‫اىدَٖ٘رية الجزائرية الديمقراطية الشعبية‬

République Algérienne Démocratique et Populaire

‫وزارة التعليم العالي والبحث العلمي‬
Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique
‫جامعة محمد البشير االبراهيمي برج بوعريريج‬
Université Mohammed El Bachir El Ibrahimi B.B.A
‫كلية علوم الطبيعة والحياة وعلوم االرض والكون‬
FacultédesSciencesdelaNatureetdelaVieetdesSciencesdelaTerreetdel’Univers
‫قسم العلوم البيولوجية‬
Département des Sciences Biologiques

Mémoire
En vue de l’obtention du Diplôme de Master
Domaine Sciences de la Nature et de la Vie
Filière : Sciences Biologiques
Spécialité: Toxicologie
Intitulé:

Evaluation des activités biologiques d’un extrait brut de

polysaccharides algaux

Présenté par:
DRIAI Asma & BOUGUERRA Habiba

Soutenu l e : 04/07/2022, Devant le jury :

Nom et prénom Grade Affiliation/Institution

Président MOUMENI Ouissem MCB Université.BBA

Encadrant MEZDOUR Hichem MCB Université.BBA

Examinateur BENRADIA Hamida MCB Université.BBA

Année universitaire:2021/2022
 Dédicace
Avant tout, louage à ALLAH le tout puissant, le très miséricordieux qui

m’a donné la santé, la force, le courage et la volonté de mener ce travail

Je dédie ce mémoire

A mes très chers parents

Faroudja et Salem

Aucun hommage ne pourrait être à la hauteur de vos sacrifices

, de l’amour et de l’affection dont vous n’avez jamais cessé de m’entourer

toutes au long de ces années d’études.

J’espère que vous trouvez dans ce travail un vrai témoignage de mon profond
amour et éternelle reconnaissance.

A mes très chers frères et ma petite adorable sœur

A toute ma famille, mes amis (es), mes collègues et mon binôme

A tous mes enseignants tout au long de mes études sans exception

A tous ceux qui m’aiment et tous ceux qui j’aime

Asma
 Dédicace
A l'aide d’ALLAHtout Puissant, qui m’a tracé le chemin de ma vie, j'ai pu réaliser ce
travail que je dédie.
A mon cher père : Chaaban
« Une épaule forte, un œil attentif et compréhensif et une personne qui mérite
mon appréciation et mon respect. Aucune dévotion n'exprime mes sentiments. Que
Dieu vous préserve et vous donne la santé et une longue vie. Merci. » Je taime papa.
A ma chère maman : Merbouha
« Merci, vous m'avez donné la vie, la tendresse et le courage de réussir.
Tout ce que je peux vous donner ne pourra pas exprimer l'amour et la
Reconnaissanceque j'ai pour vous ». Je t'aime, ma mère.
Dans mon témoignage, je te présente cet acte humble pour te remercier de
tes sacrifices et de l'affection dont tu t'as toujours entourée, que Dieu te protège,
et t'accorde santé et longue vie.
Mes merveilleux frères et sœurs : Hamza, Sofiane, Laila, Zahra, Salma, Taous,
Kenza, Yasmin, Khadîdja, et leurs maris et enfants. Merci de m'avoir montré tant de
patience pendant les moments difficiles.
A mon fiancé Mounir qui m’ beaucoup encouragée tout le long de ce travail.
Merci de m’avoir montré beaucoup de patience durant les moments les plus
stressants.
A mes chers amis : Bouthaina, Lydia, Saloua, Hicham Harbi, et surtout
Abde Raouf ben Khelifa.
A toute ma famille, proche et lointaine.
A ma compagne, « Driai Asma », qui a partagé avec moi les moments difficiles
de cette entreprise, et sa famille.
Sans oublier mes braves amis du cours de Toxicologie.

Habiba
 REMERCIEMENTS

On remercie ALLAH le tout puissant de nous avoir donné la santé et la volonté

d’entamer et de terminer ce mémoire
Tout d’abord, ce travail ne serait pas aussi riche et n’aurait pas pu avoir le jour
sans l’aide et l’encadrement de Dr. Mezdour Hichem, on le remercie pour son
aide, ses conseils, sa patience, et sa disponibilité tout au long de la réalisation
de ce mémoire.
Nos remerciements vont aussi à Dr. Benradia Hamida d’avoir bien accepté
d’examiner le contenu du ce travail et Dr. Moumeni Ouissem de nos avoir
honoré de présider le jury de la soutenance.
Nos remerciement s’adresse également à tous nos professeurs de la faculté de
science de la nature et de la vie et science de la terre et de l’univers
Remerciements particuliers aux membres de laboratoire de biochimie
Sabrina et Fadila
Un gros merci également à nos familles pour leurs soutiens aussi bien moral
que financier et pour leurs sacrifices
Finalement, nous remercions tous ceux qui ont contribué de près ou de loin à la
réalisation de ce travail.
 Sommaire
Dédicace
Remerciements
Sommaire
Liste des figures
Listedes tableaux
Liste abréviation
Chapitre Ⅰ: Introduction
1. Introduction……...……………………………………………………..……………...…01

ChapitreⅡ: Etudebibliographique
1. L’inflammation…………………………………………………………………..............02
1.1. Définition..……………………………………………………………………….....02
1.2. Les facteurs déclenchant l’inflammation…………………………..........….............02
1.3. Les signes stéréotypes de la réaction inflammatoire………….………….………....02
1.4. Les formes de l’inflammation …………………………………………………...…03
1.4.1 La réaction inflammatoire aiguë…………………………………………03
1.4.2 La réaction inflammatoire chronique ………………………………........04
2 Les anti-inflammatoires…………………………………………………………...…....04

2.1 Généralité……………………………………………………………...……….….04
2.2 Les anti-inflammatoires stéroïdiens (AIS) :……………………...…………….….05
2.2.1 Définition …………………………………………………….…............05
2.2.2 Mécanisme d’action…………………………………………..…............05
2.2.3 Toxicité et effets indésirables des (AIS) ……………………….…….…06
2.3 Les anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS)……………………...…….…….06
2.3.1 Définition………………………………………………………..............06
2.3.2 Mécanisme d’action ………………………………………………….....07
2.3.3 Toxicité et effets indésirables des anti-inflammatoires non
stéroïdiens (AINS)………………………………………………………..…......08

ChapitreⅢ:Matériel et Méthodes
1. Matériel …………………………………………………………………………......09
1.1 Matériel végétal ………………………………………………………...............09
1.1.1 Description botanique d’Ulva lactuca………………………………….......09
1.1.2 Récolte d’Ulva lactuca……………………………………..........................10
1.1.3 Extraction des polysaccharides……………………………..........................10
1.2 Matériel animal………………………………………………………................11
1.2.1 Test de l’œdème plantaire chez le rat………………………………………11
1.2.2 Sacrifice des animaux, récupération du tissu de la voute plantaire et
préparation de sa fraction cytosolique………...….…………………….......11
 1.3 Réactifs………………………………………………………………................12
1.4 Appareillage……………………………………………………………..…......13
2. Méthodes………………………………………………………………………..............13
2.1 Méthodes de dosage des paramètres de l’inflammation et du stresss
oxydantif……………………..……………………………………………….....13
2.1.1 Dosage de la myéloperoxydase (MPO)……………………….........13
2.1.2 Dosage du malondialdéhyde (MDA) dans une fraction
cytosolique……………………………………………………….....13
2.1.3 Dosage du glutathion réduit (GSH)………………………………...15
2.1.4 Dosage de l’activité de la catalase (CAT)……………………….....16
2.2 Evaluation de l’activité anti-hémolytique de l’extrait de polysaccharides
algaux…………………………………………………………………………...18
2.3 Evaluation de l’activité anti-hémolytique de l’extrait de polysaccharides
algaux ……..……………………………………………………………….…...17
2.3.1 Préparation de la suspension érythrocytaire…………….………....18
2.3.2 Evaluation de la non-toxicité de l’extrait de polysaccharides pour
les globules rouges…………………………………........................19
2.3.3 Evaluation de l’activité stabilisatrice des membranes des globules
rouges par l’extrait de polysaccharides contre un stress
osmotiqu…………………………………………………………....20
2.4 Evaluation statistique……………………………………………………........20

ChapitreⅣ:Résultats et Discussion
1. Résultats ………………………………………………………………...……….....21
1.1 Effet de l’extrait de polysaccharides algauxsur l’œdème plantaire chez les
rats ………………………………………………………..................................21
1.2 Effet de l’extrait de polysaccharides algauxsur la concentration de la
myéloperoxydase ………………………………………...................................22
1.3 Effet de l’extrait de polysaccharides algauxsur les paramètres du stress
oxydantif (Malonydialdéhyde, Glutathion réduit et la catalase)……………….22
1.4 Evaluation de l’activité protectrice de l’extrait de polysaccharides…………....25
1.5 Evaluation de l’innocuité de l’extrait de polysaccharides pour les globules
rouges……………………………………………………………………….......26
1.6 Evaluation de l’activité stabilisatrice des membranes des GR par l’extrait de
polysaccharides contre un stress osmotique……………………………………26
2. Discussion ………………………………………………………….………...28

Conclusion & perspectives…………………………………………………….…..…..…37

Références bibliographiques…………………………………………………...……….....39

Résumé.
 Liste des figures & des tableaux
Liste des figures :
N° Titre Pages
01 Mécanisme d’action des glucocorticoïdes 6
02 Mécanisme d’action des anti-inflammatoires non stéroïdiens 7
03 Ulva lactuca 10
04 Un échantillon de tissu d’œdème de la patte avant et après le broyage avec une 12
solution de PBS
05 Préparation des échantillons pour la centrifugation 12
06 La fraction cytosolique 12
07 Centrifugeuse Sigma 13
08 Bain marie 13
09 Spectrophotomètre 13
10 La fraction cytosolique avec le n-butanol et l’acide thiobarbiturique (TBA) 14
11 Chauffage des échantillons dans un bain marie 14
12 Formule chimique du Glutathion réduit 15
13 Réaction d’Ellman 15
14 Préparation des matériels pour le dosage de GSH 16
15 Agitation de réactif d’Ellman 16
16 Extrait d’Ulva lactuca 19
17 Des échantillons de sang 19
18 Le culot érythrocytaire 19
19 Effet de l’extrait de polysaccharides algaux sur le taux de MDA plantaire 23
20 Influence de l’administration de l’extrait de polysaccharides algaux sur la 24
concentration du tissu plantaire en GSH
21 Effet de l’extrait de polysaccharides algaux sur l’activité de CAT plantaire 25
22 Taux de protection contre la dénaturation thermique du BSA en présence de 25
l’aspirine et de l’extrait de polysaccharides algaux
23 Pourcentage de protection des GR en fonction des concentrations de l’extrait 27
de polysaccharides algaux contre le stress osmotique.
Liste des tableaux :
N° Titre Pages
01 Effet de l'extrait de polysaccharides algaux et de médicament standard 21
(diclofénac) par rapport au groupe témoin carraghénane

02 L'effet de l’extrait de polysaccharides algaux sur le niveau de MPO 22

03 Pourcentage d’hémolyse avec différentes concentrations de l’extrait algal. 26
 Liste des abréviations
Liste des abréviations :

 AA: Acide arachidonique

 AINS: Anti-inflammatoire non stéroïdien
 AIS : Anti-inflammatoire stéroïdien
 BSA : Bovine Serum Albumin
 CAT : Catalase
 CL50 : Concentration Létale50
 CRP: Protéine C réactive
 DTNB: Réactif d'Ellman
 EDTA: Acide éthylène diamine tétra-acétique
 ERO : Espèces réactives de l’oxygène
 GPx: Glutation peroxydase
 GR : Globule rouge
 GSH : Glutathion réduit
 GSSG: Glutathion oxydé
 GST : Glutathion S-transférase
 H2O2: Peroxyde d’hydrogène
 IL-1β: Interleukine-1β
 KCl: Chlorure de potassium
 MDA: Malondialdéhyde
 MPO : Myéloperoxydase
 NaCl: Chlorure de sodium
 PBS: Tampon phosphate salin
 PLS: Polysaccharide
 PS : Polysaccharide
 PS-CC: Polysaccharide issus de Cualerpa curessoides
 PSS: Polysaccharide sulfaté
 SOD: Superoxyde dismutase
 TBA : Acide Thiobarbiturique
 TCA : Acide trichloracétique
 TEP: 1,1,3,3-Tetraetoxypropane
 TNB: Acide thionitrobenzoique
 U. lactuca: Ulva lactuca
 Chapitre Ⅰ: Introduction

Introduction

Le milieu marin est un milieu riche en ressources naturelles les plus précieuses et
fournissent la majorité de la nourriture sous forme de poisson, coquillage et algue. L’eau de
mer contient d’énormes quantités et de large variété de composés bioactifs avec un grand
potentiel thérapeutique (conseil national de recherches 1999).dans ces dernières années de
nombreux composés bioactifs ont été extraits de divers organismes marins, environ 25% des
produits pharmaceutique sont obtenus à partir des végétaux et 12% supplémentaire sont des
biomolécules actifs disponibles dans le milieu marin (Jha et Zirong, 2004).

Les algues marines sont l’une des plus grands producteurs de biomasse en milieu
marin. Ils sont généralement classés en algues vertes (Chlorophyta), algues brunes
(Phaeophyta) et algues rouges (Rhodophyta), elles contiennent plus des 600 métabolites
secondaires (Faulkner, 1984). Le potentiel nutritionnel de l’algue est largement reconnu,
Elles sont consommé depuis de nombreuses années à cause de leurs multiples propriétés
bioactives. Ces organismes contiennent des molécules de grande valeur comme les protéines,
les acides gras polyinsaturés oméga-3, minéraux, polyphénols, alcaloïdes, terpènes, pigments
(chlorophylles, caroténoïdes et phycobilines) et polysaccharides (SP) (Pereira et al.,2021).
Cette diversité des composés est impliquée dans plusieurs activités biologiques comme anti-
oxydantes, antimicrobiennes, anticancéreuses, anti-allergiques, antivirales et anticoagulantes
(Kosanic et al., 2015 et Barkiaet al., 2019).

L’objectif de ce travail consiste à évaluer l’activité pharmacologique anti

inflammatoire d’un extrait brut de polysaccharides obtenus de l’algue verte Ulva lactuca, en
utilisant deux approches expérimentales :

 La première étant l’évaluation de l’activité anti-inflammatoire de l’extrait de

polysaccharides d’Ulva lactuca au niveau des tissus de la voute plantaire de rats issus du
modèle in vivo de l’œdème induit par la carraghénane au niveau de la patte postérieure.
 La deuxième regroupe un ensemble de tests réalisés in vitro dans le but de déceler une
possible activité anti-inflammatoire.

Nous avons décidé de commencer cette étude par un petit rappel bibliographique, où nous
mettons en lumière certaines notions essentielles à la réalisation de cette étude.

1
 ChapitreⅡ: Etude bibliographique

1. Inflammation
1.1. Définition

L’inflammation est la première barrière de la réponse immunitaire innée qui active par
la suite la réponse immunitaire adaptative (Jean-Luc et Lefranc, 2009). Elle résume un
ensemble des réactions biologiques en chaîne par un tissu vivant vascularisés contre une
agression quelconque.

Ce processus est habituellement bénéfique son objectif est de reconnaître, détruire et

éliminer l’agent pathogène, et de réparer les lésions tissulaire, parfois l’inflammation peut être
néfaste du fait de l’agressivité et la persistance de l’agent pathogène, du siège de
l’inflammation, par anomalies de régulation du processus inflammatoire, ou par anomalie
quantitative ou qualitative des cellules intervenant dans l’inflammation (Chiolero et al.,
2000). Si la réaction inflammatoire touche un organe sa fonction peut être affectée et
diminuée, en terminologie médicale l’ajout de préfixe 《ite》 à un nom d’un organe signifier
l’inflammation de ce dernier, par exemple : gastrite pour l’inflammation de la muqueuse
gastrique, hépatite pour l’inflammation de foie.

1.2. Les factures déclenchant l’inflammation

Les causes de la réaction inflammatoire sont diverses et représentent l’agent
d’agression qui déterminent la lésion cellulaire et tissulaire et qui peut stimuler le processus
inflammatoire (Stevens et al., 2004) :
A. Agents exogènes
●Agents chimiques : toxiques, acide, bases…

●Agents physiques : blessure, brûlure, rayonnements ionisants, froid, chaleur…

●Agents biologique: contamination bactérienne, fongique, parasitaire et virale.

B. Agents endogènes
● Défaut de vascularisation, réaction allergique anomalie de systèmes immunitaire…

1.3. Les signes stéréotypes de la réaction inflammatoire

La réaction immunitaire inflammatoire se manifeste par quatre symptômes :
 Rougeur : augmentation de l’afflux sanguin dans la microcirculation de tissus
enflammé.

2
  Chaleur: due à la libération des agents pyrogènes par les cellules inflammatoire.
 Gonflement: formation des œdèmes par infiltration de liquide plasmatique dans les
tissus.
 Douleur : suite à une stimulation des fibres nociceptives.
1.4 Les formes de l’inflammation
On distingue deux types :

1.4.1 La réaction inflammatoire aigue

Est une réponse immunitaire immédiate locale de courte durée (quelques jours ou
quelques semaines), elle se caractérise par un phénomène vasculo-exsudative intense.
Généralement l’inflammation guérissent spontanément, et disparaît dès que le stimulus est
supprimé, la lésion se cicatrise et les différentes fonctions et structure se rétablissent
(Espinosa et Chillet, 2006).

L’inflammation aiguë se divise en trois phases :

A. la phase vasculaire
Ce commence par une modification de la microcirculation, par une vasodilatation
artériolaire puis capillaires dans la zone atteinte. Ce qui entraine une augmentation de l’apport
sanguin (hyperémie) et une diminution de sa vitesse. Ce processus se déclenche
immédiatement par la production des facteurs vaso-dilateurs (Stevens et al., 2004) tel que la
prostaglandine, la bradykinine et l’histamine libérée par les mastocytes.

Ce phénomène est couplé par une augmentation de la perméabilité vasculaire et le

passage d’un liquide contient de l’eau et des protéines plasmatiques appelé exsudat dans les
tissus conjonctifs interstitiels qui vont créer des œdèmes inflammatoires (Espinosa et Chillet,
2006).

L’augmentation de la perméabilité vasculaire facilitant ainsi le passage des cellules

immunitaires vers le site inflammatoire.

B. la phase cellulaire
Correspond à la mobilisation des leucocytes en dehors de la microcirculation vers le
foyer inflammatoire (Espinosa et Chillet, 2006), après l’adhérence des cellules à la paroi
endothéliale et des vaisseaux sanguins, ce phénomène est la diapédèse. Au niveau d’un tissu
enflammé, les cellules immunitaires résidantes sécrètent des molécules qui attirent d’autres
cellules au niveau du site inflammatoire.

3
 Le foyer d'une inflammation aigue attire selon l'origine de la réaction soit les
neutrophiles, les monocytes ou les macrophages. Ce qui détermine la nature et la durée de
l’inflammation (Lüllmann, 2008).Les neutrophiles sont les cellules les plus essentielles au
cours de la réponse immunitaire innée, recruté rapidement au site inflammatoire où ils
participent à la phase aigüe (Barrientos, 2014).

Cette mobilisation cellulaire va permettre la neutralisation de l’agent pathogène par la

phagocytose. La libération d’enzymes Hydrolytiques des polynucléaires et le pouvoir
phagocytaire des macrophages permettent la destruction de l’agent pathogène (Hajjaj, 2017).

C. la phase de résolution
C’est la phase de retour à l’homéostasie, dépend du degré de lésion tissulaire. Le
pathogène et les produits de la dégradation tissulaire et les neutrophiles morts sont phagocytés
par les macrophages, ainsi que le liquide d’œdème drainé dans la circulation lymphatique et
résorbé par pinocytose. Après le nettoyage de foyer inflammatoire, les lymphocytes vont
sécréter des cytokines et des médiateurs qui vont induire la phase de cicatrisation et de
régénération du tissu lésé.

1.4.2 La réaction inflammatoire chronique

Si l’agent pathogène persiste ou lorsque la réaction inflammatoire récidive de façon
répétée dans le même organe et provoque des destructions des tissulaires, l’inflammation donc
devient chronique (pal et al., 2014). Les symptômes peuvent se manifeste pendant deux mois
à deux ans et conduire à de grave complication, par exemple la maladie de Crohn et la
polyarthrite rhumatoïde (Pacheco et al, 2006). Elle n’est plus du tout bénéfique et doit être
diagnostiquée et traitée par des médicaments.

2. Les anti-inflammatoires

2.1 Généralité
Les anti-inflammatoires sont des médicaments capable d’atténuer ou de supprimer le
processus inflammatoire (Cohen et al., 2001), c’est à dire permettent de lutter contre les
phénomènes inflammatoires généraux ou secondaires quelle que soit la cause de cette
inflammation (sont des réactions systématiques qui se développent à distance « chroniques »
et locaux ou primaires (aiguës)) d’origine diverses (infections, brûlures, irritations, troubles
métaboliques, etc.) par inhibition de la Cyclo-oxygénase (COX). (Grunfeld, 2002 ; Gobec et
al., 2005).

4
 Les prostanoïdes sont synthétisés à partir de l’acide arachidonique (AA)
(phospholipide membranaire), l’activation de la phospholipase A2 qui transforme certains
phospholipides membranaires en AA. La cyclo-oxygénase impliquées dans de nombreux
mécanismes pour former les prostanoïdes qui serviront de base à la synthèse des
prostaglandines et du thromboxane A2. L’acide arachidonique peut aussi (en fonction du type
cellulaire considéré) être métabolisé par les lipoxygénases et les époxygénases. Il existe deux
isoformes de cyclo-oxygénases (COX): la cyclo-oxygénase 1(qui est constitutive dans les
tissus) et la cyclo-oxygénase 2 (qui est induite par les phénomènes inflammatoires).
On distingue généralement deux catégories des anti-inflammatoires : les unes sont
hormonaux (les anti-inflammatoires stéroïdiens AIS) et les autres ne sont pas (les anti-
inflammatoires non stéroïdiens AINS) (Samson et al., 2008).
2.2. Les anti-inflammatoires stéroïdien(AIS)
2.2.1. Définition
Les anti-inflammatoires stéroïdien ou corticoïde sont des hormones naturelles
synthétisées par la glande surrénale, la plus connu et la plus efficace les corticostéroïdes ont
une activité glucocorticoïde, comme le cortisol (Samson et al, 2008), et autre
minéralocorticoïde comme l’aldostérone (Berrady et al., 2010). Des études ont déterminé la
synthèse des glucocorticoïdes qui se fait sous le contrôle de l’axe hypothalamo-hypophyso-
surrénalien adrénergique. D’abord ce sont des hormones stéroïdiennes, agonistes des
récepteurs appelés GR (récepteur des glucocorticoïdes),(Chaplin et al, 1996 ; Samson et al,
2008)

Les anti-inflammatoires stéroïdiens (AIS) ont constitué une vaste famille de

médicaments dérivés du cortisol (Chaplin et al., 1996), leur durée d’action est plus longue,
leur activité anti-inflammatoire plus importante et leur activité minéralocorticoïde plus faible
que celles de la molécule mère (cortisol)(Berrady et al., 2010).

2.2.2. Mécanisme d’action

Les AIS ont l’originalité d’exercer leurs actions par des effets essentiellement
génomiques en agissant sur la transcription de l’ADN en ARN et sur la régulation post-
transcriptionnelle des ARN messagers, les corticoïdes peuvent également avoir des effets non
génomiques, surtout quand ils sont utilisés à forte dose (Adcock, 2000 ; Devillier, 2001).

Les AIS interagissent avec la membrane cellulaire (Hench et al., 1949) ou pénètrent
dans le cytoplasme (Adcock, 2000), dans le cytoplasme ils se fixent sur leurs récepteurs
intracellulaires (GRα) (récepteurs cytosoliques spécifiques), Le couple GRα-corticoïdes
5
pénètre dans le noyau il s’ensuit une translocation intranucléaire de ce récepteur ainsi activé
ce qui aboutit à la modulation positive ou négative des gènes cibles qui codent pour protéines
responsable de l’action des glucocorticoïdes. Les glucocorticoïdes agissent sur tous les types
cellulaire et tissulaire de l’organisme dans le cadre de la réaction inflammatoire, ils inhibent la
migration leucocytaire vers le site inflammatoire. (Blétry et al., 2006).

Figure 01 : Mécanisme d’action des glucocorticoïdes (Barnes, 1998)

2.2.3 Toxicité et effets indésirables des (AIS)

 Hypercorticisme iatrogène : Obésité facio-tronculaire, Diabète, hypokaliémie,
Hypertension artérielle, Ostéoporose, Retard de croissance, Inhibition de l’axe
hypothalamohy-pophysaire.
 Accidents de « sevrage » : hypocortisolisme endogène à l’arrêt brutal :
Insuffisance surrénale aiguë, Reprise évolutive de l’affection initiale.
 Accidents digestifs : Ulcères (gastro-duodénal, ou du colon, œsophage, intestin
grêle, du rectum), Pancréatites aiguës/ chroniques (Chaplain et al, 1996).

2.3 Les anti-inflammatoires non stéroïdien(AINS)

2.3.1 Définition
Les anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS) regroupent l’ensemble des
médicaments symptomatiques qui permettent de réduire ou de supprimer les conséquences de
la réaction inflammatoire (Samson et al, 2008 ; Orliaguet et al, 2013 ; Tréchot et al, 2014).
Ils agissent en inhibant COX (Lelong et al., 2013), ces molécules sont malheureusement à
l’origine des effets indésirables graves et de nombreux AINS ont été retirés du marché ou à
cause de leur toxicité (Tréchot et al., 2014).
6
2.3.2 Mécanisme d’action
Les anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS) sont largement utilisés dans le
traitement de la polyarthrite rhumatoïde, l'arthrose et la douleur (douleur dentaire, douleur
post-opératoire, etc.). Le mécanisme d'action des AINS est l’inhibition de la cyclooxygénase
(COX), enzyme clé de la biosynthèse de la prostaglandine. Cette enzyme a été conclue à
l'existence de deux isoformes, la COX-1 et COX-2. (Hla et Nelson, 1992 ; Seibert et al.,
1994).
 La COX-1 : est constitutivement exprimées dans les cellules normales (les plaquettes,
le tractus gastro-intestinal, reins, etc.).
 Alors que la COX-2 : est spécifiquement exprimée dans les cellules inflammatoires et
implique des réponses inflammatoires aiguës et chroniques.
Les AINS inhibent à la fois la cyclo-oxygénase conduit à une diminution de la
production des prostaglandines (notamment la PGE2 et la PGI2) (Nicolas et al., 2001).
A l'échelle cellulaire, des stimuli variés (mécaniques, chimiques...) activent les phospholipases
A2 contenues dans les membranes cellulaires entraînant la transformation des phospholipides
membranaires en acide arachidonique. Ce dernier est métabolisé en prostaglandines et
thromboxane A2 (TXA2) grâce à une enzyme, la cyclo-oxygénase ou COX.

L’inhibition de la synthèse des prostaglandines par les AINS semblait donc, jusqu’à
récemment, devoir obligatoirement s’accompagner d’effets favorables et délétères (Blain et
al., 2000).

Figure 02 : Mécanisme d’action de l’inti inflammatoire non stéroïdien (Nicolas et al., 2001)

7
 2.3.3 Toxicité et effets indésirables des anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS)
 Les effets gastro-intestinaux sont les plus fréquents : Troubles digestifs (dyspepsie,
nausées, diarrhée, gastralgies), ulcère gastrique, hémorragie digestive.
 Réaction d’hypersensibilité :
 cutanées : Rash, urticaire, aggravation d’urticaire chronique, prurit.
 générales : Anaphylaxie (notamment chez les sujets présentant une
allergie à l’aspirine), œdème de Quincke, vascularité.

 Troubles du SNC : Céphalées, insomnie, vertiges, malaise.

 Troubles cutanés : Rares cas de photosensibilisation, érythème polymorphe,
dermatoses bulleuses, syndrome de Stevens Johnson, syndrome de Lyell. (Baumloh, 2000)
 Complications hématologiques : Neutropénie, thrombopénie et plus rarement
agranulocytose aigue, poncytopéne.
 Troubles rénaux : Insuffisance rénale fonctionnelle, néphrites interstitielles aigue.
(Talbert, 1998)
 Réaction hépatiques : Une simple élévation transaminases peut être constatée.
(Devilier, 2001).

8
 Chapitre Ⅲ : Matériel et Méthodes

Avant de commencer, nous tenons à préciser que les échantillons qui ont servi à la
réalisation de cette étude, ainsi que certaines données relatives à l’expérimentation, nous ont
été grassement fournis par le laboratoire LBE de Constantine.

1. Matériel
1.1 Matériel végétal

1.1.1 Description du matériel végétal

Ulva lactuca est une espèce foliacée d'un vert brillant ou jaune claire, pousse
généralement en eau peu profonde jusqu’à 10 mètres, bien éclairée, au niveau de l’étage
médiolittoral et infralittoral supérieur. U. lactuca est une macro-algue verte comestible, à
distribution cosmopolite (très vaste) en Méditerranée, en Atlantique, mer Noire et en océan
Indien et Pacifique (Guiry, 2014). Ulva lactuca est récolté en grande quantité chaque année
dans le monde (Tian et al, 2015).

 Caractéristiques phénotypiques et botanique

Le nom commun d’Ulva lactuca est « laitue de mer » ou « laitue verte ». Elle a des
variations de couleur de vert à vert foncé selon sa présence (sous l’eau ou à la plage)
Morphologiquement, Elle ressemble à la laitue et forme une lame très mince (bicouche
cellulaire), orbiculaire et translucide. Le thalle de la laitue peut atteindre 18 cm de longueur,
mais généralement beaucoup moins, et jusqu’à 30 cm de diamètre avec une bordure un peu
ébouriffée (Fischer et al, 1987).
Le thalle : appareil végétatif sans feuille, ni tige ni racine.
 Reproduction et cycle de vie

Leur durée de vies est de quelques mois, mais on en trouve toute l’année . Sa
reproduction est dite « haplosdiplobiontique »ce cycle est caractérisé par l’alternance
régulière de générations haploïde (gamétophyte) et diploïde (sporophyte), qui sont
morphologiquement identiques (Ficher et al, 1986).

9
Taxonomie : Linnaeus (1753)

Embranchement : Chlorophyta

Classe : Ulvophyceae

Ordre : Ulvales

Famille : Ulvaceae

Genre : Ulva

Espèce : lactuca

Figure 03: Ulva lactuca

1.1.2 Récolte d’Ulva lactuca

Les échantillons d’Ulva lactuca ont été récoltés à la fin du mois d’Avril 2019 dans la
région de Jijle. Ils sont ensuite lavés puis séché à l’air libre et à l’ombre. Les algues collectées
devenues sèches, ont été conservées dans de la glace et lavées doucement quelques fois avec
de l'eau distillée pour éliminer les débris indésirables et ensuite séchées une nouvelle fois à
l'air. Elles ont ensuite été broyées en poudre et conservées dans des bocaux en verre
recouverts de papier d'aluminium.
1.1.3 Extraction des polysaccharides

La technique utilisée pour l’extraction des polysaccharides est la « Hot extraction »

(Rong, 2010), décrite ci-dessous :

De la poudre d’Ulva lactuca (40 µg) a été ajoutée à 1,6 µkg d'eau. Le mélange a été
agité vigoureusement dans un bain d'eau (80°C) pendant 8 h, suivi d'une centrifugation (4300
rpm, 20 min).

Le surnageant a été concentré à 1/5 du volume d'origine. Ensuite, cinq fois le volume
d'éthanol à 95 % a été ajouté à la solution concentrée. Le mélange d'éthanol a été placé dans
un congélateur pendant une nuit, suivi d'une centrifugation (4300 rpm) pendant 10 min. Le
précipité est lavé à l'acétone, essoré puis séché, la poudre de polysaccharides est alors enfin
récupérée.

10
 1.2 Materiel animal
Les rats utilisés dans cette expérimentation sont des rats mâles adultes de souche
Wistar, pesant entre 150 et 175 g, issus de l’élevage au niveau de l’animalerie de l’Université
des frères Mentouri de Constantine. Les rats sont logés dans des cages où chaque cage
regroupe 5 rats. Ils ont libre accès à l’eau et à la nourriture. Les rats sont maintenus à une
température ambiante. Ils ont été traités conformément au principe et directive énoncés dans
le manuel sur le soin et l’utilisation des animaux d’expérimentation.

1.2.1 Test de l’œdème plantaire chez le rat

Un œdème de la patte a été induit (Winter et al, 1962)en injectant 100 µl de

carraghénane à 1 % p/v en suspension dans du PBS à 1 % dans les tissus sous-plantaires de la
patte arrière gauche de chaque rat. Les rats ont été divisés en 4 groupes ; chaque groupe
composé de 5 animaux.

 Groupe I: Controle (sain)

 Groupe II: Contrôle (carragenine)
 Groupe III : Extrait de polysaccharides algaux (100 mg/kg).
 Groupe IV : Diclofénac sodique (10 mg/kg) comme référence standard.

L'épaisseur de la patte a été mesurée avant l'injection de la carraghénine et après 1, 2,

3.4, 5 heures. À l'aide d'un pied à coulisse. L'activité anti-inflammatoire a été calculée en
pourcentage d'inhibition de l'œdème chez les animaux traités avec l'extrait testé par rapport au
groupe témoin carragenine.

Le pourcentage (%) d'inhibition de l'œdème est calculé à l'aide de la formule :

Inhibition (%) = [(T0 – Tt) / T0] X 100

Où Tt est l'épaisseur de la patte des rats ayant reçu l'extrait de test au moment
correspondant et To est l'épaisseur de la patte des rats du groupe témoin (carragénine) au
même moment.

1.2.2 Sacrifice des animaux, récupération du tissu de voute plantaire et préparation de

sa fraction cytosolique

Après la prise de la dernière mesure de l’épaisseur de la patte, les rats ont été par la
suite sacrifiés par translocation cervicale et le tissu plantaire de la patte a été récupéré.

11
Ensuite, il a été rincé par l’eau physiologique saline 0 .9 %, divisé en deux parties puis
conservé à 4°.

Le jour du travail (dosage), 0.2 g de tissu est additionné à 3ml de solution tampon Tris-EDTA
phosphate 0.1 M pH; 7.4 contenant du KCl 1,15M, le mélange est homogénéisé à 1200
tours/minute par un homogénéiseur.

L’homogénat est ensuite centrifugé à 1000 tours/minute pendant 15 minutes à 4C. Le

surnageant est récupéré puis centrifugé à 9600 tours /minute pendent 45 minutes à 4C°. La
fraction cytosolique est récupérée et utilisée pour les dosages du taux de molonyldialdéhyde
(MDA), la concentration de glutathion réduit (GSH) et l’activité de la catalase (CAT).L’autre
partie du tissu entier a été utilisée pour le dosage de la myéloperoxydase (MPO).

Figure 04 : Figure 05 : Figure 06 :

Un échantillon de tissu d’œdème de la patte Préparation des La fraction

avant et après le broyage avec une solution de échantillon pour la cytosolique
PBS centrifugation

1.3 Réactifs
 L’Acide Thiobarbiturique (TBA), le 1, 1, 3,3-Tetraetoxypropane (TEP), l’Acide
Thionitrobenzoique (DTNB), le Glutathion réduit (GSH) sont de chez SIGMA
ALDERICHCO., ST Lowis, Mo.
 Le Tris, le KH2Po4, le K2HPo4 et l’EDTA sont de chez BIOCHEM.,
CHEMOPHARMA, Gorgia; USA.
 Carragenine, BIOCHEM, CHEMOPHARMA, Gorgia; USA.
12
  Le Tricholoroacide Acétique (TCA) est de chez FLUKA CHEMIKa ; Switzerland.
 Le peroxyde d’hydrogène, et le KCl sont de chez PANREAC QUIMICA, SA ;Espana
 Le n-butanol et acheté de PROLAB, MERK EUROLAB.
 BSA de BIOCHEM., CHEMOPHARMA, Gorgia; USA.

1.4. Appareillage

 Centrifugeuse Sigma.
 Spectrophotomètre.
 Bain marie.

Figure07:Centrifugeuse Figure 08 : Bain marie Figure09 :

Sigma Spectrophotomètre

2. Méthodes

2.1 Méthodes de dosage des paramètres de l’inflammation et du stress oxydant

2.1.1Dosage de la myéloperoxydase (MPO)

La myéloperoxydase (MPO) est une peroxydase hème exprimée principalement dans

les neutrophiles, elle fait partie des médiateurs locaux des lésions tissulaires et de
l'inflammation qui en résulte dans diverses maladies inflammatoires (Aratani, 2018).

L'activité MPO a été mesurée comme indiqué dans la méthode de Bradley et al

(1982). Les échantillons ont été homogénéisés, congelés et décongelés, puis centrifugés à
1500 rpm pendant 10 min à 4°C. L'activité MPO a été mesurée à 450 nm en ajoutant 100 µl
dusurnageant à 1900 µl de tampons phosphate 10 mmol/l (pH 6,0) et 1 ml de chlorhydrate
d'odianisidine 1,5 mol/l contenant H2O2 (0,0005% p/v).

2.1.2. Dosage du malondialdéhyde (MDA) dans une fraction cytosolique

 Principe
13
Le MDA est un dialdéhyde à trois carbones hautement réactifs, produit comme sous-produit
de la peroxydation des acides gras polyinsaturés et du métabolisme de l'acide arachidonique
(Hartman, 1983).

En tant que l'un des produits secondaires les plus connus de la peroxydation lipidique, le
MDA peut être utilisé comme marqueur de lésion de la membrane cellulaire. Des niveaux
accrus de produits de peroxydation lipidique ont été associés à la zone enflammée ainsi qu’à
une variété de maladies chroniques chez les humains et les modèles animaux (Lovric et al,
2008).

Dans notre étude, le taux du MDA du tissu plantaire a été évalué selon la méthode d’
(Ohkahawa et al., 1979).

Le dosage repose sur la formation en milieu acide et chaud (100c˚), entre le MDA et deux
thiobarbituriques (TBA) d’un pigment coloré absorbant à 530 nm, extractible par les solvants
organiques comme le n-butanol.

 Méthode de dosage

A 0.5ml de la fraction cytosolique 10% (KCl 1,15M) du tissu plantaire nous avons
additionné0.5 ml d’acide trichloracétique (TCA) 20% et 1 ml d’acide thiobarbiturique (TBA)
0.67%. Le mélange est chauffé à 100c˚ pendant 15 minutes, refroidi puis additionné de 4 ml
de [Link]ès centrifugation de 15 minutes à 3000 tours/min, la densité optique est
déterminée sur le surnageant au spectrophotomètre à 520 nm. La quantité du MDA dans
l’échantillon est exprimée en nm/gramme de tissu. Elle est obtenue grâce à une courbe
standard réalisée avec du 1, 1, 3,3-tetraetoxypropane dans les mêmes conditions.

Figure 10: La fraction cytosolique avec le Figure 11: Chauffage des échantillons
n-butanol et l’acide thiobarbiturique dans un bain marie

14
2.1.3. Dosage du glutathion réduit (GSH)

Le glutathion, également appelé GSH, est un composant endogène du métabolisme

cellulaire, c’est un tripeptide composé de glycine, de cystéine et d'acide glutamique. Il est
normalement présent dans le foie à une concentration de 10 mmol l-l. Elle fait partie intégrante
de la biotransformation des substances xénobiotiques et sert à protéger l'organisme des agents
réducteurs (Gad, 2014).Le glutathion se trouve dans la cellule sous deux formes : une forme
oxydée « GSSG »et une forme réduite « GSH » représentant plus de 99% de la quantité
total(Lahouel, 2005).

Figure 12: Formule chimique du Glutathion réduit.

 Principe

Pour le dosage du glutathion, la méthode colorimétrique par le réactif d’Ellman

(DTNB) est la méthode la plus employée (Ellman, 1959). La réaction consiste à couper la
molécule d’acide 5,5′ dithiodis-2-nitrobenzoïque (DTNB) par le GSH, ce qui libère
l’acidethionitrobenzoique (TNB) lequel à pH (8-9) alcalin présente une absorbance à 412 mn
selon la réaction suivante :

Figure 13: Réaction d’Ellman

15
  Méthode de dosage
A 0.5ml de la fraction cytosolique 10% (KCl 1,15M) du tissu plantaire nous avons
additionné 0.5 ml d’acide trichloracétique (TCA) 10% puis centrifugé à 2000 tours/min
pendant 5 minutes. Ensuite, à 1.7 ml du tampon phosphate 0.1 M, pH : 8 nous avons
additionné 0.2 ml de surnageant et 0.1 ml du réactif d’Ellman 0.1M. La lecture de la densité
optique est effectuée après 5 minutes à 412 nm contre un blanc préparé dans les mêmes
conditions avec le TCA 10%. Les concentrations du GSH dans l’échantillon sont exprimées
en μm/gramme de tissu. Elle est obtenue grâce à une courbe standard réalisée avec du GSH
dans les mêmes conditions.

Figure 14: préparation des matériels Figure 15: Agitation de réactif d’Ellman
pour le dosage de GSH

2.1.4. Dosage de l’activité de la catalase (CAT) cytosolique

La catalase est une enzyme dismutase, elle contient une fraction hème au site actif et
convertit deux molécules de peroxyde d'hydrogène en oxygène et en eau, elle est impliquée
dans la prévention des dommages cellulaires causés par le stress oxydatif (Kehrer et al,
2010).

L’activité de la catalase cytosolique est déterminée selon la méthode d’(Aebi,

1984).La méthode utilisée est basée sur la propriété de la catalase à dégrader le péroxyde
d’hydrogène H2O2 (Aebi, 1984). On effectue une lecture continue du changement
d’absorbance à 240nm chaque minute dans un intervalle de temps de 2 minutes.

16
  Principe

Le principe repose sur la disparition de l’H2O2à 25 C° par la présence de la source

enzymatique dans la fraction cytosolique.

 Méthode de dosage
La méthode utilisée est basée sur la propriété de la catalase à dégrader le péroxyde
d’hydrogène H2O2 (Aebi, 1984). On effectue une lecture continue du changement
d’absorbance à 240nm chaque minute dans un intervalle de temps de 2 minutes.

 Calcule

- K : Constant de vitesse de la réaction.

- T : Intervalle de temps.

- A1 : Absorbance dans le temps zéro.

- A2 : Absorbance après une minute.

L’activité de l’enzyme est calculée selon l’équation suivante :

U/mg =

n : mg de protéines en mg présentent dans le volume de l’échantillon utilisé.

U/mg de Prot : µmol d’H2o2 consommé/min/mg de protéine.

2.2. Evaluation de l’activité protectrice de l’extrait de polysaccharides

Afin d’étudier la capacité de l’extrait de polysaccharides algaux à prévenir les

inflammations causées par l’injection de la carragénine, nous avons choisi de réaliser le test
d’inhibition in vitro de la dénaturation des protéines (BSA) par la chaleur (72°C) décrit par
Kandikattu et al. (2013).

Nous avons réalisé une gamme de concentrations de l’extrait de polysaccharides

algaux, allant de 50 à 400 μg/ml. 1ml de chaque dilution est ajouté à 1 ml de la solution BSA

17
à 0.2 %préparée dans du PBS (à pH 6.4, NaCl 0.9%). Enfin, le mélange est incubé pendant
5min à 72°C.

Ensuite, nous attendons que les tubes refroidissent avant de les passer au vortex, enfin
l’absorbance des mélanges est lue à 660nm.

Nous avons aussi choisi l’aspirine comme anti-inflammatoire de référence, son activité
anti-inflammatoire a été évalué dans les mêmes conditions appliquées à nos échantillons.

Le pourcentage d’inhibition de la dénaturation thermique a ensuite été calculé en

utilisant l’équation suivante :

(%) Protection = 100- (Do échantillon/Do du contrôle) X 100

Un contrôle positif (un mélange sans extrait de polysaccharides) a été utilisé pour les
calculs.

2.3. Evaluation de l’activité anti-hémolytique de l’extrait de polysaccharides algaux

L’évaluation de l’activité anti-hémolytique d’un extrait est un très bon indicateur

quant à sa capacité à présenter un effet thérapeutique pour plusieurs maladies hémolytiques,
inflammatoires ou encore dégénératives.

Nous allons donc, inspecter à travers ce test la possible activité anti-hémolytique de

notre extrait de polysaccharides algaux, c'est-à-dire sa capacité à prévenir la destruction des
globules rouges soumises à un stress osmotique.

1.3.1 Préparation de la suspension érythrocytaire

Le sang prélevé pour la réalisation de nos tests est récupéré dans des tubes héparines à
partir de personnes volontaires saines qui n’ont pas de pathologies particulières afin d’éviter
toute interférence avec nos résultat.

Le sang est centrifugé à 3000rpm /5min, le culot récupéré et lavé 3 fois avec la
solution PBS iso-saline formée de tampon phosphate de potassium 10mM, pH=7,4 et
154mMde Na Cl. Chaque lavage consiste en une suspension des cellules dans du PBS Iso
salin et une centrifugation à 3000rpm/5min. Après la dernière centrifugation, le culot est
suspendu à nouveau dans une solution du PBS iso-saline, la suspension érythrocytaire est
prête (Rani et al, 2014).

18
Figure 16: L’extrait d’Ulva Figure 17: Echantillons de Figure 18: Le culot
lactuca sang érythrocytaire

1.3.2 Evaluation de la non-toxicité de l’extrait de polysaccharides pour les

globules rouges

Avant de passer à l’évaluation de l’activité anti-hémolytique de notre extrait, nous

devons au préalable nous assurer de son innocuité vis à vis des GR, selon les étapes
suivantes :

 une série de concentrations de l’extrait de polysaccahrides a été préparée dans un

tampon phosphate (pH 7.4 ; 0.9% NaCl) à un hématocrite de 2%.

 Le mélange a été incubé pendant 10 min à température ambiante, ensuite centrifugé à

2000 rpm à 4° C.

 lire l’absorbance du surnageant à 540 nm.

 Le pourcentage de protection a été calculé en utilisant la saponine (à 1200 ug/ml),

c’est notre hémolytique de référence, provoquant 100% d’hémolyse.

 Un tube sans traitement qui représente le témoin négatif a aussi été préparé, afin
d’observer une hémolyse naturelle.

Les pourcentages d’hémolyses de chacune des concentrations utilisées sont calculés suivant
l’équation suivante :

Hémolyse (%) = [DoE- Doc-/ Doc+] X 100

19
DoE : Densité optique de l’échantillon

Doc- : Densité du contrôle négatif

Doc+ : Densité du contrôle positif.

2.3.4 Evaluation de l’activité stabilisatrice des membranes des GR par

l’extrait de polysaccharides contre un stress osmotique
Certains paramètres physicochimiques tel que le milieu hypotonique, peuvent
provoquer la rupture de la membrane cytoplasmique des GR et libèrent par la même occasion
leur contenu en hémoglobine.

L’hémoglobine libérée sera dosée à l’aide du spectrophotomètre à une longueur

d’onde de 540nm.

 Nous avons donc commencé par préparer une série des concentrations en NaCl de
0.3%, 0.5%, 0.7 % et 0.9 %.
 Ensuite, nous avons mélangé 1 ml de la suspension érythrocytaire à 2 % à 1 ml de
l’une des concentrations variables en NaCl citées précédemment (préparées dans
PBS).
 Chacune est combinée par la suite à des concentrations variables de l’extrait (50, 100,
200, 300,400µg/ml), cela veut dire que chaque concentration de l’extrait sera testée
avec les quatre concentrations de NaCl.

2.4 EVALUATION STATISTIQUE

Les résultats sont exprimés en moyenne ±écart-type, n = 5 (nombre des rats dans
chaque groupe): Différence non significative P > 0.05 ; significative *P <0.05 ; **P <
0.01.L’évaluation statistique est effectuée par le logiciel GraphPadPrism 8. Les valeurs du
groupe témoin et celles des groupes traités par l’extrait de polysaccharides algaux sont
analysées par one-wayanalysis of variance (ANOVA) suivi par Student.

20
 Chapitre Ⅳ : Résultats et Discussion

1. RESULTATS
1.1. Effet de l’extrait de polysaccharides algaux sur l’œdème plantaire chez les rats

Le tableau 01 montre l'effet de l'extrait de polysaccharides algaux et du médicament

standard (diclofénac) par rapport au témoin carraghénane à différentes heures dans le
modèle d'œdème de la patte induit par le carraghénane en utilisant un pied à coulisse.
L'extrait de polysaccharides algaux administré à une dose de 100 mg/kg po a
remarquablement empêché l'œdème de la patte induit par la carraghénane avec un
pourcentage d'inhibition de 8,27%, 25,46%, 37,96%, 46,12% et 59,63% à 1, 2, 3, 4 et 5
heures, respectivement, cependant ces valeurs restent inférieures à celles du diclofénac à
la dose de 10 mg/kg p.o. qui a empêché l'œdème de la patte induit par le carraghénane
avec un pourcentage d'inhibition de 19,49%, 45,29%, 67,55%, 73,87% et 82,96% à 1, 2,
3,4 et 5 heures, respectivement.

Tableau 01 : Effet de l'extrait de polysaccharides algaux et du médicament standard

(diclofénac) par rapport au témoin carraghénane.

Temps (heure) 1 2 3 4 5

Contrôle
0,000 0,000 0,000 0,000 0,000
(Sain)

Contrôle
(carragenine)
0,000 0,000 0,000 0,000 0,000

Diclofénac

10 mg/Kg 19,49% 45,29% 67,55% 73,87% 82,96%

Extrait
polysaccharide
8,27% 25,46% 37,96% 46,12% 59,63%
100 mg/kg

21
 [Link] sur la concentration sur la myéloperoxydase

Les niveaux de MPO ont été testé après 5 heures de la provocation de l’œdème plantaire par
au groupe carraghénane. L'effet de l’extrait de polysaccharides algaux sur les niveaux de
MPO est résumé dans le tableau 2. L'injection du carraghénane dans la patte arrière du rat a
induit une augmentation marquée (78,67±3.51 nmol/mg de tissu) par rapport au témoin sain
(27,67±4,37 nmol/mg de tissu) , le traitement avec l’extrait de polysaccharides algaux à la
dose de 100 mg/kg a significativement diminué (p<0,05) le taux de la MPO à 59,76±2,98
nmol/mg de tissu. Le diclofénac-sodium à la dose de 10 mg/kg était le meilleur des
traitements médicamenteux en termes de diminution du taux de MPO de façon significative
(39,42±4,28) (p<0,05).

Tableau 02 : L'effet de l’extrait de polysaccharides algaux sur le niveau de MPO.

Groupes MPO (nmol/g tissue)

Contrôle (Sain) 27,67±4,37

Contrôle (Carraghénane) 78,67±3.51

Diclofénac 39,42±4,28*

Carragenine+ Extrait algal 59,76±2,98*

Les résultats sont exprimés en moyenne ± écart-type, n = 5. ns. : Différence non

significative P > 0.05 ; *P < 0.05 ; **P < 0.01.

1.3. Evaluation de l’effet de l’extrait de polysaccharides algaux sur les paramètres du

stress oxydant

1.3.1. Effet sur la concentration du malonydialdéhyde (MDA)

La figure 9 représente la variation du taux de MDA chez les rats de l’expérimentation.

Pour cette étude, la concentration en MDA a été déterminée sur la fraction cytosolique du
tissu de la patte. Nous avons constaté que chez les rats qui ont reçu uniquement l’injection
plantaire du carragt-hénane , une augmentation significative (P < 0.05) du taux du MDA au
niveau du tissu plantaire(153.9±4.017nmol/g tissu) par rapport au groupe sain (34.54±2.94).
Le diclofénac a quant à lui, signification diminué la péroxydation lipidique (58.87±4.55
nmol/g tissu). Par contre le traitement par l’extrait de polysaccharides algaux a
22
significativement baissé le taux du MDA à 86.96±4.46 nmol/g tissu, mais reste cependant
moins importante que chez le groupe diclofénac.

Figure 19: Effet de l’extrait de polysaccharides algaux sur le taux de MDA plantaire

Les résultats sont exprimés en moyenne ± écart-type, n = [Link]. : Différence non significative P
>0.05 ; *P < 0.05 ; **P < 0.01.

1.3.2. Effet sur la variation du taux plantaire en glutathion réduit (GSH)

Les résultats d’étude de l’influence d’un traitement par l’extrait de polysaccharides

algaux sur le taux de GSH du tissu plantaire sont rassemblés dans la figure 10. Chez les rats
traités par le diclofénac, nous avons constaté une augmentation significative du taux du GSH
plantaire (40.88±2.65 nmol/mg prot) (P< 0.05) par rapport à celui enregistré chez les témoins
sans traitement (uniquement le carraghénane à la patte) qui eux, ont montré une déplétion
importante en GSH (14.18±1.43 nmol/mg prot) par rapport au groupe sain (57.68±3.85
nmol/mg prot ). Par contre, la déplétion du glutathion réduit (GSH) causée par l’injection
plantaire du carraghénane a été en partie limitée à (24.50±1.92 nmol/mg prot) chez le groupe
ayant reçu l’extrait de polysaccharide algaux à la dose de 100 mg/kg, par rapport au groupe
témoin (carraghénane) (P< 0.05).

23
 Figure 20 : Influence de l’administration de l’extrait polysaccharides algaux sur la
concentration du tissu plantaire en GSH

Les résultats sont exprimés en moyenne ± écart-type, n = [Link]. : Différence non significative P
> 0.05 ; *P < 0.05 ; **P < 0.01.

1.3.3. Effet sur l’activité du catalase (CAT) plantaire

L’activité du catalase a été déterminée sur une fraction cytosolique du tissu plantaire.
La figure 11 représente les résultats de l’influence d’un traitement par l’extrait de
polysaccharides algaux sur l’activité de la catalase plantaire. Dans notre étude nous avons
constaté une augmentation significative (P< 0.05) de l’activité de la catalase
(52.22±4.38µmol/min/mg) au niveau du tissu plantaire chez les rats traité par l’extrait de
polysaccharide algaux à une dose de 100mg/kg par rapport à celles de groupe témoins
(carraghénane) (33.69±3.80 µmol/min/mg ), Cependant, les résultats obtenus par l’extrait
restent inférieurs à ceux obtenus par l’administration du diclofénac qui a enregistré une
augmentation significative de l’activité de la CAT (P< 0.05), par rapport au groupe témoin
(carraghénane).

24
 Figure 21 : Effet de l’extrait de polysaccharides algaux sur l’activité de CAT plantaire

Les résultats sont exprimés en moyenne ± écart-type, n = [Link]. : Différence non

significative P > 0.05 ; *P < 0.05 ; **P < 0.01.

1.4. Evaluation de l’activité protectrice de l’extrait de polysaccharides

Figure 22 : Taux de protection contre la dénaturation thermique du BSA en présence de

l’aspirine et de l’extrait de polysaccharides algaux

D’après l’histogramme ci-dessus, nous remarquons que le taux de protection de

l’extrait de polysaccharides est directement proportionnel à la concentration utilisée, allant de

25
18.629 ±1.324% pour la première concentration (50µg/ml) jusqu’à plus de 56.189±1.674%
pour la cinquième (400µg/ml). Cependant, même si ces valeurs restent très intéressantes, elles
sont en dessous de celles enregistrées pour l’aspirine (anti-inflammatoire de référence) qui
vont de 37.699±2.114% pour la première concentration de 50 µg/ml, et jusqu’à
83.682±2.674% pour la cinquième (400µg/ml).

1.5. Evaluation de l’innocuité de l’extrait de polysaccharides pour les globules

rouges
Le tableau 03représente les pourcentages d’hémolyse obtenus après l’incubation des
GR avec l’extrait de polysaccharide algaux, les taux ont été calculés en prenant en
considération un témoin positif (GR avec saponine) et un témoin négatif (hémolyse naturelle).

Tableau 03 : Pourcentage d’hémolyse avec différentes concentration de l’extrait algaux.

Concentration de l’extrait (µg/ml) %Hémolyse

50 1.48±0.11%

100 1.17±0.37%

200 2.55±0.63%

300 3.59±0.51%

400 4.67±0.214%

On a observé que l’extrait de polysaccharide présent un taux très faible d’hémolyse

allant de 1.48±0.11% à 4.67±0.214% en comparaison avec les témoins (positif et négatif) qui
reste très inférieurs et négligeables même avec concentration de 400µg/ml de l’extrait de
polysaccharide algaux, ces résultats restes très intéressants.

1.6. Evaluation de l’activité stabilisatrice des membranes des globules rouges par
l’extrait de polysaccharide contre un stress osmotique
Un globule rouge placé dans l'eau pure subit une pression osmotique considérable. En
absence de contre-pression appliquée dans le cytoplasme, la solution (hypotonique) diffuse
vers l'intérieur de la cellule (hypertonique) à travers la membrane. L'entrée massive d'eau dans
l'hématie entraîne le gonflement puis l'éclatement du globule rouge. Ce test nous permet
26
d’évaluer la capacité de notre extrait de polysaccharides algaux à donner une stabilité aux
membranes des GR et donc d’éviter leur éclatement par hémolyse. Les résultats obtenus sont
exprimé sur le graphique si dessous :

0,30% 0,50% 0,70% 0,90%

80
75.146%
70
66.228%
60
59.654%
50
51.941%
% protection

40

30

20

10

0
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450
Concentration (µg/ml)

Figure 23: Pourcentage de protection des GR en fonction des concentrations de l’extrait de

polysaccharides algaux contre un stress osmotique

Nous remarquons que le pourcentage de protection des GR par l’extrait algal

augmente proportionnellement avec la concentration de ce dernier ainsi que la concentration
de la saline utilisée. L’activité maximale était enregistrée à une concentration de 400 μg/ml
pour donner respectivement 51,941 % , 59,654 %, 66,228 % et 75,146 % avec les
concentration de la saline suivantes : 0.3% , 0.5% , 0.7 et 0.9%.Les résultats obtenues sont
assez intéressants dans la mesure où elle démontre la présence d’une activité protectrice vis-à-
vis des GR contre le stress osmotique et donc de prévenir l’hémolyse.

27
Discussion
La réaction inflammatoire peut être associée à une très grande variété de situations
Pathologiques : l’infection, l’arthrite, l’athérosclérose, le cancer et certaines maladies
mortelles (Lee et al., 2013) .Ainsi, bien qu’elle soit indispensable à la survie de l’organisme
agressé, L’inflammation n’ est pas moins dangereuse (Galanaud, 2003). Cependant, les
médicaments commercialisés tel que les anti-inflammatoires stéroïdiens, anti-inflammatoires
non stéroïdiens, anesthésiques Locaux, sont insatisfaisants, contraignants et entrainant
beaucoup d’effets indésirables : ulcères Gastriques, action immunosuppressives, insuffisance
rénal , convulsions, accidents cardiovasculaire (Stewart et al., 2003). D’où la Nécessité de la
recherche de nouvelles molécules qui pourraient agir directement sur la douleur et les
médiateurs de l’inflammation ayant ainsi moins d’effets secondaire possible.

Les algues prennent de l’importance dans divers domaines allant de l’alimentation à la

médecine, elles représentent une source riche en composants biologiques actifs qui possèdent
divers avantage pour la santé (Mayer et al., 2003) qui pourraient être utilisés comme des
agents thérapeutiques (Madhusudan et al., 2011). Il a été démontré que des extraits ainsi que
des composés de divers structures obtenu à partir des algues vertes et des algues brunes
capables d’inhiber l’inflammation (Hoang et al., 2007 ; Kang et al., 2008). De même, les
Ulva sp. (algues vertes) ont été connu pour divers composés bioactifs fonctionnels qui ont été
étudiés pour leurs activités.

Plus précisément, les polysaccharides sont les principaux composants des algues. Ils se
produisent généralement dans la gamme de 5 à 75% de leur poids sec selon l’espèce, l’âge ou
la saison de récolte, (Hentati etal., 2020). L’importance des polysaccharides réside dans le
fait que nombre d’entre elles sont des polysaccharides sulfatées, non présents dans les
plantes terrestres et lié à plusieurs avantages pour la santé. Leur occurrence est spécifique
pour chaque espèce de macroalgue (Hentati et al., 2020). Par exemple, les algues vertes
contiennent de l’ulvane, les algues brunes sont riches en alginate, laminarine, fucanes et
fucoidans, tandis que les macroalgues rouges sont composé du carraghénane, d’agar,
d’amidon de floride, mais aussi d’autres galactanes. Ces les différences dans leur structure
chimique entraînent les propriétés de polysaccharide (Raposo et al., 2005). Ulvan est un
polysaccharide majeur présent dans les Ulva sp. Il comprend de 9 % à 36 % de la biomasse
de poids sec des cellules d’Ulva sp. (Morelli et al.,2017 ; Kidgel et al., 2019) . ils sont

28
largement utilisé comme additifs alimentaires et plusieurs études ont examiné ses avantages
thérapeutiques (Madhusudan et al., 2011 et Lakshmi et al., 2020).Généralement, ils
possèdent plusieurs activités tel que l’activité ,anti-hyperlipidémiante (Pengzhan et al.,
2003) , anti-tumoral (Lee et al., 2004) antioxydant (Qi et al., 2006),anti coagulant,(Mao et
al., 2006) anti-inflammatoire (Margret et al.,2009) , anti -viral (Chiu et al., 2013).

Ce travail vise à mettre en évidence l’activité anti-inflammatoire d’un extrait brut de

polysaccharides algaux obtenu de l’algue verte Ulva lactuca , on utilisent des test in vivo sur
un modèle animal de l’inflammation aigue, et des tests in vitro pour l’évaluation de la non-
toxicité vis-à-vis les globules rouges ainsi que le test d’inhibition de la dénaturation des
protéines (BSA) .

L’œdème est l’un des signes importants de l’inflammation aigue, c’est un paramètre
très important dans l’évaluation de l’activité anti-inflammatoire de plusieurs molécules (
Morris, 2003). Dans notre étude l’œdème inflammatoire à était reproduit expérimentalement
par injection du carraghénane dans la patte arrière gauche des rats « wistar » (Winter et al.,
1962), afin d’étudier l’effet anti-inflammatoire et d’essayer de comprendre le mode d’action
de l’extrait de polysaccharides algaux. L’inflammation provoquée par cet agent phlogogène
est développée sous forme de gonflement (œdème inflammatoire) et une augmentation du
volume de la patte de rat jusqu’à 50 % du volume initial.

D’après Rahmbmhatt et al (2010) l’inflammation au niveau de la patte postérieure

induite par la carraghénane est un modèle expérimentale standard pour l’étude de
l’inflammation aiguë, elle provoque une inflammation locale sur le point d’application. Nos
résultats ont clairement démontré que l’extrait de polysaccharide algaux a un effet anti-
œdématogène chez les rats ,avec un pourcentage d’inhibition de 8,27%, 25,46%, 37,96%,
46,12% et 59,63% à 1, 2, 3, 4 et 5 heures, respectivement par rapport au groupe carraghénane.

Des travaux similaire de Margret et al (2009) ont démontré que les polysaccharides
isolées de Ulva lactuca possèdent des propriétés anti-inflammatoires en réduisant l’œdème de
la souris après 4 jours dans une expérimentation animal. Aussi, selon les travaux précédents
un effet anti-inflammatoire a été rapporté chez les deux Algues vertes des genres
Enteromolpha (Okai et al., 1997) et Ulva (Hong et al.,2011) .cette activité est due à cause
de leurs teneur en acides gras, en terpènes et en polysaccharides, ces molécules s’avèrent
Etre dotées d’ activité anti-inflammatoire (Assreuy et al., 2008).

29
 Une autre étude de Rodrigues et al, (2013)sur les activités anti-inflammatoires et
anti-nociceptive des PS : le polysaccharide issu de l’algue verte Caulerpa cupressoides a été
injecté par voie sous-cutanée pour des rats mâles Wistar dans un modèle de péritonite et un
modèle d’œdème de la patte. Ont trouvé que le PS-CC a évidemment montré des effets anti-
inflammatoires en diminuant la migration des neutrophiles et en réduisant le volume l’œdème
de la patte.

L’agrégation des leucocytes dans l’environnement inflammatoire est un évènement

fondamental de l’inflammation. La dégradation des pathogènes s’effectue par deux
mécanismes concomitants : la production de formes réactives de l’oxygène (ROS : reactive
oxygen species) par la voie du NADPH oxydase et la libération, de protéines enzymatiques
(myéloperoxydase, élastases, lysosyme, gélatinase) et antimicrobiennes (lactoferrine,
bactericidal/permeability-increasing protein ou BPI, défensines) par les granules des
polymorphonucléaires neutrophiles (Segal, 2005 ; Pierce, 2009).

La réponse inflammatoire de la patte induite par la carraghénane s’accompagne d’une

infiltration intense des neutrophiles (Souza et al., 1998). L’activité de la MPO est
généralement considérée comme un paramètre biochimique et un indicateur important
d’infiltration de neutrophiles (Bradley et al.,1982). Nos résultats ont démontré que le
traitement avec l’extrait de polysaccharides algaux à la dose de 100 mg/kg a significativement
diminué (p<0,05) le taux de la MPO à 59,76±2,98 nmol/mg de tissu par rapport au groupe
control carraghénane 78,67±3.51 nmol/mg. On peut suggérer que notre extrait a inhibé
l’infiltration des neutrophiles, qui a été évident de l’activité réduite de MPO mesurée dans les
pattes des rats.

Des résultats similaires des travaux menés par Tarcisio et ces collaborateurs en
(2013) ont rapporté une diminution de l’activité de MPO à 5 (UMPO)/mg de tissu, mesurée
dans le tissus de la patte chez les animaux traités par la fraction de polysaccharides algaux
par rapport au groupe control carraghénane 30 (UMPO)/mg de tissu. Ainsi une diminution des
neutrophiles péritonéaux et, la cytokine pro-inflammatoire (IL-1β) dans le liquide péritonéal
qui présente des effets multiples, dont l’activation des cellules inflammatoires, induction de
plusieurs protéines inflammatoires, cytotoxicité, formation d’œdèmes et migration des
neutrophiles (Rosenbaum, 1991).

De plus, le polysaccharides obtenu à partir du la microalgue rouge Porphyridium a

inhibé le recrutement des cellules immunitaires en bloquant la migration et l’adhérence des

30
leucocytes polymorphonucléaires (Matsui, 2003). L’administration orale de polysaccharide
brut soluble dans l’eau d’algue brune Turbinaria orné évoquait une inhibition considérable sur
la perméabilité vasculaire induite par l’acide chez la souris (Ananthi, 2010).

C’est bien établi que les AINS inhibent la migration des cellules en inhibant la
libération de médiateurs chimiques (Prempeh et al.,2008), inhibant l’expression de molécules
d’adhésion cellulaire (Endemann et al., 1997) et inhibant la motilité cellulaire (Phelps et al.,
1971). Compte tenu de ces résultats, il est possible que l’extrait de polysaccharides sulfatés a
inhibé la migration des neutrophiles en un ou plusieurs de ces mécanismes.

Les espèces réactives de l’oxygène (ROS) telles que l’anion superoxyde radicaux (O
2), espèces de radicaux hydroxyle (- OH), et de l’hydrogène peroxyde (H2O2) sont des
espèces d’oxygène actifs qui sont souvent générés par des réactions d’oxydation biologique
(Cheeseman et al., 1993). Il est bien connu que les ROS sont couramment produites au cours
des processus inflammatoires, elles sont impliquées dans la transduction du signal,
l’activation des gènes, et peuvent provoquer des dommages aux cellules hôtes et aux organes
(Li et al, 2010) .

La production excessive d’espèces réactives de l’oxygène dans l’environnement

inflammatoire peut causer des dommages oxydatifs aux macromolécules biologiques telles
que les protéines, les acides nucléiques, les lipides et l’ADN (Xie et al., 2015). Les lipides
sont le cible le plus courant du stress oxydatif, et leur produit d’oxydation, le MDA, peut
causer de graves dommages au complexe de la chaîne respiratoire mitochondriale et à la
membrane cellulaire, il est largement utilisé comme marqueur de la peroxydation lipidique
(Wang et al., 2010). Par conséquent, l’élimination des ROS est considérée comme important
pour contrôler inflammation.

Dans la présente étude nous avons choisi de doser l’enzyme anti-oxydante (CAT), la
molécule anti-oxydante andogène (GSH) et le produit d’oxydation des lipides (MDA) pour
mettre en évidence le stress oxydatif. Nous avons observé une augmentation significative (P<
0.05) de l’activité de la catalase à (52.22±4.38µmol/min/mg) et de GSH à (24.50±1.92
nmol/mg prot) et une diminution du taux de MDA à (86.96±4.46 nmol/g) dans le tissu
plantaire chez les rats traités par l’extrait de polysaccharides algaux à une dose de
100mg/[Link] rapport au groupe carraghénane dont le taux est :
CAT(33.69±3.80µmol/min/mg),GSH(14.18±1.43 nmol/mg prot) et MDA(153.9±4.017nmol/g
tissu). Ce qui était conforme à l’étude de Godard et al, (2009) qui ont démontré que le

31
polysaccharide d’U. lactuca pourrait significativement augmenter les activités de différents
systèmes de lutte contre les radicaux libres comme la superoxyde dismutase (SOD) , la
glutathion peroxydase (GSH-Px) et surtout inhiber la peroxydation lipidique et la production
d’anion superoxyde. Ainsi les fractions des polysaccharides extraites d’Ulva lactuca ont
montré un effet inhibiteur significatif sur l’hydroxyle et l’activité des radicaux superoxydes
(Qi et al.,2010).

Li et ces collaborateur sen (2018) ont démontré que les composants des
polysaccharides algueux peuvent augmenter l’activité de la glutathion peroxydase (GSH), la
superoxyde dismutase (SOD), la catalase (CAT), la télomérase, et les antioxydants totaux et
diminuent le taux de malondialdéhyde (MDA). La forte activité antioxydante de l’ulvane
d’Ulva sp est corrélée à la position et la composition en sulfate et leur poids moléculaire(
Massironi et al.,2019). De plus, l’ulvane à haute teneur en sulfate a une capacité antioxydante
évidente et une activité hypolipidémiante (Li et al.,2020). Cependant, les polysaccharides
sulfatés n’ont pas tous des activités anti-oxydantes élevées, puisque plusieurs facteur tels que
le poids moléculaire, la composition des monomères, le degré de la sulfatation et de la
position du sulfate peut considérablement modifier leur activité anti-oxydante (Zhong et al,
2019). Selon des études menées en 2015, 2019 et 2020, plusieurs sources d’ulvanes d’Ulva sp
se sont avérées avoir un effet antioxydant ; ils comprennent U. lactuca et U . ohnoi (bondu et
al.,2015)U. rigida (Fernandes et al.,2019) et U. australis (Trentin et al., 2020).

Chez les souris hypercholestérolémiques, l’ulvane réduit le stress oxydatif en

augmentant l’activité des enzymes antioxydantes (110 % pour CAT, 77 % pour GPx et 23 %
pour SOD) et le niveau des antioxydants non enzymatiques (GSH). Ces changements limitent
les conséquences de l’endommagement des macromolécules en minimisant la peroxydation
des lipides et l’oxydation des protéines (Bkhairia et al, 2017). L’administration d’Ulvan à
des souris exposées à un stress extrême a empêché le métabolisme anormal des lipides, et
modulé les systèmes de défense antioxydant du foie, et réduit la peroxydation lipidique
(Wang et al, 2013).

Dans un second volet de notre étude. Le criblage de l'activité anti inflammatoire a été
aussi réalisé in vitro par teste de la dénaturation des protéines et stabilisation des membranes
des globules rouges. (EL Opie, 1962 ; Kumar et al., 2011).

Le sang est un liquide rouge biologique circulant dans les artères et les veines sous
l’impulsion du cœur. Un individu en contient de 5à 7 litres de sang dans son corps, ce qui
représente environ 8% de son poids total. Le sang est constitué des globules (hématies,
32
leucocytes …) contenus dans un liquide riche en élément minéraux (chlorure de sodium …) et
en protéines (plasma). Il jour un rôle essentiel dans le transport de l’oxygène, les hormones et
les nutriments à toutes les cellules, tous les tissus et tous les organes du corps.

Les globules rouges, encore appelés « hématies ou érythrocyte» est les cellules
sanguines les plus abondantes anucléées dont le cytoplasme est constitué essentiellement
d’une hémoprotéine (hémoglobine), les globules rouges se présente comme un disque
biconcave qui possède une capacité de déformation lui permettant de circuler jusqu’au
capillaires sanguins, le membranes de l’hématies est le siège des antigènes qui déterminent les
groupes sanguins (système ABO, système rhésus et autre systèmes érythrocytaires).
(Raymonde Gilles et Michel Anctil, 2006).

Dans notre expérience afin d'étudier la capacité d'un extrait de polysaccharide d'algaux
à inhiber l'inflammation induite par des injections de carragénnine, nous avons choisi de
réaliser un test in vitro d'inhibition de la dénaturation des protéines (BSA) par la chaleur
(72°C) (Kandikattu et al.,2013).

Selon EL Opie (1962), La dénaturation des protéines est un processus dans lequel les
protéines perdent leur structure tertiaire et leur secondaire par application d’une contrainte ou
d’un composé externe, tel qu’un acide ou une base forte, un seul inorganique concentré, un
solvant organique ou la chaleur. La plupart des protéines biologiques perdent leur fonction
biologique lorsqu’elles sont dénaturées, la dénaturation des protéines tissulaires est l’une des
causes d’inflammation bien documentées

Dans notre étude, nous remarquons que le taux de protection de l’extrait de

polysaccharides algaux d’Ulva Lactuca est directement proportionnel à la concentration
utilisée, allant de 18.629 ±1.324% pour la première concentration (50µg/ml) jusqu’à plus de
56.189±1.674% pour la cinquième (400 µg/ml). Cette proportion directe aux résultats avec
des concentrations variables et croissant (18.629 ±1.324%... jusqu’à 56.189±1.674%) indique
que l’extrait polysaccharides algaux d’Ulva Lactuca inhibant la dénaturation des protéines
ont des propriétés anti-inflammatoires. Nous avons aussi choisi l’aspirine comme anti-
inflammatoire de référence, son activité anti-inflammatoire a été évalué dans les mêmes
conditions appliquées à nos échantillons. Ce qui a été démontré par Brown et al, (1968) et
Grant et al, (1970) où ils ont été trouvés les polysaccharides issus des algaux ont montré de
nombreuses fonctions biologiques bénéfiques telles que l'antioxydant, l'anti cancérogène,
l'antiviral, l'administration ciblée de médicaments, activités cicatrisantes et anti-
inflammatoires.
33
 Les processus inflammatoires et anti-inflammatoires impliquent de nombreuses
molécules, dont la plupart sont des protéines. La dénaturation de ces protéines leur fait perdre
leurs propriétés biologiques, ce qui peut déclencher ou accentuer l'inflammation (Brown et al,
1968). Cette dénaturation passe souvent par l'altération des liaisons qu'ils constituent
(hydrogène, électrostatique, hydrophobe et disulfure). (Grant et al., 1970). Leurs résultats ont
montré que l’extrait de polysaccharide avaient une bonne activité anti dénaturation de la BSA.

Williams et al,(2002). Ont montré que le sérum sérique bovine contenait deux sites
actifs avec l’acide aminée thréonine, lysine et tyrosine auxquels les molécules bioactives
pouvaient se lier pour activer et réguler la transduction du signal.

Selon Duganath et al, (2010). Rapportent que cet effet pourrait également être due à
la liaison des molécules bioactives au plasma protéines et ainsi les protéger de toute agression.

L'étude menée par Williams et al, (2008). A montré que Il a été ont rapporté que l'une
des caractéristiques de plusieurs anti-inflammatoires non stéroïdiens est leur capacité à
stabiliser (empêcher la dénaturation) l'albumine traitée thermiquement au pH physiologique
(pH : 6,2-6,5).

La dénaturation des protéines est l’une des causes de plusieurs maladies

inflammatoires. En effet, la dénaturation des protéines tissulaires est l'une des causes des
maladies auto immunes telles que l’arthrite ou la production d'antigènes auto dénaturation
(Umapathy et al, 2010).

D’autre part, l'hémolyse est classiquement définie comme un processus de rupture

et de destruction des érythrocytes se produisant soit à l'intérieur (par exemple, in vivo,
également connu sous le nom "d’hémolyse intra vasculaire" ou "anémie hémolytique"), soit à
l'extérieur (c'est-à-dire in vitro, également connu sous le nom "d’hémolyse d'impulsion")
(Lippi et al, 2011). Bien que la concentration « normale » (c'est-à-dire physiologique)
d'hémoglobine libre soit généralement comprise entre 0,22 et 0,25 g/L dans le sérum et entre
0,10 et 0,13 g/L dans le plasma (Lippi et al, 2014). La définition de l'hémolyse est
généralement réservée aux conditions où les échantillons de sérum ou de plasma contiennent
une concentration d'hémoglobine acellulaire > 0,5 g/L et affichent une couleur rose à
légèrement rouge. Lorsque la concentration d'hémoglobine acellulaire dépasse 2 à 3 g / L, elle
est souvent appelée hémolyse «grossière» ou «franche» et s'accompagne d'une couleur rouge
à brune du sérum ou du plasma, en fonction de la quantité finale de protéines (Lippi et al,
2011).

34
 Afin d'évaluer l'activité anti-hémolytique de l'extrait de polysaccharide d’algaux
d’Ulva lactuca, nous avons examiné l'activité anti-hémolytique potentielle (hémolyse de
l'extrait de polysaccharide d'algaux, c'est-à-dire sa capacité à empêcher la destruction des
globules rouges soumis à un stress osmotique). Nous remarquons que les pourcentages
d’hémolyse obtenus après l’incubation des GR avec l’extrait de polysaccharides algaux
d’Ulva lactuca ont démontré que l’extrait présente une très faible cytotoxicité à des
concentrations variables et qui ne dépasse pas les 5%. Ce qui a été démontré par (Lahaye et
Robic (2007)) les résultats des travaux ont indiqué que l'extrait d'Ulvan, un polysaccharide
marin sulfaté issu l'algue marine verte Ulva lactua est d'une grande versatilité, non toxique.
(Lahaye et Robic, 2007).

Aussi selon Mccray et al, (2000). Les résultats ont également montré que les algaux
verts possèdent une activité hémolytique très inférieure et qu’elles peuvent en outre être
utilisées pour l’isolement de composés bioactifs.

L’évaluation de l’activité stabilisatrice des membranes des GR par l’extrait de

polysaccharides algaux d’Ulva lactuca contre un stress osmotique. Le principe de cette
méthode est basée sur la capacité des extraits à empêcher l’hémolyse des GR humaine, induite
par l’hypotonie et la chaleur et donc prévenir la libération de l’hémoglobine. Le pourcentage
de protection des GR par l’extrait polysaccharide algal Ulva lactuca augmente
proportionnellement avec la concentration de ce dernier ainsi que la concentration de la saline
utilisée.

L’activité maximale était enregistrée à une concentration de 400 μg/ml pour donner
respectivement 51,941 %, 59,654 %, 66,228 % et 75,146 % avec les concentrations de la
saline suivantes : 0.3%, 0.5%, 0.7 et 0.9%, ceci indique que nos résultats démontrent une
activité protectrice contre les érythrocytes et contre les stress osmotique, empêchant ainsi
l’hémolyse. Ce qui a été démontré par Kumar et al, (2011). Les lysosomes sont des organites
cellulaires, présents dans le cytosol de toutes les cellules eucaryotes animales à l’exception
des hématies, vu les similitudes existant entre la membrane érythrocytaire et la membrane
lysosomale, l’effet de l’extrait polysaccharides algal verts sur la stabilité des hématies pourrait
être extrapolé à la stabilisation de la membrane lysosmale. Cette stabilisation est importante
pour limiter la réponse inflammatoire en empêchant la libération des constituants lysosomaux.

Selon Okoli et al, (2008). Les leucocytes jouent un rôle central dans l'infiltration
cellulaire au cours du processus inflammatoire En libérant des enzymes lysosomales, telles
que les protéases, l'extrait de polysaccharide algaux Ulva intestinalis était plus efficace pour
35
protéger contre l'hémolyse induite par la chaleur car la membrane lysosomale est similaire à
celle des globules rouges et l'inhibition de l'hémolyse donne une bonne vision du processus
inflammatoire. En effet, la stabilité cellulaire La membrane empêche la lyse et la libération de
substance cytoplasmique, stoppant ainsi l'inflammation.

L’extrait polysaccharidiques des algaux vertes Ulva rigida (Ray et Lahaye, 1995),
Ulva fasciata (Shonima et al, 2012), Ulva intestinalis (Okoli et al., 2008) donne de la
stabilité aux membranes des GR, évitant ainsi leur éclatement par hémolyse. Il a déjà été
décrit comme ayant une forte activité anti-inflammatoire.

Et enfin. Le but de cette étude était de savoir si le polysaccharide a ou non un potentiel

protecteur. Dans notre étude, basée sur plusieurs références et de nombreux articles, nous
avons constaté que les polysaccharides sulfatés présentent des activités biologiques
importantes telles que des activités anticoagulantes (Abd El-baky et al., 2009), antioxydantes
(Yildiza, 2012), anticytotoxiques (Mezghani, 2013), ainsi que des activités anti-bactérienne
(Berri et al., 2016), antivirales (Aguilar et al., 2015) et anti-inflammatoires (Brown et al.,
1968). Malgré les recherches avancées sur les sucres, il existe peu d'études par rapport à leur
grande variété. Il serait donc intéressant d'identifier et de caractériser les nouvelles activités
biologiques des polysaccharides, notamment ceux d'origine végétale, afin d'augmenter
l'utilisation des remèdes naturels dans les domaines médical et nutritionnel. Afin de mieux
évaluer les potentiels biologiques des polysaccharides, il est souhaitable d'exploiter et
d'étendre diverses recherches d'investigation.

36
 Conclusion et perspectives

Conclusion et perspectives

À l'heure actuelle, la recherche des anti-inflammatoires naturelles comme d’autres

sources des anti-inflammatoires de synthèse a émergé et l'exploitation des divers métabolites
secondaires de les algues a été souligné ces dernières années.

Les extraits d'algaux sont également utilisés dans de nombreux domaines, y compris le
secteur pharmaceutique, Les principes actifs extraits des algaux sont utilisés comme anti-
inflammatoires, pour lutter contre la prise de poids, pour leur effet laxatif ou pansement, les
micro-algues peuvent être utilisées pour améliorer le confort des diabétiques. Certains sucres
issus des algaux peuvent également modifier l'absorption intestinale de la réponse du glucose
et de l'insuline à la nourriture... etc.

L'algaux verte Ulva lactuca a une force pharmacologique et des indications Beaucoup
thérapeutiques. L’inhibition du développement de l’œdème de la patte induit par la
carraghénane dans les rats permet de conclure que l’extrait polysaccharide possède une
activité anti-inflammatoire, et comparable à celle de diclofénac qui est un anti-inflammatoire
de référence.

L'activité anti-inflammatoire de l'extrait de polysaccharide a été évaluée pour l'algaux

verte Ulva lactuca par essai d'inhibition de la dénaturation des protéines. Nous avons constaté
que l'extrait de polysaccharide d'Ulva lactuca a une capacité intéressante à faire face au
processus inflammatoire en régulant le statut redox cellulaire et en réduisant le taux de
dénaturation des protéines.

Alors que dans le test de stabilisation de la membrane des globules rouges humains,
L'extrait polysaccharidique d'Ulva lactuca a montré la capacité de protéger la dégradation
membranaire, les extraits de cette algue pourraient donc être utilisés sous diverses formes en
algothérapie grâce à ses diverses activités biologiques.

Les résultats obtenus dans notre étude serviront de support dans le futur, afin de
compléter et d’approfondir cet axe par des études avancées (composition osidique, degré de
sulfatation, mécanismes d’action moléculaire).

37
 Des travaux supplémentaires sont nécessaires pour tester d'autres doses et d'autres
extraits d'algues. Il est également intéressant d'identifier les principes actifs des algues ainsi
La structure et la méthode de leur travail.

38
 Références bibliographiques

Références bibliographiques

A
Abd El-Baky, HH, El-Baz FK, El-Baroty, GS. (2009).Potential Biolo-Gical Properties of
Sulphated Polysa-Ccharides Extracted From The Macroalgae Ulva Lactuca L. Acad J
Cancer Research 2: 1-11.

Ananthi, S, Raghavendran, H.R, Sunil, A.G, Gayathri, V, ramakrishnan, G, Vasanthi.

(2010). In vitro antioxidant and in vivo anti-inflammatory potential of crude polysaccharide
from turbina ria ornata (Marine Brown Alga). Food Chem. Toxicol., 48, 187-192

Aratani Y,(2018).Myeloperoxidase: Its role for host defense, inflammation, and neutrophil
function. Arch Biochem Biophys. Feb 15;640:47-52.

Assreuy, D. M. Gomes, M.S.J. Silva, V. M. Torres, R.C.L. Siqueira, A. F. Pires, D.N.

Criddle, N.M.N. Alencar, B.S. Cavada, A.H. Sampaio et W.R.L. Farias .(2008).Biological
Effects of Sulfated-Polysaccharide Isolated from the Marine Red Algae Champia Feldmannii.
Biol. Pharm. Bu ll., 31(4), 691-695. .

B
Barriento L .(2014).Modulation fonctionnelle des cellules dendritiques par les « Neutrophil
Extracellular Traps ». Cytokines, chimiokines et immunopathologie, 01 :11-16.

Baumloh A, (2000).Encyclopédie du médicament, Vidal, Paris, 166-167.

Berri, M., Slugocki, C., Olivier, M., Helloin, E., Jacques, I., Salmon, H. & Collen, P. N.
(2016).Ulvane, un polysaccharide sulfaté d’Ulva armoricana, stimule la réponse immunitaire
intestinale par un mécanisme impliquant la voie de signalisation TLR4/Akt

Bkhairia, I, Ben Abdallah, F, Jaballi, I, Ktari, N, Boudawara, O, Nasri, M, gharsallah,

N, Hakim, A, Ben Amara, I. (2017),Potential protective effects of polysaccharide extracted
from Ulva lactuca againstMale reprotoxicity induced by thiacloprid. Arch. Physiol.
Biochem.123, 334–343. [CrossRef] [PubMed]

39
Bondu, S, Bonnet, C, Gaubert, J, Deslandes, É, Turgeon, S, Beaulieu, L.
(2015).Bioassay-guided fractionationApproach for determination of protein precursors of
proteolytic bioactive metabolites from macroalgae.J. Appl. Phycol., 27, 2059–2074.
[CrossRef]

Bradley.R, [Link] , G. Rothstein .(1982). Myéloperoxydase cellulaire et

extracellulaire dans l’inflammation pyogénique Sang , 60, p. 618 – 622

Bradley PP, Priebat DA, Christensen RD, Rothstein G .(1982).Measurement of cutaneous

inflammation: estimation ofneutrophil content with an enzyme marker. J Invest Dermatol,78:
206-9.

Brahmbhatt M, M. PATEL , B. PATEL , A. K. SALUJA .(2010). Analgesic and Anti-

inflammatory activity of leaves of Rivea [Link] Phytother. 1 (1),
001- 003

Brown, H. Mackey. (1968).Inhibition of heat-induced denaturation of serum proteins by

mixtures of nonsteroidal anti-inflammatory agents and amino acids, Proc. [Link]. Biol.
Med. 128 (1),225–228.

C
Cheeseman, K.H. , Slater, T.F. (1993).An introduction to free radical [Link].
Med. Bull., 49, 481-489.

Chen, L., Deng, H., Cui, H., Fang, J., Zuo, Z., Deng, J., et Zhao, L. (2018). Inflammatory
responses and inflammation-associated diseases in [Link], 9(6): 7204-7206.

Chiellini, F. ; Morelli, A. (2011).Ulvan une plate-forme polyvalente de biomatériaux issus de

ressources renouvelables. Biomatière. Phys. Chim. [Google Scholar] [CrossRef ].

D
Devilier P. (2001).Pharmacologie des drogues anti-inflammatoires non Stéroïdiens et de la
pathologie ORL, ELSEVIER, France.70-9. . 5.

Duganath, S.R. Kumar, R. Kumanan, K. Jayaveera. (2010) .Activity of traditionally used

medicinal plants, Int. J. Pharm. Bio Sci.1 ,2.

40
 E
EL Opie. J. Exp. Med.(1962).On The Relation of nicrosis and Inflamationto denaturation of
proteins 115, 597-608.

Espinosa .E, Chillet P. (2006).Immunologie. Èdition [Link]. P :16- 110- 114-117-

121-114-128.

F
Fernandes. H, Salgado. J, Martins. N, Peres. H, Oliva-Teles.A, Belo. I.
(2019).Sequential bioprocessing of Ulva rigida to produce lignocellulolytic enzymes and to
improve its nutritional value as aquaculture [Link]. Technol.281, 277–285.
[CrossRef]

Fischer W., Schneider M. & Bauchot M.-L., (1987).Guide F.A.O d’Identification des
Espèces pour les Besoins de la Pêche, Méditerranée et Mer Noire – Zone de Pêche 37,Volume
1 : Végétaux et Invertébrés, 1-1

G
Godard, M. Décordé, K. Ventura, E. Soteras, G. Baccou, J. Cristol, J. Rouanet, J.
(2009).Polysaccharides from the green alga Ulva rigida improve the antioxidant status and
prevent fatty streak lesions in the high cholesterol fed hamster, an animal model of
Nutritionally-induced atherosclerosis. Food Chem., 115, 176–180. [CrossRef]

Grant, H.E. Alburn, C. Kryzanauskas. (1970) .Stabilization of serum albumin by anti

inflammatory drugs, [Link]. 19 (3) ,715–722.

Guiry M.-D. & Guiry G.-M. (2014).[Link]-wide electronic publication,

National University of Ireland, Galway.(En ligne) (Sans date) Adresse URL : Consulté le
16/02/201

H
Hajjaj G .(2017).Screening phytochimique, étude toxicologique et valorisation
pharmacologique de matricaria chamomilla l. et de l’ormenis mixta l. (asteraceae). Thèse de
Doctorat, Université MohammedV,Maroc,216
41
Hartman PE .(1983). Review: putative mutagens and carcinogens in foods.
[Link] Mutagen ; 5:603_7.

Hentati, F., L. Tounsi, D. Djomdi, G. Pierre, C. Delattre, A. V. Ursu, Fendri, S.

Abdelkafi, and P. Michaud. (2020).Bioactive polysaccharides from seaweeds. Molecules 25
(14) :[Link] : 10.3390/molecules25143152.

Honda D, Yokochi T, Nakahara T, Erata M, Higashihara T. (1998). Schizochytrium

limacinum sp. Nov., a new thraustochitrid from a Mangrove area in the west Pacific
[Link]. Res. 102(4) : 439

Hong, H.M. Hien, and H.T.L. Anh.(2011).Studies on the analgesic and Anti-inflammatory
activities of Sargassum swartzii (Turner) C. Agardh (Phaeophyta) and Ulva reticulata
Forsskal (Chlorophyta) in experiment animal [Link] Journal of Biotechnology,
10(12), 2308-2314.

J
Jean-Luc A., Lefranc G. (2009). Immunologie humaine. Èdition De [Link],P :59

Jesus Raposo, M. F., A. M. B. De Morais, and R. M. S. C. De Morais. (2015).

Marinepolysaccharides from algae with potential Biomedical [Link] Drugs 13
(5) :2967–3028. Doi : 10.3390/md13052967.

Jha, R. and Zi-rong, X. (2004).Biomedical Compounds from Marine organisms. Marine

Drugs, 2(3) : 123–146.

K
Kandikattu, K., Bharath, RKP, Venu, PR, Sunil, KK, Ranjith Singh, BR.
(2013).Evaluation of anti-inflammatory activity of Canthium parviflorum by in-vitro
[Link] J. Res. Pharm. Biotech. 1(5), , 729-730.

Kang JY, Khan MNA, Park NH, Cho JY, Lee MC, Fujii H, Hong YK .(2008).
Antipyretic, analgesic, and anti-inflammatory activities of the Seaweed Sargassum fulvellum
and Sargassum thunbergii in mice.J. Ethnopharmacol.116 : 187-190

Kehrer, [Link], [Link].(2010). Comprehensive toxicology;1: 277-307.

42
Kidgel, JT , Magnusson, M. , de Nys, R. , Glasson. (2019).CRK Ulvan : Une revue
systématique de l’extraction, de la composition et de la fonction. Algal Res., 39 , 101422. [
Google Scholar ] [ CrossRef ]

Kumar V., BHAT Z.A., KUMAR D., BOHRA P. et SHEELA S. (2011). In vitro anti-
inflammatory activity of leaf axtracts of Basella alba llin. Var. Alba; international Journal of
Drug Developpement & Research. 3(2): 176-179.

L
Lahaye, A. Robic. (2007).Structure and functional properties of ulvan, a polysaccharide
from green seaweeds, Biomacromolecules.;8 (6),1765– 1774.

Lakshmi, DS , Sankaranarayanan, S. , Gajaria, TK , Li, G. , Kujawski, W. , Kujawa, J. ,

Navia, R. (2020).Une brève revue sur la valorisation des algues vertes et des ulvanes :
matière première pour les produits chimiques et les biomatériaux. Biomolécules, 10 , 991. [
Google Scholar ] [ CrossRef ]

Lee JC, Hou MF, Huang HW, Chang FR, Yeh CC, Tang JY, et al. . (2013).Produits
naturels d’algues marines aux propriétés anti-oxydantes, anti-inflammatoires et
anticancéreuses. Cancer Cell Int;13 :55. [Link] .

Lee, CY , Parc, SH , Lim, HY , Jang, SG , Parc, KJ , Kim, DS , Kim, JH , Cho, JY.

(2021).Effets anti-inflammatoires in vivo de l’ extrait d’éthanol de Prasiola japonica . J.
Fonction. Aliments, 80 , 104440. [ Google Scholar ] [ CrossRef ]

Li, B. , Xu, H. , Wang, X. , Wan, Y. , Jiang, N. , Qi, H. ,Liu, X. (2020).Antioxidant and

antihyperlipidemic activities of high sulfate content Puri fi ed polysaccharide from Ulva
pertusa. Int. J. Biol. Macromol, 146, 756–762. [CrossRef]

Li, W. , Jiang, N. , Li, B. , Wan, M. , Chang, X. , Liu, H. , Zhang, L. , Yin, S. , Qi, H. ,

Liu, S. (2018). Antioxidant activity ofPurified ulvan in hyperlipidemic mice. Int. J. Biol.
Macromol., 113, 971–975. [CrossRef]

Li, Y.J. , Takizawa, H. , Kawada, T.(2010).Role of oxidative stresses Induced by diesel

exhaust particles in airway inflammation, allergy And asthma : their potential as a target of
chemoprevention. Inflamm. Allergy Drug Targets, 9, 300-305

43
Lippi G, Giavarina D, Gelati M, et al.. (2014).Reference range of hemolysis index in serum
and lithium-heparin plasma measured with two analytical platforms in a population of
unselected outpatients. Clin Chim Acta 429:143-6. 10.1016/[Link]..12.010 [PubMed]
[CrossRef] [Google Scholar] [Ref list].

Lippi G, Plebani M, Di Somma S, et al. (2011).Hemolyzed specimens: a major challenge

for emergency departments and clinical laboratories. Crit Rev Clin Lab Sci; 48:143-53.
[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] [Ref list].

Lovric J, Mesic M, Macan M, Koprivanac M, Kelava M, Bradamante V. Measurement of

malondialdehyde (MDA) level in rat plasma after simvastatin treatment using two different
analytical methods. Period Biol 2008;110:63_7.

Lüllmann-Rauch R .(2008). Histologie.Édition De Boeck. .Bruxelle,P : 284-288.

M
Madhusudan, C., Manoj, S., Rahul, K., and Rishi, C. M. (2011).Seaweeds : A diet with
nutritional, medicinal and industrial [Link] J Med Plant 5, 153-7.

Mao, W., Zang, X., Li, Y., and Zhang, H. (2006).Sulfated polysaccharides from marine
green algae Ulva conglobata and their anticoagulant activity. Journal of Applied phycology
18, 9-1..

Margret, R.J. , Kumaresan, S. , Ravikumar, S. A.(2009).preliminary study on the anti-

inflammatory ativity of methanol extract of Ulva lactuca in rat.J. Environ. Biol.30, 899–902.

Massironi, A. , Morelli, A. , Grassi, L. , Puppi, D. , Braccini, S. , Maisetta, G. , Esin, S.

Batoni, G. , Della Pina, C. ,Chiellini, F.(2009)..Ulvan as novel reducing and stabilizing
agent from renewable algal biomass : Application to Green synthesis of silver
[Link]. 203, 310–321. [CrossRef]

Matsui, M.S. , Muizzuddin, N. , Arad, S. , Marenus, K.(2003).Sulfated Polysaccharides

from red microalgae have antiinflammatory properties in vitro and in vivo. Appl. Biochem.
Biotechnol, 104, 13-22.
Mccray Jr, Lehrer RI, Welsh MJ andTack BF.( 2000). Bactericidal Activity ofMammalian
Cathelicidin- DerivedPeptides. Infection and Immunity . 68(5): 2748-55.

44
Mezghani S. Bourguiba I., Hfaidh I. , Amri M.(2013). Antioxidant Potential of Ulva rigida
Extracts: Protection of HeLa Cells Against H2O2 Cytotoxicity. The Biological Bulletin 225:1-
7.

Morelli, A. , Puppi, D. , Chiellini, F. (2017).Perspectives sur les applications biomédicales

d’Ulvan ; Elsevier Inc. : Amsterdam, Pays-Bas : ISBN 9780128098172. [ Google Scholar ]

Morris (2003).Carrageenan-induced paw Edema in the rat and mouse. Methods Mol.
Biomol.115-121.

O
Okai and [Link] Okai (1997).Potent Anti-inflammatory activity of pheophytin a derived
from edible green algae enteromorpha prolifera (Sujiao-nori). Int. [Link].,19,
355-358

Okoli, C.O., Akah, P.A., Onuoha, N.J., Okoye, T.C., Nwoye, A.C., Nworu,
C.S.(2008).Acanthus montanus: An experimental evaluation of the antimicrobial, anti-
inflammatory and immunological properties of a traditional remedy for furuncles. BMC
Complement. Altern. Med. 8, 27. [CrossRef].

P
Pacheco-Sanchez M.(2006).Polysaccharides ayant une activité immunomodulatrice chez les
champignons indigènes du québec., Université Laval Quebec, Canada, 119

Pal, S., Bhattacharjee, A., Ali, A., Mandal, N. C., Mandal, S. C., et Pal, M.
(2014).Chronic inflammation and cancer : potential chemoprevention through nuclear factor
kappa B and p53 mutual antagonism. Journal of inflammation: 23-12

Pengzhan, Y., Quanbin, Z., Ning, L., Zuhong, X., Yanmei, W., and Zhi'en, L.
(2003).Polysaccharides from Ulva pertusa (Chlorophyta) and preliminary studies on their
antihyperlipidemia activity. Journal of appliedphycology 15, 21-27

Phelps P, McCarty DJ .(1971). Suppressive effect of indomethacin on crystal-induced

inflammation in canine joints and on neutrophPharmac motility in vitro.J. Pharmacol. Exp.
Ther : 546-545.

45
Pierce A, Legrand D, Mazurier J .(2009).La lactoferrine : une protéine multifonctionnelle.
Med Sci (Paris) : 361–9.

Prempeh ABA, Mensah-Attipoe J .(2008).Crude aqueoux extract of the root bark of

zanthoxylium xanthoxyloides inhibits white blood cells migration in acute inflammation,
Ghana. Med. J: 117-119.

Q
Qi, H., Liu, X., Ma, J., Zhang, Q., and Li, Z. (2010).In vitro antioxidant activity of
acetylated derivatives of Polysaccharide extracted from Ulva pertusa (Cholorophta). J Med
Plants Res 4, 2445-245.

Qi, H., Zhang, Q., Zhao, T., Hu, R., Zhang, K., and Li, Z. (2006).In vitro antioxidant
activity of acetylated and benzoylated derivatives of polysaccharide extracted from Ulva
pertusa (Chlorophyta). Bioorganic &Medicinal Chemistry Letters 16, 2441-2445.

R
Rani, A, A., S, M, J, Punitha., M, Rema .(2014)."Anti-inflammatory activity of flower
extract of Cassia auriculata-an in vitro study." Int. Res. J. Pharm. Appl. Sci. 4: 57-60.

Ratheesh M, Helen A .(2007).Anti-inflammatory activity of Ruta Graveolens Linn on

carrageenan induced paw edema in wistar male Rats. Afr. J. Biotechnol.: 1209-1211.

Ray, M. Lahaye .(1995).Cell-wall polysaccharides from the marine green alga Ulvarigida (Ulvales,
Chlorophyta).Chemical structure of ulvan, Carbohydr. Res: 313–318.

Raymonde Gilles, Michel Anctil .(2006).Aperçu page157 (PHYSIOLOGIE ANIMALE)

Rodrigues, J.A. , Oliveira Vanderlei, E.D.S. , Silva, L.M. , de Araujo, I.W. , de Queiroz,
I.N. , De Paula, G.A. , Abreu, T.M. , Ribeiro, N.A. , Bezerra, M.M. ,
Chaves,H.V.(2012).Antinociceptive and anti-inflammatory activities of a sulfated
polysaccharide isolated from the green seaweed Caulerpa cupressoides. Pharmacol. 282–292

Rong.(2010).“Extraction, purification and anti-tumor activity of polysaccharide from

mycelium of mutant cordyceps militaris,” Advanced Chemistry Research, pp. 798–802.

Rosenbaum JT, Boney RS. (1991).Use of A soluble interleukin-1 receptor to inhibit ocular
inflammation. Curr EyeRes : 1137–1139.

46
 S
Segal AW .(2005). How neutrophils kill microbes. Annu Rev Immunol . 197–223
Shonima, J. Thomas, G.M. (2012).In vitro antioxidant and antitumor activity of polysaccharide
isolated from Ulva fasciata. Int. J. Pharm. Bio. Sci. 238–246.

Sousa, RA , Reis, RL. (2013).Une perspective pratique sur les ulvanes extraites d’algues
vertes. [Link]. phycol.407-424.

Souza GE et al. (1988).Neutrophil migration induced by inflammatory stimuli is Reduced by

macrophage [Link] Actions : 377–380.

Stevens A., Lowe J., Barbara Y. (2004).Anatomie pathologique générale et spéciale.

Édition De Boeck .4emeÉ[Link],P25.

Stewart, N. Kellett et [Link]. (2003).The Central nervous system and cardiovascular

effects Of levobupivacaine and ropivacaine in healthy [Link]. Analg., 97, 412-
416.

T
Talbert M.(1998). Guide pharmacologique, LAMMARIE ,3éd, Paris, 49-61.

Tarcisio Vieira de Britoa, ,Rafael da Silva Prudêncioa, , Adriano Bezerra Salesa ,Ana
Lúcia Ponte Freitasc, Jand-Venes Rolim Medeirosa and André Luiz dosReis Barbosa.
(2013).Royal Pharmaceutical Society Journal of Pharmacy and Pharmacology, 65, pp. 724–
733.

Trentin, R. , Custódio, L. , Rodrigues, M.J. , Moschin, E. , Sciuto, K. , da Silva, J.P. ,

Moro, I. (2020).Exploring UlvaAustralis Areschoug for possible biotechnological
applications : In vitro antioxidant and enzymatic inhibitory Properties, and fatty acids
[Link] Res.50, 101980. [CrossRef]

W
Wang, J. , Sun, B. , Cao, Y. , Wang, C. (2010).Wheat bran feruloyl oligosaccharides
enhance the antioxidant activity of rat plasma. Food Chem: 472–476. [CrossRef]

47
Wang, R. , Paul, V.J. , Luesch, H. (2013).Seaweed extracts and unsaturated fatty acid
constituents from the green alga Ulva lactuca as activators of the cytoprotective Nrf2-ARE
pathway. Free Radic. Biol. Med: 141–153.[CrossRef]

Williams, A O’Connar, L Latore, O Dennis, S Ringer, JA Whittaker, et al. (2008).West

Indian Med: [Link] in vitro Anti-denaturation Effects Induced by Natural Products
and Non-steroidal Compounds in Heat Treated (Immunogenic) Bovine Serum Albumin as
Proposed as a Screening Assay for the Detection of Anti-inflammatory Compounds, without
the use of Animals, in the Early Stages of the Drug Discovery Process

Williams, E. Vasquez, P. Milan, C. Zebitz, W. Kraus. (2002). In vitro anti-inflammatory

and antimicrobial activities of phenylpropanoids from Piper betle L. (Piperaceae), Natural
Products in the New Millennium: Prospects and Industrial Application, [Link]. 221–
227.

Winter CA, Risely EA, Nuss CW. (1962). Carrageenan-induced edema in hind paw of the
rat as an assay for anti-inflammatory drugs. Proc Soc Experimental Biol Med. 544–7.

X
Xie, Z.X. , Xia, S.F. , Qiao, Y. , Shi, Y.H. , Le, G.W. (2015).Effect of GABA on oxidative
stress in the skeletal muscles and plasma free amino Acids in mice fed high-fat diet. J. Anim.
Physiol. Anim. Nutr.492–500. [CrossRef] [PubMed]

Y
Yildiza G. CS, Vatana O.,Derea S. (2012). Determination of the Anti-Oxidative Capacity
and Bioactive Compounds in Green Seaweed Ulva rigida C. Agardh. International Journal of
Food Properties 15:1182-1182-1189.

Z
Zhang, Y., X. Fu, D. Duan, J. Xu, and X. Gao. (2019). Preparation and Characterization of
agar, agarose, and agaropectin from the red alga Ahnfeltia [Link] of Oceanology
and Limnology 37 (3) :815–24. Doi : 10.1007/s00343-019-8129-6.

48
 Résumé

Résumé
Le but de cette étude est d'évaluer le potentiel anti-inflammatoire d'un extrait
polysaccharidique de l'algue verte Ulva lactuca. Etant donné que les algues représentent une
source prometteuse d’agents bioactifs.

L’activité anti inflammatoire a donc été évaluée par deux méthodes : dans la première,
sur des échantillons tissulaires issus d’un traitement in vivo de rats adultes de souche Wistar,
pesant entre 150 et 175 g. Un œdème de la patte a été induit par l’injection 0,1 ml de
carraghénane de la patte arrière gauche de chaque rat, en testant l’activité anti-oxydante in
vivo par dosage des bio-marqueurs de stress oxydant : la myélopéroxydase MPO la
molonydialdéhyde MDA la catalase CAT et le glutathion réduit GSH. Les résultats obtenus
révèlent que l’extrait d’algue Ulva lactuca induit une diminution de la MPO et MDA par
contre une augmentation de la CAT et GSH. En même temps, les résultats ont montré que
l’extrait a réduit l’épaisseur de l'oedème de la patte de la rats, même si elle reste moins
importante par rapport à l’anti-inflammatoire de référence le diclofénac. Ces données
confirment que l’extrait présentant une activité anti-oxydante et peut devenir une nouvelle
alternative thérapeutique.

Dans le deuxième volet, une série de teste in vitro a été réalisée, dans le but d’évaluer
l’activité protectrice et anti hémolytique de l’extrait de polysaccharides d’algue Ulva lactuca
vis a vis des globules rouges (la dénaturation du BSA et la stabilisation des membranes des
globules rouges humains). L’extrait polysaccharide brut de Ulva lactuca présenté une capacité
intéressante pour réduire le taux de la dénaturation des protéines, un maximal taux
d’inhibition a été enregistré avec une valeur de 56.189±1.674% à la dose 400µg/ml. Il
présenté aussi une capacité de la protection de la lyse de la membrane, un maximal taux
d’inhibition et de protection de la membrane enregistré avec 75,146 % à la dose 400µg/ml.

En conclusion, Ulva lactuca est une algue intéressante dont l’extrait polysaccharidique
pourrait être utilisé de manière raisonnée dans le traitement de l’inflammation.

Mots clés :, Polysaccharides, U. lactuca, Algue verte Anti-inflammatoire,

Antioxydant.
Abstract:

The aim of this study is to evaluate the anti-inflammatory potential of a polysaccharide

extract of the green alga Ulva lactuca. Since algae represent a promising source of bioactive
agents.

The anti-inflammatory activity was therefore evaluated by two methods: in the first,
on tissue samples from an in vivo treatment of adult Wistar strain rats, weighing between 150
and 175 g. A paw edema was induced by injecting 0.1 ml of carrageenan into the left hind
paw of each rat, by testing the antioxidant activity in vivo by assaying the biomarkers of
oxidative stress: myeloperoxidase MPO molonydialdehyde MDA catalase CAT and reduced
glutathione GSH. The results obtained show that the seaweed extractUlva lactuca induces a
decrease in MPO and MDA on the other hand an increase in CAT and GSH. At the same
time, the results showed that the extract reduced the thickness of the paw edema of the rats,
although it remained less significant compared to the reference anti-inflammatory diclofenac.
These data confirm that the extract exhibits antioxidant activity and can become a new
therapeutic alternative.

In the second part, a series of in vitro tests were carried out, with the aim of evaluating
the protective and anti-hemolytic activity of the polysaccharide extract of Ulva lactuca algae
against red blood cells (the denaturation of BSA and stabilization of human red blood cell
membranes). The crude polysaccharide extract of Ulva lactuca presented an interesting
capacity to reduce the rate of protein denaturation, a maximum rate of inhibition was recorded
with a value of 56.189 ± 1.674% at the dose of 400 µg / ml. It also presented a capacity for
the protection of the lysis of the membrane, a maximum rate of inhibition and protection of
the membrane recorded with 75.146% at the dose of 400µg/ml.

In conclusion, Ulva lactuca is an interesting algae whose polysaccharide extract could

be used sensibly in the treatment of inflammation.

Keywords: Polysaccharides, U. lactuca, Green Algae, Anti-inflammatory,

Antioxidant.
 ‫الملخص‪:‬‬

‫اىٖذف ٍِ ٕزٓ اىذساسخ ٕ٘ رق‪ ٌٞٞ‬اىقذسح اىَضبدح ىالىزٖبثبد ىَسزخيص عذ‪ٝ‬ذ اىسنبس‪ٝ‬ذ ٍِ اىطسبىت‬
‫اىخضشاء‪Ulva lactuca.‬ألُ اىطسبىت رَثو ٍصذسًا ٗاعذًا ىيع٘اٍو اىْشطخ ث‪٘ٞ‬ى٘خ‪ًٞ‬ب‪.‬‬

‫ىزىل رٌ رق‪ ٌٞٞ‬اىْشبط اىَضبد ىالىزٖبثبد ٍِ خاله طش‪ٝ‬قز‪ :ِٞ‬األٗى‪ ، ٚ‬عي‪ ٚ‬ع‪ْٞ‬بد األّسدخ ٍِ عالج ف‪ ٜ‬اىدسٌ‬
‫اىس‪ ٜ‬ىفئشاُ سالىخ‪Wistar‬اىجبىغخ ‪ٗ ،‬اىز‪ٝ ٜ‬زشاٗذ ٗصّٖب ث‪ 175 ٗ 150 ِٞ‬خٌ ‪ .‬رٌ إزذاس ٗرٍخ ٍخيت عِ طش‪ٝ‬ق زقِ ‪0.1‬‬
‫ٍو ٍِ اىنبساخ‪ْٞ‬بُ ف‪ ٜ‬اىَخيت اىخيف‪ ٜ‬األ‪ٝ‬سش ىنو فأس ‪ ،‬عِ طش‪ٝ‬ق اخزجبس ّشبط ٍضبداد األمسذح ف‪ ٜ‬اىدسٌ اىس‪ ٜ‬عِ‬
‫طش‪ٝ‬ق فسص اىَؤششاد اىس‪ٝ٘ٞ‬خ ىإلخٖبد اىزأمسذ‪: myeloperoxidase MPO molonydialdehyde MDA ٛ‬‬
‫‪ٗcatalase CAT‬رقي‪ٞ‬و اىدي٘ربث‪ GSH. ُ٘ٞ‬أظٖشد اىْزبئح اىز‪ ٜ‬رٌ اىسص٘ه عي‪ٖٞ‬ب أُ ٍسزخيص اىطسبىت اىجسش‪ٝ‬خ ‪Ulva‬‬
‫‪ٝlactuca‬ؤد‪ ٛ‬إى‪ ٚ‬اّخفبض ف‪ّ ٍِٗ MDA ٗ MPO ٜ‬بز‪ٞ‬خ أخش‪ ٙ‬ص‪ٝ‬بدح ف‪ GSH. ٗ CAT ٜ‬ف‪ ٜ‬اى٘قذ ّفسٔ ‪ ،‬أظٖشد‬
‫اىْزبئح أُ اى َسزخيص ‪ٝ‬قيو ٍِ سَبمخ ٗرٍخ ٍخبىت اىفئشاُ ‪ ،‬عي‪ ٚ‬اىشغٌ ٍِ أّٔ ظو أقو إَٔ‪ٞ‬خ ٍقبسّخ ثَضبد اىزٖبة‬
‫اىذ‪ٝ‬ني٘ف‪ْٞ‬بك اىَشخع‪. ٜ‬رؤمذ ٕزٓ اىج‪ٞ‬بّبد أُ اىَسزخيص ‪ٝ‬عشض ّشبطًب ٍضبدًا ىألمسذح ٗ‪َٝ‬نِ أُ ‪ٝ‬صجر ثذ‪ٝ‬الً عالخ‪ًٞ‬ب‬
‫خذ‪ٝ‬ذًا‪.‬‬

‫ف‪ ٜ‬اىدضء اىثبّ‪ ، ٜ‬رٌ إخشاء سيسيخ ٍِ االخزجبساد ف‪ ٜ‬اىَخزجش ‪ ،‬ثٖذف رق‪ ٌٞٞ‬اىْشبط اى٘قبئ‪ٗ ٜ‬اىَضبد ىالّسالى‪ٜ‬‬
‫ىَسزخيص عذ‪ٝ‬ذ اىسنبس‪ٝ‬ذ ٍِ طسبىت ‪ Ulva lactuca‬ضذ خال‪ٝ‬ب اىذً اىسَشاء (رَسخ ‪ٗ BSA‬رثج‪ٞ‬ذ اىذً األزَش اىجشش‪.ٛ‬‬
‫أغش‪ٞ‬خ اىخال‪ٝ‬ب ‪).‬قذً ٍسزخيص اىسنبس‪ٝ‬ذ اىخبً ٍِ‪Ulva lactuca‬قذسح ٍث‪ٞ‬شح ىالٕزَبً ىزقي‪ٞ‬و ٍعذه رَسخ اىجشٗر‪ ، ِٞ‬رٌ‬
‫رسد‪ٞ‬و أقص‪ٍ ٚ‬عذه ىيزثج‪ٞ‬ظ ثق‪َٞ‬خ ‪ ٪ 1.871 ± 58.165‬ثدشعخ ‪ٍٞ 100‬نشٗغشاً ‪ٍ /‬و ‪.‬مَب قذً قذسح عي‪ ٚ‬زَب‪ٝ‬خ رسيو‬
‫اىغشبء ‪ ،‬أقص‪ٍ ٚ‬عذه ىيزثج‪ٞ‬ظ ٗزَب‪ٝ‬خ اىغشبء ٍسدو ثْسجخ ‪ ٪75.118‬ثدشعخ ‪ٍٞ 100‬نشٗخشاً ‪ٍ /‬و‪.‬‬

‫الكلمات المفتاحية‪ :‬عذ‪ٝ‬ذ اىسنش‪ٝ‬بد ‪ ،‬اٗىفب المز٘مب ‪ ،‬اىطسبىت اىخضشاء ‪ٍ ،‬ضبد ىالىزٖبثبد ‪ٍ ،‬ضبد ىألمسذح‪.‬‬