MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR, BURKINA - FASO
DE LA RECHERCHE ET DE L’INNOVATION La patrie ou la mort, Nous vaincrons
(MESRI)
RAPPORT
TITRE
« TRAVAUX PRATIQUES DE MICROBIOLOGIE »
Rédigé par sous-groupe 2 :
KABORE CHRISTOPHE
KABRE AWA AINATOU
KOLGO FIRDAOUSSE
KOLOGO EUGENIE
KOLOGO KADIATOU
Classe : Licence 1 Bio analyse et assurance qualité
Professeur
Dr OUEDRAOGO G ABASSE
Année académique : 2024– 2025
INTRODUCTION
La microbiologie est une sous-discipline de la biologie basée sur l'étude des
microorganismes et des relations avec leur environnement.
La microbiologie est importante dans le sens qu’elle permet de garantir la sécurité
et la qualité des produits. Elle a pour but de développer des compétences pratiques
et de comprendre les techniques de base. Son objectif principal est de permettre
aux étudiants d’acquérir une compréhension pratique.
I – MATERIELS
Lors de notre passage au laboratoire nous avons une à utiliser le matériel suivant :
✓ Autoclave
✓ Incubateur
✓ Four Pasteur
✓ La hotte a flux laminaire
✓ Boite de pétri
✓ La pipette Pasteur en verre
✓ Les seringues
✓ Les scalpins
✓ Une balance
✓ Une spatule
✓ Un tube à essai
✓ Une éprouvette graduée
✓ Des flacons
II – METHODE
1- TECHNIQUE DE PREPARATION DES MILIEUX
Pour notre travaux pratique nous avons eu à utiliser le Plate Count Agar (PCA)
comme milieux de culture. Dans un premier temps on prélève 9.4g du PCA qu’on
mélange avec 400ml d’eau physiologique. On fait dissoudre en chauffant avec
une plaque chauffante. Dans un deuxième temps on autoclave à 1210 C pendant
15mn puis on laisse refroidir avant l’utilisation.
2- TECHNIQUE D’ENSEMENSEMENT
On prélève 1ml de la solution mère (90ml) obtenue.
Nous disposons de 3 tubes a essaie contenant chacun 9 ml d’eau physiologique.
On procèdera par dilution par cascade, c’est-à-dire qu’on prélève tout d’abord à
l’aide d’une seringue 1 ml de la solution mère (90ml) qu’on met dans un premier
tube (10-1) a essai et on homogénéise 3fois. Puis on prélève de nouveau 1ml de la
solution du premier tube qu’on met dans le deuxième tube (10-2). On homogénéise
encore 3fois. Enfin on prélève 1ml du deuxième qu’on met qu’on met dans le
troisième (10-3) et on homogénéise encore 3fois.
Pour l’ensemencement nous allons retenir deux tubes dont 10-2 et 10-3. Nous
disposons de 8 boites de pétri dont 4 boites pour le premier échantillon et 4 autres
boites pour le second. Pour l’échantillon 1, deux boites représente 10-2 et deux
autres boite 10-3 et nous ferons de même pour l’échantillon 2.
Pour l’échantillon 1, nous prélevons 0,4 ml de 10-2 que nous répartissons dans les
deux boites dont 0,2 ml pour chaque boite. On prélèvera 0,4 ml de 10-3 que nous
repartirons dans les 4 boites qui lui sont attribués (0,2 ml chacun). Nous
procèderons de la même manière pour 10-2 et 10-3 de l’échantillon 2.
Stérilisons la pipette pasteur 3fois et transformons-la en râteau à l’aide du bec
bunsen. Laissons refroidir notre râteau puis passons à l’étalement puis renverser
les boites et enfin les mettre dans l’incubateur pendant 24 heures minimum.
3- DENOMBREMENT
Pour notre cas N 15
CE
N = ⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯
V (n1 + 0,1 n2) d
4- OBSERVATION AU MICROSCOPE
Etat frais
Choisir une colonie par échantillon, stériliser la pipette pasteur (au moins 4fois)
puis prélever la colonie et la déposer sur la lame contenue d’eau distillé (1 à 2
gouttes) et homogénéiser. Observer au microscope a l’objectif 10x et 40x.
Apres on enlève la lamelle et on laisse l’eau sécher pour les fixer en faisant passer
la lame sur la flamme 4fois.
Coloration de Gram
On utilise un kit constituer de 04 colorants. A savoir :
• Le cristal violet : la mettre pendant 1mn puis rincer
• Le ligol (fixateur) : mettre pendant 1mn et rincer
• Décoloration avec l’alcool : on rince et on arrête quand la couleur change
• La safranine (couleur orange) : pendant mn et on rince
On laisse le tout sécher avant l’observation sur microscope.
III- RESULTATS
• Tableau récapitulatif des caractéristiques des colonies l’échantillon 1
E1 Forme Bord Elév Taille Opacité Consistance Couleur
ation
10-2 Arrondi Régulie Plat 0,5cm Translucide Dur Blanchâtre
e r
10-3 Arrondi Régulie Plat 0,5cm Transparent Molle Blanchâtre
e r
• Tableau récapitulatif des caractéristiques des colonies l’échantillon 2
E2 Forme Bord Elévation Taille Opacité Consistance Couleur
10-2 Irrégulier Ondulé Plat 0,5cm Translucide Dur Blanchâtre
10-3 Irrégulier Ondulé Plat 0,5cm Translucide Dur Blanchâtre
• Tableau récapitulatif du dénombrement des colonies
Boite n 0 1 Boite n 0 2 Boite n 0 1 Boite n 0 2
10-2 10-3 10-2 10-3
Echantillon 1 15 15 15 15
Echantillon 2 15 15 15 15
IV- DISCUSSION
L’absence de colora colonies après notre ensemencement peut être du a la
présence de certains ingrédients dans le zoom koom qui peut empêcher la
croissance microbienne comme par exemple la cannelle qui contient des
composés actifs comme Cinna aldéhyde qui possède des propriétés anti
bactérienne. Ce composé perturbe la membrane cellulaire et le métabolisme des
bactéries.
Nous pouvons aussi avoir la présence de clou de girofle qui contient de
l’eugénol une molécule aux propriétés anti bactériens reconnu.
Nous pouvons avoir la présence du citron dont l’acidité empêche le
développement des bactéries.
CONCLUSION
En somme cette séance de travaux pratique nous a permis de connaitre d’une
part certains milieux de cultures comme le PCA qu’on a utilisés ainsi que sa
préparation et d’autre part d’appréhender la qualité de certains aliments.
Également nous avons constaté que certains aliments pouvaient empêcher la
croissance de certaines bactéries.
ANNEXES
Image 1 : Kit des 4 colorants
Image 2 : Echantillon 1 a l’état frais Image 3 : Echantillon 1 après colorations
Image 4 : Echantillon 2 après coloration
Image 6 : Echantillon 2 a l’état frais
Image 7 : Boite de pétri pour ensemencement