Cours 13, 8 Jan 2018

Rappeler

Ch 19.
LE DOGME CENTRAL DE LA BIOLOGIE
MOLÉCULAIRE ET LES APPLICATIONS
MÉDICALES
- Le "dogme central", introduit par F. Crick
(le co-découvreur de la structure de l‘ADN):
dans tous les êtres vivants l'information ne
soit transmise que dans un sens:

Le dogme centrale est valable pour

procaryotes et eucaryotes; 2
1. replication d’ADN
2. transcription
3. traduction

3
 Gene Function

> DNA sequence

AATTCATGAAAATCGTATACTGGTCTGGTACCGGCAACAC
TGAGAAAATGGCAGAGCTCATCGCTAAAGGTATCATCGAA
> Protein sequence
TCTGGTAAAGACGTCAACACCATCAACGTGTCTGACGTTA
MKIVYWSGTGNTEKMAELIAKGIIESGKDV
ACATCGATGAACTGCTGAACGAAGATATCCTGATCCTGGG NTINVSDVNIDELLNEDILILGCSAMGDEVLE
TTGCTCTGCCATGGGCGATGAAGTTCTCGAGGAAAGCGAA ESEFEPFIEEISTKISGKKVALFGSYGWGDG
TTTGAACCGTTCATCGAAGAGATCTCTACCAAAATCTCTG KWMRDFEERMNGYGCVVVETPLIVQNE
GTAAGAAGGTTGCGCTGTTCGGTTCTTACGGTTGGGGCGA PDEAEQDCIEFGKKIANI
CGGTAAGTGGATGCGTGACTTCGAAGAACGTATGAACGGC
TACGGTTGCGTTGTTGTTGAGACCCCGCTGATCGTTCAGA 4
ACGAGCCGGACGAAGCTGAGCAGGACTGCATCGAATTTGG
TAAGAAGATCGCGAACATCTAGTAGA
• Le matériel génétique
a) Chez les eucaryotes:
- dans le noyau (env. 23 000 gènes)
- dans les mt (37 gènes);

Existe molecules liniaires d’ADN

dans le noyau

et

molecules circulaires dans les mitoc.

5
- L'ADN est un polymère de bases désoxyribonucléiques, appelées
nucléotides.
- Chaque nucléotide est constitué d'un groupe de phosphate lié au
désoxyribose, lui-même lié à une base azotée.

6
b) Chez les procaryotes:

l’ADN est circulaire est se trouve

- dans le chromosome
- dans les plasmides (contient des
genes optionales: 3-200 genes).

!!!! Les plasmides peuvent être inserées

dans le chromosome------ resultant
l’épisome.

7
!!! L’importance medicale de plasmides réside en:

1. leur application dans la Biotechnologie d’ADN

recombinante

8
...utilisant les enzymes de restriction

9
- Appl: la synthèse des interpherones, d’insuline, STH,
erytropoetine, etc.

10
2. Les plasmides (apportant gènes optionnales) sont
impliqués dans la résistance des bacteries au antibiotiques

• La résistance aux antibiotiques

– est une des formes de pharmaco
résistances
– cause possible de maladies
nosocomiales

11
12
 1. La réplication d’ADN
• le processus au cours duquel
l'ADN est synthétisé grâce à
l’ADN polymérase

• La molécule d'ADN s'ouvre

comme une fermeture éclair
libérant 2 brins
complémentaires
13
En théorie, il y a 3 modèles possibles:

14
• Chaque brin solitaire - synthétisé selon la règle de complémentarité
des bases.

• Les 2 chaînes de l'ADN parental se séparent et 2 nouvelles molécules

sont formées: ce processus est semi-conservatif
• Ainsi, chaque nouvelle molécule est identique à la molécule d'ADN
initiale 15
• Le problème des brins antiparallèles
est contourné par la synthèse d'un brin continu (dit avancé) et
d'un brin discontinu (retardé), formé de fragments d’Okazaki:

16
 Fragments
d'Okazaki

Replication d’ADN:
(a) brins «parents»
(b) brin continu (dit avancé), dans le sens 5’vers 3’
(c) brin discontinu (dit retardé), formé de fragments d'Okazaki
(d) lieu de séparation des brins par l‘enzyme helicase
(e) amorce
(f) fragment d'Okazaki

– Les ADN polymérase ont la capacité de corriger les

17
erreurs dans la formation de brin néoformé
18
L’origine de réplication

19
 Particularités pour l’eucaryotes:
• 1. la vitesse de répl. pour l’eucaryotes < procaryotes;
– mécanisme compensatoire: il y a plusieurs origines de
réplication avec 2 fourches de réplication (aprox. 100 orig. de
répl./ chaque chromosome);

20
• 2. l’unité de réplication –
avec groupes de 20-80
origines de réplication
(chaque groupe: unité de
réplication ou réplicon)

3. la synthèse de prot.
histones (se fait
simultanément avec la
réplication d’ADN, en phase S)

• 4. ADN polymérase - 21
spécifiques pour l’eucaryotes
 LES IMPLICATIONS ET LES
APPLICATIONS MÉDICALES DE
L’ETUDE DE LA RÉPLICATIONS D’ADN

22
A. LES MUTATIONS

• Modification
irréversible de la
séquence d'un génome
(ADN ou ARN)

23
24
 Types de mutations
• - punctiformes (une séule
nucleotide)
– déamination
– dépurination (frequente)

Environ 5000 bases puriniques sont

perdues tous les jours de chaque
cellule humaine, par rapport à 100
déaminations

• - complexes (les sequences d’ADN)

25
 Agents mutagènes
Le taux de mutations peut être
augmenté par des facteurs physiques
ou chimiques, appelés agents
mutagenes.

1. AGENTS CHIMIQUES
– I. Subst. qui modif. directement les
bases ex: les agents alchilants;
– peuvent être utilisés aussi comme
des ag. chimiotherapeutiques
27
- II. Substances intercalants entre les 2
chaînes d’ADN:
• etidium bromide (util. en lab pour l’identif. des
acides nucleiques par
fluorescence)..aujourd’hui rempl. avec des
colorants moins toxique (Sybr Green, Red safe);
• la caféine (! Cancer du pancreas);
Subst. qui, en plus, établissent des ponts
– mytomicine C
– médicaments comme les sels de Pt (Cisplatin) trait.
anti-tumorale
– !!! particularité pour le traitement de psoriasis
cutané – util. d’un médicament – Psoralen qui
s’intercale entre les 2chaînes d’ADN dans les
cellules malades (peau) et après, pendant l’exposé a
radiation UV, les cellules malades sont détruits.
28
Normalement,
il y a des
mécanismes
de réparation:

29
• Une modification du
système de réparation
de l'ADN explique une
maladie génetique
caracterisée par
l’absence de ces
méchanismes
reparatoires: l’anémie
de Fanconi
(anémie grave,
imunodepression,
cancer de la peau, du
foie)

30
2. AGENTS
PHYSIQUES - Les ondes
électromagnétiques:

– I. Les rayons ultraviolets

(UV)- avec λ: 300 nm-
provoquent les
dimerisations de la tymine
– qui bloquent la
réplication d’ADN.

31
32
 Normalement il y a des procesus de réparation de ces

modifications de l’ADN qui utilisent plusieurs enzymes:

33
• les déficiences de
ces systemes
provoque une
maladie grave:
xeroderma
pigmentosum
(lessions cutanées
qui dévient
cancereuses)

34
– II. Les rayons ionisantes:
– rayons X,
– rayons β (les electrons)
– rayons α (noyau de He)
– les rayons Gamma,

Ces rayons provoquent

des ruptures d’ADN;
pour ce phénomenes
existe aussi normalement
35
systemes de réparation.
MAIS, les
déficiences de ces
systèmes de
réparations
provoque la
maladie ataxia
téléangiectasia
(malcoordonations des
mouvements, dilatations des
venules, imunodepression,
cancer).
36
 B. Les inhibiteurs de synthese de l’ADN

a) Substances anthibiotiques (empêchent la

multiplication des micro-organismes):
- l’acide nalidixic (anti- bacteries)
- l’acide phosphonoacétique (anti- virus)

b) Les substances anti-tumorale

(cytostatiques)
- Arabinosyl-adenine,
- Arabinosyl-citosine;
- néocarcinostatine 37
Appl: L’introduction de la
technique PCR* - au TP

38
…après, l’electrophorese d’ADN

39
 19.5. L’essence de la
transcription et
applications médicales

40
• Le concept d’ARN messager a été introduit par
Jacob et Monod en 1961

• Le concept d’ARNm a été démontré par

Spiegeleman en 1962
– La bactérie [Link] e été infectée par le bactériophage
T2 (virus)
– L’expérience a démontré que l’ARN synthétisé en
[Link] après l’infection avec le phage T2 a une
séquence complémentaire avec l’ADN du phage 41
42
Caractéristiques de la transcription pour
l’eucaryotes:

1. Existent 3 types de polymérase: la

polymérase II – pour la synthese d’ ARNm

2. Chez les eucaryotes, l'ARN n'est pas

directement utilisable. Il doit subir une
maturation (avec 7-MG et la polyA)

43
3. Pour obtenir une molécule
d'ARN fonctionnelle…l’épissage

Les gènes des eucaryotes:

1) séquences codantes (les
exons) séparées par des
2) zones non codantes (les
introns)

- L'ARN produit est plus court,

passe dans le cytoplasme et
devient un ARN messager
mature ou ARNm
44
 Les applications médicales

• Les inhibiteurs de la transcription

(quelques antibiotiques):

– La rifamycine et la rifampycine (dérivé semi-

synthétique) inhibent l’initiation de la synthèse
de l’ARNm dans les bactéries;

– L’actinomycine D s’intercale en ADN, inhibe

spécifiquement la transcription. 45
 La traduction
• La traduction est
l'interprétation des
codons de l‘ARNm en
acides aminés.

• Elle a aussi besoin

d'énergie, des ribosomes,
des ARNt, de l'activité
enzymatique et d'un plan
apporté par l'ARNm.

46
47
L’ARNt

48
• Le code génétique
désigne le système de
correspondance gene-
proteine

• Les ribosomes traduisent

.. l'enchaînement des
bases nucléotidiques de
l'ARN en une séquence
d'acides aminés

49
Le code génétique – caractèristiques
(triplet, dégénéré , universel)

50
Ribosome: la synthèse des protéines

51
52
Un chapelet de ribosomes est appelé polysome ou
polyribosome (visible par ME)

53
 Translation - Initiation

fMet

Large P A
subunit E
UAC
5’GAG...CU-AUG--UUC--CUU--AGU--GGU--AGA--GCU--GUA--UGA-AT GCA...TAAAAAA 3’
Small mRNA
subunit

54
 Translation - Elongation
Polypeptide
Met Arg
Phe
Leu Ser
Gly
Aminoacyl tRNA

Ribosome P A
E
CCA
5’GAG...CU-AUG--UUC--CUU--AGU--GGU--AGA--GCU--GUA--UGA-AT GCA...TAAAAAA 3’
mRNA

55
 Translation - Elongation
Polypeptide
Met
Phe
Leu Ser
Gly Arg

Aminoacyl tRNA

Ribosome P A
E
CCA UCU
5’GAG...CU-AUG--UUC--CUU--AGU--GGU--AGA--GCU--GUA--UGA-AT GCA...TAAAAAA 3’
mRNA

56
 Translation - Elongation
Polypeptide
Met
Phe
Leu Ser
Gly
Arg

Ribosome P A
E
CCA UCU
5’GAG...CU-AUG--UUC--CUU--AGU--GGU--AGA--GCU--GUA--UGA-AT GCA...TAAAAAA 3’
mRNA

57
 Translation - Elongation
Polypeptide
Met
Phe Ala
Leu Ser
Gly
Arg Aminoacyl tRNA

Ribosome P A
E
CCA
UCU
5’GAG...CU-AUG--UUC--CUU--AGU--GGU--AGA--GCU--GUA--UGA-AT GCA...TAAAAAA 3’
mRNA

58
 Translation - Elongation
Polypeptide
Met
Phe
Leu Ser
Gly
Arg Ala

Ribosome P A
E
UCU CGA
5’GAG...CU-AUG--UUC--CUU--AGU--GGU--AGA--GCU--GUA--UGA-AT GCA...TAAAAAA 3’
mRNA

59
19.7. Particularités d’organisation et d’exprimation
du matériel génétique du virus
a) Les virus à ADN ont l’ADN double caténaire liniaire ou
circulaire

b) Les virus à ARN sont des virus qui, dans la cellule hôte il y a
3 possib:
1. leur ARN est directement l’ARNm de la cellule hôte

2. utilise leur ARN comme une matrice pour la synthèse

d’ARNm de la cellule hôte

3. leur ARN est une matrice pour la synthèse d’ADN dans la

cellule hôte avec l’enzyme transcriptase inverse, puis elle
synthétise le brin complémentaire d'ADN); apres se form l’ARNm.
60
Figure 6-37 Essential Cell Biology (© Garland Science 2010)
 19.8. LES AMENDAMENTS DU DOGME CENTRAL DE
LA BIOLOGIE MOLÉCULAIRE
• 1. La transcription inverse

Elle a été découverte comme faisant partie du cycle réplicatif des

rétrovirus (dont le plus connu est le virus HIV):

62
• 2. La possibilité de la changement de la position
des gènes sur le chromosomes: transposition. Les
transposons sont des élément d’ADN qui peut se
déplacer d’un endroit à un autre dans le genome.

(La découverte en a été faite par Barbara McClintock,

Prix Nobel de medecine en 1983)

• 3. La transcription de les 2 chaînes d’ADN mitoch.

- réside en la synthèse de 2 molecules de ARN messager
complementaires sur une matrice d’ADN mitochondrial.
63
• 4. Les variations du codage utilisés par les
mitochondries (leur code genetique est consideré primitif)

•5. La transcription
chez les procaryotes
respecte la
coliniarité ADN-ARN-
protéines;

- chez les
eucaryotes existe
l‘épissage, donc les
gènes chez les
eucaryotes sont
discontinués. 64
6. Types d’ARN
- pour les procaryotes on retrouve d’un même ARNm ,
des séquences codant pour plusieurs protéines

- chez les eucaryotes se forme une seul chaîne

polypeptidique a partir d’une molécule d’ARNm

Chez les procaryotes ARNm est polycystronique, et chez les

eucaryotes est monocystronique. 65
66
*

67
*

68
* L’epigenetique

69