Jacques Davy IBABA

PhD Plant Pathology

• Bhojwani, Sant Saran, and Prem Kumar Dantu. Plant Tissue
Culture : An Introductory Text. Chapitre 3 et 17. Springer, 2013.

• Soumare A, Diédhiou AG, Arora NK, Al-Ani LKT, Ngom M, Fall S,

Hafidi M, Ouhdouch Y, Kouisni L and Sy MO (2021) Potential Role
and Utilization of Plant Growth Promoting Microbes in Plant Tissue
Culture. Front. Microbiol. 12:649878. doi: 10.3389/fmicb.2021.649878.

• [Link]
• La propagation clonale in vitro des plantes, communément appelée
micropropagation, est une méthode de multiplication des plantes en
laboratoire qui utilise un explant pour produire de nouvelles plantes
génétiquement identiques dans des des conditions physiques et
chimiques définies
• C’est une méthode alternative de propagation des plantes qui sont
soit très difficiles, ou très lentes à multiplier avec les méthodes
traditionnelles de propagation clonale.
La micropropagation est devenue
une technologie industriel l e
largement utilisée dans le monde
entier pour la multiplication des
orchidées, de certaines plantes
ornementales, ainsi que des
espèces d'arbres fruitiers et
forestiers.
• Les principaux avantages de la micropropagation par
rapport aux méthodes conventionnelles de propagation
clonale sont les suivants : Production dans un temps et un
espace relativement courts, d’un grand nombre de plantes à
partir d'un seul individu;
• L’utilisation des explants de très petites tailles pour initier
des cultures aseptiques;
• L e s p l a n t e s p r o d u i t e s s o n t r e l at ive m e n t e xe m p t e s
d'infestation de micro-organismes;
• Le taux de multiplication obtenu in vitro est souvent
beaucoup plus élevé que le taux obtenu avec les methodes de
propagation in vivo par ce que les parametres de cultures in
vivo sont manipulables afin de produire des conditions
optmiales de culture;
• Elle est applicable à de nombreux génotypes pour lesquels la
multiplication végétative in vivo est difficile ou impossible;
• Elle peut se faire à tout moment de l'année.
• Le processus de la micropropagation se fait en six étapes bien définies
qui sont :
• Étape 0 : Stade préparatoire;
• Étape I : Établissement ou initiation de la culture;
• Étape II : Élongation et multiplication;
• Étape III : Enracinement;
• Étape IV : Repiquage et acclimatation en serre;
• Étape V : Transfert dans des conditions naturelles de culture.
• Chacune de ces ses étapes a ses exigences et ses problèmes spécifiques.
• Cette étape a été initialement introduite pour contrôler le
problème de la contamination, en par ticulier par les
champignons, mais elle est désormais considérée comme
importante pour la réussite de l'établissement et de la
multiplication éventuelle aux étapes 1 et 2 respectivement.
• Toute(s) mesure(s) prise(s) pour améliorer la qualité de la de
la plante mère ou donneuse, qu'il s'agisse de son hygiène ou
de son état physiologique, sont incluses dans cette étape.
• L'étape préparatoire peut également comprendre la

manipulation de paramètres tels que la lumière et la

température dans lesquels les plantes mères sont maintenues

et l'application de régulateurs de croissance, qui pourraient

influencer la réponse des explants aux stades ultérieurs.

• L'objectif de cette étape est d'établir des cultures aseptiques
de la plante à micropropager à l'aide d'explants appropriés.
• Le succès de cette étape dépend du choix de l'explant
approprié, de la procédure de stérilisation adéquate et de la
prévention de toute réaction d'hypersensibilité des explants.
• Le choix de l'explant depend de la technique à utiliser, de
l'objectif de l’experimentation et de l'espèce de la plante
mère.
• Les facteurs qui affectent le comportement des explants
pendant la micropropagation comprennent la source de
l'explant, l'âge du tissu et de la plante dont il est issu, la
préparation de l'explant, la manière dont il est planté sur le
milieu.
• Le choix du milieu de base de culture est un autre parametre
a evaluer avec soin.
• Le succès d'une expérience de culture in vitro de végétaux dépend en
grande partie de la sélection d'un milieu de culture adéquat.
• La croissance, le développement et la réponse morphogénique d'un
explant en culture dépendent de la composition du milieu de culture.
• Les milieux de culture in vitro contiennent des éléments nutritifs
inorganiques, éléments nutritifs organiques, des régulateurs de
croissance des plantes et autres suppléments
• Les macronutriments sont nécessaires en quantités

millimolaires (mM). Le calcium, le potassium, le magnésium,

l'azote, le soufre et le phosphor sont les macroéléments et les

ingrédients essentiels des milieux de culture des tissus

végétaux.
Certains micronutriments, bien que requis en petites quantités,

sont essentiels à la croissance des tissus dans les cultures. Ils

agissent comme cofacteurs des enzymes. Les micronutriments

comprennent généralement le bore, le manganèse, le fer, le

zinc, le cuivre, le molybdène et le cobalt.

• Les vitamines et acides aminés.

• Les vitamines qui agissent comme des coenzymes doivent

être ajoutées au milieu pour assurer une croissance saine des
cultures de tissus.

• Les vitamines les plus utilisées sont les vitamines B

• D'autres vitamines sont incluses dans certains milieu de culture :
l'acide folique (vitamine M), l'acide ascorbique (vitamine C), la
riboflavine (lactoflavine, vitamine B2), l'acide pantothénique (D-
pantothénate de calcium, vitamine B5), la biotine (vitamine H) et le
tocophérol (vitamine E).

• Ces vitamines sont ajoutées pour des raisons historiques ou parce

qu'elles favorisent une réaction in vitro spécifique.
• Une source de carbone.
• La plupart des cultures de tissus végétaux sont incapables de
réaliser la photosynthèse en raison de l'absence de chlorophylle
ou de chloroplastes peu développés, de la quantité limitée de CO2
dans le récipient de culture et de l'absence d'une intensité
lumineuse optimale. Il est donc obligatoire d'ajouter au milieu de
culture une source utilisable de carbone nécessaire aux diverses
activités métaboliques.
• La source de carbone la plus couramment utilisée est le

saccharose à une concentration de 2 à 5 % (m/v).

• Un milieu contenant des nutriments inorganiques,

organiques et du saccharose est appelé milieu basal.

• L'ajout de régulateurs de croissance est invariablement nécessaire
pour déclencher différents types de croissance et de
différenciation.
• Les régulateurs de croissance sont généralement requis en
quantités infimes (0,001-10 µM).
• La nature et la quantité de régulateurs de croissance dans le
milieu varient en fonction de la variété de la plante, de la nature
du tissu et du stade de la culture.
• Les auxines ont été utilisées pour induire la division
cellulaire, la cytodifférenciation, la différenciation
organogénique et embryogénique.

• En général, l'auxine à faible concentration favorise la

formation des racines, tandis qu'à plus forte concentration,
elle induit la formation de cals.
• Les auxines couramment utilisées dans les cultures de tissus sont :
l'acide indole-3-acétique (IAA);
• l'acide indole-3-butyrique (IBA);
• l'acide a-naphtalène-acétique (NAA);
• l'acide 2,4-dicholorophénoxyacétique (2,4-D);
• l'acide para-chlorophénoxyacétique (p-CPA).
• Les cytokinines constituent un autre groupe important
d'hormones végétales utilisées dans la culture in vitro de
tissus végétaux.
• L'incorporation de ces composés dans les milieux de culture
vise principalement à déclencher la division cellulaire et à
induire la différenciation des pousses adventives à partir des
cals et des organes.
• Les cytokinines couramment utilisées dans les cultures in
vitro de tissus sont:
• La kinétine (6-furfurylamino) purine;
• BAP [(benzylamino) purine];
• 2iP [(2-isopentenyl)-adenine;
• Zeatin [6-(4-hydroxy-3-methyl but-2-enyl amino)-purine)].
• Le succès de tout protocole de micropropagation dépend
largement de l'efficacité de l’étape 2.
• La multiplication des pousses est réalisée soit par la régénération
à partir de cals, ou la formation directe de bourgeons adventifs à
partir de l'explant.
• Les cellules végétales de presque toutes les parties d'une plante
sont capables de former des cals dans des conditions de culture
appropriées, et les cals peuvent être induits pour régénérer des
plantes via l'organogenèse ou l'embryogenèse somatique.
• Le cal issu d'un même explant peut présenter des variations
considérables en ce qui concerne la couleur, la texture, la
compacité, la teneur en eau.
• Le cal peut être compact, sec, humide, de couleur claire ou
foncée.
• Le milieu de culture doit être complété par des régulateurs de
croissance appropriés pour stimuler la multiplication
ultérieure des pousses.
• Les cytokinines présentes dans le milieu utlilisé pour
stimuler la pousse des bourgeons empêchent également la
formation de racines, et il est donc essentiel de transférer les
pousses dans un milieu approprié pour l'enracinement.
• L'enracinement est généralement réalisé en transférant des
pousses individuelles sur un milieu supplémenté avec une
auxine appropriée.
• La réussite de la micropropagation dépend de l'établissement
des plantes en terre ou en terreau.
• Les plantes cultivées in vitro sont exposées à l'environnement
artificiel qui se caractérise par un milieu de culture riche en
nutriments inorganiques et organiques, en saccharose et en
régulateurs de croissance, une humidité élevée, une faible
luminosité et un échange gazeux insuffisant.
• Dans ces conditions non naturelles, les plantes poussent bien
mais souffrent de nombreuses anomalies morphologiques et
anatomiques ce qui nécessite une acclimatation minutieuse
aux conditions in vivo.
• Le principe de l'acclimatation des plantes in vitro est de les
renforcer afin qu'elles puissent survivre dans des conditions
normales.
• Le principe de l'acclimatation des plantes in vitro est de les
renforcer afin qu'elles puissent survivre dans des conditions
naturelles.
• Les plantes micropropagées sont d'abord retirées du milieu
gélosé, les racines sont lavées pour éliminer la gélose et
plantées individuellement dans des pots contenant un
terreau approprié avant d’être transférée dans une serre
d’acclimatation.
• Une fois que l’acclimatation est terminée, les plantes sont
prêtes a être utilisées a toute fin.