RAPPORT DE MICROBIOLOGIE
[Link]
Le travail pratique de microbiologie tient dans le sens à amener les étudiants que nous sommes
à comprendre et réalisé :
Ibigüité des germs
Ensemencement d’un bouillon à partir d’une culture en milieu liquide ;
Ensemencement d’une gélose incliner à partir d’une culture liquide ;
Une coloration de Gram avec les différentes cultures obtenue pour distinguer les
bactéries gram positif des bactéries gram négatifs.
Dans le cadre de ce travail pratique, nous avons utilisé la méthode de diffusion en milieu gélosé
pour mesurer la zone d’inhibition (méthode des disques) en appliquant une technique de
routine. L’objectif est d’assurer une prise en charge optimale des patients, d’utiliser de manière
rationnelle les traitements disponibles et de surveiller activement la résistance aux
antibiotiques.
Dans les sections suivantes, nous présenterons en détail les différentes manipulations réalisées
lors des séances au laboratoire, sous la supervision attentive du CT : WELO UNYA, ainsi que
l'assistant : DISASHI, qui nous ont accompagnés tout au long de ces travaux pour garantir leur
bon déroulement.
[Link] POUR L’ENSEMENCEMENT
Pour ensemencer, nous avons utilisé :
Boite à pétri
Anse de platine
Bec bunsen
Microscope
Écouvillon
2.1 POUR LA COLORATION DE GRAM
Nous avons utilisé :
Lame porte objet
Anse de platine
Bec bunsen
Microscope
2.2. les réactifs :
Cristal violet
Lugol
Alcool
Safranine
Eau distillée
[Link] MILIEUX DE CULTURE
Ici nous avions Utilisés de milieu non connus ,de boite de pétri vide
[Link] ET RESULTAT
Dans ce point, nous allons relater le déroulement de quelques manipulations
précisément du à l’Ensemencement :
[Link]üité des germes
Réalisation en groupe:
Cela a été réalisé en groupe de trois, avec Kambem et Kalala Bukasa. Nous avons utilisé un
écouvillon pour prélever notre échantillon en le frottant sur la bouche.
a.Déroulement :
Nous avons pris un écouvillon et l’avons frotté sur notre bouche, préférant cette méthode
plutôt que sur la peau ou les narines. L’objectif était de prélever un échantillon, que nous avons
ensuite flambé à l’aide d’une anse de platine tout en maintenant la boîte dans une zone
aseptique, c'est-à-dire dans la chaleur dégagée par le bec Bunsen. Enfin, nous avons ensemencé
le milieu et refermé la boîte.
b. Résultat :
Après 24 heures d’incubation, l’observation visuelle du milieu de culture a révélé que, pour
l’échantillon exposé à l’air libre, des colonies bactériennes étaient présentes sous forme de
groupes. Pour l’échantillon prélevé avec l’écouvillon, nous avons observé des colonies isolées et
groupées, modifiant même la coloration de la boîte de culture.
2. Ensemencement d’un bouillon liquide à partir d’une culture liquide
a.Déroulement
L’anse de platine a été stérilisée à l’aide d’une flamme de bec Bunsen, puis refroidie. À l’aide de
cette anse, nous avons prélevé une goutte de la culture microbienne dans un tube. L’orifice du
tube a été flambé pour assurer la stérilité, puis soigneusement recouvert d’ouate.
Le bout de l’anse de platine contenant la goutte de culture a été plongé dans un autre tube
contenant du bouillon nutritif. Après avoir flambé l’orifice extérieur, le bouchon a été replacé.
L’anse de platine a ensuite été stérilisée de nouveau au bec Bunsen pendant 50 secondes à une
minute.
Le bouillon a ensuite été incubé à 37 °C pendant 24 heures.
b.Résultat :
Après 24 heures d’incubation, l’observation visuelle du milieu de culture a révélé une turbidité,
indiquant la croissance microbienne.
[Link] d’une gélosé inclinée à partir d’une culture en liquide
a. Déroulement :
La première étape est identique à celle de la manipulation précédente. Après avoir prélevé une
goutte de culture liquide dans le tube, nous l’avons étalée en stries serrées sur la surface de la
gélose inclinée, en commençant par le fond du tube. L’élimination du matériel a suivi les
mêmes procédures que lors de la première manipulation. Ce deuxième tube a ensuite été
incubé à 37 °C.
Il est important de noter que la culture microbienne ensemencée contient du Staphylococcus
aureus.
b.Résultat :
Étant donné que le milieu est solide, la croissance bactérienne se manifeste par une mousse à
la surface de la culture.
4. COLORATION DE GRAM
a Déroulement :
Prélèvement de l’inoculum provenant de la culture liquide réalisé
précédemment à l’aide de l’anse de platine flambé au préalable.
Etalement de frottis sur une lame puis sécher
Couverture de frottis avec du violet de gentiane pendant 1 minute.
Le violet est rejeté et puis couverture du frottis avec la solution de Lugol pendant
1minute.
Le Lugol est rejeté puis rinçage avec l’eau de robinet
Décoloration avec l’alcool
De nouveau rincer à l’eau de robinet
Recoloration du frottis pendant une minute avec la safranine
La safranine est rejetée
Rinçage à l’eau
Le frottis a été sécher à l’air libre.
CONCLUSION
Après ces différentes manipulations, nous sommes en mesure d’ensemencer des bactéries sur
des différents milieu de culture, de purifier des colonies bactériennes, de différencier les
bactéries Gram positif des bactéries Gram négatif en faisant la coloration de Gram.