‫الجمهورية الجزائرية الديمقراطية الشعبية‬

République Algérienne Démocratique et Populaire

‫وزارة التعليم العالي والبحث العلمي‬
Ministère de L’Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique

N°Ref :……………

Centre Universitaire Abdelhafid BOUSSOUF- Mila

Institut des Sciences de la Nature et de la Vie
Département des Sciences Biologiques et Agricoles

Mémoire préparé en vue de l’obtention du diplôme de

Master
Domaine : Sciences de la Nature et de la Vie

Filière : Sciences Biologiques

Spécialité : Microbiologie Appliquée

Thème :

Présenté par :
 .

 .

Devant le jury :
MEDJANI S. MCB Présidente
GHOUT A. MCB Examinatrice
BAKLI S. MCA Promotrice

Année Universitaire : 2024/2025

 Remerciements
Avant tous nous tenons à remercier « Allah » tout puissant
qui nous a donné le courage et la volonté et de nous avoir bénie
jusqu’à la réalisation de ce travail...Alhamdolillah

Un très grand merci à nos parents pour leur soutien

inconditionnel tout au long de nos études et la confiance qu’ils
m’ont toujours témoignée.

Nous tenons à exprimer notre profonde gratitude et nos

sincères remerciements à notre promotrice, Mme BAKLI Sabrina
pour son assistance, Pour son aide précieuse et par ses judicieux
conseils pour assurer le succès de ce travail.

Nous adressons également nos sincères remerciements aux

membres de jury : Mme MIDJANI S. Présidente et Mme GHOUT
A. examinatrice, pour l'intérêt qu'elles ont porté à notre travail en
acceptant de l’examiner et de l’enrichir par leurs suggestions

Nos vifs remerciements et notre gratitude vont aussi à cher

Mr. KELLAB Rabeh pour les conseils et les orientations qu’il
nous a prodigués le long de notre travail.

Nous tenons également à remercier La vétérinaire Mme

BOUAROUDJ Samah pour sa gentillesse et pour son aide tout au
long de la période de notre étude.

Nous adressons un très grand et sincère remerciement au

médecin Mme BOUDJRIDA et l’ensemble de l’équipe du service
d’anatomie Pathologique de l’hôpital de Chelghoum l’eid.

Enfin, nous tenons à remercier toutes les personnes qui ont

contribué de près ou de loin à la réalisation de ce travail.
 Dédicaces
À l’aide de dieu tout puissant, qui m’a tracé le chemin de ma
vie, j’ai pu réaliser ce travail que je dédie:

À mes côtés fidèles, à celle dont les prières ont été la raison de
ma réussite et le baume de mes blessures, à mon ange dans la
vie ma chère mère qui m’a apporté son appui durant toutes mes
années d’étude, pour son sacrifice et soutien qui m’ont donné
confiance, courage et la sécurité nécessaires pour avancer.

À mon très cher père qui m’a toujours soutenu et aidé, il

était toujours à mes côtés, depuis mon enfance pour que je
réussisse.

Que Allah les garde et les protège.

À ma chère sœur, pour ses encouragements permanents,

son soutien moral, sa tendresse et son amour pour moi.

À mes chers frères, pour leur appui et leurs

encouragements.

À mon cher binôme Meryeam pour son engagement, sa

contribution, son aide tout au long de notre projet et cela a été
un plaisir de travailler ensemble.

Ainsi qu’à mes amis et camarades d’études et mes collègues

de travail.

Enfin, que tous ceux qui ont participé de près ou de loin dans
l’élaboration de ce modeste travail trouvent ici l’expression de ma
reconnaissance.

Dalal
 Dédicaces
A l’aide d’Allah, le tout puissant, j’ai pu réaliser ce travail que je
dédie.

À mes chers parents, qui n’ont jamais cessé de formuler des

prières à mon égard, de me soutenir, et de m’épauler pour que je
puisse atteindre mes objectifs, que Dieu vous accorde. Santé,
bonheur et longue vie ;

Un grand Mercie à mon mari Mohamad boudjaja, pour sa

compréhension, sa confiance et son soutien inestimable, merci
d’être à mes coté, d’être le meilleur mari et ami dont on puisse
rêver souhaitant de tout mon cœur que nos chemins ne
s’éloignent jamais.

À mes chères sœurs" Nadjwa, Ahlem, Chahra zed, Amel,

Amira, Djawida, Alaa elrahman, Douaa " merci pour vos
encouragements, vos conseils et surtout e votre soutien moral.
Que dieu les protègent.

A ma deuxième famille, merci pour toutes les valeurs que vous

m’avez transmis.

À mon cher binôme amie Dalal je te remercie énormément pour

ton sérieux et ton courage durant cette année, on a eu de très
beaux souvenirs.

A tous mes amis Sara, Nada, Fêlla, Amina, amira, Khadija,

Sara, Ikram, Djouhaina pour leur soutien et surtout pour tous
les bons moments qu’on a vécu ensemble, ils resteront à jamais
gravés dans ma mémoire.

Et enfin, un grand merci à toutes les personnes qui ont contribués

au succès de mon travail et qui m’ont aidée pour finaliser ce
mémoire, de près ou de loin.

Meryeam
 Résumé

Résumé
Les problèmes de santé liés à l’utilisation des produits phytopharmaceutiques sont,
malgré tout, une réalité : on recense à la fois des intoxications aiguës consécutives à l’utilisation
de ces produits (maux de tête, troubles hépato-digestifs, etc.) et des intoxications chroniques
suite à l’exposition répétée à des faibles doses, aboutissant à des pathologies plus graves, telles
que cancers du sang, troubles neuro-comportementaux et atteintes de la reproduction.
Notre étude consiste à évaluer la toxicité de la métribuzine utilisé en agriculture comme
un herbicide et ses effets sur quelques paramètres liés à la fonction hépatique, rénale et
reproductrice. 15 lapins mâles ont été répartis en 3 lots de 5 sujets chacun; le lot témoin a reçu de
l’eau de robinet par gavage, un lot traité uniquement avec la métribuzine (Mtz) à 10% et un lot
traité avec l’association de la métribuzine (10%) et l’infusion de la plante de Laurus nobilis
(4mg/ml) (Mtz/L). Les variations des paramètres hématologiques, biochimiques et certains
marqueurs de la fertilité masculine et l’étude histologique ont été déterminée chez des lapins
témoins et traités.
Les résultats obtenus ont montré que le traitement par la métribuzine a provoqué une
anémie hémolytique caractérisée par une diminution des paramètres hématologiques (globules
rouges et hémoglobine) et une augmentation des taux des globules blancs des lots traités par
rapport au lot témoin. Concernant les paramètres biochimiques, des changements ont été
enregistrés dans les paramètres liés à la fonction hépatique et rénale se manifestant par une
augmentation du taux de glucose, créatinine, urée, cholestérol et triglycérides accompagnée par
une augmentation significative de la concentration sérique des transaminases (ASAT, ALAT)
toujours chez les lapins traités. Concernant les paramètres de la fertilité masculine ; une
diminution de la concentration, de la mobilité et de la vitalité des spermatozoïdes chez les lapins
traités a été obtenue. Les altérations histologiques observées au niveau du foie, du rein, des
testicules et de l’épididyme ont confirmé les résultats biochimiques précités.
En conclusion, l’ensemble des résultats ont bien démontré que l’exposition à la
métribuzine a provoqué des perturbations au niveau de l’organisme qui se manifeste par une
altération des paramètres liés à la fonction hépatique, rénale, et reproductrice (testiculaire et
épididymaire). Toutefois, l’administration de Laurus nobilis sous forme d’une infusion, a
conduit à une légère correction dans leurs valeurs en raison de son effet correctif. Ces résultats
suggèrent que le Laurus nobilis peut atténuer les perturbations induites par la métribuzine en
raison de ses propriétés thérapeutiques.
Mots clés : Fertilité, lapins, Laurus nobilis, métribuzine, polyphénols, toxicité.
 ‫الملخص‬

‫الملخص‬
 Abstract

Abstract
Health problems related to the use of phytopharmaceutical products are, nevertheless, a
reality: there are both acute intoxications following the use of these products (headaches, hepato-
digestive disorders, etc.) and chronic intoxications resulting from repeated exposure to low
doses, leading to more serious conditions such as blood cancers, neurobehavioral disorders, and
reproductive impairments.

Our study aims to evaluate the toxicity of metribuzin used in agriculture as an herbicide
and its effects on various parameters related to liver, kidney, and reproductive function. Fifteen
male rabbits were divided into 3 groups of 5 subjects each; the control group received tap water
by gavage, one group was treated solely with metribuzin (Mtz) at 10%, and another group was
treated with a combination of metribuzin (10%) and an infusion of Laurus nobilis leaves
(4mg/ml) (Mtz/L). Changes in hematological, biochemical parameters, and some markers of
male fertility, as well as histological studies, were determined in both control and treated rabbits.
The results showed that treatment with metribuzin caused hemolytic anemia
characterized by a decrease in hematological parameters (red blood cells and hemoglobin) and an
increase in white blood cell counts in treated groups compared to the control group. Regarding
biochemical parameters, changes were recorded in parameters related to liver and kidney
function, manifested by an increase in glucose, creatinine, urea, cholesterol, and triglyceride
levels, accompanied by a significant increase in serum transaminase concentrations (ASAT,
ALAT) in treated rabbits. Regarding male fertility parameters; a decrease in sperm
concentration, mobility, and vitality in treated rabbits was obtained. The histological alterations
observed in the liver, kidney, testicles, and epididymis confirmed the aforementioned
biochemical results.

In conclusion, all the results clearly demonstrated that exposure to metribuzin caused
disturbances in the organism manifested by alterations in liver, kidney, and reproductive
(testicular and epididymal) function.
However, the administration of Laurus nobilis in the form of an infusion led to a slight
correction in their values due to its corrective effect. These results suggest that Laurus nobilis
may mitigate disturbances induced by metribuzin due to its therapeutic properties.

Keywords: Fertility, rabbits, Laurus nobilis, metribuzin, polyphenols, toxicity.

 Liste des abréviations

Liste des abréviations

DDT : dichlorodiphényltrichloroéthane

CAS : Chemical Abstracts Service (service des résumés cimiques)

HE : Huiles essentielles.

Mtz : Métribuzine.

EDTA : Ethylène diamine tétra-acétique.

FNS : Formule de numération sanguine.

GB : Globules Blancs.

GR : Globules Rouges.

HB : Hémoglobines.

ALAT : Alanine Aminotransférase.

ASAT : Aspartate Aminotransférase.

TGO : Transaminases glutamique oxalacétique.

TGP : Transaminases glutamique pyruvique.

ACTH : Hormone adrénocorticotrope.

CRH : Corticotropin-releasing hormone.

Spz : Spermatozoids.

TSM : le taux des spermatozoïdes morts.

TSV : le taux des spermatozoïdes vivants.

H & E : Coloration éosine hématoxyline.

ROS : Reactive oxygen species.

OMS : Organisation mondiale de la sante.

T° : Température.

UV : Ultra-violet.

Ph : Potentiel d’hydrogène.

TGP : Transaminase glutamique pyruvique

 Liste des abréviations

TGO : Glutamate oxaloacétique

LNT : Lapins témoin Non Traité

LTM : Lapins Traité avec métribuzine

LTL : Lapins traités avec la métribuzine plus l’infusion des feuilles du laurier.

P : Seuil de signification.
 Liste des figures

Liste des figures

Figure 1 : Structure chimique de la métribuzine..........................................................................15

Figure 2 : Structure de base de l’isoprène....................................................................................22
Figure 3 : Structure des acides phénoliques simples....................................................................23
Figure 4 : Structure de base des flavonoides................................................................................24
Figure 5 : Structures des principaux flavonoïdes.........................................................................24
Figure 6 : Structure de base des tanins hydrolysables..................................................................25
Figure 7 : Structures chimique de quelques tanins hydrolysable.................................................26
Figure 8 : Structure chimique des tanins condensés.....................................................................26
Figure 9 : Aspect morphologique de Laurus nobilis L.................................................................32
Figure 10 : Photographie du matériel biologique.........................................................................39
Figure 11 : Photographie du matériel végétal...............................................................................39
Figure 12 : Photographie du matériel chimique...........................................................................40
Figure 13 : Lots expérimentaux....................................................................................................41
Figure 14 : Pesée des lapins..........................................................................................................41
Figure 15 : Préparation de la métribuzine diluée..........................................................................42
Figure 16 : Préparation des feuilles du laurier..............................................................................42
Figure 17 : Gavage des lapins......................................................................................................43
Figure 18 : Sacrifice et dissection................................................................................................44
Figure 19 : Prélèvements sanguins...............................................................................................45
Figure 20 : Prélèvement des organes............................................................................................45
Figure 21 : Pesage des organes.....................................................................................................45
Figure 22 : Conservation des organes..........................................................................................46
Figure 23 : Prélèvement du sperme..............................................................................................46
Figure 24 : Schéma récapitulatif du protocole expérimental........................................................47
Figure 25 : Présentation schématique des modifications morphologiques..................................49
Figure 26 : Photographie des étapes de fixation des coups des organe........................................58
Figure 27 : Photographie des étapes de déshydration..................................................................58
Figure 28 : Photographie des différentes étapes de l’inclusion....................................................59
Figure 29 : Photographie des différentes étapes de la préparation des lames..............................59
Figure 30 : photographie de l’étape de la coloration....................................................................60
Figure 31 : photographie des étapes du montage.........................................................................60
Figure 32 : Observation microscopique des lames préparées......................................................61
 Liste des figures

Figure 33 : Variation du poids du foie (g) chez le lot témoin et les lots Traités..........................63
Figure 34 : Variation du poids des reins (g) chez le lot témoin et les lots Traités.......................63
Figure 35 : Variation du poids des testicules (g) chez le lot témoin et les lots traités..................64
Figure 36 : Variation du poids de l’épididyme (g) chez le lot témoin et les lots Traités.............64
Figure 37 : Variation des paramètres hématologiques chez les différents lots après 15 jours de
traitement.......................................................................................................................................67
Figure 38 : Variation des activités enzymatiques de l’aspartate aminotransférase ASAT (TGP) et
de l’alanine transaminase ALAT (TGO) chez les lapins traités et non traités..............................69
Figure 39 : Effets du traitement sur le métabolisme glucidique chez les lapins témoins et traités
par la métribuzine seule et la combinaison Mtz/P.........................................................................70
Figure 40 : Effets du traitement sur le métabolisme lipidique chez les lapins témoins et traités
par la métribuzine seule et la combinaison Mtz/P.........................................................................72
Figure 41 : Variation de la concentration sérique de la créatinine et de l’urée chez le lot témoin
et les lots Traités, * : Différence significative (P<0.05)................................................................73
Figure 42 : Variation de la mobilité des spermatozoïdes après 15 jours de traitement................75
Figure 43 : Variations de quelques bio-marqueurs liés à la fonction reproductrice (la mortalité et
vitalité des spermatozoïdes)...........................................................................................................75
Figure 44 : Photographies des coupes histologiques préparées à partir du foie des lapins témoin
et lapins traités avec Mtrz seule et Mtz/ L après 15 jours (H&E X40).........................................78
Figure 45 : Photographies des coupes histologiques préparées à partir des reins des lapins
témoin et lapins traités avec Mtrz seule et Mtz/ L après 15 jours (H&E X40).............................80
Figure 46 : Photographies des coupes histologiques préparées à partir des testicules des lapins
témoin et lapins traités avec Mtz/ L après 15 jours (H&E X40)...................................................81
Figure 47 : Photographies des coupes histologiques préparées à partir des épididymes des lapins
témoin et lapins traités avec Mtz seule et Mtz/ L après 15 jours (H&E X40)...............................83
 Liste des tableaux

Liste des tableaux

Tableau 1 : Quelques familles chimiques de pesticides et leurs cibles principales.......................8

Tableau 2 : Classification des alcaloïdes......................................................................................20
Tableau 3 : Classification botanique de Laurus nobilis L............................................................33
Tableau 4 : Répartition des lots........................................................................................................... 43
 Sommaire

Sommaire

Remerciements
Dédicaces
Résumé
‫الملخص‬
Abstract
Liste des abréviations
Liste des figures
Liste des tableaux
Introduction générale.......................................................................................................................1

Synthèse bibliographique
Chapitre I: Pesticide
I. Pesticides................................................................................................................................................5
I.1. Historique........................................................................................................................................5
I.2. Définition.........................................................................................................................................6
I.3. Classement des pesticides................................................................................................................6
I.3.1. Premier système de classification.............................................................................................6
I.3.2. Deuxième système de classification.........................................................................................7
I.4. Plan national santé-environnement..................................................................................................9
I.5. Impacte des pesticides sur la santé et l’environnement...................................................................9
I.5.1. Généralité..................................................................................................................................9
I.6. Intérêt des pesticides......................................................................................................................13
I.7. Métribuzine....................................................................................................................................15
I.7.1. Définition................................................................................................................................15
I.7.2. Propriétés physico-chimiques et environnementales de la métribuzine.................................15
I.7.3. Principales caractéristiques physico-chimiques et environnementales..................................15
I.7.4. Utilisation et mode d'action....................................................................................................16
I.7.5. Comportement de la métribuzine dans l’environnement........................................................16
I.7.6. Effets sur la santé....................................................................................................................17
I.7.7. Toxicité de la métribuzine......................................................................................................17
 Sommaire

Chapitre II: Plantes médicinales

II. Plantes médicinales et la phytothérapie..............................................................................................19
II.1. Définition.....................................................................................................................................19
II.2. Métabolites des plantes médicinales............................................................................................19
II.2.1. Généralité..............................................................................................................................19
II.2.2. Métabolites secondaires........................................................................................................19
II.3. Phytothérapie................................................................................................................................27
II.3.1. Histoire..................................................................................................................................27
II.3.2. Définition..............................................................................................................................28
II.3.3. Types de la phytothérapie.....................................................................................................29
II.3.4. Avantages et inconvénients de la phytothérapie...................................................................30
II.3.5. Intérêt de la phytotérapie.......................................................................................................31
II.4. Laurus nobilis L...........................................................................................................................32
II.4.1. Histoire /Origine....................................................................................................................32
II.4.2. Famille des lauracées............................................................................................................32
II.4.3. Description botanique...........................................................................................................32
II.4.4. Laurier en Algérie.................................................................................................................33
II.4.5. Composition chimique..........................................................................................................33
II.4.6. Propriétés pharmacologiques................................................................................................34
II.4.7. Effets et usages médicinaux..................................................................................................36

Partie expérimentale
Chapitre III: Matériel et Méthodes
I. Matériel.................................................................................................................................................39
I.1. Matériel biologique........................................................................................................................39
I.2. Matériel végétal.............................................................................................................................39
I.3. Matériel chimique..........................................................................................................................40
I.4. Conditions d’élevages....................................................................................................................40
II. Méthodologie......................................................................................................................................41
II.1. Protocol expérimental..................................................................................................................41
II.1.1. Pesage des lapins...................................................................................................................41
II.1.2. Préparation de la métribuzine................................................................................................42
II.1.3. Préparation du matériel végétal (infusion du laurier)............................................................42
II.1.4. Traitement des lapins............................................................................................................43
 Sommaire

II.1.5. Sacrifice et dissection............................................................................................................43

II.2. Prélèvements................................................................................................................................44
II.3. Étude des paramètres indicateurs de la fertilité masculine chez les lapins..................................47
II.3.1. Mobilité des spermatozoïdes.................................................................................................47
II.3.2. Vitalité de spermatozoïdes....................................................................................................48
II.4. Dosage des paramètres biochimiques..........................................................................................49
II.4.1. Dosage du glucose.................................................................................................................49
II.4.2. Dosage du cholestérol...........................................................................................................50
II.4.3. Dosage des triglycérides........................................................................................................52
II.4.4. Dosage de l’aspartate aminotransférase (ASAT/TGO).........................................................53
II.4.5. Dosage de l’alanine aminotransferase (ALAT/GPT)............................................................54
II.4.6. Dosage d’urée sérique...........................................................................................................55
II.4.7. Dosage de créatinine.............................................................................................................56
II.4.8. Dosage des paramètres hématologiques................................................................................57
II.5. Étude histopathologique...............................................................................................................57

Chapitre IV: Résultats et discussions

I. Effet de la métribuzine sur le poids des organes..................................................................................63
I.1. État pondéral des organes..............................................................................................................63
II. Effet de la métribuzine sur les paramètres hématologiques................................................................67
III. Effets du traitement sur les réponses des marqueurs biochimiques de la fonction hépatique...........69
IV. Effets du traitement sur le métabolisme glucidique..........................................................................70
V. Effets du traitement sur le métabolisme lipidique..............................................................................72
VI. Effets du traitement sur les réponses des marqueurs biochimiques de la fonction rénale.................73
VII. Effets du traitement sur la mobilité des spermatozoïdes..................................................................74
VIII. Variation de la mortalité et la vitalité des spermatozoïdes.............................................................75
IX. Étude histologique.............................................................................................................................77
Conclusion et perspectives.............................................................................................................88
Références bibliographiques..........................................................................................................91
 Introduction générale

Introduction générale

De nombreuses maladies (cancers, autisme, hyperactivité, maladie de Parkinson, etc.) et

affections (respiratoires, immunitaires, santé reproductive, etc.) touchant l’être humain peuvent
être attribuées, du moins en partie, à l’impact de polluants, parmi lesquels les pesticides
chimiques et/ou synthétiques dont les effets néfastes sont largement documentés (Aribi et al.,
2020 ; Ruiz-González et al., 2024). Cependant, en l’absence de ces pesticides, les vecteurs
d’agents pathogènes pour l’homme (comme les moustiques porteurs de parasites ou de virus)
tout comme les ravageurs de cultures (invertébrés, parasites, champignons, etc.) sont susceptibles
de causer de fortes nuisances à l’homme et à son environnement économique (Aribi et al., 2020).

Les pesticides est un terme générique qui regroupent les produits phytosanitaires et les
biocides. Les produits phytosanitaires sont des substances chimiques destinées à protéger les
végétaux contre des nuisibles d’origine animale ou végétale. Ainsi, les pesticides à usage
agricole désignent principalement les herbicides, les insecticides et les fongicides. Leur
utilisation s’avère indispensable pour une bonne production agricole, ils permettent d’assurer un
bon rendement de cultures. En raison de l’expansion des superficies cultivées en Algérie.
L’utilisation des pesticides à usage agricole est de plus en plus fréquente, près de 400 substances
actives de pesticides, dont environ 7000 spécialités, y sont commercialisées annuellement
(Zamoum et al., 2023). Cependant, l’utilisation de ces substances ne demeure pas sans
conséquences néfastes. En effet, la présence de produits pharmaceutiques dans les effluents ou
les sédiments constitue un sujet de préoccupation majeur au regard de leur impact écologique et
de leur accumulation dans l’environnement (Poirier et al., 2019).

Depuis l’antiquité, l'homme utilisait les plantes médicinales trouvées dans la nature, pour
traiter et soigner des maladies (Sanago, 2006). Elles sont utilisées en médecine traditionnelle
et/ou moderne dont au moins une partie renferme une ou des substances qui possèdent des
propriétés thérapeutiques (Ouedraogo et al., 2021). Dans la pharmacopée, une plante médicinale
est une drogue végétale (Bureau, 2016) qui constitue une source importante de molécules
bioactives qui font généralement partie des métabolites secondaires (Haddouchi et al., 2016).
Ces plantes fournissent des médicaments et aident à la préservation de la santé et la plupart
d’elles sont récoltées à l’état sauvage. Le développement des connaissances scientifiques sur ces
espèces végétales ouvre de nouvelles voies pour leur utilisation dans de nombreux domaines de
la vie telles que les cosmétiques, les médicaments, les additifs alimentaires, etc. (Aubé, 2018 ;
Pandey et al., 2020).

1
 Introduction générale

La phytothérapie est l'utilisation de plantes médicinales pour le traitement et la prophylaxie

des maladies, c’est une pratique médicale scientifiquement prouvée (Petkova et al., 2019). C’est
une alternative faisant l’objet d’un regain d’intérêt depuis quelques années, que l’on retrouve
aussi bien en médecine humaine qu’en médecine vétérinaire. Elle a d’ailleurs longtemps été
l’unique option pour se soigner (Brasseur, 2021).

Pour réaliser des études toxicologiques, les organismes doivent fournir des indicateurs de
perturbation de l'environnement ou un groupe de créatures utilisées comme gardes en examinant
les changements physiologiques, biologiques et écologiques qui ont un impact sur eux. Le lapin
fait l'objet d'un intérêt scientifique croissant comme le prouve l’augmentation du nombre de
publications utilisant cette espèce comme modèle d'étude dans des disciplines diverses
(génétique, physiologie, éthologie, neurosciences, médecine, etc.). Les travaux conduits sur cette
espèce sont parfois directement comparables et généralisables à d'autres espèces animales, voire
à l'Homme. Ils permettent donc une meilleure compréhension du vivant (Gidenne, 2015).

La toxicité induite par les pesticides, peut induire des perturbations d’un certain nombre de
fonctions physiologiques dont la fonction de reproduction (Bitri et al., 2008). Pour diminuer les
effets nocifs des pesticides, plusieurs substances chimiques ayant des propriétés biologiques ont
été proposées. Parmi les plantes médicinales aromatiques largement utilisées pour leurs
propriétés thérapeutiques, Laurus nobilis L. ou le laurier noble originaire de la région
méditerranéenne (Beloued, 2005 ; Catier et Roux, 2007). C’est une plante médicinale,
appartenant à la famille des Lauraceae (Lauracées) (Ferdinand, 2010) qui renferme environ
2000-2500 espèces. Laurus nom d’origine latin qui veut dire " toujours vert " allusion au
feuillage persistant de la plante et qui est riche en métabolites secondaire. Cette espèce est très
utilisée en Algérie dans la médicine traditionnelle ou alternative, pour ses multiples effets
thérapeutiques (Pariente, 2001).

Plusieurs laboratoires à travers le monde se sont orientés vers la recherche des substances
bioactives et leur valorisation. Dans ce contexte s’inscrit ce présent travail dont l’objectif
essentiel est de vérifier l’effet protecteur de l’infusion de la plante de laurier (Laurus nobilis) sur
les lapins mâles exposés à la métribuzine, herbicide de la famille des triazinones (Oukali, 2013),
et d’étudier son impact sur certains paramètres relatifs à la fonction de reproduction mâle chez ce
même rongeur.

2
 Synthèse
bibliographique
Chapitre I:
Pesticides
Chapitre I …………

………………..

5
 Chapitre II:
Plantes médicinales
Chapitre II ……..

…………..

7
Partie expérimentale
 Chapitre III:
Matériel et Méthodes
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

I. Matériel
I.1. Matériel biologique
L’étude in vivo a été réalisée sur des lapins mâles (n=15), de l’espèce Oryctolagus
cuniculus, sexuellement matures âgés de six (06) mois environ et pesant entre 1,2 et 2 Kg,
procurés auprès d’un éleveur du secteur privé à Mila.
Le lapin (Oryctolagus cuniculus) appartient à l’ordre des lagomorphes, à la famille des
Leporidae et à la sous-famille des Leporinae (figure 10). L’ordre des lagomorphes
(littéralement : ceux qui ressemblent au lièvre) se distingue de celui des rongeurs, en particulier
par l’existence d’une deuxième paire d’incisives à la mâchoire supérieure (Hervé Garreau et al.,
2020).

Figure 1 : Photographie du matériel biologique

I.2. Matériel végétal

Le matériel végétal est constitué des feuilles de laurier (Laurus nobilis L) (Figure 11) qui
ont été achetées chez un herboriste de Mila.

Figure 2 : Photographie du matériel végétal

10
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

I.3. Matériel chimique

Le pesticide utilisé dans cette étude est un herbicide : La métribuzine (4-amino-6-tert-
butyl-4,5-dihydro-3-methylthio-1,2,4-triazine-5-one), commercialisée en Algérie sous le nom de
Sencorate (75% de Métribuzine) (Figure 12), est un herbicide de la famille de triazines,
inhibiteur de la photosynthèse par blocage de la protéine d1 du photosystème II et est utilisée
pour le désherbage dans la culture de pomme de terre (Hutchinson, 2012), employée en pré-levée
et en post-levée. La métribuzine a une persistance courte à moyenne dans l'environnement. Elle
présente une solubilité élevée dans l'eau (1,05 g.L -1) et une faible sorption dans le sol. Toutes ces
caractéristiques apportent à la métribuzine une grande mobilité dans le sol (Saiba et Bouras,
2010).

Figure 3 : Photographie du matériel chimique

I.4. Conditions d’élevages

Les lapins mâles sont hébergés dans des cages munies d’un porte étiquette où est
mentionné le nom du lot, le traitement subi et les dates des expérimentations (figure 13).

Ces lapins sont répartis selon l’homogénéité de leurs poids en trois lots expérimentaux de
cinq lapins chacun. Ils sont utilisés après une période d’adaptation de 2 jours, ils ont accès libre à
l’eau et à l’aliment disposés, la litière est renouvelée chaque jour.

11
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

TNT TM ML

Figure 4 : Lots expérimentaux (TNT : lot non traité, TM : traité par la métribuzine, ML:
métribuzine/Laurier

II. Méthodologie
II.1. Protocol expérimental
II.1.1. Pesage des lapins
Au total, 03 lots expérimentaux de 05 sujets chacun ont été utilisés (Figure 14). La prise
de poids corporel est réalisée trois fois : avant le début du protocole expérimental, après une
semaine et le jour du sacrifice. La durée de l’expérimentation est de 15 jours.

Figure 5 : Pesée des lapins

12
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

II.1.2. Préparation de la métribuzine

La métribuzine (75%) est préparée dans de l’eau distillée et diluée à 10% (10g dans 100ml
d’eau distillée) (Figure 15) et administrée à raison de 1ml par jour pendant 21 jours par voie
orale (gavage).

Figure 6 : Préparation de la métribuzine diluée

II.1.3. Préparation du matériel végétal (infusion du laurier)

Les feuilles du laurier préalablement débarrassées de toutes impuretés ont été séchées à
température ambiante dans un endroit aéré et ombragé pendant plusieurs jours. La matière sèche
obtenue a été broyée à l’aide d’un broyeur électrique jusqu’à l’obtention d’une poudre.

On verse de l’eau frémissante sur la poudre des feuilles du laurier, on recouvre l’infusion.
Au bout de 10 min, on filtre et on obtient ce que l’on appelle « l’infuser » (Figure 16).

Figure 7 : Préparation des feuilles du laurier

13
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

II.1.4. Traitement des lapins

Les lapins ont été gavés quotidiennement durant deux semaines et les traitements ont été
effectués comme suit :

Les lots expérimentaux (Figure 17) :

Lot 1 (LNT) : Lapins témoin Non Traité ; qui reçoit le même volume d’eau physiologique
durant la période du traitement.

Lot 2 (LTM) : Lapins Traité avec 1ml de métribuzine (10%) quotidiennement par gavage une
fois par jour pendant 2 semaines.

Lot 3 (LML) : Lapins traités avec 1ml de métribuzine (10%) plus l’infusion des feuilles du
laurier (4ml) (10 mg/kg de P.V.) quotidiennement par gavage une fois par jour et pendant 2
semaines.

Figure 8 : Gavage des lapins

Tableau 4 : Répartition des lots

Lots Lot 1 (Témoin) Lot 2 Lot 3

Doses Sans traitement 1ml (10%) de 1ml (10%) de métribuzine + 4ml

métribuzine de l’infusion du laurier

II.1.5. Sacrifice et dissection

Le sacrifice et la dissection des lapins ont été effectués dans la matinée après les deux
semaines de traitement (Figure 18).

14
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

Figure 9 : Sacrifice et dissection

II.2. Prélèvements

 Prélèvement sanguin

Les prélèvements sanguins ont été récupérés à partir de la veine jugulaire des lapins. Les
échantillons du sang sont recueillis dans un tube hépariné et dans un autre tube contenant
l’EDTA, en vue de l'analyse des paramètres hématologiques et biochimiques, respectivement.
Les tubes contenant les échantillons de sang ont été transportés dans une glacière au laboratoire
d’analyses (hôpital les frères Meghlaoui. Mila et polyclinique les frère Letrache Ouad Endja)

Le sang a été recueilli dans des tubes (Sec, EDTA, Lithium Héparine) (Figure 19).

 Tube Sec : sans anticoagulant qui subit une centrifugation à 3000 tours par minute,
pendant 10 minutes, le sérum obtenu est mis au frais jusqu’au moment du dosage
biochimique.

 Tube EDTA : Les échantillons de sang prélevés dans les tubes EDTA ont été
immédiatement utilisés pour déterminer la formule numérique sanguine ; globules blancs
(GB), globules rouges (GR), hémoglobines (HGB),

 Tube Lithium Héparine : Le sang des tubes héparinés a été centrifugé à 3000 tr/mn
pendant 5 min et les paramètres biochimiques (Cholestérol et Triglycéride, Transaminase
Glutamate Oxalo-acétate (TGO=ASAT), Transaminase Glutamate Pyruvate (TGP
=ALAT), Glycémie, Urée et Créatinine) ont été dosés sur le sérum obtenu grâce à
l’automate.

15
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

Figure 10 : Prélèvement sanguins

 Prélèvements des organes

Après la dissection des lapins, les testicules, l’épididyme, le foie et les reins sont prélevés,
débarrassés de leurs tissus adipeux, rincés dans une solution de chlorure de sodium à 0.9%, puis
pesés (figure 20-21).

Figure 11 : Prélèvement des organes

Figure 12 : Pesage des organes

16
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

Les testicules, l’épididyme, le foie et les reins des lapins sacrifiés sont conservés dans du
formol à 10% pour l’étude histologique (Figure 22).

Figure 13 : Conservation des organes

 Prélèvement du sperme

Le prélèvement du sperme ce fait a partir de l’épididyme après dissection à l’aide d’une

lame (Figure 23).

Figure 14 : Prélèvement du sperme

17
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

15 Lapins

Période
d’adaptation

Lot 1 Lot 2 Lot 3

Témoin 2ml /kg P.C. Métribuzine 2ml /kg P.C.
Métribuzine plus la plante

Traitement de
2 semaines

Décapitation et
dissection

Récupération Récupération
des organes du sang

Histologie du foie, Dosage des Dosage des

rein, testicules et paramètres paramètres
épididyme hématologiques biochimiques

Figure 15 : Schéma récapitulatif du protocole expérimental

II.3. Étude des paramètres indicateurs de la fertilité masculine chez les lapins

Afin d’estimes l’effet de la métribuzine utilisé sur la fertilité des lapins a travers les
caractéristique des spermatozoïdes et la qualité du sperme, nous avons procédé au test du sperme
selon la méthode de l’OMS (organisation mondiale de la santé, 1993) le sperme à été prélevé à
partir d’une petite ouverture faite au niveaux de la tête de l’épididyme, 1uL de sperme est dilué
dans 50ul de la solution physiologique (Nacl /0.9%) mis dans une étuve à une température de
37°C le sperme est dilué 50 fois.

II.3.1. Mobilité des spermatozoïdes

Une goutte du sperme dilué est déposée sur une lame, puis recouverte d’une lamelle. La
préparation est examinée sous microscope optique avec l’objectif X40.

18
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

La mobilité des spermatozoïdes est déterminée par la numération des spermatozoïdes

mobiles et immobiles dans 3 champs d’observation, puis calculer le pourcentage des
spermatozoïdes mobiles (OMS, 1993).

II.3.2. Vitalité de spermatozoïdes

II.3.2.1. Coloration vitale

C’est est une technique de coloration basée sur le principe que la colorante éosine (1%) y
pénètre dans les spermatozoïdes morts (cellules dont la membrane plasmique est endommagée)
et les colore en rouge.

Une goutte de sperme est mise entre lame et lamelle en ajoutant une goutte d’éosine (1%).
On laisse 2 à 3 min. Puis on examine au microscope à l’objectif X40.

La. Vitalité est déterminée par la numération des spermatozoïdes colorés et incolores dans
3 champs d’observation, puis on calcule le pourcentage de chaque catégorie (spermatozoïdes
colorés et incolores) (OMS, 1993).
II.3.2.2. Test de gonflement hypo-osmotique (HOS-TEST)
Ce test est réalisé pour étudier les modifications morphologiques des spermatozoïdes exposés à
un stress Hypo-osmotique (Figure 25).
 Solution utilisée
- Dissoudre 0,367g de citrate de sodium (Na3 C6H5O7, 2H2O) et 0.675g de fructose dans
50ml d’eau distillée (conserver à 4°C).
- Mélanger la solution avant usage.
 Méthode
- Réchauffer à 37°C, pendant 5 minutes environ, 1 ml de la solution placée dans un tube
Eppendorf fermé.
- Ajouter 0.1 ml de sperme dilué et mélanger doucement à l’aide d’une pipette.
- Laisser incuber à 37°C pendant 30 minutes.
- Observer les spermatozoïdes sous microscope à l’objectif X40.
- Calculer le pourcentage des spermatozoïdes présentant des modifications du flagelle sur
un total de spermatozoïdes comptés (Jeyendran et al., 1984 ; OMS, 1993).

19
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

Figure 16 : Présentation schématique des modifications morphologiques

Caractéristiques des spermatozoïdes exposés à un stress hypo-osmotique

A : modification faible du flagelle,
B : modification importante du flagelle,
C : modification très importante du flagelle,
N : spermatozoïde normal.

II.4. Dosage des paramètres biochimiques

II.4.1. Dosage du glucose
Selon la méthode de Kaplan, (1984). Voir la fiche technique (Spinreact).
 Principe : Le glucose subit des réactions couplées décrites ci-dessous pour donner un
complexe coloré, qui peut être mesuré à la spectrométrie.

Glucose oxydase
B-D- Glucose + O2 + H2O Gluconate + H2O2
Peroxydase
H2O2 + phénol + 4- Aminoantipyrine Quinone + H2O
L’intensité de la couleur formée est proportionnelle à la concentration du glucose dans
l’échantillon.

 Échantillon : Sérum
 Réactifs utilisés
Réactifs Composition Concentration
Tris pH 7.4 92 m mol/l
R1 tampon
Phénol 0.3 m mol/l
Glucose oxydase (GOD) 15000 U/l
R2 enzymes Peroxydase (POD) 1000 U/l
4- Aminophenazone (4-AP) 0.6 m mol/l
Glucose cal Étalon de glucose aqueux primaire 100 mg/dl

20
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

 Préparation du réactif de travail (RT)

- Dissoudre le contenu de R2 dans la fiole de R1.
- Mélanger bien doucement jusqu’à la dissolution complète. Ce réactif de travail est stable
4 mois à 2-8 C°, ou 40 jours à 15-25 C°.
 Mode opératoire

Blanc Étalon Échantillon

RT (ml) 1.0 1.0 1.0
Étalon (μl) … 1.0 …
Échantillon (μl) … … 1.0

-Agiter bien et incuber pendant 5 min à 37° C

-Mesurer l’absorbance (A) de l’échantillon à 500 nm et de l’étalon contre le blanc, la couleur est
stable après 30 min.
La concentration du glucose dans l’échantillon est calculée par la formule suivante :

(A) Échantillon
Glucose (mg/dl) = x 100
(A) Étalon
La concentration de l’étalon = 100 mg/dl
Facteur de conversion = mg/dl x 0.055 = m mol/l
II.4.2. Dosage du cholestérol
Selon la fiche technique Spinreact Naito, (1984).
 Principe : Le cholestérol présent dans l’échantillon forme un complexe coloré selon la
réaction suivante :

Cholestérol estérase
Cholestérol esters + H2O Cholestérol + acides gras
Cholestérol oxydase
Cholestérol + O2 Cholestérol-4-one + H2O2
Peroxydase
2 H2O2 + phénol + 4- Aminophenazone Quinonimine+ 4 H2O2

L’intensité de la couleur formée est proportionnelle à la concentration du cholestérol dans

l’échantillon.
 Échantillon : sérum

21
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

 Réactifs utilisés

Réactifs Composition Concentration

PIPES PH 6.9 90 m mol/l
R1 tampon
Phénol 26 m mol/l
Cholestérol estérase (CHE) 300 U/l
Cholestérol oxydase (CHOD) 300 U /l
R2 enzymes
Peroxydase (POD) 1250 m mol/l
4- Aminophenazone (4- AP) 0.4 m mol/l
Cholestérol cal Étalon de cholestérol aqueux primaire 200 mg/dl

 Préparation de réactif de travail (RT)

- Dissoudre le contenu de R2 dans la fiole de R1.

- Mélanger bien et doucement jusqu’à la dissolution compète. Ce réactif de travail est

stable 1 mois à 2-8 C° à l’abri de la lumière.

 Mode opératoire

Blanc Étalon Échantillon

RT (ml) 1.0 1.0 1.0

Étalon (μl) … 1.0 …

Échantillon (μl) … … 1.0

- Agiter bien et incuber pendant 5 min à 37°C, ou 10 min à la température de 25C°.

- Mesurer l’absorbance (A) de l’échantillon à 505 nm et de l’étalon contre le blanc, la

couleur est stable après 60 min.

(A) Échantillon
Concentration du cholestérol (mg/dl) = x 200
(A) Étalon

- La concentration de l’étalon = 200 mg/dl.

- Facture de conversion : mg/dl x 0.025 = m mol/l.

II.4.3. Dosage des triglycérides

Selon la fiche technique Spinreact (Kaplan et al., 1984).

22
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

 Principe : Les triglycérides présents dans l’échantillon forment un complexe coloré selon
la réaction suivante :

Lipoprotéine lipase
Les triglycérides + H2O Glycérol + acides gras libres

Glycérol Kinase
Glycérol + ATP Glycérol 3 – phosphate + ADP

Peroxydase
2H2O2 + P-chlorophénol + 4-Aminophenazone Quinone + H2O

L’intensité de la couleur formée est proportionnelle à la concentration des triglycérides

dans l’échantillon.

 Échantillon : Sérum

 Réactifs utilisés

Réactifs Composition Concentration

GOOD pH 7.5 50 m mol/l
R1 Tampon
P- chlorophénol 2 m mol/l
Lipoproteine lipase 150000 U/l
Glycérol kinase 500 U/l
Glycérol 3- phosphate 2500 m mol/l
R2 enzymes
Peroxydase (POD) 440 U/l
4- Amin antipyrine (4-AP) 0.1m mol/l
ATP 0.1 m mol/l
Triglycérides cal Etalon de triglycérides aqueux primaire 200 mg/dl

 Préparation des réactifs du travail

- Dissoudre le contenu de R2 dans la fiole de R1.

- Mélanger bien et doucement jusqu'à la dissolution complète. Ce réactif de travail est

stable 6 semaines C° ou une semaine à 15-25 °C.

 Mode opératoire

Blanc Étalon Échantillon

RT (ml) 1.0 1.0 1.0
Étalon (μl) … 1.0 …

23
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

Échantillon (μl) … … 1.0

-Agiter bien et incuber pendant 5 min à 37C°, ou 10 min à la température de 25C°.

-Mesurer l’absorbance (A) de l’échantillon à 505 nm et de l’étalon contre le blanc. La couleur est
stable après 30 min.
(A) Échantillon
Concentration des triglycérides (mg/dl) = x 200
(A) Étalon

La concentration de l’étalon = 200 mg/dl

Facteur de conversion = mg/dl x 0.011 = m mol/l

II.4.4. Dosage de l’aspartate aminotransférase (ASAT/TGO)

Selon la fiche technique Biomagheb (Bergmyer, 1980) :

 Principe : Détermination cinétique de l’activité Aspartate aminotransférase. Le schéma

réactionnel est le suivant :

L’aspartate aminotransférase (ASAT) initialement appelée glutamate oxaloacétique (GOT)

catalyse le transfert réversible d’un groupe aminé d’aspartate vers l’alpha cétoglutarate avec
formation de glutamate et d’oxaloacétate. L’oxaloacétate produit est réduit en malate en présence
d’une malate déshydrogénase (MDH) et NADH :

TGO
2-oxoglutarate + Aspartate Glutamate + oxaloacétate

MDH
Oxaloacétate + NADH + H+ L- Malate + NAD+

- Le taux de diminution de la concentration du NADH est proportionnel à l’activité de

l’Aspertate aminotransférase dans l’échantillon.

 Échantillon : sérum.

 Réactifs utilisés :

Réactifs Composition Concentration

R1 solution tampon Tampon TRIS pH 7,8 à 30C° 80 mmol/l

24
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

L-Aspartate 200 mmol/l

NADH 0,18 mmol/l
Lactate déshydrogénase (LDH) 800 U/l
R2 Substrats et enzymes
Malate déshydrogénase (MDH) 600 U/l
α-Cétoglutarate 12 mmol/l

 Préparation de réactif de travail et stabilité

- Dissoudre le contenu de R2 dans la fiole de R1.
- Agiter bien et doucement jusqu’à elle devient homogène.
 Mode opératoire

Solution de travail 3 ml
Préincuber à la température 37C°
Échantillon 50μl
Mélanger et incuber les tubes préparés 1 minute à 37 C°. Mesurer la diminution de la densité
optique par minute pendant 1 à 3 minute à 340 nm.

Activité (ASAT/TGO) UI/l = Δ 𝐷𝑂 x 175 U/l

Δ 𝐷𝑂 : C’est la valeur moyenne des trois lectures.

II.4.5. Dosage de l’alanine aminotransferase (ALAT/GPT)

Selon la fiche technique Biomaghreb (Bergmyer, 1980)
 Principe : Détermination cinétique de l’activité Alanine aminotransferase. Le schéma
réactionnel est le suivant :
L’alanine aminotransférase (ALAT) initialement appelée transaminase glutamique
pyruvique (TGP) catalyse le transfert réversible d’un groupe animique d’alanine vers l’alpha-
cétoglutarate à formation de glutamate et de pyruvate. Le pyruvate produit est réduit en lactate
en présence de lactate déshydrogénase (LDH) et NADH:

TGP
2-oxoglutarate + L-Alanine Glutamate + pyruvate
LDH
Pyruvate + NADH + H+ Lactate + NAD+
- Le taux de diminution de la concentration en NADH est directement proportionnel à
l’activité alanine transférase dans l’échantillon.

 Échantillon : sérum.

25
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

 Réactifs utilisés

Réactifs Composition Concentration

Tampon TRIS pH 7,5 à 30C° 100 m mol/l
R1 solution tampon
Alanine 500 m mol/l
NADH 0.18 m mol/l
R2 Substrats et enzymes LDH 1200 U/l
Oxoglutarate 15 m mol/l

 Préparation de réactif de travail et stabilité

Reconstituer chaque R2 par 1 flacon R1. Cette solution de travail est stable 7 jours à 2-8 C°
24 heures à 20-25 C°.

 Mode opératoire

Solution de travail 3 ml
Préincuber à la température 37C°
Échantillon 50μl
Mélanger et incuber les tubes préparés 1 minute à 37 C°. Mesurer la diminution de la densité
optique par minute pendant 1 à 3 minute à 340 nm.

Activité (ALAT/GPT) UI/l = Δ 𝐷𝑂 x 1750 U/l

II.4.6. Dosage d’urée sérique

 Principe de la méthode
L’uréase catalyse l’hémolyse de l’urée, présente dans l’échantillon, en ammoniac (NH 3) et
en anhydride carbonique (CO2). L’ammoniac formé est incorporé à l’α-cétoglutarate par l’action
du glutamate déshydrogénase (GLDH) avec oxydation parallèle de la NADH à la NAD+:

Uréase
Urée + H2O + 2 H+ 2 NH3 + CO2
GLDH
2 NH3 + α-Cétoglutarate + NADH H2O + NAD+ + L-Glutamate
La diminution de la concentration de NAD + est proportionnelle à la concentration d’urée
dans l’échantillon testé (Kaplan et al., 1984).

 Réactifs utilisés

Réactifs Composition Concentration

26
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

TRIS pH 7,8 80 m mol/l

R1 solution tampon
α-Cétoglutarate 6 m mol/l
Uréase 3750 U/l
R2 Substrats et enzymes Glutamate déshydrogénase (GLDH) 6000 U/l
NADH 0,32 mmol/l
UREA CAL Patron primaire de détection d’urée 50 mg/dl

 Mode opératoire

Blanc Étalon Échantillon

RT (ml) 1.0 1.0 1.0
Étalon (μl) … 1.0 …
Échantillon (μl) … … 1.0

Mélanger et lire les absorbances à 30 s (A1) et à 90 s (A2) à 340nm, et une T°: 37/15-25°C.
Calculer : ΔA= A1 – A2.

(A) Échantillon
[Urée] (mg/dl) = x 50 (concentration de l’étalon)
(A) Étalon

II.4.7. Dosage de créatinine

 Principe de la méthode
Le test est basé sur la réaction de la créatinine avec le picrate de sodium décrit par Jaffé. La
créatinine réagit avec le picrate alcalin en formant un complexe de couleur rouge. L’intervalle de
temps choisi pour les lectures permet d’éliminer une grande partie des interférences connue pour
la méthode. L’intensité de la couleur formée est proportionnelle à la concentration de créatinine
présente dans l’échantillon testé (Murray et al., 1984).

 Réactifs utilisés

Réactifs Composition Concentration

R1 : Réactif picrique Acide picrique 17,5 mmol/l

27
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

R2 : Réactif alcalinisant Hydroxyde de sodium 0,29 mol/l

Patron premier de détection de la 2 mg/dl
CREATININE CAL
créatinine

 Mode opératoire

Blanc Étalon Échantillon

RT (ml) 1.0 1.0 1.0
Étalon (μl) … 1.0 …
Échantillon (μl) … … 1.0

Mélanger et activer le chronomètre.

- Lire l’absorbance (A1) au bout de 30 secondes puis de 90 secondes (A2) après avoir
ajouté l’échantillon du test. A 492 nm (490-510), et T°: 37°/15-25°C.

- Calculer : ΔA= A2 – A1.

Calcule :

ΔAEchantillon – ΔABlanc
x 2 (Conc. Modèle) = mg/dL de créatinine dans l’échantillon
Modèle ΔA - ΔABlanc

Facteur de conversion : mg/dl x 88,4= μmol/l.

II.4.8. Dosage des paramètres hématologiques

L’analyse de sang total a été effectuée à l’aide d’un automate d’hématologie. Les
échantillons de sang dans les tubes EDTA ont été immédiatement utilisés pour déterminer la
formule numérique sanguine (FNS) : Globules rouges (RBC), Globules blancs (WBC),
Hémoglobine (HGB).

II.5. Étude histopathologique

Les organes prélevés sont fixés dans du formol (10%), puis les étapes suivantes :
inclusion, coupe et coloration sont effectuées au niveau du laboratoire d'anatomopathologique,
hôpital de Mila. Les organes conservés ont subi des coupes d’une épaisseur de 4 μm à l’aide d’un
microtome après leur inclusion à la paraffine. Ils ont été ensuite colorés à l’hématoxyline-éosine,
fixés entre lame et lamelle avant d’être observés sous microscope muni d’appareil photo.

28
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

 Fixation
Elle a pour but d’immobilier les structures cellulaires tout en conservant leurs
morphologies et les durcirent. Les prélèvements réalisés sont alors mis dans des cassettes
spéciales à parois trouées afin de permettre le passage des liquides (Figure 26).

Figure 17 : Photographie des étapes de fixation des coups des organes

 Déshydratation

Comme la paraffine est hydrophobe on doit auparavant déshydrater les échantillons dans
des bains d’éthanol de concentration croissante (70%, 90% et 100%). Cette étape est réalisée par
un automate qui permet le passage automatique et progressif des échantillons (Figure 27).

Figure 18 : Photographie des étapes de déshydrations

 Inclusion
L’inclusion consiste à mettre les pièces dans des bains de paraffine liquide. Les pièces
sont plongées dans des bains de paraffine liquides fondus à 60°C pendant deux heures. Les tissus
étant maintenus et imbibés de paraffine, ils sont placés dans des moules appelés les barres de
Leuckart, puis sont remplis de paraffine (Figure 28). Ceci facilite la confection des coupes.

29
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

Figure 19 : Photographie des différentes étapes de l’inclusion

 Coupes

Les blocs de paraffine ainsi formés vont être coupés par un microtome, permettant de
réaliser des tranches de section de 2 à 5 μm. Les rubans de paraffine obtenus sont étalés sur des
lames porte-objet, puis déplissées et fixées par l’eau. Les lames sont ensuite séchées dans une
étuve à 100°C pendant 1 heure (Figure 29).

Figure 20 : Photographie des différentes étapes de la préparation des lames

 Coloration

30
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

La coloration a pour but d’accentuer les contrastes pour mieux voir les différents
éléments de la préparation. Le colorant utilisé est l’Hématoxyline-Eosine (H&E) selon les étapes
suivantes:
Le déparaffinage des échantillons s’effectue à l’aide du xylène pour que les colorants
puissent y pénétrer (figure 30). Ensuite, les lames sont mises dans des bains d’alcool de degré
décroissant (100%, 90%,70%) pour la réhydratation. Le rinçage est réalisé avec l’eau du robinet.
Puis, mettre les lames dans l’hématoxyline pendant 10 à 20 minutes, celui-ci colore les noyaux
en violet. Après rinçage les lames sont mises dans l’eau ammoniaquée et un deuxième rinçage,
puis on utilise l’éosine 1% pendant 10 minutes pour mettre en évidence le cytoplasme coloré en
rose. Après le rinçage, les lames sont placées dans des bains d’alcool d’ordre croissant (90%,
100%) pour les déshydrater. Enfin, nous plaçons les lames dans un mélange de 50% de xylène +
50% d’acétone, puis les lames sont mises dans deux bacs de xylène.

Figure 21 : Photographie de l’étape de la coloration

 Montage

Le montage se fait pour protéger des échantillons par des lamelles en verre après la
coloration, en mettant deux gouttes d’EUKITT (colle). Ensuite, les lames sont séchées et
observer au microscope optique équipé d’un appareil photographique (Figure 31).

Figure 22 : Photographie des étapes du montage

31
Partie expérimentale Matériel et Méthodes

 Observation microscopique

Un foie l’histologie terminé, les lames sont observées à l’aide d’un microscope optique
muni d’une caméra. Les images obtenues ont été transféré sur l’écran de l’ordinateur à l’aide du
logiciel Optika (Figure 32).

Figure 23 : Observation microscopique des lames préparées

 Étude statistique

Les résultats des tests effectués in vivo sont exprimés en moyenne ± SEM (Erreur standard
moyenne). La comparaison des moyennes et des variances est déterminée grâce au logiciel
MINITAB version 21.

Les différences sont considérées statistiquement significatives comme suit :

* : Significatives lorsque (P ≤ 0,05).

** : Hautement significative comparant au témoin (P ≤ 0,01).

*** : Très hautement significative comparant au témoin (P ≤ 0,001).

P : Seuil de signification.

32
Chapitre IV:
Résultats et
discussions
Étude expérimentale Résultats et discussions

I. Effet de la métribuzine sur le poids des organes

I.1. État pondéral des organes
[Link]
Au terme des 15 jours de traitement, une augmentation non significative du poids du foie
a été observée chez le lot traité par la métribuzine (Mtz) et le lot traité avec la métribuzine et le
laurier (Mtz/L) par rapport au lot témoin (Figure 33).

Poids du foie (g)

Figure 24 : Variation du poids du foie (g) chez le lot témoin et les lots Traités

I.1.2. Reins

Comparativement au lot témoin, il y’a une diminution non significative du poids des reins
chez les deux lots traités par le laurier et la métribuzine (Mtz/L) et le lot traité avec la
métribuzine seule (Figure 34).
Poids des Reins (g)

Figure 25 : Variation du poids des reins (g) chez le lot témoin et les lots Traités

34
Étude expérimentale Résultats et discussions

[Link]
La métribuzine a également provoqué une diminution très hautement significative du
poids des testicules chez le lot traité uniquement avec la métribuzine par rapport au lot témoins,
une diminution non significative a été observée chez le lot traité avec la Mtz/P en comparaison à
ceux du lot traité par Mtz seule et le lot non traité (Figure 35).

Poids des Testicules (g)

***

Figure 26 : Variation du poids des testicules (g) chez le lot témoin et les lots traités

*** : Différence très hautement significative (P<0.001).

I.1.4. Épididyme

Les résultats présentés dans la figure 36 ont montré une diminution hautement significative
chez le lot traité par la Mtz et une diminution non significative chez le lot traité avec Mtz/L
comparativement au lot traité par Mtz seule et le lot non traité.
Poids de l'épididyme (g)

**

Figure 27 : Variation du poids de l’épididyme (g) chez le lot témoin et les lots Traités

** : Différence hautement significative (P<0.01).

35
Étude expérimentale Résultats et discussions

Les herbicides sont des phytotoxiques chimiques utilisés pour contrôler les diverses
mauvaises herbes. Ils ont des degrés variables de spécificité (Gupta, 2014). La métribuzine est
l'herbicide le plus fréquemment appliqué dans les cultures de pommes de terre dans divers pays
(Rathore et Nollet, 2012).

De même, les données expérimentales montrent dans leur ensemble que les pesticides sont
capables de perturber les mécanismes métaboliques et d'entraîner par conséquent des
modifications métaboliques importantes dans différents organes (Jestadi et al., 2014 ; Al-Attar,
2015 ; Nwozo et al., 2015 ; Abdel-Ghany et al., 2016 ; Jamal et al., 2016).

Le foie est un organe principal impliqué dans le métabolisme des xénobiotiques, il est
devenu une cible majeure pour ces derniers (Postic et Girard, 2008). Les résultats obtenus dans
cette étude montrent une augmentation non significative du poids du foie chez les lapins traités
par la Mtr et Mtz/P comparativement au lot témoin. Cette augmentation est probablement la
conséquence de l’accumulation de la métribuzine et ses métabolites au niveau des hépatocytes en
vue d’une intoxication ou d’un effet d’induction enzymatique traduit par l’augmentation de
l’activité enzymatique des transaminases glutamo-oxaloacétique (TGO) et transaminases
glutamo-pyruvique (TGP). Ces résultats concordent avec les travaux de Brakch et Kesseler
(2011) ; En outre, Chiali et al. (2013) ont montré que le poids du foie augmente chez les rats
mâles et femelles traités avec de faibles doses de métribuzine (1,30 et 13 mg/kg) pendant 14
semaines comparés à leurs témoins. Aussi, Maronpot et al. (2010) ; Sharma et al. (2014) ;
Tichati (2020) ont rapporté que l’ingestion de pesticides chez les rats est accompagnée par une
augmentation à la fois du métabolisme hépatique et de l’excrétion rénale, qui se traduit par une
augmentation de la masse relative du foie et des reins de l'animal.

En revanche, le lot des lapins traités avec la combinaison de métribuzine et d'infusion de

laurier a entraîné une amélioration du poids du foie et de l’activité de ses enzymes (TGO/TGP)
par rapport à ceux traités uniquement avec la métribuzine. Cette amélioration est probablement
due aux propriétés antioxydantes, anti-inflammatoires et hépatoprotectrices des composés
bioactifs présents dans le laurier tels que les flavonoïdes et les phénols. Ces effets combinés
permettent de réduire le stress oxydatif et l'inflammation induite par la métribuzine, conduisant à
un meilleur état hépatique avec un poids plus normalisé (Smith et Brown, 2023).

Nos résultats révèlent une légère diminution significative du poids des reins chez le lot
traité par combinaison Mtz/P comparativement au lot traité par la Mtz seule, Ces résultats
concordent parfaitement avec les expérimentations effectuées par Maamar et al. (2013) ; qui ont

36
Étude expérimentale Résultats et discussions

démontrés que l’administration de l’herbicide Sekator (Sk) et du fongicide prosaro 250 EC (Pr
250 EC) a provoqué une diminution du poids absolu et relatif des reins, ce qui avait déjà été
rapporté chez les lapins traités par 0,01, 0,02 et 0,04 mg/kg p.c. de brodifacoum pendant trois
semaine (Maamar et al., 2013). Aussi, une diminution significative du poids du rein a été
constatée chez des rats males traités par 1,28 mg/kg de poids corporel de deltaméthrine (un
insecticide pyréthroïde de synthèse) pendant 4 semaines (Mongi et al., 2011). Cette atrophie peut
être expliquée par une diminution du volume glomérulaire conduisant, par conséquent à la
réduction de la synthèse des protéines et à une diminution de l’apport alimentaire (Tayeb et al.,
2012 ; Upadhyaya et al., 2018).

Les constatations sur la masse testiculaire et épididymaire indiquent une réduction

significative chez les lots traités avec la combinaison Mtz/P et celui traité uniquement avec la
Mtz par rapport au lot témoin. Ces résultats concordent parfaitement avec ceux d’Aïche et al.
(2015) qui ont observé une diminution similaire chez les rats mâles traités avec les fongicides
propiconazole, propinèbe et leurs mélanges pendant quatre semaines à des doses de 60 et 100
mg/kg, ainsi qu'un mélange de 30 et 50 mg/kg pour chaque fongicide respectivement. Des
constatations similaires ont été obtenues par Bououza et al. (2014), qui ont noté une réduction du
poids des testicules chez les lapins mâles exposés au fongicide thiophanate méthyl à des doses de
50, 100 et 150 mg/kg pendant 30 jours.

Par ailleurs, il est bien établi que les tubes séminifères constituent une partie importante de
la gonade mâle chez les mammifères ainsi, la diminution de la masse testiculaire pourrait être
attribuée à une réduction de ces tubes, comme l'indique l'étude histologique des testicules
(Dérivaux et Ectors, 1986 ; Nicolino et Forest, 2001).

Cependant, Nous avons par ailleurs montré que le traitement avec l’addition de laurier
sous forme d’une tisane entraîne une amélioration de poids des testicules et des épididymes
comparativement au lot traité par la métribuzine seule qui montre une atrophie de ces organes ;
cette amélioration est probablement due à la présence des composés actifs tel que les
polyphénols qui ont des effets bénéfiques. Plusieurs études ont pu également mettre en évidence
ces effets bénéfique sur le poids corporel, la masse relative du foie, des reins et encore des
testicules et du cerveau chez les rats traités avec des pesticides (Dutta et Sahu, 2013 ; Ojo et al.,
2014 ; Mossa et al., 2015 ; Abdel Rasoul et Marei, 2016).

37
Étude expérimentale Résultats et discussions

II. Effet de la métribuzine sur les paramètres hématologiques

Les résultats des paramètres hématologiques suite à l’analyse de la formule de
numération sanguine (FNS) sont représentés dans la figure 37.
Nos résultats révèlent que le traitement des lapins par la métribuzine provoque une
perturbation du taux des globules rouges, de l’hémoglobine et des globules blancs. Une
diminution très hautement significative des globules rouge chez le lot traité par la Mtz seule et
une diminution significative chez le lot traité par Mtz/L comparativement au lot traité
uniquement par la métribuzine et le lot non traité. Une diminution hautement significative de
l’hémoglobine est observée chez les lapins traités par la Mtz, et une diminution significative à
été enregistré chez le lot traité avec la Mtz/P comparable au lot traité par Mtz et le lot non traité.
De plus, nous avons enregistré une augmentation très hautement significative des globules blancs
chez le lot traité par Mtz par rapport au lot témoin et une augmentation hautement significative a
été observée chez le lot traité par la Mtz/L comparé à ceux du lot traité par Mtz seule et le lot non
traité.
Taux d'hémoglobine (g/dL )

*
Taux de globules rouge

***
*
***
10^12/L

Taux de globules blanc 10^9/L

***
**

Figure 28 : Variation des paramètres hématologiques chez les différents lots

après 15 jours de traitement.
* : Différence significative par rapport au témoin (P<0.05).
** : Différence hautement significative (P<0.01).
*** : Différence très hautement significative (P<0.001).

38
Étude expérimentale Résultats et discussions

Dans cette étude, les paramètres hématologiques ont également été évalués pour obtenir
d'autres informations liées à la toxicité de la métribuzine, les résultats obtenus indiquent une
augmentation du nombre de globules blancs dans les lots traités par rapport au lot témoin. Ces
résultats sont en accord avec l'étude de Medjdoub et al. (2011), qui ont démontré que la
métribuzine entraîne l'activation et la stimulation de la prolifération des lymphocytes ainsi que la
production de cytokines dans les cellules spléniques humaines et des rats. Les pesticides sont des
xénobiotiques considérés comme des substances chimiques étrangères pour l’organisme et ils
sont la cible du système immunitaire (Revillard, 2001). Lorsqu'un corps étranger franchit les
barrières naturelles de l'organisme, ce dernier produit des cellules spécialisées dans la défense
immunitaire, les leucocytes ou globules blancs (Ragot, 2011).

En contrepartie, le traitement par la Mtz a entraîné une diminution significative du nombre

de globule rouge (GR), de l'hémoglobine (HGB). Ce résultat peut faire référence à l'apparition
d'une anémie sanguine associée à la diminution du taux d’hémoglobine (Tonietto et al., 2022).

L'hémoglobine ; une protéine qui fixe, transporte et libère l'oxygène, pourrait être
responsable d'une diminution du nombre d’érythrocytes, entraînant une baisse des valeurs
d'hématocrites (Rahman et Siddiqui, 2006 ; Celik et Suzek, 2008).

Des modifications similaires de la valeur de l’hématocrites, de l’hémoglobine et des

globules rouges chez des rats après une exposition à la métribuzine (Kadeche et al., 2017). Sur la
base de ces observations, les auteurs ont suggéré que la baisse des éléments du sang pourrait être
attribuable à une anémie hémolytique (lyse cellulaire) causée par la capacité du pesticide d’agir
directement sur les érythrocytes en provoquant une hémolyse extravasculaire massive ou
d’induire un stress oxydatif (Demur et al., 2013 ; Lalruatfela et al., 2014 ; Hashish et Elgaml,
2016).

Cependant, l’anémie provoquée par la métribuzine est corrigée chez lot traité par l’infusion
du laurier après 15 jours de traitement, cette correction serait probablement liée à l’activité
antioxydante du laurier et de ses composés bioactifs tels que les flavonoïdes qui paraient
diminuer le risque de la toxicité hématologique.

À cet égard, ces résultats sont conformes à ceux obtenus par Dutta et al . (2014) qui ont
travaillé sur les extraits de Pterocarpus santalinus et de leurs constituants actifs (flavonoïdes,
alcaloïdes, saponines et triterpénoïde) et qui ont démontré une protection des hématies (GR)
contre la toxicité induite par l'insecticide coragen.

39
Étude expérimentale Résultats et discussions

De manière similaire, l'administration par gavage d'un extrait de thé vert, riche en
polyphénols flavonoïdes, à une dose de 36 mg/kg/j a entraîné une augmentation significative du
taux d'hémoglobine et du nombre de globules rouges chez les rats traités par l'insecticide
malathion pendant quatre semaines (Elzoghby et al., 2014).

En outre, Kadeche (2017) a constaté que la supplémentation en quercétine ou en vanilline

semble diminuer le risque de la toxicité hématologique. La structure phénolique de ces
composés, pourrait expliquer la résistance des globules rouges des rats traités à la métribuzine.

III. Effets du traitement sur les réponses des marqueurs biochimiques de la fonction
hépatique

Le traitement des lapins par la métribuzine a entrainé des troubles du métabolisme

biochimique, caractérisés par une augmentation très hautement significative de l’activité
enzymatique des transaminases ; l’aspartate aminotransférase ASAT (TGP) et de l’alanine
transaminase ALAT (TGO), chez les lots traités par la métribuzine seule et par l’association
Mtr /L en comparaison avec le lot témoin (Figure 38).

***
Enzymes hépatiques TGO/TGP (UI/L)

***
*** ***

TGO
TGP

Figure 29 : Variation des activités enzymatiques de l’aspartate aminotransférase ASAT (TGP) et

de l’alanine transaminase ALAT (TGO) chez les lapins traités et non traités

*** : Différence très hautement significative (P<0.001).

Les résultats obtenus ont montré que l’administration de la métribuzine entraîne

effectivement une élévation du taux des transaminases qui peut être dues à une hépatotoxicité et
qui a provoqué une altération de la perméabilité membranaire de l’hépatocytes qui a conduit à
une fuite de ces enzymes lysosomales dans le flux sanguin (Al-Otaibi et al., 2019) . Ces résultats
sont en accord avec ceux obtenus dans l’étude de Sidhu et al. (2014) ; dans cette étude, une

40
Étude expérimentale Résultats et discussions

élévation du taux plasmatique des enzymes hépatiques (AST, ALT et PAL) est traduite par une
inflammation et éventuellement une nécrose hépatique est observée après l’administration du
chlorpyriphos (insecticide) chez le rat. Cette nécrose hépatique a donc conduit à une libération
du contenu enzymatique dans le sang.

Des recherches sur la toxicité du pesticide abamectine à des doses de 30 mg/kg pendant 30
jours et 10 mg/kg pendant 210 jours chez les rats a révélé des niveaux significativement élevés
des transaminases par rapport aux témoins (Abd-Elhady et Abou- Elghar, 2013). Aussi, des
résultats publiés sur le traitement des rats avec des doses de 10, 25 et 50 mg/kg de
cyperméthrine (pyréthrinoïdes) pendant 28 jours ont montré des concentrations en
transaminases plasmatiques supérieures à celles des témoins (Adjrah et al., 2013).

Nos résultats sont aussi similaires avec ceux rapportés par d’autres travaux utilisant
l’atrazine (herbicide de la famille des triazines) (Bhattie et al., 2011 ; Singh et al., 2011) et le
macozébe (fongicide : complexe polymérisé d'éthylène bis-dithiocarbamate de manganèse avec
un sel de zinc) (Elkhans, 2016) et qui o n t aboutit au même résultat qui est l’augmentation des
transaminases dans le flux sanguin. De même, selon Katagi (2010) ; la bioaccumulation des
fongicides au niveau des hépatocytes mène à la fuite des enzymes transaminases.

IV. Effets du traitement sur le métabolisme glucidique

Les résultats obtenus présentés dans la figure 39 montrent que la glycémie est augmentée
de façon non significative chez le lot traité par la combinaison Mtr/L et chez le lot traité par la
métribizine seule en comparant au témoin.
Glycémie (g/L)

Figure 30 : Effets du traitement sur le métabolisme glucidique chez les lapins témoins et traités
par la métribuzine seule et la combinaison Mtz/P

41
Étude expérimentale Résultats et discussions

Selon les résultats de notre étude, le traitement des lapins avec la métribuzine (Mtz) induit
une perturbation de la concentration de glucose dans le sang, se manifestant par une
hyperglycémie. Plusieurs recherches ont démontré qu'en cas d'exposition à des substances
toxiques, des réactions émotionnelles dans le système limbique activent l'hypothalamus pour
produire la corticolibérine (CRH). Cette dernière stimule l'hypophyse à libérer l’hormone
adrénocorticotrope (ACTH), activateur des glandes surrénales à produire et à sécréter du cortisol
dans le sang (Pourramzanzidesaraei et al., 2013). Le cortisol a diverses actions, certaines
conduisant à une élévation de la glycémie (Jacotot et Campillo, 2003), ce qui explique
probablement les résultats de l'hyperglycémie. Des recherches récentes menées par Chiali et al.
(2013) ; Mehra et al. (2014) ; Deka et Dutta (2015) ; Ikpesu (2015) utilisant différents types de
pesticides ont confirmé les résultats obtenus et ont suggéré que l'effet hyperglycémiant s'explique
par une augmentation de la charge glycémique dans le sang qui résulte de la stimulation de la
glycogénolyse hépatique. Selon ces mêmes études, l'exposition aux pesticides entraîne une
sécrétion accrue d'hormones hyperglycémiantes (glucagon et adrénaline). Étant essentielles au
maintien de l'homéostasie énergétique, leur augmentation active une voie métabolique utilisant
les réserves énergétiques, favorisant ainsi une augmentation de la production de glucose
endogène par le foie : la glycogénolyse.

Cependant, une diminution de la glycémie chez les lapins traités par l’association (Mtz/P)
montre que le laurier possède des substances bioactives qui ont des propriétés anti-
hyperglycémiants. Plusieurs études ont, pour leur part, observé une amélioration dans le niveau
de la glycémie après supplémentation par des polyphénols. Entre autres, la consommation de
l’extrait méthanolique de Zygophyllum album a abouti à une réduction de la glycémie chez des
rats traités par un insecticide à base de deltaméthrine (Feriani et al., 2016). Une autre étude de
Newairy et Abdou (2013) dans laquelle des rats ont été traités par le pesticide chlorpyrifos, a
montré que le taux de la glycémie après traitement par la propolis, substance végétale très riche
en bioflavonoïdes et polyphénols, était plus faible que celle observé dans le groupe traité
seulement par le chlorpyrifos. Néanmoins, les études de Gomes et al. (2014) ; Kedache (2017)
ont montré que la quercétine peut avoir différentes actions conduisant à une diminution de la
glycémie : stimulation de l'absorption du glucose par les tissus périphériques, augmentation de la
glucokinase hépatique, augmentation de l'oxydation et du stockage du glucose, inhibition de la
gluconéogenèse hépatique et la glycogénolyse.

42
Étude expérimentale Résultats et discussions

V. Effets du traitement sur le métabolisme lipidique

Les résultats montrent qu'il n'y a pas une augmentation significative du taux de cholestérol
et des triglycérides chez le lot traité par la combinaison Mtr/L, le même résultat est enregistré
chez le lot traité par la métribizine (Mtz) par rapport au lot témoin (Figure 40).

Taux desTriglycérides (g/L)

Taux du cholestérol (g/L)

Figure 31 : Effets du traitement sur le métabolisme lipidique chez les lapins témoins et traités
par la métribuzine seule et la combinaison Mtz/P

Le profil lipidique a également subi des changements après l’administration de la

métribuzine. Une augmentation des concentrations sériques en cholestérol total et en
triglycérides a été observée chez les lapins traités, ceci est confirmé par les résultats d’une étude
précédente menée par El-Demerdash et Nasr (2014). Comme le rappellent Lagrost et al. (2004) ;
le foie constitue l’organe central du métabolisme et du transport des lipides et joue un rôle
fondamental dans l’homéostasie du cholestérol et des triglycérides (Gautier et Legallais, 2009).
L'hyperlipidémie observée dans la présente étude, chez le lot traité uniquement par la
métribuzine, pourrait être due à un désordre du métabolisme des lipides probablement induit par
un dysfonctionnement hépatique. El-Demerdash et Nasr (2014) ont, quant à eux, suggéré que le
déséquilibre du métabolisme du cholestérol pourrait résulter d'une augmentation de la synthèse
hépatique de cholestérol ou d’une altération de la perméabilité membranaire des cellules
hépatique par les pesticides, qui est souvent accompagnée d’un dysfonctionnement hépatique,
entraînant ainsi une augmentation de cholestérol dans le sang.
Une diminution du taux du cholestérol et des triglycérides a été observée dans le plasma
des lapins traités par la combinaison Mtr /L comparativement au lot traité par la métribuzine
seule. L’administration du laurier sous forme de tisane à améliorer le profil lipidique des lapins.

43
Étude expérimentale Résultats et discussions

Ce résultat peut être expliqué par l’influence des composés bioactifs que contient le laurier
(flavonoïde, HEs, alcaloïde...) sur les enzymes impliquées dans l’anabolisme des lipides et
l’activation des enzymes impliqués dans le stockage des graisses au niveau des adipocytes sous
forme de lipides simples. Ces résultats concordent avec ceux rapporté par Hélène (2007) qui ont
montré une diminution du taux des lipides chez les ravageurs traités par les HEs de thym de
sauge. L’effet antihyperlipidémique de la quercétine a également été rapporté chez l'homme. En
fait, des résultats semblables ont été notés par Egert et al. (2009) sur des sujets en surpoids ou
obèses traités à une dose de 150 mg/kg de quercétine.

VI. Effets du traitement sur les réponses des marqueurs biochimiques de la fonction rénale
Une augmentation significative du taux de créatinine et d’urée chez le lot traité par la Mtr
seule par rapport au lot témoin et une augmentation non significative chez le lot traité par la
combinaison Mtz/P par rapport au lot traité par la Mtr seule (Figure 41).

*
*
Taux de créatinine (mg/L)

Taux d'urée (g/L)

Figure 32 : Variation de la concentration sérique de la créatinine et de l’urée chez le lot témoin

et les lots Traités,
* : Différence significative (P<0.05).

Les paramètres plasmatiques tels que l’urée et la créatinine ont varié d’une manière
significative chez le lot traité par la métribuzine par rapport au lot témoin. En revanche ; on
remarque qu’il ya une petite amélioration et une diminution dans les taux de la créatinine et de
l’urée chez le lot traité par la combinaison de Mtr /L par rapport au lot traité par la métribuzine
seule ; cela pourrait être attribuée à l’administration de laurier qui a amélioré le fonctionnement
rénal.

44
Étude expérimentale Résultats et discussions

L’urée et la créatinine sont des paramètres essentiels pour évaluer la fonction rénale et la
filtration glomérulaire (Cempel, 2004). De plus, l’augmentation de l’urée dans le sérum est
corrélée avec l’augmentation du catabolisme des protéines qui sont dégradées en acides aminés
puis en urée et créatinine (l’urée est le produit final de dégradation des protéines). Ceci est peut-
être confirmé par la diminution des protéines totales dans le sérum.

Donc l’augmentation des taux de ces deux paramètres chez les lapins traites est due à
l’effet néphrotoxique de la métribuzine (Sunderman et al., 1990 ; Obone et al., 1999). La
détermination du taux de l'urée contribue à l'exploration de la fonction rénale qui est la principale
forme d'élimination des déchets azotés du catabolisme protéique chez l'homme, formée dans le
foie à partir de l'ammoniac produit par la désamination des acides aminés (Kubab et al., 2015).

La créatinine est aussi un marqueur de la fonction rénale qui est formée dans l’organisme
par déshydratation non enzymatique de la créatine synthétisée par le foie et stockée dans le
muscle. Un taux sérique élevé en créatinine associé à un taux élevé en urée traduit une
diminution de la filtration glomérulaire (Bossuyt et Boeynaems, 2001). Cette augmentation en
créatinine et en urée plasmatique s’explique par la diminution de la capacité des reins à filtrer ces
déchets du sang et de les excréter dans les urines. Une association entre l’hyperuricémie et les
dommages rénaux a été rapporté par Feig et al. (2006). Nos résultats cohérent avec l’étude faite
par Sherif et al. (2014) sur des rats traités par voie orale pendant 28 jours par un fongicide
triazole le difenoconazole à la dose de 10 mg/kg et un herbicide le diclofop-méthyle à la dose de
1 mg/kg ainsi que la combinaison des deux, les résultats ont révélé des taux d'urée plus élevés
dans tous les groupes traités, tandis que la créatinine plasmatique était plus élevée dans les
groupes traités au difenoconazole et diclofop-méthyle. Nos résultats sont aussi en accord avec
des études réalisés par Radad et al. (2009) ; EL-Fakharany et al. (2011) ; El-Demerdash et al.
(2012).

VII. Effet du traitement sur la mobilité des spermatozoïdes

Les résultats présentés dans la figure 42 montrent une diminution très hautement
significative de la mobilité des spermatozoïdes chez les lots traités par la métribuzine par rapport
au témoin, tandis qu’on observe une diminution non significative du lot traité par la métribuzine
et le laurier (Mtz/P) comparativement au lot traité avec métribuzine seule.

45
Étude expérimentale Résultats et discussions

Mobilité des spermatozoides (%)

***

Figure 33 : Variation de la mobilité des spermatozoïdes après 15 jours de traitement

*** : Différence très hautement significative (P<0.001).

VIII. Variation de la mortalité et la vitalité des spermatozoïdes

La figure 43 indique qu’il y a une augmentation très hautement significative du
pourcentage de mortalité des spermatozoïdes chez le lot traité avec la métribuzine seule par
rapport au lot témoin, également une augmentation très hautement significative a été observée
chez le lot traité par métribuzine et le laurier comparativement au lot traité par Mtz et le lot
témoin. L’analyse du pourcentage des spermatozoïdes vivants démontre qu’il y’a une diminution
très hautement significative chez le lot traité par métribuzine seule par rapport au lot non traité,
une diminution très hautement significative chez le lot traité par métribuzine et laurier
relativement au lot traité par Mtz et le lot non traité.
TSM
TSV
***
Taux de spermatozoides (%)

*** ***

***

Figure 34 : Variations de quelques bio-marqueurs liés à la fonction reproductrice

(la mortalité et vitalité des spermatozoïdes)
*** : Différence très hautement significative (P<0.001).

46
Étude expérimentale Résultats et discussions

On enregistre une diminution du pourcentage de la mobilité des spermatozoïdes chez les

lapins traités par la métribuzine. Nos résultats sont en accord avec ceux obtenus par El-Kashoury
et al. (2010), qui ont montré que le traitement des rats au Dicofol (acaricide) à des doses faibles
et fortes pendant 16, 28 et 90 semaines réduit significativement le nombre de spermatozoïdes
chez tous les groupes traités ; signifiant ainsi un dysfonctionnement testiculaire (Ali et al., 2012).
La baisse du nombre et de la mobilité des spermatozoïdes au cours du traitement ; peut-être
expliqué par l’administration des herbicides (Métribuzine, Atrazine, …) qui ont été identifiés
comme des perturbateurs endocriniens. De plus, ils affectent la reproduction par différents
mécanismes d’action ; ils s’interfèrent à la reproduction et le processus de développement et ils
peuvent perturber tous les stades de la fonction hormonale du système reproducteur (Gupta,
2012). Enfin tous les rapports disponibles ont montré que la plupart des pesticides sont des
inhibiteurs de la spermatogenèse au niveau des gonades dès lors qu’ils affectent la synthèse de la
testostérone (Ranjan et Daundkar, 2014).

La diminution dans la mobilité des spermatozoïdes peut également être due à la présence
de malformations morphologiques au niveau de la pièce intermédiaire (type B) et flagelle (Type
C), ces deux zones sont les parties qui assurent le mouvement et la vitesse du spermatozoïde
(indicateurs de fertilité). Les pesticides peuvent modifier la lignée germinale des tubes
séminifères dans les testicules ce qui diminue la capacitation et la maturation des spermatozoïdes
(Djebali et Khelili, 2009 ; Jorsaraei et al., 2010 ; Mathur et D`Cruz, 2011). En outre, une étude
réalisée par Zhang et al. (2019) avec le chlorothalonil (fongicide) testé sur la fertilité masculine
chez les souris mâles aux doses très faibles de (0.1 à 10 mg/kg) a montré que le chlorothalonil a
entrainé une diminution de la mobilité des spermatozoïdes in vitro et une augmentation de
l’apoptose cellulaire, la spermatogenèse chez les souris était inhibée par le chlorothalonil in vivo;
donc le chlorothalonil a troublé la spermatogenèse probablement par la perturbation de la
signalisation du récepteur des œstrogènes.

D'autre part, on enregistre une baisse importante du nombre de spermatozoïdes vivants et

une augmentation du taux des spermatozoïdes morts dans les lots traités par rapport au lot
témoin. Ces résultats sont corrélés avec les travaux de Salem et al. (1988) et Wang et al. (2009)
et avec ceux de Cai et Xiao (1996) qui ont prouvé que les solvants travers la barrière hémato
testiculaire ce qui provoque des effets directs sur la morphologie des cellules de sertoli où les
cellules germinales se nourrissent et se développent donc leur destruction entraine la mort des
spermatozoïdes (Dalgard et al., 2001). En effet, la réduction de la vitalité des spermatozoïdes

47
Étude expérimentale Résultats et discussions

peut-être due aux effets néfastes de la métribuzine sur la spermatogenèse (Sakr et Al-Amoudi,
2012).
Nos résultats montrent une augmentation de la vitalité et de la mobilité des
spermatozoïdes chez le lot traité avec l’association métribuzine et laurier par rapport au lot traité
uniquement avec la métribuzine. Des études ont été réalisées sur l’effet du laurier sur les
paramètres du sperme et le système reproducteur chez des lapins mâles adultes et les résultats ont
montrés que la consommation de cette plante agit positivement sur la concentration, la mobilité
et la morphologie des spermatozoïdes, avec une augmentation du poids des testicules et de
l’épididyme ce qui confirme nos résultats (Ramezani et al., 2016).

IX. Étude histologique

Les principaux changements histopathologiques observés chez les lapins traités étaient
compatibles avec ceux associés à la toxicité et les lésions causées par la métribuzine. Ces
dommages affectent l'intégrité fonctionnelle des organes, ce qui peut entraîner une infiltration
cellulaire ; diffuse observée histopathologiquement dans les lots des lapins traités.
Le lot 1 non traité a montré une histologie normale caractérisée par une structure normale
(Figure 44, 45, 46 ,47). En revanche, le lot traité avec la Mtz seule a présenté des lésions sévères
et le lot traité avec l’association de la Mtz/L a présenté des lésions plus au moins sévères (Figure
44, 45, 46, 47) qui s’est traduite par une désintégration tissulaire.

IX.1. Foie
L’observation microscopique du foie des lapins témoins a révélé une architecture normale
du tissu hépatique contenant des veines Centro-lobulaire, des hépatocytes de forme habituelle,
ainsi que quelques cellules de Kupffer dans les sinusoïdes dispersés dans tous le tissu (Figure
44).

L’observation microscopique du foie des lapins traités avec la métribuzine a montré :

 Une dilatation et une congestion des veines Centro-lobulaires et des sinusoïdes.

 Clarification du cytoplasme, des lésions une perte du tissu avec un infiltrat inflammatoire
de l’espace porte et une vacuolisation cellulaire.

 Des hépatocytes ballonnés et nécrotiques.

48
Étude expérimentale Résultats et discussions

Figure 35 : Photographies des coupes histologiques préparées à partir du foie des lapins témoin
et lapins traités avec Mtrz seule et Mtz/ L après 15 jours (H&E X40).

H : hépatocytes ; S : sinusoïdes ; VC : veine centrolobulaire ; : nécroses. :

Clarification et lésion cytoplasmique ; C : congestion ; Coloration d’hématoxyline éosine.

49
Étude expérimentale Résultats et discussions

IX.2. Reins
Comme illustré sur la figure 45, l’examen histologique des reins des lapins témoins a
montré un parenchyme rénal normal avec des glomérules et des tubules bien définis. Cependant,
le traitement des lapins avec la Mtz seule et en association a montré :

 Des changements dégénératifs dans l'épithélium tubulaire du cortex rénal.

 Les tubules proximaux et distaux sont gonflés et dilatés.

 La pyélonéphrite (inflammation dans le parenchyme tubulaire du rein).

 Congestion des vaisseaux vasculaire.

50
Étude expérimentale Résultats et discussions

Figure 36 : Photographies des coupes histologiques préparées à partir des reins des lapins
témoin et lapins traités avec Mtrz seule et Mtz/ L après 15 jours (H&E X40).

G : glomérules ; EB : espace de bowman ; T : tubules ; : grand espace de bowman ; GD :

tubes gonflés et dilatés.

IX.3. Testicules
L’observation microscopique des coupes histologiques des testicules des lapins témoins a
révélé des tubes séminifères de forme arrondie et allongée contenant des cellules germinales à
différents stades de développement d’aspect normal et une lumière remplie de spermatozoïdes
(Figure 46).

Par contre, l’observation microscopique de celles des lapins traitées avec la Mtz a montré :

 Des tubes séminifères de forme très allongée.

 Grands espaces interstitiels, des lumières de diamètre réduit avec une congestion.

 Diminution de la masse sparmatique (Figure 46).

51
Étude expérimentale Résultats et discussions

Figure 37 : Photographies des coupes histologiques préparées à partir des testicules des lapins
témoin et lapins traités avec Mtz/ L après 15 jours (H&E X40).

TS : Tubes séminifères ; Spz : Spermatozoïde ; EI : Espace interstitiel ; L : Lumière testiculaire ;

C : Congestion ; Coloration d’hématoxyline éosine.

52
Étude expérimentale Résultats et discussions

IX.4. Epididyme
Les résultats des coupes histologiques montrent au niveau du groupe témoins (T) une
structure normale avec une lumière pleine de spermatozoïdes.
En ce qui concerne l’histologie du groupe traité par la Mtz on observe :
 Une diminution de la quantité des spermatozoïdes dans la lumière des tubes.
 On note aussi une absence des spermatozoïdes dans la lumière de quelques tubes
séminifère.
 Congestion épididymaire.
Concernant le lot traité par la Mtz/L, présente une lumière épididymaire dilatée complètement
par une substance éosinophile primauté par un des polynucléaires neutrophiles (PNE) (Figure
47).

53
Étude expérimentale Résultats et discussions

Mtz /L

PNE

Figure 38 : Photographies des coupes histologiques préparées à partir des épididymes des lapins
témoin et lapins traités avec Mtz seule et Mtz/ L après 15 jours (H&E X40).

Spz : spermatozoïdes ; LE : lumière épididymaire ; C: congestion épididymaire ; dilatation

de la lumière épididymaire ; PNE : Poly nucléaire éosinophile.

L'examen histopathologique des sections de foie, rein, testicule et épididyme appartenant

au lot témoin (Figure 44, 45, 46, 47) ont montré une absence de toute lésion sur ces organes.

La pathologie macroscopique et microscopique a été spécifiquement utilisée pour

démontrer la gravité de la maladie chez les lapins. La présence de lésions tissulaires sévères dans
les différents organes indique la gravité de la toxicité due à la métribuzine.

L’histologie du foie des lapins traités avec la métribuzine a montré une désorganisation
architecturale des hépatocytes associée à une congestion et une inflammation. Ces changements
pourraient être dus à la quantité importante de métribuzine accumulée au niveau des hépatocytes.
Ces constatations sont en accord avec celles qui ont été observé chez des rats recevant par voie
orale de l’acide 2 ,4-dichlorophénoxyacétique (2,4-D) à raison de 5mg/kg du poids corporel
pendant 30 jours du traitement, où il est noté une dilatation des espaces sinusoïdaux, une
congestion de la veine Centro-lobulaire ainsi qu’un phénomène de nécrose cellulaire (Trichat,
2020). D’autres résultats semblables ont été trouvés par Suradkar et al. (2010) ; Zhang et al.
(2010) ; Jarrar et Taib (2012) qui ont constatés une congestion, une hypertrophie et une
vacuolisation des hépatocytes, une dégénérescence vacuolaire, hydropique et graisseuse des
hépatocytes associée parfois à une congestion de la veine centrolobulaire (VCL) et une
hémorragie au niveau des sinusoïdes. La nécrose et la vacuolisation des hépatocytes ont
également été constatées dans les études antérieures de Jarrar et Taib (2012) ; Suradkar et al.
(2010).

54
Étude expérimentale Résultats et discussions

Les coupes histologiques du tissu rénal des lapins traités ont montré des changements
remarquables par rapport à ceux des lapins témoin. Les lésions microscopiques observées au
niveau des reins des lapins traités par la métribuzine sont présentées dans les figures. Ces
résultats concordent avec ceux précédemment rapportés par Mossa et al. (2015) ; Bokreta et al.
(2021). Elles sont également similaire a l’étude de Moneim et al. (2011) qui ont observé une
vacuolisation tubulaire, nécrose et dilatation dans une étude de toxicité menée chez des rats. Les
mêmes résultats ont été rapportés dans des études antérieures effectuées chez des rats et des
souris (Abdou et Hassan, 2014 ; Soliman et al., 2015).

Nos résultats concordent aussi avec ceux d’autres auteurs suite à l’administration de l’acide
2 ,4-dichlorophénoxyacétique (2,4-D) qui a provoqué des dégénérescences tubulaires et
glomérulaires accompagnés d’une nécrose tubulaire au niveau des reins (Tichati, 2020).

Les lésions constatées dans cette étude sont en corrélation avec les troubles de la fonction
hépatique et rénale rapportés ci-dessus et prouvent le degré d’hépatotoxicité et de néphrotoxicité
de la métribuzine.

De plus, les coupes du foie et des reins des lapins traités avec la métribuzine et le laurier
ont marqué les mêmes lésions décrites précédemment mains en un degré moins, la diminution
des lésions morphologiques induites par la Mtz pourrait être le signe d’une réparation des
hépatocytes et d’un renforcement du parenchyme rénal, suite au traitement par le laurier
(infusion), cette réparation dues a une efficacité préventive des composés bioactifs (flavonoïdes)
contre la toxicité de la métribuzine.

Enfin, il a également été décrit que ces composés étaient capables de protéger les structures
cellulaires des altérations oxydatives et stimulaient l’activité des défenses antioxydants
enzymatiques et non enzymatiques face au stress oxydant induit par les pesticides (Elzoghby et
al., 2014 ; Ojo et al., 2014 ; Heikal et al., 2014 ; Gasmi et al., 2016 ; Vara Prasad et al., 2016).

Notre étude a révélé que les testicules des lapins traités un larges espaces interstitiels et des
tubes séminifères dégénérés, de forme très allongée, contenant quelques vacuoles lipidiques vers
leurs extrémités et des perturbations de la spermatogenèse. La pluparts de ces lésions sont
couramment retrouvées dans les travaux réalisés avec Khaldoun et al. (2015) qui ont montrés
que le tissu testiculaire des rats traité avec l’insecticide lambda –cyhalothrine (LCT) pendant 28
jours subit des changements dégénératifs de la majorité des tubules séminifères, ces changements
ont été caractérisés par une désorganisation et un endommagement qui a montré un arrêt de la
spermatogénèse. D’autre part une hyperplasie atypique et une dégénérescence au niveau des

55
Étude expérimentale Résultats et discussions

vésicules séminales a été marquée. D’autres résultats ont été répertoriés par Zidan (2009) qui,
après avoir administré à des rats mâles un mélange d’organophosphorés (Chlorpyrifos methyl,
Diazinon et Profenofos) aux doses de 5 et 50 mg/kg p.c. par voie orale pendant 65 jours, a
observé une congestion des tubes séminifères. Ainsi que ; Holloway et al. (1990) ont montré que
l’exposition aux éther de glycol peut provoquer des effet délétères sur le fonctionnement des
tubes séminifères et une nette diminution de spermatozoïde occupant la lumière de ces tubes ; et
elle parait plus prononcée avec la dose la plus forte (300 ppm) ce qui suggère une modification
du déroulement de la spermatogénèse.

L'observation histologique des testicules des lapins traités a révélé l’apparition de larges
espaces interstitiels et des tubes séminifères dégénérés, de forme très allongée, contenant
quelque vacuole lipidique vers leurs extrémités et des perturbations de la spermatogenèse. La
pluparts de ces lésions sont retrouvées dans les travaux réalisés par Slimani et al. (2014) qui ont
constaté que l'examen histologique des testicules de pigeons traité avec la dose de 0,2 g/l de
propineb a montré un diamètre irrégulier de tubes séminifères avec une fine lame basale
allongée. L’analyse du tissu testiculaire des rats traités au lindane a montré une désorganisation
cellulaire avec des formes irrégulières et un espace intercellulaire plus marqué entre les
spermatogonies (Simic et al., 2012).

D’autres résultats ont été répertoriés par Zidan (2009) qui, après avoir administré à des rats
mâles un mélange d’organophosphorés (Chlorpyrifos methyl, Diazinon et Profenofos) aux doses
de 5 et 50 mg/kg p.c. par voie orale pendant 65 jours, a observé une congestion des tubes
séminifères.

Les pesticides peuvent modifier la lignée germinale des tubes séminifères dans les
testicules ce qui diminue la capacitation et la maturation des spermatozoïdes (Jorsaraei et al.,
2010 ; Mathur et D`Cruz, 2011).

L’examen microscopique de l’épididyme chez le lot traité par la Mtz pendant 21 jours a
révélé une diminution discrète de la quantité des spermatozoïdes dans la lumière des tubes avec
une congestion épididymaire Toutefois, nos résultats concordent avec ceux de Soni Shrivastava
(2013) ; Bouaza et al. (2014). On sait que de nombreux xénobiotiques, y compris des pesticides,
produisent un stress oxydatif par l’augmentation de la production des radicaux libres qui à leur
tour génèrent un stress oxydatif dans différents tissus et chez différents organismes (Mehta et al.,
2008). Les dommages oxydatifs induits par les espèces réactives de l’oxygéne et les espèces
reactive de l’azote (ERO / ERN ou ROS / RNS) sont directement impliqués dans l'infertilité

56
Étude expérimentale Résultats et discussions

masculine. Une production excessive de ROS peut entraîner une altération de la stéroïdogenèse
et de la spermatogenèse par plusieurs mécanismes, dont les lésions de l'ADN, la peroxydation
lipidique et l'oxydation des protéines (Prahalathan et al., 2006).

En revanche, le lot traité par la Mtz/laurier présente un parenchyme testiculaire et

épididymaire moins altéré par rapport au lot traité par la métribuzine seule ce qui peut être
expliqué par l’effet bénéfique des constituants du laurier qui ont amélioré significativement les
effets néfastes de la métribuzine. Ce résultat est en accord avec les travaux d’Ahmed et al.
(2013) qui ont expliqué le rôle bénéfique de Fucus racemosa sur les dommages toxiques
provoqués par la Doxorubicin (DOX) et qui ont également indiqué que Fucus racemosa est une
source très riche en composés phénoliques, qui possède d'excellentes propriétés antioxydantes in
vitro et in vivo, protégeant ainsi l’architecture testiculaire et épididymaire contre les dommages
oxydatifs induits par la DOX (Ahmed et urooj, 2009). Cependant, Shalizar Jalali et Hasanzadeh
(2013) ont montré le rôle de l’extrait aqueux des fruits de la plante Cratagus monogyna (20
mg/kg), très riche en composés phénoliques, notamment les proanthocyanidines et les
flavonoïdes ce qui lui confère un rôle crucial dans la prévention du stress oxydatif dû au
traitement par la DOX (4mg/kg ). Cet effet est caractérisé par une diminution du taux des
radicaux libres et du stress oxydatif ainsi qu’une augmentation du niveau des enzymes
antioxydants.

57
Conclusion et
perspectives
 Conclusion et perspectives

Conclusion et perspectives

L’investigation pharmacologique des plantes médicinales traditionnelles reste importante

pour offrir des bases scientifiques pour l’usage traditionnel des plantes et fournir à la société de
nouvelles sources de médicaments sains et efficaces. L’objectif visé par ce travail est d’étudier la
toxicité induite par la métribuzine à faible dose, chez des lapins mâles (Oryctolagus cuniculus),
après une exposition orale d’une durée de 15 jours et d’évaluer l’effet protecteur de l’infusion
des feuilles de Laurus nobilis contre sa toxicité sur le fonctionnement des systèmes internes
notamment sur le système reproducteur mâle. Pour cela, des analyses biochimiques,
hématologiques et histologiques ont été réalisés.
Les résultats rapportés dans cette étude ont dévoilé que la métribuzine provoque des
effets nocifs sur l’organisme, qui ont été manifestés par :
- Une variation du poids de quelques organes ; une augmentation du poids du foie et une
diminution du poids des reins, des testicules et de l’épididyme.
- Augmentation des paramètres hématologiques de défense (globules blanc) alors que les
valeurs hématologiques en particulier, le nombre de globules rouges, le taux
d'hémoglobine ont diminué.
- Augmentation des niveaux sériques des paramètres biochimiques hépatiques (ASAT,
ALAT) et rénaux (créatinine, urée) après 15 jours de traitement.
- Augmentation des taux sériques lipidiques (cholestérol, triglycérides) (hyperlipidémie) et
du glucose (hyperglycémie).
- Diminution de la concentration, de la mobilité, de la vitalité des spermatozoïdes.
- Altération des tissus hépatiques, rénaux, testiculaires et épididymaire.
-
- L’étude histologique réalisée sur des fragments de foie, rein, testicule et épididyme a
montré des modifications histopathologiques chez le groupe traité avec la métribuzine.
En effet, les résultats illustrent clairement l’apparition d’une inflammation hépatique et
des altérations histologiques des organes révélées par une dégénérescence des cellules.
De plus, les lésions histopathologiques étaient moins sévères chez les lapins traités avec
l’infusion des feuilles de Laurus nobilis et ont montré une augmentation significative des
infiltrations de lymphocytes ; indicatif de la réponse immunitaire à médiation cellulaire
ce qui suggère que les plantes sont capables de stimuler l'immunité chez ces lapins, ce qui
confirme que l’infusion des feuilles de la plante testée a une capacité de réparation des
lésions cellulaires.

59
 Conclusion et perspectives

En conclusion et en réponse à la question de cette étude, les résultats obtenus ont bien
montré et affirmé que l’exposition à de faibles doses de métribuzine par voie orale induit une
hématotoxicité, une hépatotoxicité, une néphrotoxicité et essentiellement une reprotoxicité
masculine et le traitement des lapins Oryctolagus cuniculus par l’infusion des feuilles de Laurus
nobilis en présence du pesticide (métribuzine) a ramené tous les marqueurs biochimiques à des
niveaux proches de ceux obtenus chez les lapins témoins. Ceci souligne l’effet protecteur de
l’infusion des feuilles de Laurus nobilis contre l’intoxication par ce pesticide en raison de leurs
propriétés thérapeutiques prouvée dans la littérature.

En perspective, il sera intéressant d’améliorer les résultats et approfondir les recherches

pour mieux approuver l’effet toxique de faibles doses de la métribuzine par voie orale. Il serait
souhaitable de prolonger la période de traitement par la métribuzine pour bien confirmer si elle
est un perturbateur endocrinien ou non. Aussi, il serait bien d’étudier la possibilité de
détoxification par les plantes médicinales.

La recherche des effets retardés des pesticides sur la santé doit s’intensifier, aussi bien sur
le plan épidémiologique que toxicologique. Il est important de considérer non seulement le
produit absorbé, mais également les métabolites potentiellement toxiques qui en découlent. Le
principe de précaution incite à privilégier l’usage de substances à courte durée de vie, peu
rémanentes dans l’environnement et de faible toxicité aiguë.

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