UE 2.
15 Sciences analytiques 2 Chimie Analytique
UE 2.15 Sciences analytiques 2 EL BIYAALI Sania
Analyse Quantitative
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Analyse Quantitative
Un dosage est une méthode permettant de déterminer la qualité ou la
concentration d’une espèce en solution. Le but est de déterminer une
concentration de façon fiable. Il faut donc mettre au point une méthode de
Introduction quantification basée sur le principe de comparaison à un étalon.
L’étalonnage est une méthode qui permet de déterminer la relation mathématique
entre la réponse du détecteur et la quantité de substances analysée. Un mauvais
étalonnage conduit forcément à des résultats erronés.
Rappel : la surface des pics en chromatographie est proportionnelle à la quantité
injectée :
S = αi . Qi
- étalonnage externe : c’est le type d’étalonnage le plus simple, utilisé pour les
techniques analytiques très répétables. La gamme d’étalonnage est réalisée
selon la plage de travail définie. On utilise des étalons dont on connait la
concentration et à partir de la droite d’étalonnage on peut déterminer la
concentration de la solution inconnue.
Les différents
types - étalonnage interne : c’est une technique plus délicate pour éviter une mauvaise
d’étalonnages répétabilité on ajoute un étalon interne en quantité connue.
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On peut également travailler avec une droite d’étalonnage ou sans gamme étalon,
dans ce cas on procède en plusieurs étapes :
1) on réalise une première injection d’une quantité connue d’étalon interne de
concentration connue, on peut mesurer le coefficient de réponse de chaque
composé :
SA
αA = _____ SEi
αEi = _____
QA QEi
2) on calcule le coefficient de réponse relatif :
αA = __________
γ = ____ SA . QEi
αEi SEi . QA
3) on réalise une deuxième injection d’une quantité d’échantillon interne de
concentration également connue dans un échantillon A de quantité inconnue et
de concentration connue. On cherche alors la quantité de A :
S’A . Q’Ei
Q’A = __________
S’Ei . γ
On fait un étalonnage interne si l’analyse présente une mauvaise répétabilité et
reproductibilité (chromatographie en phase gazeuse CPG).
Si le solvant utilisé est très volatil, son évaporation au cours du traitement de
Les différents l’échantillon risque de modifier de manière significative la concentration des
types solutions analysées.
d’étalonnages L’étalon doit avoir un comportement et/ou une structure proche de la substance à
doser, ou une substance non présente dans le prélèvement.
On introduit généralement l’étalon juste avant extraction ou juste au niveau du
dosage.
- méthodes ajouts dosés : on analyse un échantillon à doser de substance B que
l’on ne peut pas analyser directement. Donc, on ajoute la même substance dans
échantillon en quantité croissante et on dose ainsi la « surcharge ». Cette
méthode est utilisée lorsque les effets de matrice sont importants et dans les cas
où la substance d’intérêt peut difficilement être extraite de la matrice et lorsque
sa quantité est faible. La matrice va être analysée seule puis avec des ajouts
connus en substance à doser.
Exemples : On veut doser une solution inconnue de potassium par une méthode.
On prépare les solutions suivantes à partir des volumes suivants.
C’est une méthode d’ajouts dosés.
Le but est que les valeurs des concentrations dosés soient les plus fiables
possibles.
Beaucoup de paramètres dit fondamentaux sont utilisés pour vérifier cette fiabilité :
Vérification et - spécificité - sélectivité
validation des - fidélité (répétabilité)
performances - exactitude
d’une méthode - sensibilité
- stabilité
- robustesse
- contamination
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- spécificité : aptitude à ne doser qu’une substance, sans inteférences liées à la
matrice.
- linéarité : capacité, à l’intérieur d’un domaine d’utilisation défini, à obtenir des
résultats directement proportionnels à la concentration de l’analyte dans la
matrice.
- justesse : étroitesse de l’accord entre la moyenne et une valeur de référence.
- exactitude : étroitesse de l’accord entre valeur de référence et valeur vraie.
- fidélité :
• répétabilité : variabilité entre les résultats d’une même mesure obtenus dans
des conditions similaires.
• fidélité intermédiaire : variabilité entre les résultats de conditions opératoires
peu variables.
• reproductibilité : permet le calcul du coefficient de variation.
- sensibilité : c’est la capacité à distinguer deux concentrations très voisines d’un
analyste. Elle est généralement évaluée au travers de la LoD (plus petite quantité
détectable), de la LoQ (plus petite quantité quantifiable) et de la pente de la
courbe d’étalonnage.
Vérification et
validation des
performances
d’une méthode
- stabilité : apparentée à la stabilité de l’analyse au cours du temps. L’évaluer
permet de vérifier la conservation des échantillons au cours du temps. La stabilité
de l’échantillon doit être évaluée à toutes les étapes précédents l’analyse.
• stabilité des solutions mères et filles
• stabilité à court terme et à long terme
• cycle de congélation-décongélation
- robustesse : capacité d’une méthode à donner des résultats d’une précision
acceptable dans des conditions variables minime (pH, concentration, T°C).
Pour évaluer la conformité des paramètres fondamentaux, on travaille en contrôle
qualité. Pour cela, on utilise des points de contrôle (appelés CIQ ou CEQ).
Il existe plusieurs types de contrôles qualité :
- contrôle interne de qualité (CIQ) : à deux ou trois niveaux de concentrations
connues au niveau de la gamme (bas, milieu, haut). À ces trois niveaux, on vérifie
le bon fonctionnement du système analytique, on valide les résultats et on
prévient les erreurs. Ce type de contrôle est réalisé en interne avant et après la
Contrôle qualité série d’analyse, il est très utilisé en laboratoire de routine. C’est un procédé
utilisant à des fins de contrôle de qualité, les résultats d’un seul laboratoire.
- contrôle externe de qualité (CEQ) : cela consiste à évaluer les performances
d’un laboratoire en réalisant une comparaison inter-laboratoire. Ce type de
contrôle est réalisé au moins une fois par mois ou par semaine par un organisme
externe de référence. L’organisme envoie un échantillon de concentration
inconnue et le laboratoire doit rendre les résultats, ainsi l’organisme évalue la
qualité de l’analyse.
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Les points obtenus à la suite de l’analyse doivent absolument être alignés, c’est un
Linéarité point primordial.
La linéarité se vérifie avec la valeur de r2 qui doit être le plus proche possible de 1.
La justesse est quantifiée par le biais, on compare la moyenne obtenue (µ) avec des
échantillons de CIQ et de la valeur cible attendue assimilée à la valeur « vraie » (v)
de l’échantillon testé. Elle est exprimée en pourcentage de la valeur cible :
µ - v x 100
Biais = ________
Justesse v
m - v x 100
Biais(relatif)= ________
v
Les critères d’acceptabilité sont : biais < 5% ou 10% selon les critères choisis.
Il est recommandé d’utiliser au minimum deux niveaux de concentration et un
effectif égal à 30 pour une interprétation statistique optimale.
Pour exploiter les résultats, il faut calculer la moyenne et l’écart-type et le
Mesure de la coefficient de variation :
répétabilité écart-type
CV = _________________ x 100
moyenne
Les critères d’acceptabilité sont : CV < 5% ou 10% selon les critères choisis.
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