Complément : Chimie

                                                                                                                                                                         

SPECTROPHOTOMETRIE  
1. INTERACTION  LUMIERE  –  MATIERE  
La  spectrophotométrie  est  l’étude  quantitative  des  interactions  entre  la  lumière  et  la  matière.    
Lorsque   de   la   lumière   traverse   une   substance,   elle   est   en   partie   transmise   et   en   partie  
absorbée.  
Si   une   substance   absorbe   dans   le   domaine   visible   (400nm<λ0<800nm)*,   alors   elle   est  
colorée.   Eclairée   par   de   la   lumière   blanche,   elle   prendra   la   couleur   des   radiations   qui  
parviennent  à  traverser,  couleurs  complémentaires  des  couleurs  absorbées.    
*  Il  s’agit  de  transitions  électroniques.  
 
Lecture  du  cercle  chromatique  :  
• Les  couleurs  sont  placées  par  ordre  croissant  de  longueur  d’onde  le  long  du  cercle.    
• Deux  couleurs  complémentaires  se  trouvent  l’une  en  face  de  l’autre.  
Exemple  :  une  solution  de  diiode  I2  absorbe  principalement  les  rayonnements  de  longueur  
d’onde  454mn  (bleu-­‐violet)  :  la  solution  est  alors  jaune-­‐orangée  (couleurs  complémentaires  
des  rayonnements  absorbés,  situées  en  face  dans  le  cercle  chromatique).  

2. LOI  DE  BEER-­‐LAMBERT  

a. Définition  de  l’absorbance  
Les   lois   régissant   l’absorption   de   la   lumière   par   une   substance   colorée   ont   été   formulées   en   1730   par   J.H.   Lambert   et  
généralisées  aux  solutions  par  [Link]  en  1852.  
Soit   une   cuve   de   longueur   ℓ   contenant   une   solution   d’une   substance   colorée   à   la   centration   c.   Un   faisceau   de   lumière  
monochromatique   de   longueur   d’onde   λ   traverse   cette   solution  ;   soit   I0(λ),   l’intensité   de   ce  
faisceau  à  l’entrée  de  la  cuve  et  IS(λ),  son  intensité  à  la  sortie.  L’absorption  de  cette  lumière  par  la  
solution  peut  être  caractérisée  par  deux  grandeurs  :  la  transmittance  et  l’absorbance.  
• La  transmittance  donne  le  pourcentage  de  lumière  que  transmet  la  solution  :    
!! !
! ! =  
!! !
• L’absorbance  A  est  définie  par  :    
! !! !
! ! = !"# = !"#  
! ! !! !
L’absorbance  A  est  une  grandeur  sans  dimension.    
Remarques  :    
-­‐ puisque  I0(λ)>  IS(λ),  A>0.  
-­‐ A  est  d’autant  plus  grande    que  Is  est  petite,  donc  que  la  solution  absorbe  de  lumière.    
 
b. Loi  de  Beer-­‐Lambert  
L’expérience  montre  que  pour  une  solution  peu  concentrée  en  substance  absorbante,  l’absorbance  A(λ)  est  proportionnelle  à  la  
longueur  de  la  cuve  ℓ  et  à  la  concentration  c  de  la  substance  absorbante,  ce  que  traduit  la  loi  de  Beer  Lambert  :    
A(λ)=ε(λ).
     ℓ.c  
ε(λ)  est  le  coefficient  d’absorption  molaire  de  la  substance  considérée.  Ce  coefficient  dépend  de  :    
• La  nature  de  la  substance  
Remarque  :   Attention   aux   unités  :   si   ε(λ)   est   exprimé   en  
• La  longueur  d’onde  λ  de  la  lumière   2 -­‐1 -­‐3
unités  SI  (m .mol ),  ℓ  doit  être  en  m  et  c  en  mol.m .  
• La  nature  du  solvant   -­‐1 -­‐1 -­‐1
Si  ε(λ)  est  en  cm .[Link] ,  ℓ  est  en  cm  et  c  en  mol.L .  
• La  température.  
 
La  loi  de  Beer-­‐Lambert  n’est  valable  que  si  la  solution  est  peu  concentrée  en  espèce  colorée  car  à  trop  forte  concentration  :    
§ Is  est  trop  faible,  et  le  spectrophotomètre  trop  peu  sensible  pour  donner  des  valeurs  cohérentes  de  A.  
§ des  agglomérats  peuvent  se  former,  qui  ne  possèdent  pas  le  même  coefficient  d’absorption  molaire  que  l’espèce  seule.  
 
Remarque  :  Cette  loi  est  valable  aussi  pour  les  radiations  UV  ou  infrarouge.  
                                                    Fiche  TP                                                                                                                                                                            
c. Additivité  des  absorbances    
Considérons  une  cuve  de  longueur  l  contenant  une  solution  renfermant  n  substances  colorées,  chacune  ayant  une  concentration  
ci   et   un   coefficient   d’absorption   molaire   εi(λ)   à   la   longueur   d’onde   et   à   la   température   considérées.   Chaque   substance   à   une  
absorbance   Ai=   εi(λ).   ℓ.ci.   L’expérience   montre   que   pour   les   solutions   diluées,   l’absorbance   totale   A(λ)   de   la   solution   est  
additive  :   A(! ) = ! Ai (! ) = ! "i (! )" l " ci  
Toutes les espèces colorées Toutes les espèces colorées

3. MESURES  SPECTROPHOTOMETRIQUES  
a. Détermination  d’une  concentration  
On   utilise   souvent   la   spectrophotométrie   afin   de   connaître   la   concentration   d’une   substance   colorée   dans   une   solution.  
L’absorbance  est  mesurée  à  l’aide  d’un  spectrophotomètre.    
 
i. Choix  de  la  longueur  d’onde  de  travail    
• Pour   augmenter   la   précision   de   l’appareil   et   limiter   l’incertitude   sur   les  
mesures   on   se   place   à   la   longueur   d’onde   pour   laquelle   le   coefficient  
d’absorption  molaire  de  la  substance  est  maximum.    
Pour   repérer   la   longueur   d’onde   λmax   correspondante,   on   peut   tracer   la   courbe  
A=f(λ)  pour  une  solution  contenant  l’espèce  et  lire  la  valeur  λmax  sur  la  courbe.  On  
appelle  cette  courbe  le  spectre  d’absorption  du  composé  considéré.  
Exemple  :  Pour  Br2,  le  spectre  A=f(λ)  est  ci-­‐dessus.    Pour  étudier  une  solution  de  dibrome,  on  se  placera  donc  à  λ=410  nm.  
• Si  plusieurs  substances  colorées  sont  susceptibles  d’absorber  la  lumière  incidente,  on  essayera  de  se  placer  à  une  longueur  
d’onde   pour   laquelle   une   seule   des   espèces   absorbe   la   lumière.   On   pourra   alors   suivre   l’évolution   de   sa   concentration,   sans  
tenir  compte  des  autres  espèces.  
 
ii. Déroulement  de  la  mesure  
Afin   d’étudier   l’absorption   de   la   lumière   par   une   substance   colorée   seule,   il   faut   tenir   compte   du   fait   que   de   la   lumière   est  
absorbée   également   par   la   cuve   et   le   solvant,   bien   que   cette   absorption   soit   faible   en   général.   Pour   s’en   affranchir,   il   faut  
alors  «  faire  le  blanc  ».    
Explication  :   «  Faire   le   blanc  »   consiste   à   mesurer   l’absorbance   (à   la  
longueur   d’onde   de   travail)   du   solvant   et   des   parois   de   la   cuve,   et   à  
retrancher  cette  valeur  à  toutes  les  mesures  ultérieures.  Ainsi,  l’absorbance  
indiquée  par  l’appareil  est  uniquement  celle  de  l’espèce  colorée  étudiée.  
 
La  mesure  se  déroulera  comme  suit  :  
• Choisir  une  longueur  d’onde  λ  appropriée  (cf  i.)  
• Remplir,  aux  deux  tiers,  la  cuve  avec  le  solvant  seul  en  veillant  à  ce  que  ses  parois  soient  bien  propres  (ne  pas  toucher  les  
parois   avec   les   doigts  !),   la   placer   dans   le   spectrophotomètre   et   «  faire   le   blanc  »,   c'est-­‐à-­‐dire   indiquer   au  
spectrophotomètre  que  cette  valeur  sera  pris  comme  référence  A=0.  
Attention  :  Certaines  cuves  n’ont  que  deux  parois  transparentes  :  veiller  à  ce  que  le  faisceau  passe  bien  par  ces  deux  parois  !  
• Vider   la   cuve,   la   rincer   avec   la   solution   à   analyser,   puis   la   remplir   aux   deux   tiers,   avec   la   solution   à   analyser.   Sécher   ses  
parois,  la  placer  dans  le  spectrophotomètre  et  lire  la  valeur  affichée.    
Le   «  blanc  »   de   l’absorbance   doit   être   effectué   pour   toute   nouvelle   longueur   d’onde   λ,   les   coefficients   d’absorption   molaire   du  
solvant  et  du  matériau  constituant  la  cuve  dépendant  eux  aussi  de  λ.  
Remarque  :  Pour  être  le  plus  précis  possible,  il  faut  réutiliser  la  cuve  qui  a  été  utilisée  pour  le  blanc  pour  toutes  les  mesures.  Il  faut  
donc   à   chaque   mesure   vider   la   cuve   et   la   rincer   avec   la   solution   à   analyser   avant   utilisation.   Si   un   grand   nombre   de   mesures  
nécessitant  un  changement  de  solution  doivent  être  réalisées,  on  tolèrera  un  changement  de  cuve  :  on  fera  alors  l’approximation  
que  toutes  les  cuves  ont  la  même  absorbance,  mais  ceci  est  une  approximation.  
 
b. Identification  d’une  espèce  colorée  
Le  spectre  d’absorption  d’une  espèce  dans  un  solvant  donné  à  une  température  donnée  lui  est  caractéristique.    
Le  tracé  du  spectre  d’absorption  d’une  espèce  (A=f(λ)  ou  ε=f(λ))  et  la  comparaison  de  ce  spectre  à  une  banque  peut  permettre  
son  identification.    
Remarque  :  on  peut  également  comparer  les  longueurs  d’onde  correspondant  aux  maxima  d’absorption.