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L’IMSI : une nouvelle technique pour optimaliser

le choix du spermatozoïde
IMSI: high magnification of spermatozoa a new technic
 P. Cohen-Bacrie*, M. Dumont*, A.-M. Junca*, S. Belloc*, M. Cohen-Bacrie*

L
a pratique de l’ICSI (Intracytoplasmic Sperm Injection) spermatozoïdes normaux, respectivement de 36,7 % et 18,7 %
et sa capacité à produire des embryons et aboutir à versus 20,2 % et 9,6 % pour les anormaux. La présélection des
des naissances avec des spermes très altérés nous a fait spermatozoïdes sur leur morphologie est donc une étape cru-
croire, au début, que tous les couples confrontés à la stérilité ciale de la procédure d’ICSI.
masculine allaient pouvoir être les parents biologiques de leur La structure et/ou la composition de la chromatine des noyaux
enfant. Les échecs de l’ICSI (échecs de fécondation et d’im- des spermatozoïdes humains sont très variables (même parmi
plantation) mettent en cause la qualité des ovocytes, du sper- les noyaux spermatiques de forme normale) et des vacuoles
matozoïde injecté, la manipulation du biologiste ainsi que la nucléaires de taille et de localisation variables sont régulière-
qualité endométriale. Plusieurs observations d’anomalies très ment observées en microscopie électronique à transmission
grossières, en particulier des têtes des spermatozoïdes, telles (2). La chromatine granuleuse peu condensée, retrouvée dans
que la macrocéphalie ou la globozoospermie, ne donnaient les spermatozoïdes, ressemble à celle que l’on trouve dans les
pas ou peu de grossesses lorsque des embryons pouvaient être spermatides allongées des autres espèces de mammifères, ce
obtenus. qui traduirait une immaturité nucléaire. En assistance médi-
Plusieurs auteurs ont noté l’absence de corrélation entre le cale à la procréation, certains échecs d’implantation et de
pourcentage de formes atypiques évaluées par le simple sper- grossesse évolutive pourraient être dus à des altérations de la
mocytogramme (classification de David ou de Krüger) et les
résultats de l’ICSI, car le choix du spermatozoïde d’aspect
morphologiquement le plus normal est réalisé par le bio-
[Link] chromatine. C’est pourquoi Evenson et al. (3) préconisent de
faire une évaluation de l’intégrité de la chromatine, en mesu-
rant le taux de fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes.
logiste au moment de la micro-injection. Le taux de succès Ce test, appelé SCSA (Sperm Chromatin Structure Assay),
semble néanmoins dépendre de l’aspect morphologique du pourrait être utilisé dans les stérilités dites inexpliquées et/ou
spermatozoïde injecté. De Vos et al. (1) ont publié en 2003 une les échecs répétés d’implantation, à condition d’avoir au moins
analyse rétrospective concernant l’influence de la morpholo- un million de spermatozoïdes par millilitre. Ce test ne peut
gie du spermatozoïde injecté au grossissement x 400 sur le donc pas être utilisé pour les OAT sévères avec lesquelles nous
taux de fécondation d’ovocytes tous matures, la morphologie observons des échecs répétés d’implantation après ICSI.
embryonnaire et les taux de grossesses en ICSI. Un spermato- De même, pour déterminer si des anomalies fines de la
zoïde, observé au grossissement x 400, était considéré comme morphologie des spermatozoïdes pouvaient interférer avec
normal si la tête était normale (forme, taille et acrosome) et les résultats de l’ICSI, Bartoov et al. (4) ont mis au point un
s’il n’y avait défaut ni du flagelle ni de la pièce intermédiaire. microscope haute résolution permettant d’observer les sper-
Hormis les anomalies grossières de la tête des spermatozoïdes, matozoïdes à un grossissement x 6 600. La technique, appelée
les défauts les plus évidents pouvant être observés étaient : MSOME (Motile Sperm Organelle Morphology Examination),
têtes allongées (deux fois moins larges que la normale), têtes consiste à noter tous les détails morphologiques des sperma-
amorphes, têtes au “cou cassé” (l’axe de la tête dévié de 30 °C tozoïdes mobiles en temps réel. Ces détails sont définis par les
par rapport à l’axe de la pièce intermédiaire), les restes cyto- observations préalables faites en microscopie électronique à
plasmiques. Sur 1 667 cycles et 1 393 transferts d’embryons, transmission et à balayage.
ils ont constaté une baisse du taux de fécondation avec l’in- Dans cette technique MSOME, l’observation porte sur 6 par-
jection de spermatozoïdes anormaux : 60,7 % contre 71,7 % ties du spermatozoïde : acrosome, lamina post-acrosomique,
pour les spermatozoïdes normaux quelle que soit l’origine cou, mitochondries, flagelle, noyau. Pour le noyau, forme et
des spermatozoïdes utilisés (éjaculat, épididyme, testicule). taille sont notées, de même que l’aspect de la chromatine, et le
Alors qu’il n’a été observé aucune différence dans la morpho- nombre et la taille des vacuoles sont répertoriés. Un noyau est
logie des embryons obtenus à J2 ou J3, les taux de grossesses considéré comme normal s’il a une taille de 4,75 ± 0,28 µm sur
et d’implantation étaient significativement plus élevés avec les 3,28 ± 0,20 µm, et si les vacuoles occupent moins de 4 % de la
surface nucléaire. Sur une série de 100 patients pour lesquels
l’ICSI a été réalisée de façon conventionnelle, les spermato-
* Laboratoire d’Eylau, 55, rue Saint-Didier, 75116 Paris. AMP Eylau La Muette, 46-48, rue Ni- zoïdes non utilisés ont été soumis au MSOME (100 spermato-
colo, 75116 Paris. AMP Eylau Cherest, 5, rue Pierre-Cherest, 92200 Neuilly. zoïdes observés pour chaque patient). L’analyse des résultats

26 La Lettre du Gynécologue - n° 322 - mai 2007

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a b

a b

Figure 1. (a) Vacuoles x 400. (b) Vacuoles x 6 600.

montre que seul le pourcentage de noyaux spermatiques

normaux est corrélé au taux de fécondation et au taux de
[Link]
grossesse. Aucun des spermes contenant moins de 20 %
de noyaux normaux n’a permis d’obtenir une grossesse.
L’application préalable en ICSI de ce test à 24 couples en
échecs répétés de cycles de FIV et/ou ICSI (7,6 + 2,1 cycles)
a permis à Bartoov et al. (5) d’obtenir 14 grossesses (G)
sur 21 transferts (T) d’embryons, soit un taux de 58 % de
Figure 2. Tératozoospermie x 6 600.
G/T.
Berkovitz et al. (6) ont établi des critères de choix des
spermatozoïdes, le premier choix étant réalisé avec des sper- différences dans les taux de fécondation ni dans le taux d’em-
matozoïdes de taille normale et de chromatine normale (zéro bryons de qualité optimale (classification de Van Royen) [8].
ou une petite vacuole). Quatre critères de deuxième choix : En revanche, ils rapportent un taux de grossesse très abaissé,
des spermatozoïdes plus petits ou plus grands, mais avec une 18 % versus 50 %, et un taux de FCS très augmenté, 80 % versus
chromatine normale ; des spermatozoïdes de forme non ovale 7 % dans le groupe des spermatozoïdes vacuolés. Ils concluent
avec une chromatine normale ; des spermatozoïdes avec une que la micro-injection des spermatozoïdes vacuolés réduit le
forme anormale, mais une chromatine normale ; des sperma- taux de grossesses et augmente le taux de FCS précoces.
tozoïdes avec une chromatine anormale et de larges vacuoles.
Dans cette série, pour 70 patientes, le taux d’accouchements
par cycle et celui de fausses couches spontanées (FCS) étaient Résultats d’IMSI 2004 à 2006
respectivement de 52,8 % et 9,8 % après ICSI avec des sper-
matozoïdes de premier choix, contre 17,1 % et 33,3 % après Bartoov a donc mis au point l’IMSI (Intracytoplasmic Mor-
ICSI avec des spermatozoïdes de second choix. Dans ce même phologically Selected sperm Injection) et nous avons reproduit
groupe, 4 FCS concernaient des ICSI avec spermatozoïdes sa technique dans nos deux centres AMP Eylau (Cherest, la
contenant de grosses vacuoles. Dans une analyse rétrospec- Muette). Nous avons équipé un microscope inversé Olympus
tive, ces mêmes auteurs, en 2006 (7), ont comparé 28 cycles (IX 70) avec un contraste de Nomarski. On utilise un objec-
d’ICSI avec injection de spermatozoïdes de premier choix à tif 100 à immersion, lequel, avec le sélecteur de grossisse-
28 cycles d’ICSI avec injection de spermatozoïdes de forme ment (x 1,5) nous donne un grossissement de 150 fois sur
normale, mais avec de grosses vacuoles. Ils n’ont pas observé de le microscope. L’image obtenue au microscope est récupé-

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rée par une caméra Sony vidéo couleur de telle sorte que le nucleus and pregnancy rate of intracytoplasmic injection with morphologically
selected sperm. Hum Reprod 2005;20(1):185-90.
grossissement final sur la vidéo est de 6 600 fois. L’observa-
tion de spermes normaux, fécondants en FIV, nous a permis 7. Berkovitz, Eltes F, Ellenbogen A, Peer S, Feldberg D, Bartoov B. Does the pre-
sence of nuclear vacuoles in human sperm selected for ICSI affect pregnancy out-
de reconnaître des spermatozoïdes à tête normale. Puis nous come? Hum Reprod 2006;21(7):1787-90.
avons déjà pu observer une très grande variabilité dans le 8. Van Royen E, Mangelschots K, De Neubourg D et al. Characterization of
nombre et la taille des vacuoles nucléaires des spermatozoïdes a top quality embryo, a step towards single-embryo transfer. Hum Reprod
de patients d’ICSI. Le tri des spermatozoïdes par cette tech- 1999;14(9):2345-9.
nique a été utilisé pour les patients en échecs répétés d’ICSI, 9. Hazout A, Dumont-Hassan M, Junca A-M, Cohen-Bacrie P, Tesarik J. High-
pour les patients avec tératozoospermie élevée et polymorphe magnification ICSI overcomes paternal effect resistant to conventional ICSI.
portant. Cette technique a été utilisée pour les patients avec RBM on line 2006;12,1.
un taux élevé de fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes,
et aussi pour les couples ayant peu d’ovocytes. Dans les cas où Pour en savoir plus
aucun spermatozoïde à tête “normale” ne pourra être sélec- 10. Bartoov B, Fisher J, Eltes F, Langzam J, Lunenfeld B. A comparative mor-
tionné, elle permettra au couple de passer à l’IAD, à l’adoption phological analysis of abnormal human spermatozoa. In: Insler V, Bettendorf G
ou à l’arrêt des techniques d’AMP. (eds), Advances in Diagnosis and Treatment of Infertility. Amsterdam : Elsevier
Hazout et al. (9) ont montré parmi 72 patients répartis en trois 1981:355-73.
classes (< 30 %, 30-40 %, > 40 %), selon le pourcentage d’ADN 11. Bartoov B, Eltes F, Pansky M, Lederman H, Caspi E, Soffer Y. Estimating
fertility potential via semen analysis data. Hum Reprod 1993;8:65-70.
fragmenté par la méthode TUNEL et n’ayant eu aucune nais-
sance après plusieurs tentatives d’ICSI, des taux d’implanta- 12. Bartoov B, Eltes F, Pansky M, Langzam J, Reichart M, Soffer Y. Improved
diagnosis of male fertility potential via a combination of quantitative ultramor-
tion respectivement de 23,6 %, 17,4 % et 33,3 % et des taux de phology and routine semen analyses. Hum Reprod 1994;9:2069-75.
naissance de 18,9 %, 17,4 % et 28,6 %.
13. Bartoov B, Berkovitz A, Eltes F et al. Pregnancy rates are higher with intra-
Sur 262 ponctions nous avons obtenu 80 grossesses cliniques cytoplasmic morphologically selected sperm injection than with conventional
évolutives (30,5 % par ponction, 31,8 % par transfert). Dans intracytoplasmic injection. Fertil Steril 2003;80:1413-9.
441 ponctions pour échecs d’implantation, nous avons obtenu 14. Berkovitz A, Eltes F, Soffer Y et al. ART success and in vivo sperm cell se-
127 grossesses évolutives (28,8 % par ponctions, 29,7 % par lection depend on the ultramorphological status of spermatozoa. Andrologia
transfert). n
[Link] 1999;31:1-8.
15. Chemes EH, Rawe YV. Sperm pathology: a step beyond descriptive morpho-
logy. Origin, characterization and fertility potential of abnormal sperm pheno-
types in infertile men. Hum Reprod Update 2003;9:405-28.
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Med 2001;345: 1067-8. 22. Junca AM, Cohen-Bacrie P, Hazout A. ICSI can one select the spermato-
6. Berkovitz A, Eltes F, Yaari S et al. The morphological normalcy of the sperm zoids? J Gynecol Obstet Biol Reprod 2005;34(1-pt2):1831-4.

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