DiaSorin Inc.

1951 Northwestern Ave – Stillwater, MN 55082 – USA

Tel 1.651.439.9710 – Fax 1.651.351.5669

Changements: § 5
Éliminations: §

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LIAISON Vitamin B12 ([__ REF__ ] 318320)

1. UTILISATION
®
Le dosage LIAISON Vitamin B12 de DiaSorin utilise la technologie de dosage immunologique par chimiluminescence
(CLIA) pour la détermination quantitative de la vitamine B12 dans des échantillons de sérum, sérum SST et plasma
avec héparine de lithium humains. Les mesure obtenues à l’aide de ce dispositif sont utilisées dans le diagnostic et le
traitement des anémies liées à la malabsorption gastro-intestinale. Les résultats du dosage doivent être utilisés en
association avec d'autres données cliniques ou biochimiques afin d'orienter le clinicien dans ses décisions de prise en
charge des patients au cas par cas.

Le dosage doit être effectué à l'aide de l'automate d'immunoanalyse LIAISON® XL Analyzer.

2. INTÉRÊT CLINIQUE
Le terme « vitamine B12 » fait référence à une famille de substances composées de cycles tétrapyrrole entourant un
atome central de cobalt auquel sont attachées des chaînes latérales de nucléotides (cobalamines). La dénomination
globale de ces substances est le groupe des « cobalamines », ces dernières portant un nom différent en fonction de
chacun des différents ligands axiaux supérieurs liés au cobalt : méthyle (méthylcobalamine), hydroxyle
(hydrocobalamine), H2O (aquacobalamine), cyanure (cyanocobalamine), et 5-désoxyadénosine
(désoxyadénosylcobalamine).

La forme principale présente dans le sérum est la méthylcobalamine, tandis que la forme prédominante dans le
1
cytosol est la désoxyadénosylcobalamine . La majorité des dosages immunologiques de la vitamine B12 mesurent
l’ensemble de ses différentes formes présentes dans le sérum, après la conversion en cyanocobalamine.
La cyanocobalamine possède un poids moléculaire de 1 355 grammes/mole.

Trois protéines, le facteur intrinsèque (FI), la transcobalamine (TC) et l’haptocorrine (HC) montrent une affinité
2
extrêmement élevée pour les cobalamines (CbI, Kd ~5 fM) . Dans le sérum, la vitamine B12 est liée à la TC (10-30%,
forme active) et à l’HC (70-90%, forme inactive). Les tests de quantification existants (Abbott Architect, Siemens
Centaur, Beckman Access et Elecsys Roche) utilisent généralement le FI (non humain) comme agent de liaison de la
vitamine B12.

La cobalamine est un nutriment essentiel à l’ensemble du développement cellulaire et à la croissance humaine. Elle agit
comme un coenzyme pour la synthèse normale de l’ADN et joue un rôle prépondérant dans le développement de la
gaine de myéline. Les principales sources de vitamine B12 sont le foie, le lait, la viande, les œufs, le poisson, les huîtres
et les palourdes. La cobalamine est libérée des aliments sous l'effet des sucs gastriques pour se lier à l’HC (conférant
une protection contre la dégradation), puis est absorbée dans l’intestin grêle sous forme de complexe B12-FI.
Une carence en vitamine B12 entraîne de graves troubles neurologiques souvent irréversibles : sensations de brûlures
ou perte de sensation dans les extrémités, faiblesse, spasticité et paralysie, confusion, désorientation et démence.
En l’absence de FI (anémie pernicieuse), la vitamine B12 ne peut pas être absorbée à partir des aliments.

Dans l’estomac, la vitamine B12 forme un complexe avec le facteur intrinsèque (FI), une glycoprotéine ayant un PM
d’environ 50 000. Lorsque le complexe B12-FI passe dans l’intestin grêle, il est lié par des récepteurs et pénètre dans
les cellules. Le complexe est ensuite dissocié et la vitamine B12 passe dans le foie où elle est stockée et libérée
dans le plasma pour répondre aux besoins physiologiques. La présence d’anticorps anti-FI peut être démontrée chez
un grand nombre de patients, en révélant la présence d’une maladie auto-immune. Une déplétion en vitamine B12
3
peut être présente pendant 6 à 18 mois avant qu’une anémie ne devienne manifeste .

Les intervalles de référence peuvent grandement varier. Des intervalles de référence représentatifs chez des adultes
à jeun sont un taux de vitamine B12 sérique de 200 à 1 100 pg/mL. Les individus souffrant d’anémie pernicieuse
présentent généralement une concentration de vitamine B12 sérique inférieure à 100 pg/mL. Des résultats de
vitamine B12 indéterminés de 100-200 pg/mL ne sont pas rares. En raison du développement progressif de cette
carence, le sérum des patients dont les résultats sont indéterminés doit faire l’objet d’une nouvelle analyse quelques
mois plus tard. Une faible concentration en vitamine B12 dans le sérum n’indique pas nécessairement une carence
1
mais peut indiquer un problème lié à la protéine de transport TC-1 en conséquence de certains cancers .

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3. PRINCIPE DU DOSAGE
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Le test LIAISON Vitamin B12 est un dosage immunologique par chimiluminescence (CLIA) compétitif pour la
détermination quantitative de la vitamine B12 dans des échantillons de sérum, sérum SST et plasma avec héparine
de lithium. Pendant la première incubation, la vitamine B12 est dissociée de sa protéine de liaison. Après l’incubation
initiale de 10,5 minutes, la vitamine B12 se lie au facteur intrinsèque sur la phase solide. Après une deuxième
incubation de 10,5 minutes, une vitamine B12 liée à un dérivé de l’isoluminol est ajoutée pour entrer en compétition
avec la vitamine B12 présente dans l’échantillon. Après une troisième incubation de 5,25 minutes, le matériel non lié
est éliminé par un cycle de lavage. Les réactifs Starter sont ensuite ajoutés et une réaction instantanée de
chimiluminescence est amorcée. Le signal lumineux, mesuré par un photomultiplicateur en unités relatives de
luminescence (RLU), est inversement proportionnel à la concentration de vitamine B12 présente dans les étalons, les
contrôles ou les échantillons.

4. MATÉRIEL FOURNI
Réactif Integral
Particules magnétiques revêtues du facteur intrinsèque dans un tampon
Particules magnétiques
[SORB] phosphate contenant un tensioactif, une protéine et de l'azide de sodium à
(2,4 mL)
0,09%.
Sérum humain exempt de vitamine B12 contenant de la cyanocobalamine
Étalon 1
[CAL|1] (vitamine B12), de l’azide de sodium à 0,09% et du sulfate de gentamicine
(2,4 mL)
à 0,01%.
Sérum humain exempt de vitamine B12 contenant de la cyanocobalamine
Étalon 2
[CAL|2] (vitamine B12), de l’azide de sodium à 0,09% et du sulfate de gentamicine
(2,4 mL)
à 0,01%.
Conjugué Polymère exclusif conjugué à la vitamine B12 et à un dérivé de l'isoluminol,
[CONJ]
(12 mL) dans un tampon MES avec un tensioactif et de l'azide de sodium à 0,09%.
Tampon de dosage 1 Tampon glycine contenant du TCEP (tris(2-carboxyéthyl)phosphine) et de
[BUF|AS]1]
(3,0 mL) l'azide de sodium à 0,09% en tant que conservateur.
Tampon de dosage 2 Tampon hydroxyde de potassium contenant du cyanure de potassium à
[BUF|AS]2]
(12,0 mL) 0,05% et de l'azide de sodium à 0,09% en tant que conservateur.
Tampon de dosage 3 Phosphate de potassium avec du dicyanocobinamide, un tensioactif et du
[BUF|AS]3]
(22 mL) ProClin 300 à 0,2% en tant que conservateur.
ProClin est une marque de commerce de The Dow Chemical Company (Dow) ou d'une société affiliée de Dow.

Standardisation : les concentrations des étalons (pg/mL) sont étalonnées par rapport à une préparation interne
standard.

Tous les réactifs sont fournis prêts à l’emploi. L’ordre des réactifs est le même que celui des compartiments du réactif
Integral.

Matériel nécessaire, mais non fourni (se rapportant au système)

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LIAISON XL Analyzer
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LIAISON Wash/System Liquid ([__ REF__ ] 319100)
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LIAISON XL Waste Bags ([__ REF__ ] X0025)
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LIAISON XL Cuvettes ([__ REF__ ] X0016)
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LIAISON XL Starter Kit ([__ REF__ ] 319200)
®
LIAISON XL Disposable Tips ([__ REF__ ] X0015)
®
LIAISON XL Cleaning Tool ([__ REF__ ] 310995)

Matériel supplémentaire nécessaire :

®
LIAISON Vitamin B12 Control Set ([__ REF__ ] 318321)

Matériel complémentaire recommandé

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LIAISON Endocrinology Diluent ([__ REF__ ] 319133)

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5. PRÉCAUTIONS D’UTILISATION
RÉSERVÉ À UN USAGE DIAGNOSTIQUE IN VITRO – Non indiqué pour une utilisation interne ou externe chez
les humains ou les animaux.
Sécurité générale :
• L'ensemble des échantillons, des réactifs biologiques et du matériel utilisés pour ce dosage doit être considéré
comme une source potentielle de transmission d'agents infectieux. Éviter le contact avec la peau, les yeux ou les
muqueuses. Respecter les bonnes pratiques d'hygiène industrielle pendant le dosage.
• Ne pas manger, boire, fumer, ni appliquer de cosmétiques dans le laboratoire d'analyse.
• Ne pas pipeter les solutions avec la bouche.
• Éviter tout contact direct avec l'ensemble du matériel potentiellement infectieux en utilisant des vêtements de
protection comme une blouse de laboratoire, des lunettes/un masque de protection, et des gants jetables.
• Se laver les mains soigneusement à l'issue de chaque test.
• Éviter les projections ou la formation d'aérosols lors de la manipulation, de la dilution ou du transfert des
échantillons ou des réactifs. Tout déversement de réactif doit être décontaminé avec une solution javellisée à 10%
(contenant de l'hypochlorite de sodium à 0,5%) et mis au rebut comme du matériel potentiellement infectieux.
• Les déchets doivent par conséquent être éliminés conformément aux règlements en vigueur, aux directives des
autorités responsables de la juridiction des laboratoires et à la règlementation de chaque pays.
• Ne pas utiliser de trousses ou de composants dont la date de péremption indiquée sur l'étiquette est dépassée.

Risque chimique et informations de sécurité : Les réactifs contenus dans cette trousse sont classés conformément à
la norme de communication des risques de l'OSHA américaine ; aux lois nationales américaines sur le droit à
l'information des individus ; au règlement sur les produits contrôlés du centre canadien d'hygiène et de sécurité au
travail ; et aux directives applicables de l'Union Européenne (consulter la fiche de données de sécurité pour de plus
amples informations).

Réactifs contenant des produits d'origine humaine :

Avertissement – Traiter comme potentiellement infectieux. Chaque don de sérum/plasma intervenant dans la
préparation de ce produit a été testé par une méthode agréée par la FDA et s’est avéré non réactif pour la présence
d’anticorps anti-virus de l'immunodéficience humaine 1 et 2 (VIH 1/2), de l'antigène de surface de l'hépatite B (HBsAg),
et d’anticorps anti-virus de l'hépatite C (VHC). Même si ces méthodes sont extrêmement précises, elles ne garantissent
pas la détection de tous les dons infectés. Ce produit peut également contenir d’autres sources de maladies d’origine
humaine pour lesquels il n’existe aucun test agréé. Parce qu’aucune méthode d’essai connue ne peut offrir une
assurance complète que le VIH, le virus de l'hépatite B (VHB) et le VHC ou d'autres agents infectieux sont absents, tous
les produits contenant du matériel d'origine humaine doivent être manipulés dans le respect des précautions
universelles et, le cas échéant, conformément aux bonnes pratiques de laboratoire décrites dans la dernière édition du
manuel des Centers for Disease Control et du National Institutes of Health, Biosafety in Microbiological and Biomedical
Laboratories, BMBL (Biosécurité dans les laboratoires biomédicaux et de microbiologie) ; ou la dernière édition du
manuel de sécurité biologique en laboratoire de l'Organisation mondiale de la Santé.

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GHS/CLP :

Hydroxyde de potassium ProClin

® Azide de sodium
N° CAS : 1310-58-3 55965-84-9 26628-22-8
Réactifs : [BUF|AS]2] [BUF|AS]3] [SORB]
[CAL|1]
[CAL|2]
[CONJ]
[BUF|AS]1]
[BUF|AS]2]
Classification : Corrosion cutanée, catégorie 1B Sensibilisation cutanée, Aucune requise
Toxicité aiguë, catégorie 4 catégorie 1
Corrosif pour les métaux, catégorie 1 Toxicité aquatique chronique,
catégorie 3
Mention Danger Avertissement Aucune requise
d'avertissement :
Pictogramme : Aucun requis

GHS05 – Corrosion GHS07 – Point GHS07 – Point d'exclamation

d'exclamation
Mention de H314 – Provoque des brûlures de la peau H317 – Peut provoquer une Aucune requise
danger : et des lésions oculaires graves. allergie cutanée.
H302 – Nocif en cas d'ingestion. H412 – Nocif pour les
H290 – Peut être corrosif pour les métaux. organismes aquatiques,
entraîne des effets
néfastes à long terme.
Conseil de P260 – Ne pas respirer les poussières/ P261 – Éviter de respirer les Aucun requis
prudence : fumées/gaz/brouillards/vapeurs/aé brouillards ou les
rosols. aérosols.
P264 – Se laver les mains soigneusement P272 – Les vêtements de
après manipulation. travail contaminés ne
P280 – Porter des gants et des vêtements devraient pas sortir du
de protection, et un équipement de lieu de travail.
protection des yeux/du visage. P273 – Éviter le rejet dans
P270 – Ne pas manger, boire ou fumer en l’environnement.
manipulant ce produit. P280 – Porter des gants et des
P234 – Conserver uniquement dans le vêtements de
récipient d’origine. protection, et un
équipement de
protection des yeux.

RÉACTIFS CONTENANT DE L'AZIDE DE SODIUM : L’azide de sodium peut réagir avec la plomberie en plomb ou en
cuivre et former des azotures fortement explosifs. Lors de l'élimination, rincer à grande eau pour empêcher
l’accumulation d’azotures. Pour plus d’informations, consulter la rubrique « Decontamination of Laboratory Sink Drains
to Remove Azide Salts (Décontamination des canalisations d'éviers de laboratoire pour l'élimination des azotures) »
dans le manuel Guide-Safety Management N° CDC-22 publié par les Centers for Disease Control and Prevention,
Atlanta, GA, 1976.

6. PRÉPARATION DU RÉACTIF INTEGRAL

Suivre scrupuleusement les précautions suivantes concernant la manipulation des réactifs :

6.1 Remise en suspension des particules magnétiques

Les particules magnétiques doivent être remises en suspension intégralement avant de placer le réactif Integral dans
l'automate. Suivre les étapes indiquées ci-après afin de garantir la mise en suspension complète des particules :
• Avant d'ôter les opercules des compartiments, agiter légèrement le compartiment des particules magnétiques
à l'aide de la molette jusqu'à ce que la solution soit marron. Le fait d'agiter horizontalement le réactif Integral
délicatement et avec soin favorisera la suspension des particules magnétiques (éviter cependant la formation
de mousse). Contrôler visuellement le fond du flacon des particules magnétiques pour s'assurer que toutes les
particules sédimentées ont été effectivement remises en suspension.

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 • Si nécessaire, répéter la procédure jusqu'à ce que toutes les particules magnétiques aient été remises en
suspension.
• Après le retrait de l'opercule, essuyer soigneusement la surface de chaque septum pour éliminer le liquide
résiduel si nécessaire.

6.2 Formation de mousse dans les réactifs

Pour garantir les performances optimales du réactif Integral, il est indispensable d'éviter toute formation de mousse.
Observer les recommandations suivantes afin d'empêcher la formation de mousse :
• Contrôler visuellement les réactifs pour s'assurer de l'absence de mousse avant d'utiliser le réactif Integral.
Si après la remise en suspension des particules magnétiques il y a formation de mousse, placer le réactif
Integral dans l'automate et laisser la mousse se dissiper. Le réactif Integral est prêt à l'emploi lorsqu'il a été
laissé au repos à l'intérieur de l'automate, lorsque les particules magnétiques sont maintenues en agitation
automatiquement et que la mousse s'est entièrement dissipée.
6.3 Chargement du réactif Integral dans le compartiment à réactifs de l'automate d'immunoanalyse
®
Automate d'immunoanalyse LIAISON XL Analyzer
®
• L'automate LIAISON XL Analyzer est pourvu d’un dispositif magnétique interne qui favorise la dispersion des
microparticules avant de placer un réactif Integral dans le compartiment à réactifs de l’automate
d’immunoanalyse. Se reporter au manuel d'utilisation de l'automate d'immunoanalyse pour obtenir des
renseignements détaillés.
a. Placer le réactif Integral dans la rainure prévue à cet effet.
b. Laisser reposer le réactif intégral à l'intérieur du dispositif magnétique pendant au moins
30 secondes (et jusqu'à plusieurs minutes). Répéter l'opération si nécessaire.
• Placer le réactif Integral dans la zone des réactifs de l'automate d'immunoanalyse, en veillant à ce que l'étiquette
soit à gauche, et attendre 15 minutes avant utilisation. Pendant cette période, les particules magnétiques sont
agitées et remises en suspension automatiquement.
• Se reporter au manuel d'utilisation de l'automate d'immunoanalyse pour charger les échantillons et démarrer
le test.

7. CONSERVATION ET STABILITÉ DU RÉACTIF INTEGRAL

Dès réception, le réactif Integral doit être conservé en position verticale afin de faciliter la remise en suspension des
particules magnétiques. Lorsque le réactif Integral est stocké hermétiquement fermé, les réactifs restent stables entre
2 et 8°C jusqu'à la date de péremption. Ne pas congeler. Le réactif Integral ne doit pas être utilisé au-delà de la date
de péremption indiquée sur la trousse et sur les étiquettes du réactif. Après ouverture et chaque utilisation, le réactif
Integral peut être replacé dans sa boîte et conservé en position verticale entre 2 et 8°C, ou peut être stocké dans
l'automate d'immunoanalyse pendant 42 jours. Éviter toute exposition excessive à la lumière.

8. PRÉLÈVEMENT ET PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS

Des tubes de sérum humain, plasma avec héparine de lithium ou avec séparateur de sérum peuvent être utilisés (il est
conseillé, mais non obligatoire, d'utiliser des échantillons prélevés chez le patient à jeun). Le sang doit être prélevé de
manière aseptique par ponction veineuse. Il est nécessaire de laisser les échantillons de sérum coaguler.
Centrifuger les échantillons et séparer le sérum du caillot ou le plasma des cellules dès que possible. Aucun additif ni
conservateur n'est requis pour maintenir l'intégrité de l'échantillon. Il peut être nécessaire de clarifier les échantillons
troubles, lipémiques, contenant du matériel en suspension ou des débris érythrocytaires en les filtrant ou en les
centrifugeant avant le test. Les échantillons fortement hémolysés ou lipémiques ainsi que ceux contenant des particules
ou présentant une contamination microbienne évidente ne doivent pas être testés. Éliminer les bulles d’air qui se sont
formées avant le test. Les échantillons sont stables à température ambiante pendant 24 heures maximum. Si le dosage
est effectué dans les 5 jours suivant le prélèvement des échantillons de sérum, ceux-ci doivent être conservés entre 2 et
8°C ; sinon, ils doivent être conservés congelés à une température inférieure ou égale à -20°C. Si le dosage est effectué
dans les 2 jours suivant le prélèvement des échantillons de plasma (avec héparine de lithium), ceux-ci doivent être
conservés entre 2 et 8°C ; sinon, ils doivent être conservés congelés à une température inférieure ou égale à -20°C.
Si les échantillons ont été congelés, attendre qu’ils soient complètement décongelés et les homogénéiser avant le
dosage. Les échantillons de sérum peuvent être congelés et décongelés 3 fois. Les échantillons de plasma
(avec héparine de lithium) peuvent être congelés et décongelés 1 fois. Les congélateurs dotés d'une fonction de
dégivrage automatique ne sont pas recommandés pour la conservation des échantillons.
Le volume d'échantillon minimal requis pour une seule détermination est de 250 μL [100 µL d'échantillon pour le
dosage + 150 μL de volume mort (volume restant au fond du tube d'aliquote que l'instrument ne peut pas aspirer)].

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9. ÉTALONNAGE
®
Chaque réactif Integral du dosage LIAISON Vitamin B12 contient des informations spécifiques pour l'étalonnage du
lot de réactif Integral particulier. Le test des étalons spécifiques du dosage permet d'ajuster la courbe maîtresse
attribuée en utilisant les valeurs de RLU (unités relatives de luminescence) détectées. Chaque solution d'étalonnage
permet d’effectuer 5 étalonnages.
Le ré-étalonnage en triple est obligatoire lorsque se vérifie au moins 1 des conditions suivantes :
• un nouveau lot de réactifs (réactif Integral ou réactifs Starter) est utilisé ;
• l’étalonnage précédent a été exécuté plus de 21 jours auparavant ;
• les résultats du contrôle de qualité sont en dehors de la plage acceptable ;
• l’automate d'immunoanalyse a subi un entretien.
Se reporter au manuel d'utilisation de l'automate d'immunoanalyse pour obtenir des renseignements sur l'étalonnage.
®
Plage de mesure : Le dosage LIAISON Vitamin B12 permet de mesurer des concentrations comprises entre
55 pg/mL et 1 500 pg/mL.
La valeur la plus faible pouvant être reportée est de 55 pg/mL. Les valeurs inférieures à 55 pg/mL doivent être
reportées comme < 55 pg/mL. La valeur sans dilution la plus élevée pouvant être reportée est de 1 500 pg/mL.
®
Les échantillons qui sont au-dessus de l'intervalle de mesure du dosage peuvent être dilués avec le diluant LIAISON
Endocrinology Diluent (319133) et testés à nouveau.
Dilution suggérée : 1 partie d'échantillon et 3 parties de diluant Endocrinology Diluent (100 µL d'échantillon + 300 µL
de diluant Endocrinology diluent).

10. PROCÉDURE DE DOSAGE

Afin de s'assurer des bonnes performances du dosage, respecter scrupuleusement le mode d'emploi de l'automate
d'immunoanalyse.
®
Automate LIAISON XL Analyzer : tous les paramètres du dosage sont identifiés par les informations codées dans
l'étiquette d'identification par radiofréquence (étiquette RFID) du réactif Integral. Si l'étiquette RFID ne peut pas être lue
par l'automate d'immunoanalyse, ne pas utiliser le réactif Integral. Ne pas jeter le réactif Integral ; contacter l'assistance
technique DiaSorin locale pour obtenir des instructions.
Se reporter au manuel d’utilisation de l'automate d’immunoanalyse pour obtenir des renseignements détaillés.

L’automate d’immunoanalyse exécute les opérations suivantes :

®
LIAISON XL :
1. Distribution du tampon de dosage 1 + du tampon de dosage 2 + de l’échantillon, de l’étalon ou du contrôle
dans la cuvette de réaction.
2. Incubation.
3. Distribution du tampon de dosage 3 + des particules magnétiques dans la cuvette de réaction.
4. Incubation.
5. Distribution du conjugué dans la cuvette de réaction.
6. Incubation.
7. Lavage avec le liquide de lavage.
8. Ajout des réactifs Starter et mesure de la lumière émise.

11. CONTRÔLE DE QUALITÉ

Il est nécessaire d’effectuer un contrôle de qualité une fois par jour d'utilisation ou conformément aux directives ou
exigences des réglementations locales ou des organismes accrédités. Pour de plus amples informations sur les
pratiques de contrôle de qualité appropriées, il est recommandé à l'utilisateur de consulter les directives CLSI C24-A3
et 42 CFR 493.1256 (c).
®
Les contrôles LIAISON Vitamin B12 sont conçus pour détecter toute détérioration importante des réactifs. Les
®
contrôles LIAISON sont à analyser en simple pour évaluer la performance du test. Le test est valide si les valeurs
des contrôles sont comprises dans les limites attendues indiquées sur le certificat d'analyses. Si les valeurs des
contrôles se situent en dehors des limites attendues, le test est non valide et les résultats des patients ne peuvent
pas être reportés. Un étalonnage du dosage doit être réalisé en cas de défaillance des contrôles, et les contrôles et
les échantillons doivent être testés à nouveau.

La performance d'autres contrôles doit être évaluée afin de s'assurer de leur compatibilité avec ce dosage avant
utilisation. Il est donc essentiel d'établir les intervalles de valeurs appropriés pour le matériel de contrôle de qualité
employé.

L'intervalle des concentrations de chaque contrôle est imprimé sur le certificat d'analyses et indique les limites
établies par DiaSorin pour les valeurs des contrôles pouvant être obtenues par des tests fiables.

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12. INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS
L'automate d'immunoanalyse calcule automatiquement la concentration de vitamine B12 présente dans l'échantillon.
Celle-ci est exprimée en pg/mL.
Pour convertir les résultats en unités SI : 1 pg/mL = 0,74 pmol/L

Avertissement - Si le résultat de l'échantillon affiche « invalid RLU » (RLU invalide) et un point d'exclamation
(!), le résultat obtenu se situe en dessous de la plage de signal du test. L'échantillon doit être testé à
nouveau. Si le résultat affiche toujours « invalid RLU » après le deuxième test, contacter le service
d’assistance technique de DiaSorin.

13. LIMITES DU DOSAGE

1. Les résultats du dosage doivent être utilisés en association avec d'autres données cliniques et biochimiques
afin d'orienter le clinicien dans ses décisions de prise en charge des patients au cas par cas.
2. Afin d’obtenir des résultats fiables, il convient de suivre strictement le mode opératoire et d'effectuer les
manipulations de façon appropriée.
3. Une contamination bactérienne ou des cycles répétés de congélation-décongélation peuvent affecter les
résultats du test.
4. Les échantillons fortement hémolysés, ictériques ou lipémiques, ainsi que ceux contenant des particules ou
présentant une contamination microbienne évidente, ne sont pas recommandés et ne doivent pas être testés.
5. Ne pas inactiver le sérum ou le plasma par la chaleur.
6. Des anticorps hétérophiles présents dans le sérum humain peuvent réagir avec les immunoglobulines ou avec
d'autres substances contenues dans les réactifs et ainsi interférer avec les dosages immunologiques in vitro.
7. Les patients régulièrement exposés à des animaux, à des produits à base de sérum animal ou à d'autres
produits immunogènes pouvant favoriser la production d'anticorps hétérophiles dirigés contre les réactifs du
dosage, sont éventuellement sujets à cette interférence ; dans ce cas, des valeurs anormales risquent d'être
observées.
®
8. Le dosage LIAISON Vitamin B12 n'a pas été évalué chez la population pédiatrique, les sujets immuno-déficients
ou les femmes enceintes.
9. Approximativement 50% des patients souffrant d’anémie pernicieuse présentent des anticorps anti-facteur
8
intrinsèque . Pendant la réaction, la dénaturation devrait inactiver les anticorps bloquant le facteur intrinsèque.
Néanmoins, tout anticorps anti-facteur intrinsèque résiduel ou titre extrêmement élevé d’anticorps anti-facteur
9
intrinsèque est susceptible d’entraîner des résultats erronés .

14. VALEURS ATTENDUES

Chaque laboratoire doit établir sa propre plage de valeurs attendues pour la population prise en compte.

Intervalle de référence

Intervalles de référence observés

Médiane Intervalle observé
Population (n = 166) e e
du 2,5 au 97,5 percentile
États-Unis 318,5 (pg/mL) 107,2 pg/mL – 653,3 pg/mL

Des échantillons de sérum prélevés de manière prospective chez 166 adultes apparemment en bonne santé âgés de
21 à 59 ans, qui étaient à jeun depuis au moins 8 heures, ont été obtenus. Le statut de bonne santé apparente des
adultes a été déterminé à l’aide des critères d’inclusion/exclusion indiqués ci-dessous. Les échantillons ont été
prélevés puis centrifugés et séparés des cellules dans les 2 heures suivant le prélèvement. Une fois le sérum/plasma
séparé des cellules, les échantillons ont été congelés immédiatement et conservés à -70°C afin de maintenir leur
intégrité. Les échantillons ont été expédiés congelés et sont restés congelés jusqu’au moment du test.
®
Afin d'évaluer l’intervalle de référence attendu du dosage LIAISON Vitamin B12, une étude a été réalisée avec des
échantillons de sérum prélevés chez 166 adultes apparemment en bonne santé âgés de 21 à 59 ans et d’origine
ethnique mixte (30% de Caucasiens, 31% d'Afro-Américains, 39% d’Hispaniques), qui étaient à jeun depuis au moins
8 heures. Le statut de bonne santé apparente a été déterminé par des sujets qui ne présentaient aucun antécédent
d’anémies, de carence en acide folique ou vitamine B12, de MII ou suspicion de MII, de maladie cœliaque, de troubles
de malabsorption gastro-intestinale, ou de troubles de l'alimentation. Les sujets n'avaient utilisé aucun contraceptif oral
au cours des 3 derniers mois et n'avaient pas consommé d’alcool dans les 48 heures précédant la prise de sang.
En outre, aucun d’entre eux ne consommait d'alcool de manière excessive. Aucune femme enceinte ou individu
recevant une supplémentation en vitamine B12 n’a été inclus(e) dans la population de l'étude.
En se basant sur l'intervalle de confiance à 95%, les valeurs suivantes ont été établies d'après la directive CLSI C28-A3.

®
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15. CARACTÉRISTIQUES DU DOSAGE

15.1 Corrélation des méthodes :

®
Au total, 156 échantillons couvrant l'intervalle de dosage ont été testés à l'aide du dosage LIAISON Vitamin B12 et
d’une autre méthode disponible dans le commerce conformément à la directive CLSI EP9-A3, et ont permis de
®
générer l'analyse de régression de Passing et Bablok suivante : LIAISON Vitamin B12 = 0,97 (méthode de
référence) + 5,4 ; R = 0,985.

Dosage N Pente (IC à 95%) Ordonnée à l’origine Coefficient de

(IC à 95%) corrélation
Vitamine B12 156 0,97 (0,94-1,00) 5,4 (-5,2-17,0) 0,985

®
15.2 Précision avec l'automate d'immunoanalyse LIAISON XL Analyzer
1 lot de contrôles de la trousse et 6 échantillons (sérum/plasma) couvrant l'intervalle du dosage ont été testés deux
fois par jour en double, pendant 20 jours ouvrables, en utilisant 1 lot de réactifs à DiaSorin Inc. Le test a été réalisé
conformément à la directive CLSI EP5-A3.
Intra-analyse sur un Total sur un lot et
Moyenne lot et un site un site
ID échantillon (pg/mL) EC %CV EC %CV
Échantillon n° 1 (KC) 642 21,56 3,4% 42,99 6,7%
Échantillon n° 2 (KC) 1262 48,79 3,9% 86,28 6,8%
Échantillon n° 3 240 10,16 4,2% 20,36 8,5%
Échantillon n° 4 417 21,85 5,2% 39,76 9,5%
Échantillon n° 5 646 24,83 3,8% 57,55 8,9%
Échantillon n° 6 773 29,36 3,8% 60,12 7,8%
Échantillon n° 7 1039 39,87 3,8% 103,87 10,0%
Échantillon n° 8 1093 47,96 4,4% 93,89 8,6%

15.3 Limite de blanc (LoB)*

®
En suivant la méthode de la directive CLSI EP17-A2, la limite de blanc du dosage LIAISON Vitamin B12 pour le
sérum est ≤ 38,7 pg/mL.
*Limite de blanc, ou la valeur la plus élevée susceptible d'être observée avec un échantillon ne contenant aucun
analyte, remplace le terme « sensibilité analytique ».

15.4 Limite de détection (LoD)

®
En suivant la méthode de la directive CLSI EP17-A2, la limite de détection du dosage LIAISON Vitamin B12 pour le
sérum est de 51,2 pg/mL.

15.5 Limite de quantification (LoQ)

®
En suivant la méthode de la directive CLSI EP17-A2, la limite de quantification du dosage LIAISON Vitamin B12
pour le sérum est de 55 pg/mL.

®
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15.6 Étude de la linéarité
Un échantillon de chaque type (sérum, sérum SST, plasma avec héparine de lithium) à forte concentration contenant
de la vitamine B12 endogène et/ou dopé en vitamine B12 au-dessus de l’intervalle de mesure du dosage à
®
1 500 pg/mL a été dilué et testé à l'aide du dosage LIAISON Vitamin B12 conformément à la directive CLSI EP6-A.
Les résultats pour chaque échantillon ont été analysés selon une régression de la concentration observée par rapport
à la concentration attendue.
Les équations obtenues pour chaque type d'échantillon sont les suivantes :
Sérum : Concentration en vitamine B12 observée = 1,076x + 6,896; R = 0,998
Sérum SST : Concentration en vitamine B12 observée = 1,009x + 0,224; R = 0,999
Plasma avec héparine de lithium : Concentration en vitamine B12 observée = 1,029x – 0,095; R = 0,996

15.7 Récupération
5 échantillons de sérum (endogènes ou dopés) à haute concentration et 5 échantillons de sérum à basse concentration
ont été analysés purs (non dilués). Les échantillons de récupération ont ensuite été préparés en mélangeant, selon des
rapports définis, des échantillons à haute et à basse concentration, puis ont été analysés par groupes de 5 réplicats.
Les résultats moyens des 5 réplicats sont indiqués dans le tableau ci-dessous.

Concentration Attendue Observée % de

définie
(pg/mL) (pg/mL) récupération
Échantillon 1
Pur, haute conc. 1484 - -
2 H:1 L 1129 1144 101%
1 H:1 L 946 940 99%
1 H:2 L 763 752 99%
Pur, basse conc. 108 - -
Échantillon 2
Pur, haute conc. 1280 - -
2 H:1 L 974 946 97%
1 H:1 L 816 773 95%
1 H:2 L 658 633 96%
Pur, basse conc. 352 - -
Échantillon 3
Pur, haute conc. 1112 - -
2 H:1 L 827 816 99%
1 H:1 L 680 683 100%
1 H:2 L 533 553 104%
Pur, basse conc. 247 - -
Échantillon 4
Pur, haute conc. 1098 - -
2 H:1 L 794 775 98%
1 H:1 L 637 641 101%
1 H:2 L 480 499 104%
Pur, basse conc. 176 - -
Échantillon 5
Pur, haute conc. 1184 - -
2 H:1 L 853 904 106%
1 H:1 L 682 707 104%
1 H:2 L 512 534 104%
Pur, basse conc. 180 - -
Récupération
100%
moyenne

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15.8 Substances interférentes
Des études contrôlées portant sur la présence de substances potentiellement interférentes dans du sérum à
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2 concentrations d’analyte (200 et 800 pg/mL) n'ont montré aucune interférence avec le dosage LIAISON Vitamin
B12 à la concentration la plus élevée de chaque substance indiquée ci-dessous. Les tests étaient basés sur la
directive CLSI-EP7-A2.

Médicament/substance Concentration testée

Hémoglobine 300 mg/dL
Bilirubine (conjuguée) 40 mg/dL
Bilirubine (non conjuguée) 40 mg/dL
Triglycérides 3 000 mg/dL
Cholestérol 500 mg/dL
Albumine 12 g/dL
IgG humaines 12 g/dL
HAMA (anticorps humains anti-souris) 1387,5 ng/mL
Facteur rhumatoïde 1035 IU/mL
Acétaminophène 20 mg/dL
Acide acétylsalicylique 65 mg/dL
Ibuprofène 50 mg/dL
Biotine 2 mg/mL

15.9 Spécificité/réactivité croisée

Des études contrôlées portant sur des substances ayant un potentiel de réaction croisée ont été réalisées avec le
®
dosage LIAISON Vitamin B12 aux concentrations indiquées ci-dessous. Les tests étaient basés sur la directive
CLSI-EP7-A2.

Substance ayant un potentiel Concentration

de réaction croisée dopée % de réactivité croisée
Dicyanocobinamide 10 000 pg/mL -0,19%
®
L'étude de réactivité croisée du dosage LIAISON Vitamin B12 a été conçue pour évaluer l'interférence potentielle
d'autres analytes étroitement apparentés possédant une structure similaire.

16.0 Bibliographie
1. Tietz textbook of Clinical Chemistry; Burtis, Ashwood, second edition, page 2046.
2. Vitamin B12 Transport Proteins: Crystallographic Analysis of β-axial Ligand Substitutions in Cobalamin Bound to
Trascobalamin; Wuerges, Geremia, Fedosov, Randaccio, IUBMB Life, 59(11): 722-729, November 2007
3. Mosby’s Manual of Diagnostic and Laboratory Tests; Pagana and Pagana, second edition, page 475.
4. Synthesis and Biological Activity of Ribose-5’-Carbamate Derivatives of Vitamin B12; McEwan, Veitch and
Russell-Jones; Bioconjugate Chem. 1999, 10, 1131−1136
5. Investigation of a Vitamin B12 Conjugate as a PET Imaging Probe; Ikotun, Marquez, Fazen, Kahkoska, Doyle,
Lapi; ChemMedChem 2014, 9, 1244-1251
6. Klee GC. Cobalamin and Folate Evaluation: Measurement of Methylmalonic Acid and Homocysteine vs.
Vitamin B12 and Folate. Clin Chem 46; 2000:1277-83.
7. Snow CF. Laboratory Diagnosis of Vitamin B12 and Folate Deficiency: A Guide for the Primary Care Physician.
Arch Intern Med. 1999; 159:1289-98.
rd
8. Chanarin I. The megaloblastic anaemias 3 ed. Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1990.
9. Taylor KB. Immune aspects of pernicious anaemia and atrophic gastritis. Clin Haematol 1976; 5: 497-519.

DiaSorin Inc. DiaSorin Italia S.p.A.

1951 Northwestern Avenue Via Crescentino snc
Stillwater, MN 55082 13040 Saluggia (VC)
USA Italy

®
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