RECOMMANDATIONS ET
PRÉLÈVEMENTS POUR
ANALYSE MOLÉCULAIRE
-Toute analyse de biologie moléculaire débute par un prélèvement
- En biologie et en médecine, Un prélèvement est le recueil d’un
échantillon biologique pour analyse
- Le prélèvement est réalisé en étape pré-analytique (avant une
analyse de biologie moléculaire)
Étape pré Étape Étape
analytique analytique d’interprétation
Prélèvement Mise en pratique des -Comparaison
différentes analyses avec des
Transport moléculaires (PCR, marqueurs
Hybridation connus;
Conservation moléculaire, -Utilisation de
séquençage, clonage logiciels
moléculaire…) spécifiques
Préparation des -Comparaison
échantillons visuelle
-Microscopie
électronique
Un prélèvement est réalisé pour deux raisons:
- Le diagnostic d’une maladie
- L’étude et la compréhension d’un phénomène lié a un axe de
recherche
Il existe plusieurs types de prélèvements biologiques
Sang, salive, urine, selles, nasal, buccal, céphalorachidien,
fécal, tissulaire (biopsie), vaginal, ….
Le choix du prélèvement est fait par le médecin vétérinaire.
Il est fonction de plusieurs critères:
- La maladie a diagnostiquer et de l’espèce animale examinée
- La technique choisie
Prélèvement sanguin
Écouvillonnage nasal
types de
prélèvement
Prélèvement urinaire
Écouvillonnage
- Choix du prélèvement en fonction de la maladie a
diagnostiquer
- Le diagnostic de certaines maladies parasitaires ou
infectieuses d’origine bactérienne ne nécessitent pas d’avoir
recours a la biologie moléculaire
- Dans ce cas on peut simplement avoir recours a des techniques
de microbiologie (cultures bactériennes, coloration) ou a des
observations microscopiques auxquelles s’ajoutera le tableau
clinique
- Certaines autres pathologies nécessitent la recherche du
génome microbien et la mise en évidence de la souche. Dans ce
cas la biologie moléculaire est nécessaire.
Choix du type de prélèvement en fonction de la
technique
Le prélèvement le plus fiable et le plus répandu; ainsi que
le plus accessible pour réaliser une analyse de biologie
moléculaire est le prélèvement sanguin:
-le sang circulant dans les veine contient des cellules
nucléées a partir desquelles on peut extraire le matériel
génétique
- l’accès a certains germes est possible via le sang
circulant, c’est également le cas des cellules cancéreuses.
- les
biopsies (peau, organes, tumeurs,…) sont également un
moyen répandu et utilisé dans certaines techniques
Recommandations lors du prélèvement
sanguin destiné a la biologie moléculaire
Conditions d’asepsie
- Nettoyage des mains au savon et application d’un gel
hydro alcoolique
- Nettoyage de la paillasse (plan de travail) ou de
l’environnement proche du préleveur
- Nettoyage de la zone ou sera fait le prélèvement
(Bétadine, Alcool, autres solutions antiseptiques)
- Utilisation d’un matériel stérile à usage unique (Gants, kit
de prélèvements, tubes, coton,…)
Désinfectants utilisés sur la zone à prélever avant le prélèvement
veineux
Conditions du prélèvement
- Utilisation d’un kit de prélèvement vacutainer (sous vide) et
stérile
- Utilisation de tubes sous vide (le bouchon ne s’ouvre pas) et
stérile contenant un anticoagulant adapté a la technique
utilisée. LE PLUS SOUVENT IL S’AGIT DE L’EDTA (éthylène di
amine tétra acétique)
- Le volume du sang prélevé dépend de la technique utilisée ainsi
que du protocole choisie (il existe plusieurs protocoles pour
chaque techniques)
- Le volume prélevé dépend de l’espèce, de la taille et de l’état de
santé de l’animal (humain): le prélèvement peut ainsi se faire en
plusieurs répétitions pour atteindre le volume souhaité, dans ce
cas un cathéter doit être placé pour éviter les piqures à
LE KIT DE PRÉLÈVEMENT VEINEUX
VACUTAINER
Pour un prélèvement destiné a
une analyse de biologie
moléculaire il faudra prévoir
environ deux tubes de 5ml
comme celui présenté sur la
photo
Le volume sanguin total
désigne, le volume du
sang qui circule a
l’intérieur d’un
organisme. Chez l’être
humain ce volume est
en moyenne de 5L, mais
il varie en fonction de
l'âge et du poids aussi.
Un volume de plus de
20% du volume sanguin
total nécessitera de
réaliser plusieurs prises
Après le prélèvement: Transport et
- conservation
Les tubes doivent être retournés délicatement entre 5 et 10 fois
(par fois plus). Ce geste permet de bien mélanger le sang avec
l’EDTA ou un autre anti coagulant.
- Chaque tube doit être numéroté et codé a fin de facilement
identifier les échantillons et les attribuer correctement aux
animaux correspondants
- La conservation des échantillons varie selon le moment auquel
on prévoie de les utiliser. Il est conseillé de procéder a une
centrifugation permettant d’éliminer les globules rouge et éviter
ainsi leur lyse
- les suspensions de globules blancs peuvent être conservées au
congélateur jusqu’à utilisation.
Sac isotherme utilisé pour transporter le sang prélevé
et éviter qu’il soit exposé a des températures trop
élevées
Glacière destinée a transporter les prélèvements biologiques