MINISTERE DE LA SANTE, DE L'HYGIENE REPUBLIQUE DE CÔTE D’IVOIRE
PUBLIQUE ET DE LA COUVERTURE Union – Discipline – Travail
MALADIE UNIVERSELLE ************
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INSTITUT NATIONALE DE FORMATION
DES AGENTS DE SANTE
(INFAS) Année Académique 2023 – 2024
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ANTENNE D’ABOISSO
LICENCE 1 TBM
PRESENTE PAR: ENSEIGNANT
NIAMKE Akou Marie Ela Dr GNAMIEN
Mle 23-8967 TBMAB Cel : [Link].82
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SOMMAIRE
INTRODUCTION
I. LE PRELEVEMENT
II. TECHNIQUE DE PIPETAGE
III. LAVAGE D’HEMATITE
IV. LA SUSPENSION D’HEMATIE
V. GROUPAGE SANGUIN
VI. TITRAGE : DILUTION DU SERUM
CONCLUSION
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INTRODUCTION
Le présent rapport détaille les procédures utilisées pour le prélèvement de sang, le
lavage des hématies, la préparation de suspensions, et le groupage sanguin. Ces
étapes sont essentielles dans le cadre des analyses hématologiques qui permettent de
déterminer les groupes sanguins et les caractéristiques des hématies. Chaque
procédure a été exécutée avec rigueur pour garantir la qualité des échantillons et la
précision des résultats. En suivant les protocoles établis pour le prélèvement, le
lavage, et les tests de groupage, nous avons pu obtenir des données fiables et
pertinentes pour l’évaluation sanguine.
I. LE PRELEVEMENT
Nous avons fait le prélèvement du sang (chacun à prélevé son camarade à l’aide
d’une liste de classe) de sorte a avoir du sang dans les tubes EDTA. Pour faire un
prélèvement sanguin, nous avons eu besoin de matériels comme : une aiguille, un
corps de prélèvement, le tube EDTA pour recueillir le sang, un tampon, de l’alcool et
un coton sec.
D’abord, avant de prélever le sang, il faut palper les deux (02) bras pour voir où on
peut trouver une bonne veine, quand nous sommes rassurer avoir trouvé un bon site
de prélèvement, nous pouvons poser notre garrot à 10cm du site de prélèvement.
Ensuite, nous prenons le tampon soit, nous faisons un coup soit nous faisons en
spirale, maintenant nous prenons le corps pour adapter l’aiguille au corps.
Nous déposons le capuchon sur le portoir et le vert sur le portoir, et là avec un angle
de 15° nous rentrons dans la veine et nous maintenons l’aiguille avec le pouce. Nous
prenons le tube, nous l’adaptons avec le majeur et l’index ; nous bloquons le corps et
nous allons enclencher avec le pour ce dès que le sang commence à jaillir dans le
tube EDTA, nous relâchons le garrot, nous avons finis le prélèvement et là, nous
retirons le tube et nous faisons un retournement pour éviter qu’il y ait coagulation.
Enfin, nous déposons et remettons le coton sec sur le corps, après nous retournons
l’aiguille sur le capuchon vert, nous divisons l’aiguille et nous retournons sur le
capuchon blanc et là, nous jetons à la poubelle alors nous avons finis le prélèvement.
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II. TECHNIQUE DE PIPETAGE
Pour manipuler une pipette-pasteur, nous avons tenu d’abord la pipette-pasteur entre
le majeur et l’annulaire, la tétine reposant sur l’index. Ensuite, avec le pouce, nous
avons exercé une force sur la tétine. Nous avons chassé l’air contenu dans la pipette,
nous avons plongé la pointe de la pipette dans le liquide à pipeter. Enfin, nous avons
relâché lentement la tétine, le liquide monte dans la pipette ; nous avons appuyé de
nouveau sur la tétine, le liquide est refaite de la pipette. Et là, nous avons bien retenue
que la pipette-pasteur doit être maintenue dans la position verticale ou légèrement
incliné pendant et après la manipulation.
III. LAVAGE D’HEMATITE
D’abord, pour faire le lavage d’hématie ; nous avons centrifugé le sang à 3000 tr/mm
pendant 3mn de telle sorte à séparer les globules rouges et le plasma. Nous avons mis
un volume de culot globulaire dans un tube à hémolyse, nous avons rincé la pipette
dans de l’eau de robinet et de l’eau physiologique jusqu’à 1cm du bord du tube, nous
avons bouché le tube avec un bouchon propre et nous avons homogénéisé par
retournement. Nous avons ensuite centrifugé à 3000 tr/mn pendant 3mn, et vider le
surnageant à l’aide d’une pipette-pasteur, nous avons fait l’opération trois (03) fois.
Et le surnageant du dernier lavage est devenu limpide comme l’eau physiologique.
Enfin, nous avons vidé ce surnageant à l’aide d’une pipette-pasteur, nous avons rincé
la pipette-pasteur dans de l’eau de robinet et de l’eau physiologique pour la rendre
propre. Et lorsque nous avons vidé ce surnageant, nous avons eu nos hématies bien
propres.
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IV. LA SUSPENSION D’HEMATIE
Après avoir fini de bien laver nos hématies, nous avons fait la suspension de 5%,
10% et 20%. D’abord pour faire une suspension de 5%, nous avons mis dans un tube
à hémolyse bien identifié, 19 gouttes d’eau physiologique et ajouter une goutte de
culot globulaire. Ensuite, pour une suspension de 10%, nous avons mis dans un tube à
hémolyse bien identifié 18 gouttes d’eau physiologique et ajouter deux (02) gouttes
de culot globulaire. Et pour une suspension de 20%, nous avons mis dans un tube à
hémolyse bien identifié, 16 gouttes d’eau physiologique et ajouter quatre (04) gouttes
de culot globulaire. Et pour une suspension de 20%, nous avons mis dans un tube à
hémolyse bien identifié 16 gouttes d’eau physiologique et ajouter quatre (04) gouttes
de culot globulaire. Enfin, pour une suspension 5% nous avons eu une coloration
saumon ; pour une suspension de 10%, nous avons eu une coloration rouge
intermédiaire et pour une suspension de 20%, nous avons eu une coloration rouge
brique.
V. GROUPAGE SANGUIN
Pour nos groupages, nous avons eu besoin d’une plaque à godet ou une plaque
d’opaline bien propre devant nous et à notre droite une cellulose et de l’eau
physiologique et de l’eau de robinet, les réactifs de groupage par BETH VINCENT
l’Anti-A, l’Anti-B, l’Anti-AB et par le Rhésus l’Anti-D. Et par SIMONIN, on a
l’hématie A à 20% et l’hématie B à 20% et à notre gauche un portoir d’échantillon et
une poubelle. Nous avons pris 1 tube contenant du sang et centrifuger à 1000 tr/mn
pendant 1mn de telle sorte à avoir le culot globulaire et le plasma. Pour SIMONIN
nous avons une goutte de plasma, pour BETH VINCENT, nous avons pris le culot
globulaire pour faire une suspension de 20% une goutte de culot globulaire par 4
gouttes d’eau physiologique pour la dilution. Après nous avons mis une goutte de
dilution sur les 4 côtés de la plaque à godet, nous avons rincé la pipette-pasteur dans
de l’eau de robinet et de l’eau physiologique pour rendre la pipette propre. Ensuite,
nous avons mis une goutte de l’Anti-A pour le 1er côté de la plaque à godet, une
5
goutte de l’Anti-B pour le 2e côté, une goutte de l’anti-AB pour le 3e côté une goutte
de Rhésus Anti-D par le 4e côté et ensuite pour le 5e côté nous avons mis une goutte
de plasma et une goutte hématie à 20% et le 6 e côté nous avons mis une goutte de
plasma et une goutte d’hématie B à 20% de la plaque à godet. Et nous avons fait un
mouvement sinusoïdal à la plaque à godet. Nous avons effectué la lecture après 2mn
et noté la présence ou non d’agglutination.
Enfin pour la lecture, nous n’avons pas eu d’agglutination avec l’Anti-A, Anti-B et
Anti-AB ; il y a eu agglutination avec l’Anti-A, l’Anti-B et l’Anti-AB ; il y a eu
agglutination avec le Rhésus Anti-D et avec l’hématie A et l’hématie B nous avons
trouvé que le patient est du groupe O positif (O+). Il n’y a pas eu d’agglutination au
niveau de l’Anti-A, l’Anti-B et l’Anti-AB car, il n’y a pas d’antigène à la surface.
Mais les hématies test sont agglutinés parce qu’il y a présence d’anticorps Anti-A et
anticorps Anti-B dans son plasma et sur les hématies, il y a présence d’antigène D
c’est pourquoi le Rhésus s’agglutine d’où le patient est O positif (O+).
VI. TITRAGE : DILUTION DU SERUM
D’abord, nous avons pris 10 tubes qu’on a numérotés de 1 à 10. Dans le 1er tube,
nous n’avons pas mis de l’eau physiologique et nous avons mus 5 gouttes d’eau
physiologique dans les tubes allant de 2 à 10. Après, nous avons mis 5 gouttes de
plasma dans le 1er tube et le 2e tube. Nous avons rincé la pipette-pasteur et faire une
dilution géométrique de raison 2. C’est à dire nous avons pris le tube 2, nous avons
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bien homogénéisé le contenu du tube 2 et nous avons mis 5 gouttes dans le tube 3,
nous avons retourné le reste dans le tube 2 et nous avons fait de telle sorte qu’il n’y
ait pas de bulle, en homogénéisant le tube 3 nous avons transféré 5 gouttes dans le
tube 4 et nous avons continué l’opération jusqu’au dernier tube (le 10e tube). Après
avoir homogénéisé le contenu du tube 10 nous avons vidé le contenu du tube 10 à
l’aide d’une pipette-pasteur et remis 5 gouttes dans le même tube 10 ensuite nous
avons versé le reste du contenu et préparer en face de la 1 ère série de tube. Une autre
série de 10 tubes marqués : ½, ¼, 1/8, 1/32, 1/64, 1/128, 1/256, 1/512 et 1/1024. Nous
avons mis une goutte d’une suspension à 5% de globules rouge à laver dans chaque
tube de plasma dilué en commençant par le dernier tube (la plus forte dilution ; nous
n’avons pas rincé la pipette-pasteur entre chaque tube), nous avons homogénéisé le
contenu des tubes et nous avons centrifuger les tubes à 100 tr/mn pendant 1mn, nous
avons faire la lecture par agitation légère du tubes.
Enfin, nous avons fait la transcription des résultats. Nous avons :
1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2 ; 4 ; 8 ; 16 ; 32 ; 64 ; 128 ; 256 ; 512 ; 1024
+++ ++ ++ + – – – – – –
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Nous avons eu comme titre : et le score : 31
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Car nous avons attribué aux crois les points, les meilleurs plasmas sont ceux qui ont
le plus de points. Nous avons :
- +++ qui est égale à 10 points,
- ++ qui est égale à 8 points,
- + qui est égale à 8 points,
- – dd qui est égale à zéro (0) point
Calcul du score : 10 + 8 + 8 + 5 = 31
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CONCLUSION
Les techniques de prélèvement, lavage, et analyse des hématies sont cruciales pour la
précision des diagnostics médicaux. L'exécution méticuleuse des étapes décrites a
permis d'obtenir des résultats clairs et précis pour le groupage sanguin et le titrage des
anticorps. La préparation adéquate des suspensions d’hématies a facilité la réalisation
de tests fiables, contribuant ainsi à une meilleure compréhension des caractéristiques
sanguines. Ces processus assurent non seulement la qualité des analyses mais aussi
une gestion efficace des échantillons pour des diagnostics corrects.