Réalisé par Hassan Bourri

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 Table des matières

I. Introduction ...................................................................................... 3

1. Mécanisme ....................................................................................... 3

2. Composition des milieux chromogènes .................................................... 5

III. Lecture des résultats ......................................................................... 6

1. Étapes de la lecture des résultats ............................................................ 7

2. Exemples de boites de pétri ................................................................... 8

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I. Introduction
En 1979, le Dr Alain Rambach a inventé et breveté le premier milieu de culture
chromogène destiné à détecter E. coli. Cette innovation a marqué le début d'une révolution
dans le diagnostic microbien, suivie de l'introduction de divers milieux pour détecter les
principaux agents pathogènes présents dans les échantillons cliniques et alimentaires.

La technologie chromogène repose sur la détection précise de l'activité enzymatique

et la coloration localisée des colonies, facilitant ainsi l'identification des micro-organismes
en fonction de la couleur des bactéries cultivées.

Cette technologie utilise une molécule incolore soluble, le chromogène, qui

comprend un substrat spécifique à une enzyme et un chromophore. Lorsque l'enzyme de
l'organisme cible clive le chromogène, le chromophore est libéré. Sous forme libre, le
chromophore révèle sa couleur caractéristique et, en raison de sa faible solubilité, précipite.

Le résultat est une différenciation visuelle très spécifique et distinctive basée sur les
couleurs, clairement visible à l'œil nu dans des conditions d'éclairage normales.

II. Mécanisme et composition des milieux chromogènes

1. Mécanisme

La conception des milieux chromogènes repose sur deux principes fondamentaux :

❖ Sélection des Microorganismes Cibles

La sélection est le processus par lequel le milieu favorise la croissance des microorganismes
que l'on souhaite étudier, tout en inhibant celle des autres. Cela est généralement accompli
de deux manières :

➢ Agents sélectifs : (Antibiotiques, substances chimiques…)

➢ Conditions de culture spécifiques : (Le pH, la température, O2, CO2, …)
❖ Différenciation par le Substrat Chromogène

La différenciation est la partie la plus innovante des milieux chromogènes. Elle permet non
seulement de cultiver la bactérie, mais aussi de l'identifier visuellement grâce à une réaction
colorée.

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Nom du milieu Enzymes recherchées Utilisation

Uriselect Biorad β-Galactosidase et β-glucuronidase Analyse des urines en biologie médicale

CPSE Biomérieux β-Glucosidase et β-glucuronidase Analyse des urines en biologie médicale

UTI β-Glucosidase et β-galactosidase Analyse des urines en biologie médicale

Recherche des Enterococcus résistants aux

Chrom Id VRE β-Glucosidase
glycopeptides
HiChrom rapid Enterococci α-Glucosidase, β-glucosidase, β-
Recherche d'Enterococcus
Agar galactosidase

Chrom Id VRE E. coli O157 β-Glucosidase, β-galactosidase Recherche d'E. coli O157

ALOA (Listeria Dénombrement des Listeria

β-Glucosidase
monocytogenes) monocytogenes
Dénombrement d'E. coli (microbiologie
Nombreux milieux β-Glucuronidase
alimentaire)

Candiselect Biorad β-D-N-Acétylgalactosaminidinase Recherche de Candida albicans

CAN2 Biomérieux ou β-D-N-Acétylgalactosaminidinase

Recherche de Candida albicans
ChromId Candida et phosphatase
Bacillus cereus HiCrome
β-Glucosidase Dénombrement de Bacillus cereus
Agar

SAIDE Biomérieux α-Glucosidase probablement Staphylococcus aureus

MRSA [Bio-Rad Laboratories

(MRSASelect), Becton
Dickinson (CHROMagar α-Glucosidase probablement Recherche des SARM
MRSA) bioMérieux
(chromID MRSA)]
Probablement β-glucosidase et β-
ESBL Biomérieux Recherche des entérobactéries
glucuronidase (comme pour les
[BBL CHROMagar ESBL] productrices de BLSE
urines)
STRB Biomérieux
- Recherche des streptocoques du groupe B
[chromID Strepto B…]

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 Le tableau ci-dessus : illustre une sélection de milieux chromogènes utilisés en
microbiologie. Pour chaque milieu, il indique les enzymes cibles qui permettent la
différenciation et l'identification des microorganismes, ainsi que son utilisation spécifique,
qu'elle soit dans le domaine médical

Le substrat chromogène est une molécule complexe, composée d'un chromophore lié à un
substrat spécifique de l'enzyme de la bactérie cible. Lorsque la bactérie possède l'enzyme
en question (par exemple, la β-galactosidase chez E. coli), elle clive le substrat, libérant le
chromophore. Ce dernier, en s'accumulant dans les colonies, leur confère une couleur
distinctive.

Les quatre domaines d'application des milieux chromogènes qui existent sont :

❖ Microbiologie Clinique : Utilisation pour l'analyse des échantillons médicaux.

❖ Industrie Agro-alimentaire : Application dans le contrôle de la qualité des produits

alimentaires.

❖ Analyse de l'Eau : Détection des micro-organismes dans les ressources hydriques.

❖ Microbiologie Vétérinaire : Utilisation pour la santé et le diagnostic animal.

2. Composition des milieux chromogènes

Les milieux chromogènes utilisés dans les laboratoires d'analyses médicales ont une
composition chimique complexe, conçue pour être à la fois sélective et différentielle. Cette
composition varie selon la bactérie ou le champignon que l'on cherche à identifier.

Composant Rôle et Fonction Exemples Chimiques ou Biologiques

Fournissent les nutriments essentiels

Sources (azote, carbone, vitamines) pour la Peptones, extraits de levure, extraits
nutritives croissance de tous les de viande.
microorganismes.

Rendent le milieu solide pour

Agents
permettre la formation de colonies Agar-agar.
solidifiant
isolées.

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 Maintiennent le pH du milieu stable
Tampons de pH malgré les activités métaboliques des Phosphates (K2HPO4, KH2PO4).
microorganismes.

Inhibent la croissance des

microorganismes indésirables et Sels biliaires, colistine, cristal violet,
Agents sélectifs
favorisent la croissance de la (des) sels de sodium (azide).
cible(s).

➢ Substrat pour la β-galactosidase :

X-Gal (5-bromo-4-chloro-3-
indolyl-β-D-galactopyranoside)
➢ Substrat pour la β-glucuronidase :
Molécules incolores qui, lorsqu'elles
X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-
Substrats sont métabolisées par une enzyme
spécifique de la bactérie cible, libèrent indolyl-β-D-glucuronide)
chromogènes
un chromophore coloré. ➢ Substrat pour la β-glucosidase :
chromogène spécifique.
➢ Substrat pour
l'acétylgalactosaminidase :
chromogène spécifique.

Composés libérés par la réaction

Dérivés d'Indole (bleu, vert), Phénol
Chromophores enzymatique. Ils précipitent dans les
(rose, rouge), etc.
colonies et leur donnent leur couleur.

Eau purifiée Solvant de tous les composants. H2O.

III. Lecture des résultats

La lecture des résultats d'un milieu chromogène se fait principalement par l'observation
visuelle de la couleur des colonies et dans certains cas, de leur morphologie ou d'un halo
autour d'elles. Chaque couleur est associée à une espèce bactérienne ou à un groupe de
bactéries spécifique.

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1. Étapes de la lecture des résultats

❖ Préparation de la boîte :

o Assurez-vous que la boîte de Petri a été incubée dans les conditions

appropriées (température, atmosphère) et pendant la durée recommandée
par le fabricant.

o Lisez le mode d'emploi du milieu pour connaître les couleurs attendues et

les espèces qu'elles représentent.

❖ Observation de la couleur :

o Examinez chaque colonie individuellement. La couleur est le critère le plus

important.

o Une colonie de couleur vive (bleu, vert, rose, violet) indique la présence
d'une bactérie cible. Par exemple, sur un milieu chromogène pour l'analyse
urinaire, des colonies bleues pourraient signifier la présence d'E. coli, tandis
que des colonies roses pourraient indiquer des coliformes.

o Une colonie incolore ou de la couleur de la gélose signifie généralement

qu'il s'agit d'une bactérie non cible ou d'une espèce qui ne possède pas
l'enzyme recherchée.

❖ Observation de la morphologie et de l'aspect :

o La forme et la taille des colonies peuvent aider à la différenciation. Certaines

espèces forment des colonies plus grandes, tandis que d'autres sont plus
petites.

o Un halo autour de la colonie (zone transparente ou opaque) peut également

être un indice. Par exemple, sur certains milieux, un halo transparent
(hémolyse) autour des colonies peut indiquer une activité enzymatique
supplémentaire.

❖ Interprétation multi-espèces :

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 o Dans certains milieux, plusieurs substrats chromogènes sont présents pour
détecter différentes espèces. Vous pouvez ainsi observer plusieurs types de
colonies colorées sur la même boîte.

o Comparez les couleurs observées avec la légende fournie par le fabricant du

milieu pour identifier chaque espèce.

2. Exemples de boites de pétri

Les microbiologistes cliniques se concentrent sur les infections bactériennes chez l'homme
et réalisent divers tests en laboratoire sur différents types d'échantillons. L'un de leurs
principaux défis est d'identifier rapidement et efficacement les infections.

Pour relever ce défi, CHROMagar TM a développé une large gamme de milieux de culture
chromogènes. Ces milieux aident à détecter et à surveiller les principaux pathogènes et les
bactéries résistantes aux antibiotiques. (Référence : Miltenyi Biotec B.V. & Co. KG.
(2018)).

Milieu Type Bactérie Apparence

C3GR
(Pour la E. coli
CHROMagar™ détection (Rose foncé à rougeâtre)
pendant la nuit
d’Entérobactéries
productrices de
bêta-lactamases
atteignant une
résistance aux Klebsiella, Enterobacter,
céphalosporines Citrobacter
CHROMagar™ de 3e génération) (Bleu métallique (+/-
C3GR halo rouge))
C3GR

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 Acinetobacter
CHROMagar™ (Crème, opaque)

Candida Candida albicans

CHROMagar™ (Milieu (Vert)
chromogène
pour l’isolement
et la
différenciation
des principales
espèces de
Candida Candida krusei
CHROMagar™ cliniquement (Rose, duveteux)
importantes)

Orientation
(Pour l’isolement
et la
Enterococcus
CHROMagar™ différenciation
(Bleu turquoise)
des agents
pathogènes des
voies urinaires)

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