MINISTERE DE LA SANTE, DE L'HYGIENE REPUBLIQUE DE CÔTE D’IVOIRE
PUBLIQUE ET DE LA COUVERTURE Union – Discipline – Travail
MALADIE UNIVERSELLE ************
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INSTITUT NATIONALE DE FORMATION
DES AGENTS DE SANTE
(INFAS) Année Académique 2023 – 2024
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ANTENNE D’ABOISSO
LICENCE 1 TBM
PRESENTE PAR: ENSEIGNANT
YAPO Chia Sidoine Kevine Dr GNAMIEN
Mle 23-9309TBMAB Cel : [Link].82
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SOMMAIRE
INTRODUCTION
I. LE PRELEVEMENT DE SANG
1. Le matériel
2. Prélèvements
II. LAVAGE DES HEMATIES
1. Matériels
2. Technique de lavage
III. CRAQUAGE ABO
1. Matériel
2. Réactifs
3. Technique du groupe
IV. TITRAGE D’ANTI-CORPS, ANTI-ERYTHROCYTAIRE
1. Matériels
2. Réactifs
3. Dilution de raison 2
4. Titrage
V. SUSPENSION DES HEMATIES
1. Matériel
2. Préparation de la suspension
CONCLUSION
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INTRODUCTION
Les techniques de prélèvement et d'analyse du sang sont cruciales pour le diagnostic
médical. Ce rapport présente les procédures pour le prélèvement sanguin, le lavage
des hématies, le test de groupe sanguin, le titrage des anticorps anti-érythrocytaires, et
la préparation des suspensions d’hématies. Chaque étape joue un rôle clé dans la
précision des résultats des tests.
I. LE PRELEVEMENT DE SANG
1. Le matériel
Nous avons utilisés : de l’alcool de 90°, du coton, un garrot, des gants, un portoir à
échantillon, un tube à EDTA, les aiguilles de prélèvements et le corps du tube.
2. Prélèvements
- On choisit la veine,
- On pose le garrot,
- On nettoie le point de jonction avec le coton et de l’alcool,
- On nettoie par la suite avec le coton sec,
- On pique à la suite,
- On homogénéise le sang recueilli par renversement.
II. LAVAGE DES HEMATIES
1. Matériels
- Tube à hémolyse, échantillon sang, les gants,
- Pipette pasteur, Centrifugeuse
- Portoir de tube,
- L’eau physiologique,
- Cellulose, Cristallisoir, Poubelle,
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2. Technique de lavage
1ère Etape
Pour ce qui concerne le lavage des hématies, nous avons centrifugés le sang prélevé
dans le tube EDTA à 3.000 tr/mm pendant 3mn. Nous avons retiré de la
centrifugeuse, nous avons obtenu deux produits qui sont : le culot globulaire et le
plasma.
2e Etape
Nous avons retiré le plasma qui est le surnageant. Ensuite, à l’aide d’une pipette
pasteur, nous avons retiré le plasma, bien rincer la pipette pasteur avec l’eau et rincé
avec de l’eau physiologique. A l’aide de la pipette pasteur, nous avons prélevé une
quantité du culot globulaire que nous avons mis dans un tube à hémolyse qu’on va
ajouter l’eau physiologique jusqu’à 1cm du bord du tube on ferme avec un bouchon
propre, on homogénéise par renversement, on centrifuge à 3000 tr/mn pendant 3mm.
3e Etape
Nous allons retirer le surnageant à l’aide d’une pipette pasteur et on va ajouter de
l’eau physiologique jusqu’à 1cm du bord et fermé avec un bouchon et nous allons
centrifuger à 3000 tr/mn pendant 3mn. Nous avons retiré de la centrifugeuse.
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4e Etape
Nous allons retirer le surnageant avec une pipette pasteur, on va ajouter de l’eau
physiologique jusqu’à 1cm du tube qu’on va centrifuger à 3000 tr/mn pendant 3mn.
On retire le bute de la centrifugeuse. Nous avons remarqué que le surnageant est loin
comme l’eau physiologique. Nous pouvons donc en déduire que les hématies sont
propre et nous allons retirer le surnageant et nous avons notre hématie bien loué.
III. CRAQUAGE ABO
1. Matériel
- Echantillon de sang, cellulose, une poubelle,
- Eau physiologique,
- Gants, centrifugeuse,
- Pipette pasteur, portoir de tube,
- Plaque de test de groupe sanguin.
2. Réactifs
- Hématie-test A et B,
- Serums-tests anti-A, B, AB, D
3. Technique du groupe
Pour déterminer le groupe sanguin d’un individu nous avons utilisé deux méthodes
qui sont : l’épreuve globulaire de Beth-Vincent et l’épreuve de Simonin.
Pour commencer, nous allons centrifuger le sang recueilli lors du prélèvement à 3000
tr/mn pendant 3mn pour séparer le plasma et le culot globulaire.
Dans un premier temps à l’aide d’une pipette pasteur prélever le plasma qu’on va
mettre de 10 gouttes sur la plaque de test du groupe sanguin pour effectuer le test de
Simonin et à l’aide d’une pipette pasteur on va prélever le culot globulaire que nous
allons sur une plaque, mettre une goutte sur chaque surface. Pour l’épreuve de Beth-
Vincent. Après cette étape, nous avons utilisé les réactifs pour l’épreuve de Beth-
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Vincent, nous avons mis une goutte d’anti-corps A, B, AB sur chaque goutte de sang
et une goutte pour l’anti-gène D. pour Simonin, nous avons ajouté une goutte des
hématies anti-A et anti-B pour chaque goutte de plasma.
Nous remarquons qu’il n’y a pas d’agglutination sur le sérum-test anti-A, anti-B et
anti-AB donc nous pouvons conclure que le sujet est du groupe O.
Pour l’épreuve de Simonin, nous remarquons qu’il n’y a agglutination des hématies A
et B nous pouvons conclure que le sujet a les hématies A et B. Le test de Beth-
Vincent concorde avec celui de Simonin donc nous pouvons conclus qu’il est du
groupe O.
Lorsqu’on met une goutte de l’antigène anti-D, il y a agglutination donc le sujet à
l’antigène D à la surface de ces hématies. Nous pouvons conclure que le sujet est du
groupe sanguin O+.
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IV. TITRAGE D’ANTI-CORPS, ANTI-ERYTHROCYTAIRE
1. Matériels
- Echantillon de sang,
- Tube à hémolyse,
- Centrifugeuse,
- Pipette pasteur,
- Portoir de tube,
- Cristallisoir,
- Poubelle,
- Cellulose,
2. Réactifs
- Eau physiologique,
- Sérum à titre,
- Suspension à 5% de globule lavée.
3. Dilution de raison 2
Nous avons utilisé 10 tubes à hémolyse que nous avons numérotée de 1 à 10. On a
ensuite ajouter 4. On ne met rien dans le premier tube et on met 5 gouttes d’eau
physiologique dans chaque tube de 2 à 10. Nous allons ajouter 5 gouttes de plasma
dans le tube 1 et 2. Nous allons homogénéiser l’eau et le plasma du tube 2. A l’aide
d’une pipette pasteur, nous allons prélever 5 gouttes au contenu du 2 et ajouter dans
le tube 3. On va faire le même processus jusqu’au tube 10 et on prélève 5 gouttes
pour jeté dans le 10e de sorte à obtenir la même quantité de liquide dans chaque tube.
4. Titrage
On prend 10 autres tubes qu’on va numéroter ½, ¼, 1/8, 1/16, 1/32, 1/64, 1/128,
1/256, 1/512 et 1/1024.
On va mettre soigneusement une goutte de notre plasma dilué que nous avons
numéroté de 1 à 10 précédemment dans les nouveaux tubes c’est à dire le tube 1 dans
le tube ½ ainsi de suite jusqu’au dernier tube. Ensuite, nous allons mettre une goutte
de hématie A dans tous les tubes de ½ à 1/1024. Nous allons homogénéiser par la
suite et mette à la centrifugeuse à 3000 tr/mn pendant 3mn.
On remarque qu’il y a agglutination dans le ½, ¼, 1/8 et 1/16.
- ½ = +++ = 10 points
- ¼ = ++ = 08 points
- 1/8 = + = 05 points
- 1/16 = + = 02 points
- 1/32 = - = 00 points
Calcul du score est égal à : 100 + 8 + 5 + 20 = 39.
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V. SUSPENSION DES HEMATIES
1. Matériel
Tube à hémolyse, pipette pasteur, eau physiologique, globule rouge lavé, portoir à
tube, cristallisoir, feutre permanant, gants, cellulose.
2. Préparation de la suspension
Suspension à 5%
On prend un tube à l’hémolyse et à l’aide du feutre, on met 5%. A l’aide d’une
pipette pasteur a prélevé 19 gouttes d’eau physiologique qu’on va mettre dans le tube
et on ajoute une goutte du culot globulaire a homogénéise. La suspension prend la
coloration saumon.
Suspension à 10%
On prend un tube à l’hémolyse à l’aide d’une pipette pasteur. On ajoute 13 gouttes
d’eau physiologique et 2 gouttes du culot globulaire et on va homogénéiser. La
suspension prend la coloration rouge intermédiaire.
Suspension à 20%
On prend un tube à hémolyse à l’aide d’une pipette pasteur. On ajouter 16 gouttes
d’eau physiologique et 4 gouttes du culot globulaire et on homogénéise. La
suspension prend la coloration rouge brique.
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CONCLUSION
Les procédures décrites sont essentielles pour garantir la précision des analyses
sanguines. Un prélèvement correct, un lavage adéquat des hématies, et des méthodes
rigoureuses de titrage et de préparation des suspensions assurent des résultats fiables,
permettant une évaluation précise des conditions cliniques et des caractéristiques
sanguines.