Plan de travail
Introduction………………………………………………………………………………………………………………………2
Objectif du TP……………………………………………………………………………………………………………………2
Matériels et méthodes………………………………………………………………………………………………….……3
Résultats et discutions…………………………………………………………………………………………………..……5
Conclusion……………………………………………………………………………………………………………………..……7
Qu’est ce que on a appris du TP ?............................................................................................7
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Introduction :
La chromatographie sur couche mince et une technique de séparation et
d’identification d’un nombre important de substances comporter dans un mélange ; en se
basent sur le poids moléculaire des substances. Se fait en deux phase :
- Phase stationnaire : généralement solide (silice ou alumine). Ou le mélange sera tenu
sur la plaque en état solide.
- Phase mobile : liquide. Ce qui permet aux constituants du mélange de se déplacée a
de différentes vitesses en fonction de leurs poids moléculaires.
La CCM et une méthode rapide qui nécessite peu de matériel qui veut dire quel est peu
couteuse qui permet l’obtention de résultat préliminaire.
Objectif du TP
La séparation des pigments contenu dans deux différents échantillons la spiruline et le
piment rouge et quantifier leur Rf afin de les identifier.
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Matériels et méthodes
Matériaux :
3
Micropipette
Seringue
Fiole
Cuve
Plaque de silice
Solvant/Eluent de
migration
(Acétate)
Echantillons : 4
- Piment « P »
- Spiruline « S »
( témoin)
Méthode :
Préparation de la cuve : - On verse environ 1cm de l’éluant
dans la cuve.
-On recouvre la cuve entre temps
(pour empêcher l’évaporation)
Dépôt de l’échantillons : - A l’aide d’un crayon on trace la
ligne de dépôt a environ 1.5 cm de la base de la plaque de
silice (pour qu’elle soit au-dessus de l’éluant).
- On dépose une goute du liquide
du piment prélever à l’aide de la seringue. On rajoute
d’autre gouttes près que la première soit sec afin de
concentrer le mélange.
Elution : -On dépose la plaque dans la cuve qui contient
l’éluant.
-On laisse le solvant monter a travers la plaque et
on fait attention a retirer la plaque juste après que l’éluant
atteigne le front de migration.
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Résultats et discussion :
- Résultats :
Résultats spiruline. Résultats piment.
On obtient les résultats suivants :
Taches Piment Distance parcourue Taches Spiruline Distance parcourue
D1(vert) 1.5cm D1(bleu) 1.5cm
D2(jaune) 1cm D2(bleu vert) 0.7cm
D3(bleu) 0.8cm D3(vert) 0.5cm
La couleur bleu/ vert : correspond à la cyanine.
Les couleur jaune/ orange correspond à la ß carotène.
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Calcule du rapport frontal « Rf » :
Rf=
Distance parcourue par le solvantdistance parcourue par la substance
/distance parcourue par le solvant(D).
Piment Spiruline
Rf=D1 /D = 1.2/4.5= 0.33 Rf= D1/D = 1.3/4.5= 0.28
Rf=D2/D = 1/4.5 = 0.22 Rf= D2J/D = 0.7/0.8 = 0.15
Rf=D3/D = 0.8/4.5 = 0.17 Rf=D3/D = 0.5/4.5 = 0.11
D=4.5cm
Discussions :
Comparaison des Rf :
On remarque que les Rf obtenue son comprise entre 0 et 1.
Les substances avec le Rf le plus bas indiques se qui on un poids moléculaire plus petit celle qui
en migrer le plus. « La cyanine qui a donné les couleurs bleus et vert »
Les substances qui en un Rf plus élever sont des substances qui en migrer peu a cause de leur
poids moléculaires. « ẞ carotène qui a donné la couleur jaune »
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Conclusion
La chromatographie sur couche mince (CCM) est essentielle pour sa simplicité, sa rapidité et
son faible coût. Elle facilite l'identification, la séparation et le contrôle de pureté des
composants dans un mélange, ce qui rend cette technique d'une grande valeur dans divers
secteurs comme la recherche, la biochimie et le contrôle qualité.
Qu’est ce que j’ai appris de ce TP
- Comment préparer une cuve.
- Comment déposer un échantillas sur la plaque q silice.
- Comment interpréter les résultats CCM.
- L’aspect fondamental de la CCM qui consiste à une analyse quantitative par rapport
au poids moléculaire.