Siwar Ben Mansour TP 01: Préparation des
milieux des cultures (3)
Emna Dhaoui
Pc22 ,GR1
2025/202
I. But:
On fait un dénombrement afin de contrôler la qualité des produits destinés à
la consommation, ça nécessite une ou Plusieurs dilutions décimales, peut se
réaliser en milieu solide .
II. Principe :
La préparation des milieux de culture en microbiologie consiste à mesurer et
peser des ingrédients comme des extraits de viande et de l'agar, puis à les
dissoudre dans de l'eau distillée chauffée. Le mélange est ensuite stérilisé
par autoclavage pour éliminer toute contamination. Une fois refroidi, il est
versé dans des boîtes de Pétri stériles, prêt à recevoir des microorganismes
pour l'étude et l'identification
III. Mode operatories
Préparation du matériel stérile :
Rassemblez des tubes, pipettes et boîtes de Pétri contenant le milieu de culture.
Chauffage du milieu de culture :
Chauffez le milieu de culture à la température appropriée pour favoriser la
croissance des microorganismes.
Stérilisation du flux laminaire :
Nettoyez la machine à flux laminaire avec une solution d'eau de Javel pour
désinfecter la surface. L'eau de Javel est efficace contre les bactéries, virus et
champignons, mais il est essentiel de respecter les concentrations appropriées et
le temps de contact pour assurer l'efficacité
Manipulation des échantillons :
Prenez 1 g de levure et commencez votre travail dans le flux laminaire pour
minimiser les risques de contamination.
Remplissage des boîtes de Pétri :
Remplissez les boîtes de Pétri avec le milieu de culture en veillant à travailler
dans des conditions de température ambiante.
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Dilution des échantillons :
Ajoutez 1 g de levure dans le
premier tube (S1) contenant 10 ml
de milieu avec agitation.
Prélevez 1 ml de la solution S1 à
l'aide d'une micropipette et
transférez-le dans le deuxième
tube pour commencer le cycle de
dilution jusqu'à 10
Ensemencement :
Lorsque les milieux de culture son devenu solide , on ajout 100 µl dans
chaque une avec des concentration diffèrent qu’on l’indique sur le surface de
billet de métrie .
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Selon notre choix on fait ensemencement : Stries : Réaliser des stries
sur toute la surface avec une anse de platine.
Inondation : Verser un volume de suspension microbienne sur la gélose et
éliminer l'excès
Etape d’incubation
On met les boules e de metrie en tuve pour évité l’introduction de l’air
appelle , l’étude de température optimal de 30°C pendent jours .
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IV. Conclusion :
La préparation des milieux de culture est cruciale en
microbiologie pour favoriser la croissance des
microorganismes. En respectant les principes de
composition et de stérilisation, elle permet d'obtenir
des résultats fiables et d'approfondir la compréhension
des interactions biologiques.