LA STERILISATION

1. DEFINITION

C’est le procédé que l’on emploie pour détruire tous les micro-organismes qui peuvent exister
à la surface ou dans l’épaisseur d’un objet quelconque, sans distinction d’état physiologique
(forme végétative ou sporulée) ou de nature (pathogène ou non pathogène). La destruction doit
être définitive. L’objet doit être protégé de façon efficace contre tout contact avec le milieu
extérieur susceptible de le souiller à nouveau. ( = conditionnement : mise sous emballage) Etat
stérile = selon la norme européenne EN556 état exempt de micro-organisme viable.

2– Les différentes méthodes de stérilisation

On peut classer les méthodes de stérilisation en deux grands groupes :

 Pour les produits qui peuvent être stérilisés dans leur conditionnement définitif :
- La stérilisation par la vapeur d’eau.
- La stérilisation par la chaleur sèche.
- La stérilisation par irradiation.
- La stérilisation par les antiseptiques gazeux.

 Pour les produits qui ne peuvent pas être stérilisés dans leur conditionnement
définitif :
- La filtration stérilisante.
- La préparation dans des conditions aseptiques.

7.3.1 – Les produits pouvant être stérilisés dans leur conditionnement définitif

a – Stérilisation par la chaleur

1. Sensibilité des Micro-organismes à un traitement thermique

- Espèce microbienne et de la forme sous laquelle elle se trouve;
- Durée du traitement ;
- Le nombre de germes au départ;
- Température;
- Nature du milieu dans lequel se trouvent les germes.

 Espèces microbiennes :
 Sensibilité différente d’une espèce bactérienne à l’autre
- Clostridium botulinum  germe pathogène
- Bacillus stearothermophilus
Germes non pathogènes
- Bacillus subtilis
  Les spores sont plus résistantes que les formes végétatives

 Durée et le nombre de micro-organisme initialement présent:

- Le nombre de survie des germes après un traitement thermique varie en sens inverse
avec la durée du traitement selon une relation logarithmique:

Log N/N0 = Kt

N: nombre de germe au temps T

N0:nombre de germe initial
 Avec des coordonnées semi logarithmique
0
N: nombre de germe au temps T
N0:nombre de germe initial

Log N/No = Kt

2. Temps de réduction décimale : DT

À une température donnée, le temps de réduction décimale DT correspond au temps
nécessaire à réduire la population de microorganismes d’un facteur 10.
 Exemples:
► D121 < 10s pour les bactéries non sporulées
► D121 10s - 1mn pour les spores des bactéries courantes
► D121 1,5 à 2 pour Bacillus stearothermophilus

- Nombre des microorganismes initialement présents :

0D 104
1D 103
2D 102
3D 101
 4D 100
5D 10-1
6D 10-2

 Le risque de survie après un traitement thermique et d’autant plus faible qu’il y’avais
moins de micro-organisme au départ.
 Il n’est théoriquement pas possible d’atteindre la stérilité absolue
 Avant la stérilisation, le nombre de germes doit être le plus petit possible pour
augmenter les chances de stérilité parfaite après la stérilisation.
 Pour éviter les germes initiaux :
- employer du matériel propre et stérile
- utiliser de l'eau fraîchement distillée
- -utiliser des matières premières les plus pures possibles
- travailler la plus proprement possible
- travailler dans une atmosphère la plus propre possible.
► Niveau d’assurance de stérilité (NAS)
- Le NAS d’un procédé de stérilisation indique le degré d’assurance avec lequel une
population d’articles est rendu stérile par le procédé considéré.

Un NAS de 10-6 correspond a une probabilité d’au plus un micro-organisme viable pour
106 unités stérilisées du produit final.

Cinétique de destruction thermique des microorganismes

En première approximation la cinétique de la destruction des microorganismes est

d'ordre 1.

Cela signifie que, lorsqu'ils sont soumis à la température , la relation entre le nombre de
microorganismes formant colonies à l'instant et ce nombre à l'instant initial est
:

Avec :

 : nombre de microorganismes formant colonies à l'instant

 : nombre de microorganismes formant colonies à l'instant initial

 : temps (min ou s)
 : temps de réduction décimale à la température (min ou s, mais même unité
que )

Figure :Exemple de cinetique de destruction thermique

3. Température

 Il existe une relation exponentielle entre le temps et la température qui, avec des
coordonnées semi logarithmiques, donne une droite.

la pente varie avec l’espèce microbienne

 Valeur d’inactivation thermique Z

- C’est l’élévation de température nécessaire pour réduire la valeur du temps de
réduction décimale (DT) d’un facteur 10
( c’est comme DT une caractéristique de chaque microorganisme.)
 - La valeur de référence retenue est celle du Bacillus stéarothermophilus qui vaut Z =
10°c.
 La Vitesse de pénétration de la chaleur
- Elle dépend de:
 Caractéristiques de l’installation
 Volume des récipients
 Viscosité du contenu
 Agitation

► Cycle de stérilisation

- Partie ascendante : la montée en température

- Plateau : maintien de la température
- Partie descendante : le refroidissement (VALEUR STERILISATRICE)

Changement de la température du traitement thermique

L'équation suivante donne la relation entre les temps de traitement de deux traitements
réalisés à des températures différentes et conduisant à la même réduction du nombre
de microorganismes (même ).

Avec :

 : temps de traitement à la température conduisant à la réduction du nombre

de microorganismes

 : temps de traitement à la température conduisant à la même réduction du

nombre de microorganismes

 et : températures des deux traitements thermiques (K ou °C)

 : élévation de température nécessaire pour réduire d'un facteur 10 le temps de

traitement (K ou °C)
Définition:
Valeur d'inactivation thermique : , parfois appelé valeur d'inactivation thermique,
est l'élévation de température du traitement conduisant à réduire de 90% (d'un facteur 10)
la durée de celui-ci.

Figure : Exemple de réduction de 90% du temps de traitement en augmentant la température

de traitement de z.

Remarque:
est une différence positive de température (élevation), donc sa valeur est la même que
son expression soit en kelvin ou en degrés celsius.

4. Nature du milieu

 Humidité
La destruction des micro-organismes est beaucoup plus rapide en milieu liquide qu’en
milieu solide
 pH
Un pH bas augmente la sensibilité des microorganismes.
 Autres constituants:
Substances qui présentent un pouvoir bactéricide à chaud.
  Stérilisation par la chaleur sèche
- Il s’agit d’une stérilisation à l’air chaud à pression atmosphérique. Elle se pratique en
étuve. Celle-ci porte le nom de son inventeur, le Dr POUPINEL.

- l’oxygène de l’air est porté à une température élevée qui provoque la dénaturation des
protéines bactériennes par oxydation
- La stérilisation par la chaleur sèche est réalisée dans un four muni d’un ventilateur
afin d’obtenir une bonne homogénéité de température dans l’enceinte.
- Cette méthode est très utilisée pour la stérilisation des contenants en verre dans le
cadre des procédés de fabrication aseptique.
- La température de stérilisation est de 180 °C , Par ailleurs, lorsque l’on élève
d’avantage la température, au-delà de 220°C, la chaleur sèche est utilisée pour la
dépyrogénisation des contenants en verre (ampoules et petits flacons pour
préparations injectables).

 Avantages et inconvénients
- C’est un procédé simple et peu coûteux, mais avec des inconvénients :
 Obligation d'utiliser des fours de petites dimensions compte tenu des difficultés à
maintenir une température uniforme dans une vaste enceinte.
 La température maximale étant de 180°C il y a un risque d'altération de nombreux
produits.

 Stérilisation par la chaleur humide:

- Mode de stérilisation le plus répandu (s’applique à bon nombre de cas et facile à

mettre en œuvre).
 Dénaturation des macromolécules bactériennes (noyau et parois) sous l’action de la
chaleur par hydrolyse partielle des chaînes peptidiques
 Conditions : chauffage à 1210c pdt 15 min
autres : NAS d’au moins 10-6
  Production de vapeur d’eau par chauffage sous pression :
- Vapeur saturante = agent stérilisant
 Pour les récipients contenant des solutions à stériliser, l’effet stérilisant est réalisé par
l’eau de la solution
 Pour la stérilisation terminale : le conditionnement doit être perméable à la vapeur
d’eau

Figure : Schéma d’un autoclave classique

Applications

- médicaments (dans leur conditionnement définitif ou étape intermédiaire avant le

conditionnement), - matériel de conditionnement (avant remplissage), - matériel chirurgical non
jetable (supportant des températures élevées)
Remarques : La "Valeur stérilisatrice" d'un procédé (stérilisation par la chaleur) : C'est le
temps nécessaire pour réduire (de 105 à 10°) le nombre de spores par ml de préparation, ce à
une température donnée. Il conviendra ensuite de choisir (ou d'appliquer) la méthode mettant
en œuvre le meilleur compromis Température / Durée pour une efficacité identique.

Remarque : la valeur stérilisatrice s'applique à la stérilisation par la chaleur.

b – Stérilisation par les rayonnements

Les rayonnements de courte longueur d'onde présentent un pouvoir microbicide plus ou moins
marqué (rayons UV, radiations ionisantes, bêta et gamma). Les rayonnements ionisants Bêta et
Gamma Ils servent à stériliser le matériel chirurgical à usage unique et les articles de pansement
et de suture. Il s'agit d'articles à usage unique c'est-à-dire dont le ré-emploi est interdit. La
stérilisation doit être effectuée dans l'emballage étanche définitif. La mise en œuvre de ces
procédés technologiquement complexes et très réglementés est toujours faite par des sous-
traitants spécialisés de l'industrie pharmaceutique.

Les rayonnements ultra-violets : Les rayons de courte longueur d'onde sont très efficaces en
théorie, mais arrêtés facilement par le moindre obstacle et notamment le verre. Non pénétrants,
ils ne sont donc utilisés que pour stériliser l'air des enceintes stériles ou maintenir une stérilité
en surface (en complément d'autres procédés de stérilisation). Ils peuvent provoquer des
accidents oculaires très graves.

c – Stérilisation par antiseptique gazeux

Deux substances servent à stériliser le matériel et les enceintes stériles : - le formaldéhyde et

l'oxyde d'éthylène, mais leur emploi est limité par leur toxicité. Le formaldéhyde (formol) Il
nécessite une atmosphère très humide qui demande un temps de contact de plusieurs heures
pour être efficace. Il doit être ensuite éliminé par ventilation avec de l'air stérile car il est irritant
et toxique. C'est un gaz peu pénétrant, donc uniquement un désinfectant de surface qui convient
bien pour stériliser du matériel et des locaux (blocs opératoires).

Acide per-acétique : Utilisé pour la stérilisation de matériel en PVC, textiles et objets non
métalliques. Produit dangereux à la manipulation. L'oxyde d'éthylène Il est utilisé pour la
stérilisation de matériel qui ne supporte par l'AUTOCLAVE tels que certaines matières
plastiques, des polyéthylènes ou certains caoutchoucs ainsi que d'autres matériaux comme les
cotons ou les gazes. Comme les rayonnements ionisants, il présente l'avantage de pouvoir être
utilisé pour des articles placés dans leur emballage définitif. Son intérêt principal par rapport
aux rayonnements est de pouvoir être employé dans les établissements pharmaceutiques et les
hôpitaux.

La manipulation de ce gaz n'est pas sans danger, c'est la raison pour laquelle la Pharmacopée
précise que la stérilisation par l'oxyde d'éthylène doit être effectuée par un personnel entraîné
et expérimenté et dans des locaux protégés à l'écart des malades.

7.3.2 – Les produits ne pouvant pas être stérilisés dans leur conditionnement définitif

Ils sont préparés dans des enceintes ou règne une asepsie aussi rigoureuse que possible. Ces
enceintes sont de dimensions très diverses : vitrine, entourage d'une machine ou salle entière de
fabrication. On est moins exigeant, par exemple, pour la répartition d'un médicament solide qui
ne constitue pas un milieu favorable à la multiplication des micro-organismes que pour celle
d'une solution de produits biologiques.

Stérilisation par filtration

Les produits stérilisés par filtration doivent être préparés dans des conditions aseptiques. Ce
mode de stérilisation est applicable à tous les fluides : liquides et gaz, tout particulièrement, aux
solutés qui ne supportent pas l'action de la chaleur. La stérilisation par filtration devra être suivie
au plus tôt par le conditionnement dans un milieu stérile et dans des récipients stériles (ou au
moins aseptiques) .