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Kit dérive génétique
Réf. DERIV1-DERIV2
A RECEPTION DU COLIS :
⊠ Vérifier la composition du colis indiquée en page 2
⊠ Stockage et maturation des élevages :
Ne pas placer les tubes au réfrigérateur (les larves pourraient être tuées), suivre les conseils de maturation ci-dessous :
Les tubes sont expédiés avec des larves au stade du passage pupe-adulte. La vitesse à laquelle va s’effectuer ce
phénomène dépend principalement de la température à laquelle vont être stockés les tubes.
A titre d’exemple :
Ces chiffres sont indicatifs car il existe une variabilité au sein de chaque souche ainsi qu’entre différentes souches et
génotypes.
De plus, nous avons laissé les pontes s’effectuer durant plusieurs jours avant d’ôter les parents. Les larves n’ont donc
pas toutes le même âge.
D’une manière approximative, les mouches vont éclore dans une période de :
8 à 20 jours à dater de la réception, si elles sont mises à 20°
4 à 8 jours, si elles sont mises à 26°.
Afin d’avoir le maximum de drosophiles, il est conseillé de les garder 15 jours à 20° (ou 7 jours à 26°) après la date de
réception.
Les drosophiles vivent environ 3 semaines après l’éclosion.
COMPOSITION DU COLIS :
OPTION N°1 : DERIV1
- 1 Tube de drosophiles sauvage
- 1 Tube de drosophiles yeux White
- 1 Tube de drosophiles yeux rouge vif
- 1 Tube de drosophiles yeux marron
OPTION N°2 : DERIV2
- 1 Tube de drosophiles sauvage
- 1 Tube de drosophiles corps ébène
- 1 Tube de drosophiles ailes vestigiales
- 1 Tube de drosophiles ailes vestigiales et corps ébène
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OPTION N°3 : DERIVMED
- 40 tubes vides (avec bouchons)
- 4 flacons de cultures (avec bouchons)
- 1 sachet de milieu déshydraté (qsp 40 tubes et 4 flacons)
OPTION N°4 : DERIVMAT
- 2 éthériseurs
- 1 flacon de 10 ml de Flynap
MATERIEL NECESSAIRE :
- Loupe binoculaire
- Pinceau
- Entonnoir en matière plastique
- Ethériseur
- Flynap pour endormir les drosophiles
Note : L’éther est fortement déconseillé.
OBJECTIFS COGNITIFS :
Dans une population de grande dimension, les fréquences des allèles sont généralement stables.
La dérive génétique est une modification aléatoire de la diversité des allèles.
Elle se produit de façon plus marquée lorsque l’effectif de la population est faible.
PRINCIPE DE LA MANIPULATION :
Chaque groupe d’élèves sélectionne au hasard 25 drosophiles parmi une population hétérogène composée de 500 à
1000 drosophiles :
Afin de faciliter le travail en atelier et l’échange entre les élèves d’une même classe suggérés par le nouveau
programme de seconde, nous avons choisi de proposer deux exemples d’étude :
- La couleur des yeux
- La taille des ailes et la couleur du corps
Les élèves endorment les drosophiles et sélectionnent complètement au hasard 25 drosophiles. Les drosophiles
sélectionnées sont mises en culture dans des tubes.
Le reste de la population est mis en culture dans un flacon de milieu en plastique de milieu (entre 250 et 750
drosophiles en fonction du nombre initial).
Après 20 jours de culture à 20°C, la génération suivante est née. La nouvelle génération et les parents sont transvasés
dans un nouveau tube de milieu et mis en culture pendant 10 jours à 20°C.
Note : Entre 23 et 28°C, le temps d’obtention de la génération suivante est plus court (environ 15 jours).
Lorsque le tube est bien grouillé, on élimine les drosophiles vivantes et on attend que la génération suivante naisse
pour pouvoir comparer la diversité phénotypique (ou allélique) entre la population isolée et la population de plus
grande dimension après deux générations.
OBSERVATION DES DROSOPHILES :
Une fois endormies ou mortes (en fonction du temps passé au contact du
Flynap) les mouches peuvent être répandues sur une surface blanche (carreau de faïence ou, à défaut, papier).
Manipuler les drosophiles délicatement avec un pinceau fin, plume ou pince pour les orienter afin de déterminer sexe
et phénotype.
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Les mouches endormies peuvent se réveiller. Il suffit de les replacer quelques dizaines de seconde dans l’éthériseur.
Observez la totalité de la descendance et pas seulement les premières mouches écloses, car les femelles naissent les
premières.
Les drosophiles sauvages :
Apprendre à repérer les différents organes à l’aide du schéma ci-dessous que les élèves légenderont (annexe 3),
apprendre également à distinguer les mâles des femelles :
- organes sexuels : avec la forme de l’abdomen, c’est le détail qui permet de les distinguer le plus facilement. Placer la
mouche sur le dos :
La plaque génitale (à l’extrémité de l’abdomen) est très colorée (rouge brun à brun foncé) alors que la plaque vaginale
ne l’est pas.
- différence de taille : les femelles sont légèrement plus grandes que les mâles.
- différence dans la forme et la couleur de l’abdomen. Vu dorsalement,
l’abdomen de la femelle est de forme pointue, avec des segments terminaux gris assez clair. L’abdomen du mâle, plus
arrondi, a des segments terminaux gris très foncé.
- présence de « peignes sexuels » chez le mâle seulement. Il s’agit d’une touffe de poils noirs, au niveau métatarse - 1er
article du tarse de la paire de pattes antérieures. Ce critère est particulièrement utile chaque fois que la différence de
coloration ou de forme de l’abdomen entre mâles et femelles n’est pas clairement perceptible (individus à peine éclos,
mutants de coloration du corps, mutants plus ou moins déformés).
Mouches adultes (D’après T.H. Morgan)
Abdomen (d’après Bridge)
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Drosophiles mutées :
Une mutation sera définie comme une modification par rapport au phénotype sauvage.
a) La mutation White :
Cette mutation entraîne la modification de la couleur des yeux : la drosophile produit une matière organique rouge
qui colore son œil. Les mouches White sont caractérisées par l’absence de ce pigment.
C’est une mutation ponctuelle (modification d’un caractère).
Tous les descendants présentent la même mutation : elle se transmet de génération en génération.
La mutation est localisée sur le chromosome sexuel X.
b) La mutation Vestigiale :
La drosophile produit une substance qui rigidifie les nervures de ses ailes. Dans le cas de la mutation Vestigiale, les
mouches présentent des ailes chiffonnées (dues à l’absence de production de cette substance rigidifiante) et sont
incapables de voler.
C’est une mutation ponctuelle également.
La mutation est localisée sur le chromosome II.
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c) La mutation Ebony :
La drosophile Ebony possède un corps de couleur presque noire due à l’accumulation d’un pigment normalement
synthétisé par la drosophile sauvage.
C’est une mutation ponctuelle également.
La mutation est localisée sur le chromosome III.
d) La mutation Scarlett :
La drosophile Scarlett possède des yeux de couleur rouge vif.
La couleur rouge brique des yeux de la drosophile est obtenue par le mélange de deux pigments brun et rouge vif.
C’est une mutation qui inhibe la synthèse d’un pigment brun qui est responsable de la couleur rouge vif des yeux de
cette drosophile.
C’est une mutation ponctuelle (modification d’un caractère).
Tous les descendants présentent la même mutation : elle se transmet de génération en génération.
La mutation est localisée sur le chromosome III.
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e) La mutation Brown :
La drosophile Brown possède des yeux de couleur marron.
La couleur rouge brique des yeux de la drosophile est obtenue par le mélange de deux pigments brun et rouge vif.
C’est une mutation qui inhibe la synthèse d’un pigment rouge vif qui est responsable de la couleur marron des yeux de
cette drosophile.
C’est une mutation ponctuelle (modification d’un caractère).
Tous les descendants présentent la même mutation : elle se transmet de génération en génération.
La mutation est localisée sur le chromosome II.
PREPARATION DU MILIEU DE CULTURE :
Pour la préparation du milieu, suivre les instructions fournies avec le milieu :
Le milieu déshydraté est prêt en moins de deux minutes :
1 dose de milieu + 1 dose d’eau + 1 pincée de levures.
Préparer le milieu de culture la veille et conserver au réfrigérateur.
Sortir les tubes du réfrigérateur 30 minutes à 1 heure avant la manipulation.
La manipulation se déroulant en deux séances, nous vous conseillons de
préparer la quantité de milieu adapté pour chaque séance :
1ère séance : 10 tubes et 1 flacon par sujet d’étude (si vous avez sélectionné les deux sujets d’étude ou si vous avez
sélectionné deux fois le même sujet, il faudra préparer 20 tubes et 2 flacons).
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MANIPULATION
1) Première séance : Prélèvement des mouches, création des populations
Préparer un éthériseur (voir annexe 2).
Vider le contenu des quatre tubes de l’option 1 et/ou de l’option 2 (en fonction du ou des sujets d’étude choisis) dans
un éthériseur.
Pour éviter la fuite des drosophiles, tapoter le fond du tube sur la table pour faire tomber les mouches au fond du
tube, enlever le bouchon et retourner rapidement le tube sur l’éthériseur.
Boucher ensuite l’éthériseur et laisser les drosophiles s’endormir.
Lorsque la totalité des drosophiles ont cessé de bouger, transvaser les
drosophiles dans une dizaine de coupelles et laisser les élèves prélever au
hasard avec un pinceau 25 drosophiles et les mettre en culture dans des tubes de milieu.
Regrouper les drosophiles non sélectionnées dans un flacon de culture.
Chaque groupe d’élève se retrouve alors avec un tube contenant 25 drosophiles alors que le professeur a un flacon de
culture contenant plus de 200 drosophiles.
2) Culture
Après avoir noté les initiales des binômes sur les tubes, placer tubes et flacons à l’étuve entre 23 et 28°C.
A défaut d’étuve, placer les drosophiles à température ambiante (20°C
minimum).
Si les cultures sont réalisées dans une étuve, nous vous conseillons de placer une coupelle d’eau à côté des tubes afin
que l’atmosphère soit humide et que les tubes ne s’assèchent pas.
Durée de culture :
15 jours à 23-28°C
20 jours à 20°C
Pendant ce délai, les drosophiles vont se reproduire, pondre et la nouvelle
génération va naître et se mélanger aux parents.
3) Deuxième séance : Transvasement des drosophiles dans un milieu de culture neuf
Pour chaque tube de culture :
Transvaser la totalité des drosophiles dans un tube de milieu neuf en utilisant un entonnoir en matière plastique.
Pour éviter la fuite des drosophiles, préparer le tube de milieu neuf en plaçant un entonnoir sur le tube, tapoter le fond
du tube contenant les drosophiles sur la table pour faire tomber les mouches au fond du tube, enlever le bouchon et
retourner rapidement le tube sur l’entonnoir.
Faire de même pour le flacon de culture.
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4) Culture
Après avoir noté les initiales des binômes sur les tubes, placer tubes et flacons à l’étuve entre 23 et 28°C.
A défaut d’étuve, placer les drosophiles à température ambiante (20°C
minimum).
Si les cultures sont réalisées dans une étuve, nous vous conseillons de placer une coupelle d’eau à côté des tubes afin
que l’atmosphère soit humide et que les tubes ne s’assèchent pas.
Durée de culture :
7 jours à 23-28°C
10 jours à 20°C
Pendant ce délai, les drosophiles vont se reproduire et pondre.
Une fois que le milieu est bien grouillé par les larves, éliminer les drosophiles vivantes (parents + première génération)
et laisser les drosophiles naître.
Note : Les drosophiles peuvent être éliminées en les transvasant dans un
éthériseur et en les laissant plus de 20 minutes au contact des vapeurs de
Flynap.
Les drosophiles doivent naître après 5 à10 jours.
5) Observation
Une fois la deuxième génération de drosophiles née, les élèves vont observer et compter les drosophiles de chaque
phénotype.
Les résultats de chaque binôme pourront être comparés aux résultats des autres binômes ainsi qu’aux résultats du
flacon contenant la plus grande population.
Afin d’observer les mouches, il est nécessaire de les endormir (ou de les tuer) avec du FLYNAP dans un éthériseur.
L’étape difficile consiste à ouvrir le tube sans que les mouches s’envolent.
L’astuce utilisée pour tout transvasement est de taper le fond du tube sur un torchon plié afin de faire tomber les
mouches sur la gélose.
Lorsque plus aucune mouche ne vole, ôter très vite le bouchon et le retourner sur un éthériseur.
Taper l’ensemble modérément (pour ne pas faire tomber la gélose) afin de faire passer les mouches au travers de
l’entonnoir dans l’éthériseur.
Pour les endormir, verser du FLYNAP sur le coton de l’éthériseur et fermer l’ensemble avec le bouchon et le tourillon
fourni.
Une fois que plus aucune mouche ne bouge, l’éthériseur peut être ouvert et
l’observation peut commencer.
!! ATTENTION !!, les mouches non endormies sont très vives !
Note : Il est possible d’endormir les mouches directement dans le tube de
culture, mais les mouches endormies risquent alors de se coller les ailes sur la gélose humide et ne pourront donc plus
être prélevées. Il faut alors coucher le tube durant l’action du FLYNAP.
Il est également possible d’utiliser un tube vide ou un erlen vide avec un
entonnoir à la place de l’éthériseur.
L’utilisation d’éther est fortement déconseillée.
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6) Exemple de résultats
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ANNEXE 1 : CARTE GENETIQUE
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ANNEXE 2 : ETHERISEUR
1) Préparation de l'éthériseur :
Son étanchéité lui confère une utilisation possible pendant une dizaine d'heures. Il est donc conseillé de préparer à
l'avance les éthériseurs sous une hotte ou dans une pièce bien ventilée.
Poser le bouchon (A) (côté plastique) dans l'entonnoir, en tournant ½ tour dans le sens des aiguilles d'une montre. Un
trait d'étanchéité continu est formé entre l'entonnoir et son bouchon.
Oter le bouchon du tube diffuseur (B).
Prélever entre 0,25 et 0,5ml de flynap à l'aide d'un compte-goutte (1 ou 2 graduations) et les mettre dans le tube
diffuseur. Reboucher aussitôt.
L'éthériseur est prêt à être utilisé.
Le compte-goutte peut être remplacé par une seringue de 5 ou 10ml.
Ne pas utiliser de pipette.
2) Utilisation :
Oter le bouchon (A) de l'éthériseur au dernier moment
puis aussitôt taper latéralement avec une main sur le
tube de mouches à endormir pour les faire descendre au
fond du tube.
Oter le bouchon des mouches et retourner le tube sur
l'entonnoir de l'étheriseur.
Taper verticalement l'ensemble étheriseur-tube retourné
sur un torchon ou un cahier pour assourdir les chocs.
Lorsque toutes les mouches sont tombées, reboucher
l'éthériseur avec le bouchon (A) et continuer à taper
doucement l'éthériseur, 2-3 fois afin de faire tomber les
mouches.
Observer le moment où plus aucune mouche ne se
déplace. Attendre 30 à 50 secondes après ce moment
puis en maintenant l'éthériseur vertical (entonnoir en
haut) dévisser le bouchon (C) contenant toutes les
mouches endormies.
Poser aussitôt l'éthériseur sur la paillasse afin que le
flynap ne diffuse pas dans la pièce.
Transvaser les mouches endormies sur un carré de
faïence ou une autre surface d'observation.
Reboucher aussitôt l'éthériseur.
Réalisées vite et correctement, ces opérations
permettent une utilisation de l'éthériseur pendant
plusieurs heures avec une perte très limitée de flynap.
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ANNEXE 3 : SCHEMA A LEGENDER
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