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Instructions pour biotypage API NH

Le document décrit la procédure de biotypage des bactéries Haemophilus influenzae et Haemophilus parainfluenzae à l'aide d'un système API. Il détaille la préparation de l'inoculum, l'inoculation des microtubes, l'incubation, ainsi que la lecture et l'interprétation des résultats. Des tests complémentaires peuvent être nécessaires pour différencier les espèces en cas de résultats douteux.

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Le document décrit la procédure de biotypage des bactéries Haemophilus influenzae et Haemophilus parainfluenzae à l'aide d'un système API. Il détaille la préparation de l'inoculum, l'inoculation des microtubes, l'incubation, ainsi que la lecture et l'interprétation des résultats. Des tests complémentaires peuvent être nécessaires pour différencier les espèces en cas de résultats douteux.

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API NH

Haemophilus influenzae,
Haemophilus parainfluenzae,
Moraxella catarrhalis (Branhamella catarrhalis)
Neisseria gonorrhoeae
Le biotypage de H. influenzae et H. parainfluenzae est réalisé à l'aide du Tableau 2.

Préparation de l’inoculum :

-Ouvrir une ampoule d’API NaCl 0.85 % (eau physiologique) (2mL)

-A l’aide d’un écouvillon préparer une suspension bactérienne d’opacité égale à 4 McFarland

Inoculation à la galerie :

-Remplir uniquement la partie tube des 7 premiers microtubes (PEN à URE) : 50 μL environ.

-Remplir tube et cupule des 3 derniers microtubes : LIP/ProA, PAL/GGT, βGAL/IND : 150 μL environ, en veillant
à ne pas créer un ménisque convexe.

-Recouvrir les 7 premiers tests (PEN à URE) d'huile de paraffine (tests soulignés)

-Renfermer la boite d’incubation et l’incuber à 37°C en atmosphère aérobie pendant 2H à 2H15

Lecture et interprétation de la galerie :

Si le nombre de tests positifs avant ajout des réactifs (y compris le test GLU) est inférieur à 3, réincuber la
galerie 24 heures (± 2 heures) de plus sans rajouter les réactifs puis révéler les tests nécessitant l'addition de
réactifs

Si 3 tests ou plus (test GLU + ou –) sont positifs, noter sur la fiche de résultats toutes les réactions spontanées
puis révéler les tests nécessitant l'addition de réactifs :

- Microtubes LIP/ProA et PAL/GGT : ajouter 1 goutte de réactif ZYM B. Attendre 3 minutes

- Microtube βGAL/IND : ajouter 1 goutte de réactif JAMES. Attendre 3 minutes

Si, après 2 heures d'incubation, plusieurs réactions (fermentation, pénicillinase) sont douteuses, réincuber la
galerie 2 heures supplémentaires et lire à nouveau ces réactions (les tests enzymatiques ne seront pas relus
dans ce cas).

En cas de faible discrimination entre plusieurs espèces, des tests complémentaires sont indiqués pour les
séparer (Tableaux 1 et 2). Les résultats de ces tests sont extraits de la littérature.
Tests Négative Positive
Jaune/jaune-vert/jaune
Bleu
PEN (Penicillinase) bleu
(absence de pénicillinase)
(Présence de pénicillinase)
GLU
FRU
Rouge/rouge-orangé Jaune/orange
MAL
SAC
ODC Jaune-vert/gris-vert Bleu
URE Jaune Rose/violet
LIP Incolore/gris pâle Bleu (avec précipité)
PAL Incolore/jaune pâle Jaune
βGAL Incolore Jaune
ProA Jaune/orange pâle
Orange
Après 3 min de l’ajout du ZYM B (jaune orange si PAL+)
GGT Jaune/orange pâle
Orange
Après 3 min de l’ajout du ZYM B (jaune-orange si PAL+)
IND
Incolore rose
Après 3 min de l’ajout du JAMES

Noter + ou - sur la fiche des résultats

A l'aide du logiciel d'identification apiweb TM, identifier la bactérie correspondante

NB : A partir de la suspension bactérienne préparée, inonder une boite de gélose

Le biotypage de H. influenzae et H. parainfluenzae

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