Chapitre 3 - Biotechnologies

1. Quels sont les différents outils dont dispose le biologiste moléculaire ?

• Croisement de variété
• Utilisation des lois de Mendel
• Interventions direct et ciblé au niveau du génome : amélioration des espèces,
traitement de maladies, développement de médicament.
2. Quel est l’intérêt d’utiliser les bactéries ?

L’intérêt d’utiliser les bactéries est qu’elles peuvent être facilement et rapidement
cultivées dans des espaces restreints grâce à leur temps de génération très court.
Dans des conditions optimales, les bactéries se divisent toutes les 20 minutes, de telle
sorte qu’en quelques heures, une cellule bactérienne peut engendrer une colonie
composée de plusieurs milliards de cellules génétiquement identiques.

3. Qu’est-ce qu’un plasmide ?

Plusieurs petites molécules d’ADN circulaire (2000 à 100 000 paires de bases)

4. Qu’est-ce qu’un virus ? De quoi est-il composé ? Comment se reproduit-il ?

Un virus est un agent affectueux très petit, qui possède un seul type d’acide nucléique
ADN ou ARN, et qui ne peut se reproduire qu’en détournant la machinerie enzymatique
d’une cellule. Il se reproduit en insérant leur matériel génétique (ADN ou ARN) dans une
cellule hôte. Il est constitué :

• d’une molécule d’acide nucléique

• d’une capside (coque de protéine)

• d’une enveloppe lipidique incluant des glycoprotéines (parfois)

5. Différencie adénovirus, rétrovirus, coronavirus.

Adénovirus : virus à ADN, structure non enveloppée

Rétrovirus : virus à ARN, structure enveloppée, possède une transcriptase inverse

Coronavirus : virus à ARN, structure enveloppée

6. Quelles sont les différentes enzymes utilisées en génie génétique ? Comment

utilise-t-ton chacune d’elle (brièvement) ?

• ADN Polymérase : réplication de l’ADN

• Enzyme de restriction

• ADN ligase : réplication et réparation de l’ADN

• Transcriptase inverse : fabrication d’ADN à partir d’ARN chez les virus

7. Qu'est-ce qu'une enzyme de restriction ? Quelles sont ses spécificités ? Quel

rôle jouent-elles dans le génie génétique ?

Les enzymes de restrictions sont présentes chez les bactéries et ont pour rôle de
découper l’ADN d’un virus qui serait rentré. Elles ne découpent pas l’ADN propre à la
bactérie car celui-ci est protégé par des méthylations sur les adénines et cytosines.
Cela restreint considérablement l’aptitude des virus à répéter leur ADN et donc elle se
multiplient à l’intérieur des bactéries. La séquence peut se lire indifféremment de
gauche à droite ou de droite à gauche c’est un palindrome.

ADN non-méthyle : coupure au niveau du site de restriction

ADN méthylé : reconnaissance impossible donc pas de coupure au niveau du site de

restriction

8. Que sont les ADN ligases ? Leur rôle en génie génétique ?

Enzyme intervenant lors de la réplication de l’ADN mais réparant aussi les cassures
dans l’ADN. Elles peuvent relier deux fragments d’ADN entre eux.

9. Que sont les transcriptases inverses ? Leur rôle en génie génétique ?

Enzyme permettant aux rétrovirus de synthétiser une molécule d’ADN à partir de leur
molécule d’ARN. Elles catalysent donc la réaction inverse de la transcription d’où le
nom de transe transcriptase réverses.

10. Quelles sont les 2 méthodes de clonage d’un fragment d’ADN ?

1. Clonage par vecteur : cette méthode repose sur l’insertion d’un fragment d’ADN dans
un vecteur (ex : un plasmide bactérien), qui sera ensuite introduit dans une cellule hôte
(souvent une bactérie).

2. Clonage par PCR : cette méthode permet d’amplifier rapidement un fragment d’ADN
en laboratoire sans avoir besoin d’un organisme hôte.

12. Explique le principe de l’électrophorèse.

Méthode de séparation de particules chargées électriquement par migration différentiel

sous l’action d’un champ électrique. -> séparation en fonction de leur taille.

13. Comment révèle-t-on la présence d’un fragment d’ADN déterminé ?

Par autoradiographie.
14. Qu’est-ce qu’une autoradiographie ? Explique le principe.

Techniques d’imagerie d’émission réalisé à partir d’une source radioactive placé en

contact d’un film photographique. « Auto » car la source de rayonnement est incluse
dans l’échantillon. -> but : révéler la présence du fragment d’ADN désiré.

15. Qu’est-ce qu’une sonde moléculaire et à quoi sert-elle ?

Séquence de nucléotides susceptibles de s’hybrider avec les fragments d’ADN

présentant la séquence complémentaire.

16. Pourquoi dénature-t-on l'ADN avant de l'hybrider avec une sonde ? Comment
interpréter une Autoradiographie dans laquelle plusieurs bandes sont radioactives
?

L’ADN double brin ne sait pas s’hybrider avec une sonde, c’est pourquoi il faut le
dénaturer grâce à un processus thermique ou chimique. Si plusieurs bandes sont
radioactive c’est que le fragment qui doit être reconnu à été coupé par l’enzyme (il
contient donc des sites de restrictions pour cette enzyme)

17. Qu'est-ce que le génie génétique ?

Ensemble des techniques permettant de modifier le génome d’un organisme vivant en

introduisant, supprimant ou modifiant des gènes. Il repose sur l’utilisation d’outils
moléculaires comme les enzymes de restriction, la PCR et les technologies d’édition
génomique (autoradiographie, etc.)

18. Quels sont les avantages de l’utilisation des bactéries pour le clonage ?

La multiplication rapide de la bactérie au cours de son cycle de vie permet de cloner le

gène en grande quantité. Ce gène permet alors aux multiples bactéries de synthétiser
une quantité significative de la protéine d'intérêt.

19. Explique les étapes de clonage d'un fragment d’ADN (ou d’un gène).

• coupure du plasmide par une enzyme de restrictions bien sélectionné

• intégration d’un gène d’un organisme sélectionné qui a été découpé par la même
enzyme de restrictions

• intégration du plasmide dans une bactérie

• multiplication rapide de la bactérie modifiée en millions de bactéries identiques

Dessin :
20. Pourquoi met-on un antibiotique dans le milieu de culture ? Quelle précaution
a-t-on dû prendre auparavant ?

- Pour sélectionner que la bactérie qui intègre un plasmide

- Précaution : éviter une surutilisation d’antibiotiques pour éviter que la bactérie
développe une résistance.

21. Différencie plasmide non recombiné et plasmide recombiné.

Plasmide non recombiné : plasmide naturel ou artificiel qui n’a subi aucune
modification. Contient uniquement son ADN d’origine.

Plasmide recombiné : plasmide dans lequel un nouveau gène a été inséré. Il contient un
gène étranger en plus de son ADN d’origine.

22. Comment détecte-t-on les clones bactériens ayant intégré le gène d’intérêt ?

Les gènes de sélection permettent de repérer et de sélectionner les cellules ayant

intégré le gène d’intérêt.

23. Pourquoi dit-on que les plasmides sont des vecteurs d'ADN ?

Car il transporte et expire un gène étranger dans une cellule hôte.

24. Définis plasmide, transgène, transgenèse.

Transgénèse : techniques permettant d’incorporer un ou plusieurs gènes dans le

génome d’un organisme vivant -> but : donner certaines caractéristiques à cet
organisme

Transgène : gêne étrangers transféré dans le génome d’un organisme

25. Explique l'intégration de gène par un virus.

L'ADN étranger est intégré dans un virus spécifique à une cellule hôte. Le virus infecte la
cellule et introduit l’ADN étranger.

26. Quel est le principe d’une transgenèse végétale ?

La transgenèse végétale est une technique qui consiste à introduire un gène étranger
dans le génome d’une plante pour lui conférer une nouvelle caractéristique.

27. Quelles sont les étapes d'une transgenèse végétale ?

1. identifier, isoler, intégrer et multiplier un gène d’intérêt.

2. transférer le gène dans les cellules de l’individu ciblé.

3. sélectionner les cellules transformées, régénérer la plante et vérifier l’expression du

gène d'intérêt.

28. De quoi est constitué le gène d’intérêt ?

- Promoteur : active expression du gène

- Séquence codante : code pour la protéine désirée
- Terminateur : marque la fin de la transcription

29. Montre que la transgenèse implique le support de l'information génétique et

que les mécanismes de son utilisation soient universels.

L’ADN est le support de l’information génétique

→ C’est l’ADN qui contient les instructions pour fabriquer les caractéristiques d’un être
vivant. Quand on transfère un gène, on transfère une information écrite dans l’ADN

30. Quels sont les avantages de produire des protéines recombinantes dans des
bactéries ?

- Production rapide et massive

- Faible coût comparé aux cellules animales
- Facilité modification matériel génétique

31. Compare le transfert de gène par agrobacterium tumefasciens et la biolistique.

Par Agrobacterium Tumefasciens, on introduit dans les cellules végétales l’ADN étranger
qui est intégré dans son plasmide Ti. Les gènes présents sur le plasmide régulent leur
intégration dans le génome de la cellule de manière autonome.

Par biolistique, on projette, sur des tissues, des microparticules de tungstène ou d’or de
1 à 3 μm de diamètre enrobées d’ADN, à l’aide d’un canon à particules.

32. Qu’est-ce que l’électroporation ?

L'électroporation est une technique qui utilise un choc électrique pour créer de petits
trous temporaires dans la membrane des cellules. Ces trous permettent à l’ADN ou à
d'autres molécules de rentrer dans la cellule.

33. Pourquoi sélectionne-t-on les plantes ayant intégré le gène par des
antibiotiques ?
Pour trouver celles qui ont intégré le transgène.

34. Qu'est-ce qu'un OGM ?

=> bactéries, levures, animaux ou plantes dont le génome a été modifié par insertion
d’un transgène.

35. Cite 3 applications de la transgenèse.

La santé : vaccins, produits sanguins, protéines humaines

L'alimentation : maturation de fruits, enrichissement en vitamines et en minéraux,

qualités nutritionnelles.

L'agronomie : la résistance à des insectes, maladies, herbicides, sécheresse, ...

36. Pourquoi la transgenèse animale est plus difficile à réaliser ?

Elle est plus coûteuse et complexe que la végétale, les avancées dans ce domaine sont
plus lentes. Les animaux ne peuvent être regénérés qu'à partir d'une cellule somatique
donc l’embryon est un passage obligatoire.

37. Qu’est-ce que la thérapie génique ? Explique les différentes étapes.

C'est une thérapie visant à intégrer un gène médicament dans les cellules du malade
pour qu’elles produisent les protéines manquantes. Elle peut se faire in vivo sur les
cellules cibles ou in vitro et réintégrées ensuite.

Mutation -> gène anormal -> protéine non fonctionnelle -> maladie héréditaire -> espoir :
thérapie génique. (Faire exprimer un gène normal pour guérir la maladie)

Dessin :

38. Différencie thérapie génique somatique et thérapie génique germinale.

Thérapie génique somatique = intégration de gènes dans les cellules non sexuelles et
donc non transmis à la descendance. (Ex : mucoviscidose)

Thérapie génique germinale = intégration d’un gène dans un œuf ou embryon malade et
donc présent dans TOUTES les cellules (et transmis à la descendance).