UNIVERSITÉ HASSAN I - SETTAT

Institut Supérieur des Sciences de la Santé

Mémoire pour l’obtention de

La licence Professionnelle

Spécialité : Technologue de Laboratoire Biomédical

Présenté et soutenu par

AHLAM BELKASSIOUIA ET MOUNA MEZGANI

Le 6 juillet 2021

LES BASES MOLECULAIRES DES EFFETS DE

L’HUILE D’ARGANE SUR LE METABOLISME AU
NIVEAU DU COEUR

Projet de fin d’étude présenté et soutenu à Settat le 6 juillet 2021, devant le jury composé de

Pr Loubna AMAHDAR Université Hassan I, ISSS, Settat, Maroc Président du jury et Examinateur

Pr Ibtissam YOULYOUZ Université Hassan I, ISSS, Settat, Maroc Examinateur

Pr Riad EL KEBBAJ Université Hassan I, ISSS, Settat, Maroc Encadrant Interne

Mme Habiba BOUCHAB Université Hassan I, Settat, Maroc Co-encadrante

Dédicace
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Dédicaces

Nous dédicaçons ce travail à :

A Nos chers parents

Aucune dédicace ne saurait exprimer nos respects, nos amours, nos profondes
considérations pour les sacrifices. C’est grâce à vos encouragements et vos prières tout au long
de nos études, que nous avons pu réaliser ce modeste travail. J’espère que votre bénédiction nos
‘accompagne toujours.

A tout membres de famille

Vous étiez toujours un magnifique modèle de labeur et de la persévérance, espérons que
vous trouvez dans ce travail, toutes nous reconnaissance et tout notre amour.

A nos ami(e)s

On vous dédie ce travail en témoignage de la forte amitié que nous unit, de l’attachement
et des souvenirs pendant lesquelles nous avons partagé des merveilleux moments, des
expériences, joies et des difficultés. On vous souhaite le bon courage et plus de succès.

A nos chers professeurs

Nous remercions tous nos enseignants dès le primaire à ce jour pour leurs disponibilités et
leurs efforts. Que ce travail soit le fruit de votre sincère accompagnement.
Remerciement
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Remerciement

A ALLAH

En préambule à rapport de projet de fin d’études nous remerciant ALLAH qui nous
aide, et nous donne la patience, et le courage durant ces langues années d’étude.

A notre encadrant

Nous adressons un grand remerciement à notre cher encadrant Monsieur le Pr. EL

KEBBAJ Riad, pour son enseignement, son encadrement, la qualité de ses conseils, et pour le
temps qu’il nous accordé lors de nos réunions et les bonnes conditions durant les trois années
de formation.

A Mlle BOUCHAB Habiba

Nos vifs remerciements s’adressent à Mlle Habiba BOUCHAB, pour la gentillesse, sa

fort, sa patience, ses précieux conseil et pour tout le temps qu’elle nous a consacré.

A tout le corps professoral et administratif

Nous adressons notre respect et considération à tous nos enseignants, et les membres de
l’administration de l’institut supérieure des sciences de la santé, et notre Directeur Monsieur
HILALI Abderraouf pour la richesse et la qualité de l’éducation et la veille particulière pour
nous assurer une formation actualisée dans les bonnes conditions.

Nous sommes fières de faire partie de votre institut.

Résumé
 L’huile d’argane, produite à partir des fruits d’arganier (argania spinosa) est considérée
comme l’huile comestible et cosmétique la plus chère au monde qui est aussi utilisée en
médecine traditionnelle. Par sa composition particulière saponifiable (les acides gras saturé et
les acides gras insaturé) et insaponifiables (les stérols, les tocophérols et les polyphénols), cette
huile s’est avérée d’avoir des propriétés antioxydantes avec une capacité à traiter plusieurs
maladies ainsi la capacité d’exclure le stress oxydatif.

Cependant, le stress oxydant est un déséquilibre pro-oxydant et antioxydant qui se traduit

par l’augmentation des radicaux libres tels que les espèces réactives de l’oxygène et de l’azote,
et/ou une diminution des antioxydants, ce déséquilibre entraine des dommages sur l’ADN, les
protéines et les lipides.

L’objectifs des travaux de notre étude a été d’explorer les bases moléculaires des effets
d’huile d’argane sur le métabolisme au niveau du cœur des souris. Une raison pour laquelle
nous avons réalisé une étude en traitant les effets d’ensemble des huiles (l’huile d’argane,
l’huile de graine de cactus et l’huile de colza) sur le métabolisme du cœur des souris affecté par
un stress oxydatif engendré par le LPS, en suivant l’activité enzymatique de quelque
antioxydant telle que le superoxyde de dismutase (SOD) et la catalase (CAT), et la
quantification du marqueur de stress oxydant le glutathion (GSH).

D’après notre étude, on a pu constater que les huiles n’ont pas un impact direct et
significatif sur l’activité enzymatique de la catalase, au niveau du métabolisme du cœur des
souris, soit en induisant le stress oxydatif ou non par le LPS. Pareil pour le marqueur de stress
GSH, les huiles n’ont pas un effet significatif contre le stress, sauf que l’effet d’huile d’argane
n’est encore conclusif, puisqu’on avait trouvé le taux de GSH des souris traitées par le LPS
inférieur à ceux traités par HA+LPS. Par contre, l’huile d’argane déclenche un effet augmentatif
de l’activité enzymatique de la SOD en présence du stress oxydant. Cependant, l’huile de graine
de cactus exerce le même effet, en absence de stress.

Pour conclure, l’huile d’argane et l’huile de graine de cactus sont capable de lutter contre
le stress oxydant induits par le LPS au niveau du cœur.

Mots-clés : l’huile d’argane, les antioxydants, le stress oxydant, le lipopolysaccharide et le

cœur.
Abstract
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Abstract

Argan oil, produced from the fruits of the argan tree (argania spinosa) is considered the
most expensive edible and cosmetic oil in the world which is also used in traditional medicine.
By its particular composition saponifiable (saturated fatty acids and unsaturated fatty acids) and
unsaponifiable (sterols, tocopherols and polyphenols), this oil has been found to have
antioxidant properties along with the ability to treat several diseases and the ability to rule out
an oxidative stress.

However, oxidative stress is a pro-oxidant and antioxidant imbalance which results in the
increase of free radicals such as reactive oxygen and nitrogen species, and / or a decrease in
antioxidants, this imbalance causes damage to DNA, proteins and lipids.

The aim of the work of our study was to explore the molecular basis of the effects of argan
oil on the heart metabolism of mice. A reason why we performed a study by treating the overall
effects of oils (argan oil, cactus seed oil, and rapeseed oil) on the heart metabolism of mice
affected by an oxidative stress generated by LPS, by monitoring the enzymatic activity of some
antioxidant such as superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT), and the quantification of
the oxidative stress marker glutathione (GSH).

According to our study, it was found that the oils do not have a direct and significant
impact on the enzymatic activity of catalase, at the level of the metabolism of the heart of mice,
either by inducing oxidative stress or not by the LPS. The same for the stress marker GSH, the
oils do not have a significant effect against stress, except that the effect of argan oil is not yet
conclusive, since we had found the level reached of GSH in mice treated by LPS lower than
those treated with HA + LPS. On the other hand, argan oil triggers an increasing effect of the
enzymatic activity of SOD in the presence of oxidative stress. However, cactus seed oil exerts
the same effect, in the absence of stress.

To conclude, argan oil and cactus seed oil are able to fight against oxidative stress induced
by LPS in the heart.
‫ملخص‬
‫‪A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI‬‬ ‫ملخص‬

‫يعتبر زيت األرك ان المنتج من ثمار شجرة األرك ان (أركانيا سبينوزا) أغلى زيت لألكل ومستحضرات التجميل في‬
‫العالم ويستخدم أي ضًا في الطب التقليدي‪ .‬بتكوينه الخاص‪ ،‬قابل للتصبن (األحماض الدهنية المشبعة واألحماض الدهنية غير‬
‫المشبعة) وغير القابل للتصبن (الستيروالت والتوكوفيرول والبوليفينول)‪ ،‬لقد ثبت أن لهذا الز يت خصائص مضادة لألكسدة‬
‫مع قدرته على عالج العديد من األمراض وكذلك قدرته على التخلص من التوتر التأكسدي‪.‬‬

‫فإن التوتر التأكسدي هو خلل مؤيد األكسدة ومضاد األكسدة م ما يؤدي إلى زيادة الجذور الحرة مثل األكسجين التفاعلي‬
‫وأنواع النيتروجين‪ ،‬و ‪ /‬أو انخفاض في مضادات األكسدة‪ ،‬وهذا الخلل يسبب تلف الحمض النووي والبروتينات والدهون‪.‬‬

‫كان الهدف من دراستنا هو استكشاف األساس الجزيئي لتأثيرات زيت األركان على التمثيل الغذائي في قلب الفئران‪.‬‬
‫أحد أسباب إجرائنا دراسة من خالل معالجة التأثيرات الكلية للزيوت (زيت األرغان وزيت بذور الصبار وزيت بذور اللفت)‬
‫على عملية التمثيل الغذائي لقلب الفئران المتأثرة التوتر التأكسدي الناتج عن عديد السكاريد الدهني ‪ ،‬من خالل مراقبة النشاط‬
‫األنزيمي لبعض مضادات األكسدة مثل ديسموتاز الفائق والكتالز‪ ،‬والتقدير الكمي لعالمة التوتر التأكسدي الجلوتاثيون‪.‬‬

‫وفقًا لدراستنا‪ ،‬فقد وجد أن الزيوت ليس لها تأثير مباشر وهام على النشاط األنزيمي للكاتاالز‪ ،‬على مستوى التمثيل‬
‫الغذائي لقلب الفئران‪ ،‬إما عن طريق إحداث التوتر التأكسدي أو عدمه بواسطة عديد السكاريد الدهني‪ .‬نفس الشيء بالنسبة‬
‫لعالمة التوتر الجلوتاثيون‪ ،‬فإن الزيوت ليس لها تأثير معنوي ضد التوتر‪ ،‬باستثناء أن تأثير زيت األركان لم يكن نهائيًا بعد‪،‬‬
‫حيث وجدنا أن مستوى الجلوتاثيون للفئران المعالجة بعديد السكاريد الدهني أقل من الواتي عولجن بزيت األركان مع عديد‬
‫السكاريد الدهني ‪.‬من ناحية أخرى‪ ،‬يؤدي زيت األركان إلى زيادة تأثي ر النشاط األنزيمي لـ ديسموتاز الفائق في وجود التوتر‬
‫التأكسدي‪ .‬ومع ذلك‪ ،‬فإن زيت بذور الصبار يعمل بنفس الطريقة دون إجهاد‪.‬‬

‫في الختام‪ ،‬زيت األركان وزيت بذور الصبار قادران على محاربة التوتر التأكسدي الناجم عن عديد السكاريد الدهني‬
‫في القلب‪.‬‬
Tables des matières
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Tables des matières

Dédicace
Remerciement
Résumé
Abstract
‫ملخص‬
Tables des matières
Liste des figures
Liste des tableaux
Liste des abréviations
Introduction Générale
Études Bibliographique

I. L’arganier ........................................................................................................... 26
1. Origine et localisation ........................................................................................ 26
2. L’intérêt d’arganier ............................................................................................ 27
II. Huile d’argane .................................................................................................... 28
1. Extraction ........................................................................................................... 28
2. Composition ....................................................................................................... 30
3. Comparaison entre les différentes huiles : argane, cactus et colza ................. 32
4. L’effet thérapeutique.......................................................................................... 34
III. Le stress oxydant................................................................................................ 35
1. Définition ............................................................................................................ 35
2. Les effets de stress oxydant sur les lipides, protéines, ADN .......................... 37
3. Maladies associées au stress oxydant ............................................................... 38
4. Les antioxydants ................................................................................................ 38
IV. Lipopolysaccharide (LPS) ................................................................................. 41
1. Structure.............................................................................................................. 41
2. Rôle de LPS ........................................................................................................ 42
3. LPS et inflammation .......................................................................................... 42
4. LPS et le stress oxydant ..................................................................................... 43
V. Le cœur ............................................................................................................... 44
1. L’anatomie du cœur ........................................................................................... 44
2. Fonctionnement du cœur ................................................................................... 45
3. Physiopathologie ................................................................................................ 46
Matériels et Méthodes
VI. Matériel d’étude ................................................................................................. 48
1. Les huiles ............................................................................................................ 48
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Tables des matières

2. Les échantillons.................................................................................................. 49
3. Evaluation du stress oxydant ............................................................................. 50
4. Analyse statistique ............................................................................................. 56
Résultats
VII. Le dosage des protéines ..................................................................................... 58
VIII. Mesure l’activité enzymatique des enzymes et dosage du marqueur de stress
60
1. Mesure de l’activité enzymatique des enzymes du stress ............................... 60
2. Dosage du marqueur de stress : GSH ............................................................... 64
Discussion générale
IX. L’effet de l’huile d’argane sur l’activité enzymatique de la catalase ............. 68
X. L’effet de l’huile d’argane sur l’activité enzymatique de la SOD .................. 69
XI. L’effet de l’huile d’argane sur le marqueur du stress oxydant : GSH ............ 70

Conclusion générale
Référence bibliographique
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Liste des figures

Liste des figures

A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Liste des figures

Figure 1: l'arbre d'arganier (Le360, 2021) ................................................................................ 26

Figure 2: les fruits oléagineux de l'arganier............................................................................... 26
Figure 3: la carte géographique de la localisation d'huile d'argane au Maroc....................... 27
Figure 4: les fruits, la graine et l'arganier.................................................................................. 28
Figure 5: la méthode traditionnelle effectuée par les femmes (viator, 2019) ........................... 29
Figure 6: la machine pour préparation d'huile d'argane ........................................................... 29
Figure 7: schéma simplifié de la fraction saponifiable .............................................................. 30
Figure 8: structure de stérols idéntifiés dans l'huile d'argane .................................................. 31
Figure 9: structure identifiée des tocophérols dans l'huile d'argane ........................................ 32
Figure 10: la déséquilibre prooxydant/antioxydant ................................................................... 36
Figure 11: la structure de lipopolysaccharide ............................................................................ 42
Figure 12: simplification du ROS et RNS dans l'activation des NF-KB induit par LPS et
dommages cellulaires(S & Am, 2002) ......................................................................................... 44
Figure 13: anatomie du cœur humain (Cours, 2009) ................................................................. 45
Figure 14: schéma simplifié fonctionnement du Cœur (Lauranne et al., s. d.)........................ 45
Figure 15: localisation géographique d'EFAS ........................................................................... 48
Figure 16: Le spectrophotomètre de laboratoire Sciences et Technologies de la Santé ......... 53
Figure 17 :la gamme étalon de la BSA ........................................................................................ 58
Figure 18 : la gamme étalon de BSA ........................................................................................... 59
Figure 19 : l'activité enzymatique de la catalase dans le cœur des souris ............................... 61
Figure 20 : la plaque de la catalase ............................................................................................ 62
Figure 21 : l'activité enzymatique dans le cœur des souris........................................................ 63
Figure 22 : la plaque de la SOD .................................................................................................. 63
Figure 23 : la courbe de la gamme étalon de GSH .................................................................... 64
Figure 24 : la plaque de la gamme étalon de GSH .................................................................... 65
Figure 25 : le taux de GSH dans le cœur des souris .................................................................. 66
Liste des tableaux
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Liste des tableaux

Tableau 1 : les compositions phénoliques d'huile d'argane (Khallouki & al, 2003) ............... 32
Tableau 2 : comparaison de la compostions des acides gras, des polyphénols, tocophérols et
des stérols d’huile d’argane ......................................................................................................... 33
Tableau 3 : traitement des souris selon chaque groupe ............................................................. 49
Tableau 4 : traitement des échantillons à traités ........................................................................ 50
Tableau 5: e protocole de cuve 1,3 ml unique au spectrophotomètre (TECAN) ...................... 52
Tableau 6 : le protocole de dosage des protéines à 750nm ....................................................... 52
Tableau 7 : le protocole du dosage de l'activité de la CAT ....................................................... 53
Tableau 8 : mélange réactionnel de la SOD de 200µl ............................................................... 54
Tableau 9 : protocole de la gamme étalon de GSH .................................................................... 55
Tableau 10 : protocole détirminatif de la composition de GSH dans les échantillons ............ 56
Tableau 11 : la quantité des protéines de chaque échantillons en µg....................................... 59
Liste des abréviations
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Liste des abréviations

ADN : acide désoxyribonucléique

BSA : sérumalbumine bovine

CAT : catalase

Cu, Zn-SOD : superoxyde de dismutase à cuivre-zinc

CuSO4 : sulfate de cuivre

EDTA : acide éthylène-diamine-tétra-acétique

ERO : espèces réactives de l’oxygène

ERN : espèces réactives de l’azote

FAO : oxydation des acides gras

GPX : glutathion de peroxydase

GR : glutathion réductase

GSH : glutathion réduit

GSSG : glutathion oxydé sous forme disulfite

GST : glutathione S-transférase

H2O2 : peroxyde d’hydrogène

HA : huile d’argane

HC : huile de colza

HGC : huile de grain de cactus

HO : radicaux hydroxyle

H2SO4: acide sulfurique

IKB : inhibiteur kappa B

IL: interleukine

KMnO4 : permanganate de potassium

LDL: low density lipoprotein

LPS : lipopolysaccharide

LXR : Récepteur X de foie

A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Liste des abréviations

MAP-kinases : protéines kinases activateur des mitogènes

MDA : malondialdéhyde

MnSOD : superoxyde de dismutase de manganèse

NaOH : hydroxyde de sodium

Na2CO3: carbonate de sodium

NBT: nitrobleu de titrazolium

NF-B : facteur nucléaire de cellules B

NFKB: nuclear factor kappa B

PGC : cellules germinales primordiales

PPAR : Le récepteur activé par les proliférateurs de peroxysomes

O2: hoxygène

O2- : anion superoxyde

ROOH : hydropyroxyde

SOD : superoxyde de dismutase

TCA : acide trichloracétique

TLR : récepteur de type toll

TNF : facteur de la nécrose tumoral

UA : acide urique
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Liste des abréviations
Introduction Générale
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Introduction Générale

Le Maroc en tant que nation parmi les pays du tiers monde en développement n'est pas
seulement connu pour sa richesse en ressources naturelles telles que le phosphate en prenant la
troisième place dans sa production et étant le numéro un pour l'exporter dans le monde, avec le
carbone en étant le 15eme pour le produire et le 7eme pour l'exporter, mais aussi pour son
abondance dans les ressources agricoles et forestières tout comme dans la production des
légumes et des fruits, également dans la production de plusieurs huiles comme l'huile d'olive,
l'huile de cactus et l'huile d'argane.

Huile d’argane est extrait de l’arganier qui est un arbre endémique au Maroc avec une
superficie de 871 210 Ha appartenant à la famille des sapotacées, poussant dans le Sud-ouest
du Maroc. Cette huile au tant qu’un produit nutritionnel et cosmétique, est utilisé comme un
traitement naturel dans la médecine traditionnelle grâce à ses effets bénéfiques dans la
prévention des maladies cardiovasculaires, de diabète, de cancer de prostate, d’hypertension
artérielle, des maladies de peau aussi dans la prévention du stress oxydatif due à ses composés
antioxydatifs.

Le stress oxydatif résultant d’un déséquilibre prooxydant/antioxydant est en faveur de la

formation des espèces réactifs d’oxygène (ERO) tels que le peroxyde d’hydrogène (H2O2),
l’anion superoxyde (O2-) et le radical hydroxyle (OH-), qui entrainent aux dommages
cellulaires. Ce stress oxydatif cible principalement les protéines, les lipides et l’ADN.

L’objectif de notre recherche est l’étude des effets protecteurs d’huile d’argane sur le
stress oxydatif induit par le LPS (in vivo) chez les souris au niveau du cœur.

24
Études Bibliographique
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI études Bibliographique

I. L’arganier

L'arganier est l'une des récoltes oléagineuses les plus importantes du monde, produisant
l'une des huiles les plus chères sur le marché.

1. Origine et localisation

Figure 1: l'arbre d'arganier (Le360, 2021)

Figure 2: les fruits oléagineux de l'arganier

L’arganier ou (Arganier spinosa L. Skeels) appartenant à la famille des sapotacées est

présent dans une zone restreinte du sud-ouest marocain, caractérisé par une faible disponibilité
en eau et une forte demande d’évapotranspiration (Chakhchar et al., 2017). Cet arbre couvre

26
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI études Bibliographique

environ 17% de la forêt total du Maroc avec 871.210 ha (HCEFLCD, s. d.). Elle pousse
essentiellement dans les provinces de Taroudant, 360.000 ha ; Tiznit, 140.000 ha ; Essaouira,
130.000 ha ; Chtouka-Aït Baha, 90.000 ha ; Agadir, 37.000 ha ; Inezgane-Aït Melloul, 13.000
ha (Khallouki et al., 2017) et Aklim, 170 ha (K. et al., 2015).

L’arganier

Figure 3: la carte géographique de la localisation d'huile d'argane au Maroc

(Carte de Maroc - Photo de Maroc - ibntoumert - science de la vie et de la terre, s. d.)

2. L’intérêt d’arganier
En 2021, l’assemblée générale des Nations unies a proclamé le 10 mai journée
internationale de l’arganier(Nations, 2021), comme il était déclaré en 2007 par l’Organisation
des nations unies que cet arbre est l’espèce protégé pour l’éducation, la science et la culture
pour son importance écologique et socio-économique qu’il a fournie (Venegas et al., 2011).

27
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI études Bibliographique

Comme intérêt écologique, l’arbre d’arganier est utilisé pour la protection du sol contre les
érosions hydrique et éolienne, une barrière naturelle face à l’avancée du désert pour sud du
Maroc, utilisé pour participer dans des conditions climatiques particulièrement défavorables
(Charrouf & Guillaume, 1999). Pour l’intérêt socio-économique, L’arbre d’arganier est
considéré comme une source de revenus ou d’alimentation. Par cet arbre on peut produire le
fourrage, la fameuse huile d’argane, aussi on peut utiliser les bois pour le chauffage et la
production des feuilles. Il est utilisé donc comme une source d’alimentation pour l’homme et
les animaux, aussi une source de revenu important pour sud-ouest marocain (Majourhat et al.,
2007).

L’intérêt principale de cet arbre d’arganier est l’extraction d’huile d’argane à partir de ses
fruits oléagineux.

II. Huile d’argane

L'huile d'argane prévenant de l’arganier est un ingrédient traditionnel du « régime amazigh

» marocain, fournissant près de 25% de l'apport total en graisses alimentaires aux
consommateurs indigènes.

1. Extraction
L’huile d’argane est extraite à partir des amandes écrasées du fruit d’arganier. Son
extraction se fait soit par la méthode traditionnelle, soit par la méthode mécanique ou par
solvants industrielles.

Figure
Figure 4:
4 :les
lesfruits,
fruits,lalagraine
graineetetl'arganier
l'arganier
(Liberomondo, 2010)

28
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI études Bibliographique

1.1 Extraction traditionnelle

La méthode traditionnelle d’extraction d’huile d’argane nécessite de longues périodes de

travail manuel lourd de la part des femmes. Cette méthode est réalisée par plusieurs étapes, elles
commencent par la collecte des fruits, et leurs dépulpage, puis le concassement des amendons
pressier à l’aide d’une meule libérant une pate qui se mélange avec l’eau chaude puis se malaxe
par les femmes pour obtenir l’huile d’argan (Charrouf & Guillaume, 1999).

FigureFigure
5: la méthode
5 : la méthode
traditionnelle
traditionnelle
effectuée
effectuée
par les femmes
par les femmes
(viator, 2019)

1.2 Extraction mécanique

La méthode mécanique est réalisée dans la coopérative, presque toutes les étapes sont
effectuées par les machines sauf le concassage est le manuel, concernant le dépulpage des fruits,
il est réalisé par « la pulpeuse-gratteuse ». La torréfaction est assurée par les torréfacteurs à gaz
et l’homogénéisation du mélange est effectué par la machine de presse.

Figure
Figure6:
6:la
la machine
machinepour
pour préparation
préparation d'huile
d'huiled'argane
d'argane
(The organic oil, s. d.)

29
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI études Bibliographique

1.3 Extraction par solvants industrielles

Cette méthode est basée sur l’extraction d’huile d’argane avec un solvant volatil lipophile,
la raison laquelle utilisé dans la domaine cosmétique et l’huile est obtenue rendement de 50-
55% (Charrouf & Guillaume, 1999).

2. Composition
L’huile d’argane se caractérise par sa composition particulière. Il est composé d’une
fraction saponifiable riche en acides gras saturés et insaturés, et d’une fraction insaponifiable
qui contient les tocophérols, les stérols (Kharrassi & El Kebbaj, 2018) et les polyphénols,
participant à ses propriétés antioxydants. Cette huile possède aussi d’autres composés à faible
quantité, comme les squalènes et les caroténoïdes sous la forme des xanthophylles (Khallouki
& al, 2003) qui contribuent à la couleur rougeâtre d’huile (Rahmani, 2005 ; Charrouf and
Guillaume, 2002).

2.1 Fraction saponifiable

Les profils des acides gras insaturés à longue chaîne dans l'huile d'argane sont prédominés
par l’acide oléique à 45,90%, suivi par l'acide linoléique à 34,10%. En général, pour les acides
gras saturés à longue chaîne, l'acide palmitique prédomine avec des quantités mineures d'acide
stéarique, représentant respectivement 11,80% et 6% du total des acides gras de l'huile (El
Kharrassi et al., 2017).

L'acide palmitique
(11,80%)

Les acides gras L'acide stéarique

saturés (17,58%) (6%)

L'acide palmitoléique
La fraction (0,18%)
saponifiable
(97,29%) L'acide oléique
(45,90%)

Les acides gras

L'acide linoléique
insaturés
(34,1%)
(79,71%)

l'acide linolénique
(0,13%)

Figure 7: schéma simplifié de la fraction saponifiable

30
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI études Bibliographique

2.2 Fraction insaponifiable

La fraction insaponifiable représente approximativement 1% de la totalité de l’huile, mais

qui reste suffisante pour attribuer à cette huile des vertus thérapeutiques intéressantes (Bennani
et al., 2007). Elle est riche en antioxydants tels que les stérols (Gharby et al., 2011) ; (El
Kharrassi et al., 2014), les tocophérols (Gharby et al., 2011) ; (Matthäusa et al., 2010) et les
polyphénols (Khallouki & al, 2003).

➢ Stérols

Les phytostérols sont des composants communs des légumineuses, des céréales et des
huiles végétales, graines et noix (McClements et al., 2007) ; (Rao & Janezic, 1992). Ils sont
bien connus pour leur effet hypocholestérolémiant chez l'homme (Calpe-Berdiel et al., 2005).
L’analyse qualitative et quantitative de la fraction insaponifiable a révélé la présence de 5 types
de stérols (figure 8) dont les deux majoritaires sont le schotténol et le spinastérol (El Kharrassi
et al., 2017).

Figure 8: structure de stérols idéntifiés dans l'huile d'argane

31
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI études Bibliographique

➢ Tocophérols
Les tocophérols (vitamine E) sont une série d’antioxydants liposolubles (α-tocophérol, β-
tocophérol, γ–tocophérol et le δ –tocophérol) obtenu à partir d'huiles végétales (Serrano et al.,
2013) ; (Hensley et al., 2004).

Les formes des tocophérols R1 R2

Α CH 3 CH 3
Β CH3 H
Γ H CH3
Δ H H
Figure 9: structure identifiée des tocophérols dans l'huile d'argane

➢ Polyphénols
Les polyphénols sont des métabolites bioactifs qui ont une activité antioxydante. Ils sont
présents dans l’huile d’argan en 4 formes (tableau 1).
Tableau 1 : les compositions phénoliques d'huile d'argane (Khallouki & al, 2003)
Composition phénoliques µg/kg d’Huile d’argane
Acide Vanillique 67
Acide Syringique 37
Acide Férulique 3174
Tyrosol 12
Total 3263

3. Comparaison entre les différentes huiles : argane, cactus et colza

L’arganier couvre environ 17% de la forêt total du Maroc avec 871.210 ha (HCEFLCD,
s. d.), tandis que les plantes de cactus occupent une superficie de 100000Ha au Maroc (Taoufik
et al., 2015).

La fraction insaponifiable dans l’huile d’argane contient 20 % de stérols, dont le schotténol

et le spinastérol sont les majoritaires (42.32 et 30.35%, respectivement) qui sont présents dans
l’huile de cactus avec une très faible quantité (Kharrassi & El Kebbaj, 2018) et de colza
(CODEX 2003).

32
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI études Bibliographique

L’acide férulique présente la fraction phénolique dominante de l’huile d’argan (Kamal et

al., 2019),alors qu’il est inexcitable dans l’huile de cactus (Benayad et al., 2014).

Le tocophérol majeur de l'huile d’argane est le gamma-tocophérol, représentant en

moyenne 89,98 % des tocophérols totaux, comparé à l'huile de cactus représentant seulement
58.07% des tocophérols totaux (Kharrassi & El Kebbaj, 2018).

Les principaux acides gras de l'huile de cactus sont l'acide oléique et l'acide linoléique
représentant 18,48 à 62,99 % des acides gras totaux. Alors que le principal acide gras de l'huile
d'argan est l'acide oléique représentant 45,90%, suivi par l'acide linoléique représentant 34,10%
des acides gras totaux (Kharrassi & El Kebbaj, 2018).

Tableau 2 : comparaison de la compostions des acides gras, des polyphénols, tocophérols et des stérols d’huile
d’argane

Huile d’argan Huile de cactus Huile de colza

Acides gras (Kharrassi & El (Kharrassi & El (CODEX 2003)

Kebbaj, 2018) Kebbaj, 2018) (%)
(%) (%)
Palmitique C16 :0 11,80 12,10 4-5
Palmitoléique C16 :1 0,18 0,73 < 0,6
Stéarique C18 :0 6 3,41 1-2
Oléique C18 :1 45,90 18,48 55-62
Linoléique C18 :2 34,10 62,99 18-22
Linolénique C18 :3 0,13 0,25
Polyphénoles (Kamal et al., 2019) (Benayad et al., (Song & Li, 2019)
(mg/kg) 2014) (µg/g)
Acide Vanillique 1,73 - <LOQ
Acide Syringique 3,91 - 0,05-0,43
Acide Férulique 4,10 - 0,05-1,02
Tyrosol - -
Tocophérols (Kharrassi & El (Kharrassi & El (Codex 2003)
Kebbaj, 2018) Kebbaj, 2018) (mg /kg)
(%) (%)
α-tocophérol 5,86 1,27 < 0,2
β-tocophérol 0,12 36 4-5
γ-tocophérol 89,98 58,07 < 0,6
δ- tocophérol 4,04 3,77 1-2
Stérols (Kharrassi & El (Kharrassi & El (Codex, 2003)
Kebbaj, 2018) Kebbaj, 2018) (%)
(%) (%)
Schotténol 42,32 0,23 -
Spinastérol 30,35 0,84 -
δ-8,22-Stigmastadiene-3β-ol 0,42 -
δ 7-Stigmasténol 4,52 1,19

33
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI études Bibliographique

Campestérol 0,38 0,56 34,4

Ces dernières années, l'intérêt porté à l'huile d'argane a augmenté au vu de ses effets
bénéfiques sur la santé humaine.

4. L’effet thérapeutique
Récemment, il a été démontré que l'effet préventif de l'huile d'argane comprend la
prévention contre les maladies cardiovasculaires, le cancer de prostate, le diabète et le stress
oxydant engendré par LPS.

4.1 Prévention contre les maladies cardiovasculaires

L’huile d’argane est riche en composés mineurs tels que des composés phénoliques, stérols
et des tocophérols (Kharrassi & El Kebbaj, 2018). Ces compositions sont connues pour leur
effets antioxydants, en ce qui concerne la prévention des risques cardiovasculaires. En effet, le
taux de cholestérol LDL plasmatique est significativement bas chez les consommateurs d’huile
d’argane vierge par rapports aux non consommateur vivant dans le sud-ouest du Maroc. Aussi
la consommation de cet huile assure un taux plasmatique plus élevée en vitamine E et diminue
50% d’hypertension artérielle (Drissi et al., 2004). L’étude de Drissi a montré pour la première
fois que la consommation d’huile d’argan pourrait réduire les facteurs de risque lipidiques des
maladies cardiovasculaire chez les humains (Drissi et al., 2004).

Les résultats d’étude de Berrougui et al effectuée sur les rats qui alimentent l’huile
d’argane, montre des diminutions observées de 30.76% du taux de triglycéride, 36.67% du taux
cholestérol, 67.70% pour LDL et 12.70% de poids corporels (Berrougui et al., 2003).

4.2 Prévention du cancer

Les compositions d’huile d’argane sont considérées comme moyen pour traiter les cancers
comme le cancer prostate associé au régime alimentaire. Ces compositions ont un effet
antiprolifératif et pro-apoptotique dans les lignes cellulaire cancéreuse prostatique. Par ailleurs,
les polyphénols possèdent un effet antiprolifératif contre les trois lignes des cellules
prostatiques humaines (PC3, DU145 et LNaP)(Drissi et al., 2006).

4.3 Prévention du diabète

Jusqu’à maintenant il n’y a pas des études réalisées pour évaluer l’effet bénéfique d’huile
d’argane sur le diabète chez les hommes, il y a juste des études sur les animaux. Cependant,

34
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI études Bibliographique

l’étude de El Midaoui et al, et plus récemment en 2017 de Riad El Kebbaj et Soufiane El

Kamouni a montré que les souris traitées avec l’huile d’argane par rapport au contrôle (traitées
avec une alimentation normale) ont présenté une réduction de la glycémie (-22%), comparées
avec ceux traité aux LPS par rapport au contrôle qui montrent une augmentation de la glycémie
circulante (+59 %). Ce qui indique que l’huile d’argane induit un effet réducteur au niveau de
la glycémie (El Kamouni et al., 2017a), en constatant qu’il est antidiabétique chez les animaux
(El Midaoui et al., 2016).

4.4 Prévention contre stress oxydant et les effets de LPS

Plusieurs études ont montré que l’huile d’argane améliore le statut antioxydant, en raison
de sa richesse en composé de polyphénols qui est capable d'atténuer les blessures oxydatives
grâce à des mécanismes de piégeage des radicaux libres (El Kamouni et al., 2017a).

Non seulement la supplémentation en huile d'argane n'a pas d'association avec des signes
histologiques d'hépatotoxicité, mais en plus, elle annule ceux induits par le LPS, car l'un de ses
bénéfices est la forte activation hépatique de l'expression du gène Il-4 (El Kamouni et al.,
2017a), qui est responsable des effets inhibiteurs sur l'expression de cytokines pro-
inflammatoires (Li et al., 2012). Aussi la prévention de la régulation négative de la commutation
métabolique entre le glucose et l'oxydation des acides gras induite par les endotoxines (El
Kebbaj et al., 2015).

Aussi Il a été démontré qu'un régime enrichi en huile d'argane prévient l'hyperlipidémie
induite par le LPS en augmentant l'expression hépatique du récepteur nucléaire (Dabbou et al.,
2011).

Par conséquent, l'huile d’argane, en tant qu'apport nutritionnel, pourrait avoir une action
préventive non seulement sur l'homéostasie lipidique perturbée, mais également sur l'état
inflammatoire et le stress oxydatif par des mécanismes de piégeage des radicaux libres formés
(El Kamouni et al., 2017a).

III. Le stress oxydant

1. Définition
Le stress oxydatif implique un déséquilibre entre la production ou bien la neutralisation des
radicaux libres liés à l'oxygène et le système de défense antioxydant. En conséquence, il y a une

35
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI études Bibliographique

augmentation des effets délétères de ces radicaux sur les fonctions cellulaires (Finaud et al.,
2006).

Anti-
Oxydants
Oxydants
Homéostasie

= Maintenance des cellules saines

= Dommages cellulaires et éventuellement = Défense de l'hôte défectueuse, fonction

la mort cellulaire, la maladie, le physiologique altérée
vieillissement…
Figure 10: la déséquilibre prooxydant/antioxydant

Les radicaux libres ou les espèces réactives d’oxygène (ERO) et d’azote (ERN)
représentent une classe des molécules réactives qui sont continuellement formée par des
réactions d’oxydation dans des cellules vivantes au cours de processus métabolique normaux
par des réactions enzymatiques et non-enzymatiques. Ces radicaux libres sont définis comme
des espèces chimiques indépendantes avec un ou plusieurs électrons non appariés, ils sont
hautement réactifs à la recherche d’un autre électron non apparié, exemple : l’hydroxyle (OH-
), l’anion de superoxyde le moins réactifs (O2-), les radicaux d’oxyde nitrique (NON-) et les de
dioxyde d’azote (NO2-). Lorsque deux électrons non appariés réagissent l’un avec l’autre pour
former une liaison covalente et une nouvelle molécule non radicale est formée. Cependant, les
radicaux libres attaquent des molécules non radicales résultant en une nouvelle molécules de
radicale (secondaire), amorçant ainsi une réaction en chaine. Cette réaction en chaine des
radicaux libres primaires et secondaires conduit finalement à des dommages oxydatifs de
plusieurs tissus et organes, exemple de radicaux secondaires sont le peroxyde d’hydrogène
(H2O2), l’azone (O3), l’oxygène pur (O2), l’acide hypochloreux (HCLO), l’acide nitreux
(HNO2), le trioxyde de dénitrogène (N2O3), le peroxynitrite (ONOO) et peroxydes lipidiques
(Daenen et al., 2019a).

Plusieurs produits finaux d’oxydation sont utilisés pour évaluer l’état redox ; ce sont des
produits finaux de peroxydation lipidique, de dommage à l’ADN ou peroxydation lipidiques.

36
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI études Bibliographique

2. Les effets de stress oxydant sur les lipides, protéines, ADN

Le stress oxydatif quel que soit son inducteur cible principalement les lipides, les protéines
et l’ADN en les peroxydant, oxydant et les endommageant.

➢ Oxydation et peroxydation des lipides

Les ERO initient l'oxydation des lipoprotéines, en particulier l'oxydation des lipoprotéines
de basse densité (LDL). Cette oxydation dépend de la capacité antioxydante du sang. Les ROS
ont également la capacité d'oxyder les acides gras libres polyinsaturés, qui participent à la
constitution de la membrane cellulaire. Cette réaction initie la peroxydation lipidique, une
réaction en chaîne qui produit d'autres radicaux libres tels que ROO- ou ROOH- et des
substances telles que les diènes conjugués ou le malondialdéhyde (MDA). La peroxydation
lipidique modifie la fluidité des membranes cellulaires, réduit la capacité à maintenir un
gradient de concentration équilibré (Finaud et al., 2006).

➢ Oxydation des protéines

Les ROS peuvent également oxyder le sang et les protéines structurelles et inhiber le
système protéolytique. Durant l’oxydation, les protéines peuvent perdre des acides aminés ou
se fragmenter. Ces réactions entraînent une altération de protéines structurelles ou altération
des fonctions enzymatiques. L'oxydation des protéines et des acides aminés s'accompagne
d'augmentations globales du niveau relatif des groupes carbonyle des protéines et des acides
aminés oxydés, qui sont utilisés comme indices généraux pour l'apparition de dommages
oxydatifs. L'oxydation des protéines peut être la conséquence d'une inflammation, d'un exercice
physique ou d'une reperfusion d'ischémie. Les protéines oxydées sont catabolisées pour
reformer les acides aminés mais les sous-produits carbonylés ne peuvent pas entrer dans ce
processus. Par conséquent, ils induisent un blocage de la protéolyse et l’accumulation de
protéines oxydées. Par conséquent, le renouvellement des protéines, la transcription génétique
et l'intégrité cellulaire sont réduites sous l'action des ERO. Les ERO ont également la capacité
de modifier le système lysosomal et les protéasomes, deux voies principales par lesquelles les
protéines sont dégradées (Finaud et al., 2006).

➢ Dommages à l'ADN

Les ERO sont également connus par leur provoquement des ruptures de brins d'ADN et
des dommages à la réparation des bases. Chaque partie de l'ADN est susceptible d'être attaquée
par les ERO. En conséquence, l'oxydation de l'ADN peut provoquer une mutagenèse et il est
un contributeur majeur au cancer humain et au vieillissement cellulaire. Différentes sources
37
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI études Bibliographique

majeures de dommages à l'ADN ont été trouvées en raison du tabagisme et de l'inflammation

chronique (Finaud et al., 2006).

En 2021, une étude a montré que les dommages à l'ADN induits par la surcharge en fer
ont été restaurés à des valeurs de contrôle après un traitement avec de l'huile d’argane, ce qui
suggère qu'il a un effet protecteur (Bouchab et al., 2021).

3. Maladies associées au stress oxydant

Le stress oxydant est considéré comme une cause de plusieurs pathologies. Cependant, les
principale causes de décès chez les patients atteints d’insuffisance rénale chronique, sont liées
à une augmentation de stress oxydant (Daenen et al., 2019b). Le stress oxydant joue un rôle
majeur dans les lésions endothéliales dans la pathologie de l’hypertension, le développement
des maladies coronariennes, comme les maladies cardiovasculaires, les maladies auto-
immunes, cancer, les maladies neurodégénératif. Le stress oxydant est aussi liée à
l’inflammation (Masuda et al., 2017). Par ailleurs, les ERO jouent un rôle important dans la
physiopathologie de l’hypertension, dysfonctionnement rénale et les lésions vasculaires (Sinha
& Dabla, 2015).

Pour se débarrasser de ce stress oxydatif, l’intervention du système de défence oxydatif est

mise en jeu.

4. Les antioxydants
Un groupe étendue efficace d’agents protecteurs et des mécanismes de défense,
collectivement appelé système de défense antioxydant (ADS), agit pour réguler les réactions
oxydatives. Et cet ADS à rupture de chaine élimine les ROS et comprend deux groupes :

➢ Les antioxydants enzymatiques

➢ Les antioxydants non-enzymatiques

4.1 Les antioxydants enzymatiques

Les antioxydants enzymatiques sont caractérisés par les superoxydes dismutases (SOD)
qui détoxifient les ions superoxydes, la catalase (CAT), qui traite le peroxyde d’hydrogène
(H2O2) et le glutathion peroxydase (GPX) qui détoxifie les peroxydes cellulaires.

38
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI études Bibliographique

➢ Superoxyde dismutase (SOD) :

Les SOD sont obtenues à partir de la famille des métalloenzymes. On distingue différentes
isoformes qui n’ont pas la même structure, cofacteurs et localisation (Cu/Zn-SOD sur le site
actif, Mn-SOD, Fe-SOD et SOD dans le milieu extracellulaire) (Fridovich, 1995).

Cu/Zn-SOD, se trouve dans la majorité des types cellulaires dans le cytoplasme. Les ions
Cu2+ Zn2+ aident à maintenir l’activité et la stabilité de la molécule. Par ailleurs, Mn-SOD est
présent dans le cytosol et la mitochondrie des cellules eucaryotes. Pour Fe-SOD et SOD ils se
trouvent dans le milieu extracellulaire chez les plantes (Fridovich, 1995).

La SOD peut catalyser le superoxyde dans l’oxygène et le peroxyde d’hydrogène. La SOD

semble être la première ligne de défense des radicaux libres dérivés de l’oxygène et peut être
rapidement induit dans certaines conditions lorsqu’exposés au stress oxydatif (He et al., 2017).

O2- + O2- + 2H+ H2O2 + O2

➢ Catalase (CAT) :
La catalase est composée de trois groupes, le premier et le deuxième contiennent des
enzymes contenant de l’hème. Tandis que le troisième contenant de non-hème, la catalase de
manganèse (Zamocky et al., 2008). La catalase (CAT) catalyse la décomposition du H2O2 en
H2O et en O2 (Amir Aslani & Ghobadi, 2016). Elle a deux activités enzymatiques selon la
concentration de H2O2, si la concentration de ce dernier est élevée, la CAT agit catalytiquement,
en éliminant H2O2 en formant H2O et O2. Cependant, à une faible concentration de H2O2 et en
présence d’un hydrogène approprié par exemple ; l’éthanol, le méthanol et le phénol, Elle agit
d’une manière péroxydique, en éliminant H2O2 mais en oxydant son substrat (réaction
peroxydé) (Ali et al., 2020).

H2O2+ H2O2 2H2O+ O2

➢ Glutathion peroxydase :

Le glutathion peroxydase est une enzyme extracellulaire, elle est dépendante du sélénium
avec une sélénocystéine codé par le codon opale TGA. Dans les tissus mammifères il y a quatre
types principaux de sélénium des isozymes GPX dépendant sont GPX classique ( GPX1), GPX
gastro-intestinal (GPX2), plasma GPX (GPX3) et phospholipide GPX (PHGPX4 ou GPX4)
(Ali et al., 2020).

39
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI études Bibliographique

Les isoenzymes de le glutathion peroxydase catalysent la réduction de H2O2 ou hydro

peroxydes organiques à l’eau utilisant du glutathion réduit GSH comme donneur d’hydrogène,
consommée de deux molécules de GSH (Margis et al., 2008).

H2O2+ 2GSH GS-SG+ 2H2O

4.2 Les antioxydants non-enzymatique

Les antioxydants non-enzymatiques ou les antioxydants à poids moléculaire faible sont

considérés comme des sources exogènes et endogènes. Ils sont caractérisés essentiellement
par le glutathion, les vitamines C et E, les caroténoïdes et l’acide urique.

➢ Le glutathion

L'organisme possède de multiples défenses antioxydantes, le GSH semble

particulièrement important. Cet antioxydant appelé glutathion protège les cellules du stress
oxydatif en piégeant les radicaux libres. Il se converti en GSSG ou GSSCy qui est réduit en
GSH par l'activité enzymatique de la glutathion réductase GR.

GSH

GRd

GSSG

La capacité de détoxification du GSH est directement liée à son groupe thiol réduit.
L'activité enzymatique des glutathion-peroxydases et des glutathion-transférases dépend
également du groupe thiol réduit du GSH. Le GSH et d'autres thiols réduits sont importants
pour la capacité du corps à résister au stress oxydant. Il a été postulé que des taux réduits de
GSH réduit seraient un marqueur d'une sensibilité accrue aux lésions oxydantes et
indiqueraient également un épuisement des réserves dû au stress oxydatif (Singh, 2002). Le
ratio GSH/GSSG s’agit comme un bon marqueur de la peroxydation lipidique (J & B, 2019).

40
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI études Bibliographique

➢ La vitamine E et la vitamine C :
La vitamine E est composée d’un groupe qui contient huit analogues (α- β-γ-δ-tocophérol
et α- β-γ-δ-tocotriénols). Ces analogues partagent l’activité antioxydante. Elle a la capacité
d’éliminer les ROO et stopper la propagation de la peroxydation lipidique (Herrera & Barbas,
2001).

La vitamine C agit comme une molécule soluble dans l’eau. Elle est synthétisée par les
plantes et certains animaux. Elle réagit avec tous les ERO réduisant la peroxydation lipidique
ainsi les dommages aux protéines et à l’ADN (Carr & Frei, 1999).
➢ Les caroténoïdes :
Les caroténoïdes sont obtenus à partir des organismes photoautotrophes. Ils sont eux-
mêmes régénéré par la vitamine C. Les caroténoïdes ont une activité antioxydante et ils ont la
capacité de réagir avec les peroxydations lipidiques et avec les radicaux libres.
➢ Acide urique :
Acide urique (UA) a une grande activité antioxydante avec une capacité de piéger les
radicaux libres. Il agit comme une source qui engendre l’oxydation de l’hypoxanthine et de la
xanthine par la xanthine oxydase et la déshydrogénase (Waring et al., 2003).

L’appauvrissement des antioxydants comme la superoxyde de dismutase (SOD) et la

glutathion ( GSH) sont déclenché par l’injection de LPS (Yang et al., 2020).

IV. Lipopolysaccharide (LPS)

1. Structure

Les bactéries gram négatif se constituent de deux membranes ; membrane interne et

membrane externe, et la dernière couche de la membrane externe est composé des
lipopolysaccharides.

41
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI études Bibliographique

Le Lipopolysaccharide est le composant non protéique qui est constitué des trois parties :
le lipide A, noyau et l’antigène O.

Figure11:
Figure 11:lalastructure
structuredede
lipopolysaccharide
lipopolysaccharide

2. Rôle de LPS
Les LPS jouent un rôle important dans la pathogénèse des infections bactériennes. Cette
pathogénie est essentiellement due par : le lipide A et l’antigène O.

➢ Le lipide A est la partie toxique et endotoxine qui est capable d’induire le même effet
que le LPS complet. Il est responsable de l’induction de la réponse immunitaire non
spécifique.

➢ L’antigène O influence la relation hôte-bactérie à différents niveaux en assurant la

résistance à l’action du complément, la résistance à la phagocytose et l’adhérence aux
tissus de l’hôte.

3. LPS et inflammation
LPS est une endotoxine qui entraine l’inflammation dans des nombreux organes, et qui
induit plusieurs signes cliniques comme la fièvre, l’agrégation des hématies et la pression
artérielle. LPS est responsable de la libération des cytokines inflammatoires, y compris
l’interleukine IL-6, IL-1 β et le facteur de nécrose tumorale TNF- α, par la liaison au récepteur
4 et l’activation des voies de signalisation inflammatoire (Kono et al., 2009a).

42
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI études Bibliographique

➢ Le récepteur TLR4 avec LPS :

TLR4 est le récepteur qui appartient à la famille de TLR. La protéine adaptative (MD2) ou
l’antigène lymphocytaire 96 se lie directement avec LPS et reconnait la partie lipophile ou lipide
A en formant un complexe discret, qui s’associe d’une manière non covalente à TLR4 pour
former l’hétérodimère activé final (LPS/MD2/TLR4) qui à son tour déclenche le signal
intracellulaire (Kuzmich et al., 2017).

4. LPS et le stress oxydant

Le LPS génère une puissante réponse inflammatoire des cytokines et altère gravement le
métabolisme des lipides, induisant une diminution des lipoprotéines sériques à haute densité
(HDL), augmentation des taux d'acides gras libres dans le plasma et de triglycérides
(Khovidhunkit et al., 2004). Ces changements métaboliques sont principalement attribuables à
une synthèse augmentée des triglycérides hépatiques et à une lipolyse du tissu adipeux
combinée à une baisse de l'oxydation des acides gras (FAOx) dans plusieurs tissus, notamment
le cœur, les reins, le foie et les muscles squelettiques (El Kebbaj et al., 2015). La régulation
négative de FAOx par le LPS est corrélée à une diminution des expressions du récepteur
nucléaire (PPAR)α Le récepteur activé par les proliférateurs de peroxysomes et de son
coactivateur PPARγ Coactivateur (PGC)-1α, qui fonctionnent physiologiquement de concert
pour réguler les expressions géniques liées à FAOx (handschin, 2006).

Dans le foie, les LPS activent les cellules de Kupffer (en tant que macrophages résidents
hépatiques), qui peuvent libérer des agents cytotoxiques, tels que TNF- et IL-6, qui sont des
gènes pro-inflammatoires, via l'activation de la voie de signalisation du facteur nucléaire NF-B
(Papa et al., 2009). À Kupffer cellules, la régulation positive du TNF- contribue en outre, de
manière autocrine, à l'augmentation de l'IL-6 expression. L'IL-10 est également un facteur
immunorégulateur qui inhibe de manière significative les pro-inflammatoires dérivés des
monocytes/macrophages cytokines, y compris TNF- et IL-6 (Kono et al., 2009).

De plus, l'activation du NF-B induit par le LPS peut être atteint par l'IL-10 dans les
macrophages et les cellules pré-B. En conséquence, la désactivation des macrophages est
favorisé par l'activation des PPAR et des LXR, en augmentant la libération d'IL-10 et en
restreignant l'IL-12 et le TNF-livraison, conduisant à la suppression de l'inflammation (El
Kamouni et al., 2017a). ERO vont agir sur l’activation de NF-KB soit par l’intermédiaire des
protéines kinases activateur des mitogènes ( MAP-kinases) ou par l’intermédiaire de la protéine
kinas C (PKC)(Huet & Duranteau, 2008).

43
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI études Bibliographique

Figure 12: Une illustration simplifiée du ROS et RNS dans l'activation des NF-KB induit par LPS et
dommages cellulaires([Link] & [Link], 2002)

Le stress oxydatif engendré par le LPS affecte plusieurs organes de notre organisme, parmi
eux : le cœur.

V. Le cœur

1. L’anatomie du cœur
Le cœur est un organe constitué de muscle lisse situé dans la cavité de la cage thoracique
entre les deux poumons, dans un compartiment appelé médiastin et contenu dans un sac fibreux
appelé péricarde. C'est un organe creux divisé en quatre chambres, deux oreillettes et deux
ventricules, divisés en deux pompes auriculo-ventriculaires indépendantes l'une de l'autre (cœur
droit et gauche séparés par des septa interauriculaire et interventriculaire), mais en
communication par des valves. Entre les deux pompes auriculo-ventriculaires se trouve la
circulation pulmonaire et systémique, avec elle le cœur fonctionne comme une machine de
pompage (Grutta et al., 2012).

44
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI études Bibliographique

Figure 13: anatomie du cœur humain (Cours, 2009)

2. Fonctionnement du cœur
Le cœur joue un rôle central dans le système cardiovasculaire. Il permet le transfert
d’oxygène, de nutriment et la circulation du sang dans tout l’organisme. Aussi il assure la
communication cellulaire par le transport des hormones.

Figure 14: schéma simplifié fonctionnement du Cœur (Lauranne et al., s. d.)

45
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI études Bibliographique

3. Physiopathologie
L'insuffisance cardiaque impose un fardeau énorme en termes de morbidité et de mortalité
mondiales. Bien qu'il existe de nombreuses causes différentes de maladie cardiaque, la plupart
partagent un mécanisme pathologique important : le stress oxydatif. Dans le cœur défaillant,
le stress oxydatif se produit dans le myocarde, et il est en corrélation avec un dysfonctionnement
ventriculaire gauche. Les espèces réactives de l'oxygène (ROS) affectent négativement la
manipulation du calcium Ca2+ myocardique qui se manifeste par une surcharge, provoquent
des arythmies et contribuent au remodelage cardiaque en induisant une signalisation
hypertrophique, l'apoptose et la nécrose (Münzel et al., 2017).

46
Matériels et méthodes
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Matériels et Méthodes

VI. Matériel d’étude

Cette recherche s’est déroulée au sein du laboratoire Sciences et Technologies de la Santé

(STS) dans l’institut supérieure des sciences de la santé à Settat, pendant une période allant de
10 mai jusqu’au 29 juin 2021. Durant notre étude nous avons travaillé par trois huiles (huile
d’argane, huile de graine de cactus et huile de colza) et nous avons utilisé les souris Swiss OF1
comme modèle animal.

1. Les huiles
Dans notre étude nous avons travaillé sur trois huiles :

➢ L’huile d’argan : émané de l’Entreprise Féminine Rurale d’Economie Sociale

(EFAS) située au village Aghraisse, province Ait Baha, Agadir, Maroc.

➢ L’huile de cactus : fournie par l'Association nationale du développement des cactus

située à Skhour Rhamna, Maroc, est considérée comme contrôle positif.

➢ L’huile de colza : prévenant du centre commercial, est considérée comme contrôle

négatif.

Figure 15: localisation géographique d'EFAS

48
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Matériels et Méthodes

2. Les échantillons
En raison d’explorer les bases moléculaires des effets d’huile d’argane sur le métabolisme
au niveau du cœur, nous avons choisi comme échantillons les souris, plus précisément leurs
cœurs.

2.1 Souche et origine des souris

Pour réaliser notre étude, on a obtenu de l'IFFA CREDO (Casablanca, Maroc) des souris
Swiss OF1 âgées entre 12 à 16 semaines.

Les études animales ont été menées conformément aux protocoles d'utilisation et de soins
des animaux de l'Université Hassan 1er, Settat, Maroc.

2.2 Traitement

Avant 10 jours du commencement du traitement, les souris étaient maintenues à une

température ambiante de 22 ± 3 ° C et un cycle de lumière de 12/12h. Puis elles étaient réparties
en 8 lots en raison de 6 souris par lot.

Pendant 28 jours, les souris recevaient une nourriture enrichie en différentes traitements :
l’huile de graines de cactus, l’huile de colza et l'huile d'argan (6%) (Tableau 3).
Tableau 3 : traitement des souris selon chaque groupe

Groupes Traitement

Contrôle L’eau + alimentation normale

(acétone)
LPS Comme Groupe (1) + Injection de LPS

Huile d’argan (HA) Comme Groupe (1) + Huile d’argane

Huile de grain de cactus (HGC) Comme Groupe (1) + Huile de cactus

Huile de colza (HC) Comme Groupe (1) + Huile de colza

LPS + (HA) Comme Groupe (3) + Injection de LPS

LPS + (HGC) Comme Groupe (4) + Injection de LPS

LPS + (HC) Comme Groupe (5) + Injection de LPS

Avant 4 heures du sacrifice par décapitation, les souris avaient reçu une injection
intraveineuse de LPS Escherichia coli O111 : B4 à (1mg/ml) avec une dose de 100μg/ 20g de

49
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Matériels et Méthodes

poids vif de souris ou eau physiologique (saline) pour les souris de lot contrôle. Puis la
récupération des cœurs des souris et la congélation immédiate dans la carboglace et puis stockés
à -80 °C. Ce traitement a été effectué avant le commencement de notre stage.
Tableau 4 : traitement des échantillons à traités
Lot : 1 Lot : 2
#31/H/Ĉ/S1/C/3 #31/H/LPS/S1/C/3
#31/H/Ĉ/S2/C #31/H/LPS/S2/C/2
#31/H/Ĉ/S3/C/1 #31/H/LPS/S3/C/1
#31/H/Ĉ/S4/C/3 #31/H/LPS/S4/C/1
#31/H/Ĉ/S5/C/2 #31/H/LPS/S6/C/3
#31/H/Ĉ/S6/C/1
Lot : 3 Lot : 4
#31/H/HA/S1/C/2 #31/H/HC/S1/C/1
#31/H/HA/S2/C/3 #31/H/HC/S2/C/2
#31/H/HA/S3/C/3 #31/H/HC/S4/C/2
#31/H/HA/S4/C/3 #31/H/HC/S6/C/1
#31/H/HA/S5/C/3
Lot : 5 Lot : 6
#31/H/HGC/S1/C/2 #31/H/HA+LPS/S1/C/2
#31/H/HGC/S2/C/2 #31/H/HA+LPS/S2/C/3
#31/H/HGC/S4/C/2 #31/H/HA+LPS/S3/C/1
#31/H/HGC/S5/C/2 #31/H/HA+LPS/S4/C/3
#31/H/HGC/S6/C/3 #31/H/HA+LPS/S5/C/2
#31/H/HA+LPS/S6/C/2
Lot : 7 Lot : 8
#31/H/HC+LPS/S1/C/1 #31/H/HGC+LPS/S1/C/1
#31/H/HC+LPS/S2/C/2 #31/H/HGC+LPS/S2/C/3
#31/H/HC+LPS/S3/C/2 #31/H/HGC+LPS/S3/C/2
#31/H/HC+LPS/S4/C/2 #31/H/HGC+LPS/S4/C/2
#31/H/HC+LPS/S5/C/3 #31/H/HGC+LPS/S5/C/2
#31/H/HC+LPS/S6/C/3 #31/H/HGC+LPS/S6/C/2

Exemple : #31/H/Ĉ/S1/C/3
Numéro de la Le morceau d’organe
manipulation
L’organe
L’huile
Numéro de souris
Le traitement

3. Evaluation du stress oxydant

3.1 Préparation d’homogénat

50
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Matériels et Méthodes

La préparation d’homogénat a été fait par l’homogénéisation des petits morceaux du cœur
d’un poids qui varie entre 25,3 et 82,9 mg mesuré par la balance à précision (AS 310.R2 PLUS)
avec 253 à 829 µl de tampon de phosphate KH2PO4/K2HPO4 (50 mM, pH 7,4 mesuré par 902
pH/conductivity meter) dans un broyeur Potter. Ces tissus homogénéisés été soumis à une
sonication (30sec, 3 cycles) par un sonicateur, puis centrifugés à 3000 g pendant 10 minutes à
4°C. Les surnageants sont été récupérés dans des tubes d’Eppendorf de 1,5 ml puis conservés à
-24 °C.

3.2 Dosage des protéines

Le dosage des protéines est une étape importante pour mesurer l’activité enzymatique
spécifique des enzymes. Dans notre étude, ce dosage est réalisé selon la méthode de Lowry. La
méthode de Lowry créée par le biochimiste américain Oliver H. Lowry en 1951 (Zawislak et
al., 1981), est une méthode de dosage colorimétrique des protéines, qui combine la méthode de
biuret avec la méthode de folin-ciocalteu. La méthode de biuret est basée sur la réduction des
ions de cuivre sous conditions alcalines, qui forment un complexe avec les peptides ou les
protéines. L’autre méthode est basée sur la réduction du réactif de Folin par le complexe cuivre-
peptide qui donne une coloration bleue.

En premier temps, nous avons préparé la solution de Lowry qui est composée de deux
solutions :

Une solution A : qui est composée de 2g NaOH + 10g Na 2CO3 + 500 ml d’eau.

Une solution B : qui est composée de 100 mg Potassium sodium tartrate + 50 mg CuSO 4
+ 10 ml d’eau.

Nous avons mélangé la solution A et B en raison de 50 :1.

L’utilisation de la gamme étalon sérum bovin d’albumine BSA standard est nécessaire pour
l’estimation de la quantité des protéines dans les échantillons suivant le protocole du tableau en
dessous (Tableau 6).

Pour doser les protéines, notre laboratoire suit le protocole de cuve 1,3 ml du
spectrophotomètre (TECAN), puisqu’on travaille avec les plaques adéquate à TECAN, nous
avons divisé les volumes comme indiqué dans le (Tableau 5) sur 6,5 pour avoir une quantité
finale de 200µl des plaques.

51
 A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Matériels et Méthodes

Tableau 5: protocole de cuve 1,3 ml unique au spectrophotomètre (TECAN)

Blanc BSA 2 mg / ml Homogénat

Quantité de protéine
0 20 30 40 50 60 70 80 90 100 XX
(µg)
Volume de l’échantillon
0 10 15 20 25 30 35 40 45 50 10
(µl)
H2O (µl) 200 190 185 180 175 170 165 160 155 150 190
Solution de Lowry (ml) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

Vortex, incubation 15 min

Folin dilué 2 fois (ml) 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1

Vortex, incubation 30 min

Tableau 6 : le protocole de dosage des protéines à 750nm

Blanc Homogénat
BSA
2mg/ml
Quantité de 0 2 4 6 8 10 12 XX
protéine (µg)
Volume 0 1 2 3 4 5 6 5
d’échantillon (µl)
H2O (µl) 30,77 29,77 28,77 27,77 26,77 25,77 14,77 25,77

Solution de 153,84 153,84 153,84 153,84 153,84 153,84 153,84 153,84

Lowry (µl)
Vortex, incubation 15min
Folin ½ 1N 15,38 15,38 15,38 15,38 15,38 15,38 15,38 15,38
Vortex, incubation 30min

Dans une plaque de 96 puits, nous avons commencé par l’ajout des échantillons (BSA :
pour la gamme étalon/Homogénat) en triplicate. Après, dans la totalité des puits, nous avons
ajouté H2O, puis la solution de Lowry et le Folin demi dilué. Après l’incubation comme indiqué
dans le Tableau 6, la DO a été lue à 750nm par le spectrophotomètre (TECAN).

52
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Matériels et Méthodes

Figure 16: Le spectrophotomètre de laboratoire Sciences et Technologies de la Santé

3.3 Mesure de l’activité des enzymes de stress

➢ Dosage de l’activité de la catalase

La catalase est une enzyme qui catalyse la dismutation de H2O2 en formant l’H2O et l’O 2,
selon la réaction suivante : 2H2O2 2H2O+O2

Ce dosage repose sur la mesure de la dégradation de peroxyde d’hydrogène H 2O2 avec

l’oxydation de permanganate de potassium KMnO 4 à 480 nm.

3H2O2 + 2KMnO4 → 2MnO2 + 2KOH + 2O2 + 2H2

Nous avons travaillé par la réaction de point final en mesurant l’activité de l’enzyme
jusqu’après l’injection, en raison de sa rapidité. C’est pour cela, nous avons utilisé l’injecteur.
Tableau 7 : le protocole du dosage de l'activité de la CAT

Les solutions Les volumes en µl

Tampon phosphate à 50mM 10

(pour le blanc)

Homogénat 10

H2O2 à 7,3mM 30
pour initier la réaction
Incubation 3min

53
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Matériels et Méthodes

H2SO4 à 6N 20
Pour stopper la réaction
KMnO4 à 2mM 140
Pour la titration de H2O2

➢ Dosage de l’activité de la superoxyde dismutase (SOD)

Le SOD est une enzyme qui catalyse la dismutase des anions superoxydes (O 2-) pour
donner H2O2 et O2.

L’activité de SOD est mesurée par la méthode de Paoletti. Cette méthode implique
l'inhibition de nitrobleu de tétrazolium (NBT) et sa réduction avec la riboflavine utilisée comme
générateur de superoxyde (Paoletti et al., 1986).

Pour la préparation du mélange réactionnel de SOD, nous avons rempli les premiers puits
(triplicate) de la plaque par le blanc positif et le deuxième triplicate par le blanc négatif, puis
nous avons ajouté toutes les solutions qu’on avait avec les échantillons et la riboflavine. Avant
de mesurer l’absorbance à 560 nm par le spectromètre, nous avons fait une projection de la
lumière sur la plaque pendant 10 minutes, pour activer la réaction et enfin une coloration violette
a été développée.

Nous avons préparé deux blancs, un négatif et un positif en raison d’avoir les valeurs des
échantillons enveloppées par ces deux blancs.

Blanc négatif : il contient tous les réactifs sauf l’homogénat et le NBT, en les
remplaçant respectivement par le tampon phosphate à 50 mM et l’eau distillé.

Blanc positif : Il contient tous les réactifs sauf l’homogénat (on ajoute le tampon
phosphate à la place de l’homogénat).

Tableau 8 : Le mélange réactionnel de la SOD de 200µl

Blanc Blanc Homogénat

positif négatif
Tampon phosphate à 112 112 98
50mM (µl)
0,25% Triton x-100 (µl) 20 20 20
pour émulsifier les
réactifs
EDTA à 0,1 mM (µl) 20 20 20
pour chélater les ions

54
 A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Matériels et Méthodes

L-Méthionine à 12mM 20 20 20
(µl)

NBT à 75mM (µl) 20 0 20

pour repérer le SOD
Echantillons (µl) 0 0 14
Riboflavine à 2µM (µl) 20 20 20
pour initier la réaction
H2O (µl) 0 20 0
Incubation 10min

3.4 Dosage du marqueur des antioxydants : le glutathion GSH

Le DTNB oxyde le glutathion réduit GSH, en formant GSSG qui est le disulfure de
glutathion avec le NBT selon cette réaction : 2 GSH + DTNB → GSSG + 2 TNB

La formation de NBT qui est proportionnelle à la quantité de glutathion total (GSH +

GSSG) est suivie à 412 nm au spectrophotomètre.

Nous avons préparé la gamme étalon de GSH pour estimer la teneur du glutathion réduit
dans les échantillons en suivant ce protocole tableau 9.
Tableau 9 : Protocole de la gamme étalon de GSH

La concentration de la solution 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
mère de GSH en (µM)

Volume prélevé de la solution 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22

mère de GSH en (µl)
DNTB en µl 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20
Tampon phosphate 50 mM en 180 178 176 174 172 170 168 166 164 162 160 158
µl
Volume final du mélange 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200
réactionnel en µl

Dans une plaque à 96 puits, nous avons préparé la gamme étalon de GSH selon les volumes
et les quantités mentionnés dans le tableau 9.

Nous avons commencé l’incubation des échantillons (5 min) dès le premier puit rempli avec le
DTNB pour mesurer la DO à 412nm.

Pour assurer la précipitation des protéines, nous avons ajouté le TCA (5%) et l’échantillon
dans un tube d’Eppendorf (pour chaque échantillon), puis nous l’avons centrifugé à 12000g
pendant 10min par la centrifuge 5430R.

55
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Matériels et Méthodes

Dans une plaque de 96 puits, nous avons déposé les surnageants obtenus, et nous avons
ajouté le tampon phosphate 50mM pH 7,4 suivie par le DTNB. Après 5min de l’incubation,
l’absorbance est mesurée.
Tableau 10 : Protocole déterminatif de la composition de GSH dans les échantillons

Les solutions Les volumes (µl)

TCA (5%) 11
pour la précipitation des protéines
Echantillon 20

Centrifugation 12000g pendant 10 min

Le surnagent 10

Tampon phosphate 50mM pH 7,4 170

DTNB (6mM) préparé dans le 20

tampon phosphate 0,4M
pour l’oxydation de GSH réduit
Incubation 5min

4. Analyse statistique
Les données représentent la moyenne ± écartype. Les analyses statistiques des données ont
été faites par ANOVA (Tukey comme post-hoc). Les différences sont considérées significatives
si la valeur du p-value est inférieure ou égale à 0,05 (** pour une p-value ≤ 0 ,01
comparativement au groupe contrôle ; # pour une p-value ≤ 0 ,05 comparativement au groupe
LPS). L'analyse statistique a été effectuée avec le logiciel informatique GraphPad Prism 8.

56
Résultat
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Résultats

Afin de savoir la capacité d’huile d’argane de prévenir le stress oxydant induit par le LPS,
nous avons travaillé sur les cœurs des souris qui sont déjà traitées ou non par le LPS, les huiles
seules (l’huile d’argane, l’huile de grain de cactus et l’huile de colza) ou par une combinaison
des huiles et le LPS (échantillons dilué à 1/5 considéré comme solution mère), en dosant leur
concentration des protéines, leur activité enzymatique des enzymes de stress oxydatif et leur
quantité en marqueur de stress oxydatif GSH.

VII. Le dosage des protéines

Le dosage des protéines par spectrophotométrie est obligatoire pour normaliser les résultats
de l’activité enzymatique des enzymes de stress oxydatif et aussi pour le dosage du marqueur
de stress oxydatif. Pour cela, une gamme étalon de BSA a été réalisée comme indiqué ci-dessus
(La partie Matériels et méthodes). La figure 17 montre l’absorbance de la BSA en fonction de
la quantité de la BSA préparée à différentes concentrations (0µg à 60µg). Cette gamme a été
réalisée au premier lieu mais nous avons constaté que la fourchette des valeurs des absorbances
été entre 0 et 0,59. En comparant les 2 extrémités, on voit que cette gamme est trop large. Pour
cela, nous avons essayé d’utiliser une gamme de BSA allant juste de 0 µg à 12 µg pour calculer
la vraie quantité des protéines contenue dans chaque échantillon.

Figure 17 :la gamme étalon de la BSA

Les données représentent la moyenne ± écartype. Les analyses statistiques des données ont été faites par le test
ANOVA.

La figure ci-dessous (Figure 18) qui représente la deuxième gamme de BSA effectuée (de 0 µg

à 12 µg), montre la droite tracée par 7 points. L’équation de la droite est y =0,022x+0,0009

(y=ax+b ; y : la densité optique DO ou bien l’absorbance ; x : la quantité des protéines) avec un

coefficient de détermination R2=0,9989. Ce coefficient montre la proximité des données à la

58
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Résultats

droite de régression ajustée. Notre résultat de R 2 montre que nos données sont très proches de
la droite.

Gamme de BSA y = 0,022x + 0,0009

0,5 R² = 0,9989
Absorbance DO

0,4

0,3

0,2

0,1

0
0 5 10 15 20 25
Quantité de BSA en µg

Figure 18 : la gamme étalon de BSA

Les données représentent la moyenne ± écartype. Les analyses statistiques des données ont été faites par le test
ANOVA.

D’après le tableau 11 de la quantité des protéines en µg contenue dans les différents échantillons
utilisés dans notre étude dilué à 1/5 pour avoir des résultats dispersés et inclut dans la gamme.
On constate que la fourchette des absorbances est comprise entre 0,018 et 0,24
Tableau 11 : la quantité des protéines de chaque échantillon en µg

Absorbance de
Quantité en µg de
Moyenne de 3 l’échantillon
5 µl de
Echantillons absorbances de –
l’échantillon dilué
chaque échantillon Absorbance du
5 fois
blanc
Blanc 0,04964 0
C/S1 0,1262 0,07656 3,439090909
C/S3 0,176533333 0,126893333 5,726969697
C/S4 0,180366667 0,130726667 5,901212121
C/S5 0,202856667 0,153216667 6,923484848
C/S6 0,067833333 0,018193333 0,786060606
LPS/S1 0,1778 0,12816 5,784545455
LPS/S2 0,185166667 0,135526667 6,119393939
LPS/S3 0,250666667 0,201026667 9,096666667
LPS/S4 0,241166667 0,191526667 8,664848485
LPS/S6 0,2407 0,19106 8,643636364
HA/S1 0,1748 0,12516 5,648181818
HA/S2 0,1838 0,13416 6,057272727
HA/S3 0,280833333 0,231193333 10,46787879

59
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Résultats

HA/S4 0,231 0,18136 8,202727273

HA/S5 0,276 0,22636 10,24818182
HA/S6 0,3139 0,26426 11,97090909
HC/S1 0,2144 0,16476 7,448181818
HC/S2 0,100166667 0,050526667 2,255757576
HC/S4 0,184033333 0,134393333 6,067878788
HC/S6 0,1663 0,11666 5,261818182
HGC/S1 0,222866667 0,173226667 7,833030303
HGC/S2 0,140966667 0,091326667 4,11030303
HGC/S4 0,1805 0,13086 5,907272727
HGC/S5 0,149466667 0,099826667 4,496666667
HGC/S6 0,249533333 0,199893333 9,045151515
HA+LPS/S1 0,154033333 0,104393333 4,704242424
HA+LPS/S2 0,212033333 0,162393333 7,340606061
HA+LPS/S3 0,1659 0,11626 5,243636364
HA+LPS/S4 0,166433333 0,116793333 5,267878788
HA+LPS/S5 0,183433333 0,133793333 6,040606061
HA+LPS/S6 0,208066 0,158426 7,160272727
HC+LPS/S1 0,1719 0,12226 5,516363636
HC+LPS/S2 0,2454 0,19576 8,857272727
HC+LPS/S3 0,189 0,13936 6,293636364
HC+LPS/S4 0,2899 0,24026 10,88
HC+LPS/S5 0,2848 0,23516 10,64818182
HC+LPS/S6 0,269666667 0,220026667 9,96030303
HGC+LPS/S1 0,2202 0,17056 7,711818182
HGC+LPS/S2 0,275633333 0,225993333 10,23151515
HGC+LPS/S3 0,308066667 0,258426667 11,70575758
HGC+LPS/S4 0,225633333 0,175993333 7,958787879
HGC+LPS/S5 0,259066667 0,209426667 9,478484848

VIII. Mesure l’activité enzymatique des enzymes et dosage du

marqueur de stress

La relation entre le LPS et le stress oxydant a été bien établie puisque le LPS perturbe
l’équilibre redox et cause le stress oxydatif, les capacités antioxydantes, y compris la catalase
(CAT) et la superoxyde dismutase (SOD) des souris non traitées ou traitées par les huiles seules,
le LPS ou les huiles et le LPS ont été comparées. Les activités des enzymes antioxydantes, y
compris la CAT et la SOD, ainsi que le marqueur du stress oxydant GSH ont été analysés.

1. Mesure de l’activité enzymatique des enzymes du stress

1.1 Mesure de l’acitivité enzymatique de la catalase

D’après la figure 19 ci-dessous ; on a constaté que l’activité enzymatique de la catalase au

niveau du cœur des souris a été un peu diminuée par le traitement avec les huiles seules

60
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Résultats

spécifiquement l’huile d’argane par rapport à l’huile de colza et de graine de cactus. Cependant,
on a pu montrer que le traitement par le LPS ne change pas le niveau enzymatique de la catalase
par rapport au groupe contrôle. Par contre, les combinaisons HGC+LPS et HC+LPS ont montré
une petite diminution comparativement au groupe LPS et au groupe des huiles seules. Tandis
que, la combinaison HA+LPS a montré une petite diminution et une petite augmentation par
rapport respectivement au groupe LPS et au groupe de l’huile d’argane [Link] ces
changements ne sont pas statistiquement significatifs. Ces résultats suggèrent que les trois
huiles utilisés dans notre étude ont un potentiel antioxydant.

Activité spécifique de la CAT

80

n.s
60
nmol/min/mg de
protéines

40

20

0
C
A

C
C
A

S
C

LP

+H

+H

G
H

H
H

S+
LP

LP

LP

Figure 19 : l'activité enzymatique de la catalase dans le cœur des souris

Les données représentent la moyenne ± écartype. Les analyses statistiques des données ont été faites par le test
ANOVA. L'analyse statistique a été effectuée avec le logiciel informatique GraphPad Prism 8.

La mesure de cette enzyme s’effectue dans le spectromètre après l’ajout du permanganate

KMnO4 (coloration violet) qui se dose d’une façon instantanée parce que la réaction se
déclenche directement après son ajout et la DO commence à diminuer, c’est pour ça que nous
avons utilisé l’injecteur afin de mesurer l’absorbance jusqu’après l’injection pour avoir la bonne
valeur de l’activité spécifique de la CAT. Au cours de cette réaction le développement de la
coloration passe par la dégradation de couleur violet jusqu’arriver au rose (figure 20).

61
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Résultats

Blanc Échantillons

Figure 20 : la plaque de la catalase

Figure 19: la plaque de la catalase

1.2 Mesure de l’activité enzymatique de la SOD

D’après la figure 20 ci-dessous, le traitement avec l’huile d’argane et l’huile de colza a

montré qu’il y a un changement non considérable comparativement au groupe contrôle, à moins
qu’un effet différentiel de la supplémentation en huile de graine de cactus soit observé sur
l’activité enzymatique de la SOD. Le LPS n’a induit aucun changement de cette activité
enzymatique par rapport au groupe contrôle. Une augmentation significative de la SOD a été
observé chez le groupe co-traité par le LPS et l’huile d’argane par rapport au LPS. Cependant,
les combinaisons LPS+HC et LPS+HGC ont montré qu’il n’y a aucune différence
comparativement au groupe LPS. Par ailleurs, une augmentation de l’activité enzymatique de
la SOD est observée chez le groupement co-traité par le LPS et l’huile d’argane par rapport au
groupe traité par l’huile d’argane seule. Par contre, les combinaisons LPS+HC et LPS+HGC
ont montré une diminution variable comparativement au groupe HC et HGC.

62
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Résultats

Activité spécifique de la SOD

200
✱✱

#
150

UI/mg de protéines 100

50

C
A

C
C
A

S
C

LP

+H

+H

G
H

HG

H
S

S+
LP

LP

LP
Figure 21 : l'activité enzymatique dans le cœur des souris

Les données représentent la moyenne ± écartype. Les analyses statistiques des données ont été faites par le test
ANOVA. L'analyse statistique a été effectuée avec le logiciel informatique GraphPad Prism 8. Les différences
sont considérées significatives si la valeur du p-value est inférieure ou égale à 0,05 (** pour une p-value ≤ 0 ,01
comparativement au groupe contrôle ; # pour une p-value ≤ 0 ,05 comparativement au groupe LPS).

L’incubation de la plaque préparée de cette enzyme a révélé une différence de coloration

entre le blanc négatif (pas de coloration) et le blanc positif avec les échantillons (coloration
violet), comme observé dans la figure en dessous (figure 22).
Blanc positif Blanc négatif Échantillons

Figure 22 : la plaque de la SOD

63
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Résultats

2. Dosage du marqueur de stress : GSH

Pour quantifier le GSH dans le cœur, une gamme étalon de GSH a été réalisée comme
indiqué ci-dessus (La partie Matériels et méthodes). La figure ci-dessous (Figure 23) montre la
droite tracée par 8 points. L’équation de la droite est y=0,0059x+0,0002 avec un coefficient de
détermination R2= 0,9876. Notre résultat de R2 montre que nos données sont très proches de la
droite.

Gamme de GSH y = 0,0059x - 0,0002

R² = 0,9876
0,07
0,06
0,05
Absorbance DO

0,04
0,03
0,02
0,01
0
0 2 4 6 8 10 12
-0,01
Concentration de GSH en µmol

Figure 23 : la courbe de la gamme étalon de GSH

Les données représentent la moyenne ± écartype. Les analyses statistiques des données ont été faites par le test
ANOVA.

Après l’incubation de la gamme préparé, nous avons observé une augmentation progressive
de la coloration jaune qui est due à l’élévation progressive de la concentration du glutathion
réduit oxydé par le DTNB, voir la (figure 4).

64
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Résultats

Blanc Échantillons

Figure 24
23 : la plaque de la gamme étalon de GSH

D’après la figure ci-dessous, on a constaté que le niveau de GSH a été modifié par le
traitement avec les huiles seules (l’huile d’argane, l’huile de cactus et l’huile de colza). En effet,
les traitements par HC et HGC ont augmenté le niveau de GSH par rapport au contrôle.
Cependant, l’HA a diminué ce niveau comparativement au groupe contrôle, ce qui suggère que
l’huile d’argane possède un effet protecteur contre la production du marqueur du stress GSH.
Le traitement par le LPS a montré que le niveau de GSH se diminue par rapport au groupe
contrôle. Cependant, les combinaisons HGC+LPS et HC+LPS ont montré une petite
augmentation du niveau de GSH comparativement au groupe LPS. De même, le groupe co-
traité par le LPS et HA a montré une augmentation mais une qui est remarquable par rapport
aux autres groupes des huiles combinés avec le LPS comparativement au groupe LPS. Par
ailleurs, les deux groupes traités par HGC+LPS et HC+LPS ont montré une diminution par
rapport aux groupes traités par les huiles seules HGC et HC. Contrairement au combinaison
HA+LPS qui a montré une grande augmentation comparativement aux groupes de l’huile seule
HA.

65
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Résultats

Niveau de GSH
500

µmol GSH/mg de protéines

400 n.s

300

200

100

C
A

C
C
A

S
C

LP

+H

+H

G
H

H
H

S+
LP

LP

LP
Figure 25 : le taux de GSH dans le cœur des souris

Les données représentent la moyenne ± écartype. Les analyses statistiques des données ont été faites par le test
ANOVA. L'analyse statistique a été effectuée avec le logiciel informatique GraphPad Prism 8.

66
Discussion Générale
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Discussion Générale

Le corps est équipé d'un système de défense antioxydant qui le protège contre les
dommages oxydatifs causés par les oxydants des radicaux libres et joue un rôle majeur dans la
protection des cellules contre le stress et les dommages oxydatifs (Ali et al., 2020).

Les antioxydants tels que le glutathion (GSH) et les enzymes protectrices, à citer, la
superoxyde dismutase (SOD), la catalase (CAT) combattent contre le stress oxydatif et
protègent les biomolécules cellulaires (Ali et al., 2020).

Les antioxydants tels que les tocophérols, les polyphénols et les stérols sont des
antioxydants naturels que l'on trouve de manière variable dans les huiles. Ils jouent un rôle
majeur dans l'élimination des oxydants des radicaux libres et protègent les cellules du stress et
des dommages oxydatifs (Kharrassi & El Kebbaj, 2018).

Pour savoir les effets d’huile d’argane sur le métabolisme du cœur des souris, un traitement
a été effectué pendant une période de 28 jours, les souris recevaient une nourriture enrichie à
6% en l’huile d’argane, l’huile de graine de cactus (comme contrôle positif) et l’huile de colza
(comme contrôle négatif), avant 4 heures du sacrifice des souris, elles recevaient une injection
intraveineuse du LPS préparé dans l’eau physiologique (1mg/ml) avec une dose de 100μg/ 20g
de poids vif de souris ou eau physiologique (saline) pour les souris de lot contrôle.

IX. L’effet de l’huile d’argane sur l’activité enzymatique de la catalase

La catalase est une enzyme qui constitue l’une des premières lignes de défense contre le
stress oxydatif, et agit comme catalyseur de la décomposition de H 2O2 en H2O et O2 (Aslani &
Ghobadi, 2016).

D’après notre résultats (figure de la CAT), on a pu montrer que l’huile d’Argane, l’huile
de graine de cactus et l’huile de colza, ne changent pas le niveau de l’activité enzymatique de
la CAT au niveau du cœur. Cependant, El Kamouni a trouvé que l’huile d’argane a un effet
préventif contre le stress oxydant induit par le LPS (El Kamouni et al., 2017a). Ces résultats
pourraient être expliqué par le potentiel de HA à piéger et neutraliser les peroxydes
d’hydrogènes à savoir le H2O2 et le malondialdéhyde MDA (Bouchab et al., 2021).

De même, le traitement par le LPS seul nous a montré que cette endotoxine n’a pas pu
perturber l’activité enzymatique de la catalase au niveau de cet organe. dans une étude au niveau
du foie on a trouvé que le LPS a pu dérégulé l’activité enzymatique de la catalase (El Kamouni
et al., 2017a).

68
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Discussion Générale

Ainsi que le co-traitement des huiles (l’huile d’Argane, l’huile de graine de cactus, l’huile
de colza) et LPS, n’induisent pas de variation significative de l’activité de la catalase, comme
le HC+LPS et HGC+LPS ont montré une petite diminution de l’activité enzymatique de la CAT
par rapport à LPS et au traitement des huiles seules, contrairement à l’huile d’argane avec LPS
qui a montré une augmentation et une diminution légère par rapport respectivement à l’huile
seule et à LPS. (El Kamouni et al., 2017).

X. L’effet de l’huile d’argane sur l’activité enzymatique de la SOD

La SOD peut catalyser le superoxyde dans l’oxygène et le peroxyde d’hydrogène. La SOD

semble être la première ligne de défense des radicaux libres dérivés de l’oxygène et peut être
rapidement induit dans certaines conditions lorsqu’exposés au stress oxydatif (He et al., 2017).

D’après notre résultat de la SOD (figure de La SOD), on a pu montrer que l’huile d’argane
seule n’a pas affecté l’activité enzymatique comparativement au contrôle. Cependant, on a pu
montrer pour la première fois que le traitement par l’huile de graine de cactus déclenche une
augmentation hautement significative au niveau du cœur comparativement au groupe de
contrôle et aux autres huiles seules qui sont modifiées d’une façon non significative. Ces
résultats peuvent être due à la particularité de la composition de chacune des huiles, plus
précisément de graine de cactus et d’argane. Pour cela, c’est normal d’avoir ces différents effets.

Le traitement par l’huile de colza seule présente une petite augmentation non significative
comparativement au groupe de contrôle au niveau du cœur.

Le traitement par LPS garde la même activité enzymatique au regard du résultat obtenu par
le contrôle au niveau du cœur. Par ailleurs, au niveau du fois Mr EL KAMOUNI a trouvé que
le LPS déclenche une petite augmentation par rapport au groupe de contrôle (El Kamouni et al.,
2017).

Tandis que le co-traitement avec l’huile d’argane et LPS induit une augmentation
significative de l’activité enzymatique SOD par rapport au groupe de LPS seul au niveau du
cœur. Par ailleurs, au niveau du fois Mr EL KAMOUNI a trouvé que l’huile d’argane et le LPS
déclenche une très petite diminution par rapport au groupe de contrôle (El Kamouni et al.,
2017).

Le co-traitement par les huiles de colza et graine de cactus avec le LPS présentent une
petite augmentation par rapport au groupe de LPS. Par ailleurs, d’après nos résultats le HC+LPS

69
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Discussion Générale

dispose une légère diminution par rapport à l’huile seule, contrairement au HGC+LPS qui
révèle une grande diminution de l’activité enzymatique comparativement à l’huile seule.

XI. L’effet de l’huile d’argane sur le marqueur du stress oxydant : GSH

Le glutathion protège les cellules du stress oxydatif en piégeant les radicaux libres. Ce
marqueur est converti en GSSG ou GSSC y qui est réduit en GSH par l'activité enzymatique de
GR.

Dans notre étude sur la quantification du marqueur GSH, on a pu montrer que le traitement
par l’huile d’argane déclenche une diminution du niveau du GSH au niveau du cœur par rapport
au contrôle grâce à les composants antioxydants d’huile d’argane. Par ailleurs, au niveau du
fois Mr EL KAMOUNI a trouvé que l’huile d’argane garde le même niveau de GSH par rapport
au groupe de contrôle (El Kamouni et al., 2017).

Pour la première fois, les deux traitements par l’huile de colza et l’huile de graine de cactus
montrent le même niveau non significatif d’augmentation de la quantité de GSH,
comparativement au groupe de contrôle.

A ce qui concerne le LPS par rapport au contrôle, une diminution légère du taux de GSH
se présente qui peut être expliquer par la puissance du système de défense de se débarrasser de
ce stress tout seul sans aucune intervention des huiles.

On a pu montrer que l’huile de graine de cactus et l’huile de colza avec LPS présentent une
même augmentation légère de la quantité de GSH par rapport au groupe de LPS et contrairement
par rapport aux groupes des huiles seules (HC et HGC) en présentant une diminution légère non
significative.

Le traitement par l’huile d’argane avec LPS exprime une augmentation non significative
par rapport au groupe de LPS et l’huile d’argane seule. Par ailleurs, les résultats de Soufiane
qui traitent l’huile d’argane avec le LPS montrent une diminution significative du taux de GSH
au niveau du foie (El Kamouni et al., 2017).

D’après les résultats précédents, on peut conclure que :

➢ L’huile d’argane a le même effet concernant le GSH et la CAT au niveau du cœur chez
les souris exprimant un stress oxydatif.

70
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Discussion Générale

➢ L’huile d’argane et l’huile de colza expriment le même effet évolutif concernant le GSH
et la SOD sur le métabolisme au niveau du cœur des souris sans stress oxydatif induit
par le LPS, parce que l’évolution de la SOD qui se traduit par le fait qu’elle est la
première ligne de défense antioxydante est proportionnelle à l’évolution du niveau de
GSH puisqu’il est un marqueur de stress.

Ces résultats peuvent être expliqués, soit par l’intervention d’autres enzymes pour se
débarrasser de ce stress telle que la GPX, ou d’autres marqueurs telle que MDA, soit par la
durée après l’injection qui est juste 4 heures par rapport à celle prise par El Kamouni qui est 6
heures. Cette durée peut être n’est pas suffisante pour induire un stress oxydatif au niveau du
cœur des souris.

71
Conclusion générale
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Conclusion générale

La composition particulière de l’huile d’argane riche en acides gras saturés (17,58%) et

insaturés (80%), aussi en antioxydants tels que les polyphénols, les tocophérols et les stérols lui
confère un caractère préventif contre un ensemble des maladies comprenant les maladies
cardiovasculaires (Kharrassi & El Kebbaj, 2018) ; (Drissi et al., 2004).

Dans notre étude nous avions comme objectif de mettre en évidence les bases moléculaires
de l’effet d’huile d’argane sur le métabolisme au niveau du cœur chez les souris. Dans ce
contexte, nous avons étudié les effets bénéfiques d’huile d’argane sur le métabolisme du cœur.

D’après les résultats de notre étude, nous avons trouvé que :

➢ L’huile d’argane diminue le taux du GSH et légèrement diminue l’activité enzymatique

de la catalase at de la SOD.

➢ L’huile de grain de cactus diminue légèrement l’activité enzymatique de la catalase,

augmente le niveau de GSH et augmente significativement l’activité enzymatique de la
SOD.

➢ L’huile de colza diminue légèrement l’activité enzymatique de la catalase et augmente

le niveau de GSH et l’activité enzymatique de la SOD.

➢ Le LPS garde la même activité enzymatique la SOD et de la CAT et diminue le niveau

de GSH

➢ L’huile d’argane et LPS diminue légèrement l’activité de la CAT, augmente le niveau

de GSH et augmente significativement l’activité spécifique de la SOD.

➢ L’huile de grain de cactus et LPS augmente l’activité de la SOD, la quantité de GSH et

diminue l’activité spécifique de la CAT.

➢ L’huile de colza et LPS augmente l’activité de la SOD, la quantité de GSH et diminue

l’activité spécifique de la CAT.

L’ensemble des résultats de notre étude a montré pour la première fois que l’huile d’argane
a un effet antioxydant illustré par une induction de l’activité enzymatique spécifique de la SOD
au niveau du cœur chez les souris.

73
Références Bibliographiques
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Références Bibliographiques

Ali, S. S., Ahsan, H., Zia, M. K., Siddiqui, T., & Khan, F. H. (2020). Understanding oxidants
and antioxidants : Classical team with new players. Journal of Food Biochemistry,
44(3), e13145. [Link]
Amir Aslani, B., & Ghobadi, S. (2016). Studies on oxidants and antioxidants with a brief glance
at their relevance to the immune system. Life Sciences, 146, 163‑173.
[Link]
Benayad, Z., Martinez-Villaluenga, C., Frias, J., Gomez-Cordoves, C., & Es-Safi, N. E. (2014).
Phenolic composition, antioxidant and anti-inflammatory activities of extracts from
Moroccan Opuntia ficus-indica flowers obtained by different extraction methods.
Industrial Crops and Products, 62, 412‑420.
[Link]
Bennani, H., Drissi, A., Giton, F., Kheuang, L., Fiet, J., & Adlouni, A. (2007). Antiproliferative
effect of polyphenols and sterols of virgin argan oil on human prostate cancer cell lines.
Cancer Detection and Prevention, 31(1), 64‑69.
[Link]
Berrougui, H., Ettaib, A., Gonzalez, M. D. H., Sotomayor, M. A. de, Bennani-Kabchi, N., &
Hmamouchi, M. (2003). Hypolipidemic and hypocholesterolemic effect of argan oil
(Argania spinosa L.) in Meriones shawi rats. Journal of Ethnopharmacology, 89(1),
15‑18. [Link]
Bouchab, H., Ishaq, A., El Kebbaj, R., Nasser, B., & Saretzki, G. (2021). Protective effect of
argan oil on DNA damage in vivo and in vitro. Biomarkers: Biochemical Indicators of
Exposure, Response, and Susceptibility to Chemicals, 1‑9.
[Link]
Calpe-Berdiel, L., Escolà-Gil, J. C., Ribas, V., Navarro-Sastre, A., Garcés-Garcés, J., & Blanco-
Vaca, F. (2005). Changes in intestinal and liver global gene expression in response to a
phytosterol-enriched diet. Atherosclerosis, 181(1), 75‑85.
[Link]
Carr, A., & Frei, B. (1999). Does vitamin C act as a pro-oxidant under physiological conditions?
FASEB Journal: Official Publication of the Federation of American Societies for
Experimental Biology, 13(9), 1007‑1024. [Link]
Carte de Maroc—Photo de Maroc—Ibntoumert—Science de la vie et de la terre. (s. d.).
Consulté 15 juin 2021, à l’adresse
[Link]
carte_de_maroc.html
Chakhchar, A., Haworth, M., El Modafar, C., Lauteri, M., Mattioni, C., Wahbi, S., & Centritto,
M. (2017). An Assessment of Genetic Diversity and Drought Tolerance in Argan Tree
(Argania spinosa) Populations : Potential for the Development of Improved Drought
Tolerance. Frontiers in Plant Science, 8, 276. [Link]
Charrouf, Z., & Guillaume, D. (1999). Ethnoeconomical, ethnomedical, and phytochemical
study of Argania spinosa (L.) Skeels. Journal of Ethnopharmacology, 67(1), 7‑14.
[Link]
Cours. (2009). [Link]
cardiologique/enseignement/cardiologie/site/html/[Link]
Dabbou, S., Dabbou, S., Selvaggini, R., Urbani, S., Taticchi, A., Servili, M., & Hammami, M.
(2011). Comparison of the chemical composition and the organoleptic profile of virgin
olive oil from two wild and two cultivated Tunisian Olea europaea. Chemistry &
Biodiversity, 8(1), 189‑202. [Link]
Daenen, K., Andries, A., Mekahli, D., Van Schepdael, A., Jouret, F., & Bammens, B. (2019a).
Oxidative stress in chronic kidney disease. Pediatric Nephrology (Berlin, Germany),
34(6), 975‑991. [Link]

75
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Références Bibliographiques

Daenen, K., Andries, A., Mekahli, D., Van Schepdael, A., Jouret, F., & Bammens, B. (2019b).
Oxidative stress in chronic kidney disease. Pediatric Nephrology (Berlin, Germany),
34(6), 975‑991. [Link]
Drissi, A., Bennani, H., Giton, F., Charrouf, Z., Fiet, J., & Adlouni, A. (2006). Tocopherols and
saponins derived from Argania spinosa exert, an antiproliferative effect on human
prostate cancer. Cancer Investigation, 24(6), 588‑592.
[Link]
Drissi, A., Girona, J., Cherki, M., Godàs, G., Derouiche, A., El Messal, M., Saile, R., Kettani,
A., Solà, R., Masana, L., & Adlouni, A. (2004). Evidence of hypolipemiant and
antioxidant properties of argan oil derived from the argan tree (Argania spinosa).
Clinical Nutrition (Edinburgh, Scotland), 23(5), 1159‑1166.
[Link]
El Kamouni, S., El Kebbaj, R., Andreoletti, P., El Ktaibi, A., Rharrassi, I., Essamadi, A., El
Kebbaj, M. S., Mandard, S., Latruffe, N., Vamecq, J., Nasser, B., & Cherkaoui-Malki,
M. (2017a). Protective Effect of Argan and Olive Oils against LPS-Induced Oxidative
Stress and Inflammation in Mice Livers. International Journal of Molecular Sciences,
18(10). [Link]
El Kamouni, S., El Kebbaj, R., Andreoletti, P., El Ktaibi, A., Rharrassi, I., Essamadi, A., El
Kebbaj, M. S., Mandard, S., Latruffe, N., Vamecq, J., Nasser, B., & Cherkaoui-Malki,
M. (2017b). Protective Effect of Argan and Olive Oils against LPS-Induced Oxidative
Stress and Inflammation in Mice Livers. International Journal of Molecular Sciences,
18(10). [Link]
El Kebbaj, R., Andreoletti, P., El Hajj, H. I., El Kharrassi, Y., Vamecq, J., Mandard, S., Saih,
F.-E., Latruffe, N., El Kebbaj, M. S., Lizard, G., Nasser, B., & Cherkaoui-Malki, M.
(2015). Argan oil prevents down-regulation induced by endotoxin on liver fatty acid
oxidation and gluconeogenesis and on peroxisome proliferator-activated receptor
gamma coactivator-1α, (PGC-1α), peroxisome proliferator-activated receptor α
(PPARα) and estrogen related receptor α (ERRα). Biochimie Open, 1, 51‑59.
[Link]
El Kharrassi, Y., Maata, N., Mazri, M. A., el Kamouni, S., Talbi, M., El kebbaj, R., Moustaid,
K., Essamadi, A., Andreoletti, P., Mzouri, E., Cherkaoui-Malki, M., & Nasser, B.
(2017). Chemical and phytochemical characterizations of argan oil (Argania spinosa L.
skeels), olive oil (Olea europaea L. cv. Moroccan picholine), cactus pear (Opuntia
megacantha salm-dyck) seed oil and cactus cladode essential oil. Journal of Food
Measurement and Characterization, 12. [Link]
El Kharrassi, Y., Samadi, M., Lopez, T., Nury, T., El Kebbaj, R., Andreoletti, P., El Hajj, H. I.,
Vamecq, J., Moustaid, K., Latruffe, N., El Kebbaj, M. S., Masson, D., Lizard, G.,
Nasser, B., & Cherkaoui-Malki, M. (2014). Biological activities of Schottenol and
Spinasterol, two natural phytosterols present in argan oil and in cactus pear seed oil, on
murine miroglial BV2 cells. Biochemical and Biophysical Research Communications,
446(3), 798‑804. [Link]
El Midaoui, A., Haddad, Y., & Couture, R. (2016). Beneficial effects of argan oil on blood
pressure, insulin resistance, and oxidative stress in rat. Nutrition (Burbank, Los Angeles
County, Calif.), 32(10), 1132‑1137. [Link]
Finaud, J., Lac, G., & Filaire, E. (2006). Oxidative Stress. Sports Medicine, 36(4), 327‑358.
[Link]
Fridovich, I. (1995). Superoxide radical and superoxide dismutases. Annual Review of
Biochemistry, 64, 97‑112. [Link]

76
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Références Bibliographiques

Gharby, S., Harhar, H., Guillaume, D., Haddad, A., Matthäus, B., & Charrouf, Z. (2011).
Oxidative stability of edible argan oil : A two-year study. LWT - Food Science and
Technology, 44(1), 1‑8. [Link]
Grutta, L., Gentile, G., Runza, G., Galia, M., Cademartiri, F., & Midiri, M. (2012). Heart
Anatomy. In Clinical Applications of Cardiac CT (p. 93‑113).
[Link]
handschin, christoph. (2006). Peroxisome Proliferator-Activated Receptor γ Coactivator 1
Coactivators, Energy Homeostasis, and Metabolism | Endocrine Reviews | Oxford
Academic. [Link]
HCEFLCD. (s. d.). Haut Commissariat Eaux et forêts et lutte contre la désertification du
Maroc. Fédération des Parcs naturels régionaux. Consulté 13 juin 2021, à l’adresse
[Link]
contre-la-desertification-du-maroc
He, L., He, T., Farrar, S., Ji, L., Liu, T., & Ma, X. (2017). Antioxidants Maintain Cellular Redox
Homeostasis by Elimination of Reactive Oxygen Species. Cellular Physiology and
Biochemistry: International Journal of Experimental Cellular Physiology,
Biochemistry, and Pharmacology, 44(2), 532‑553. [Link]
Hensley, K., Benaksas, E. J., Bolli, R., Comp, P., Grammas, P., Hamdheydari, L., Mou, S., Pye,
Q. N., Stoddard, M. F., Wallis, G., Williamson, K. S., West, M., Wechter, W. J., &
Floyd, R. A. (2004). New perspectives on vitamin E : Gamma-tocopherol and
carboxyelthylhydroxychroman metabolites in biology and medicine. Free Radical
Biology & Medicine, 36(1), 1‑15. [Link]
Herrera, E., & Barbas, C. (2001). Vitamin E : Action, metabolism and perspectives. Journal of
Physiology and Biochemistry, 57(1), 43‑56.
Huet, O., & Duranteau, J. (2008). Dysfonction endothéliale : Rôle des radicaux libres.
Réanimation, 17(4), 387‑392. [Link]
J, O., & B, M. (2019). Glutathione : Subcellular distribution and membrane transport 1.
Biochemistry and Cell Biology = Biochimie et Biologie Cellulaire, 97(3).
[Link]
K., F., Rharrabti, Y., A., B., Mahyou, H., & Berrichi. (2015). Cartographie de l’aire de
répartition de l’arganier (Argania spinosa L. Skeels) dans la région orientale du Maroc
par le GPS combiné au SIG. Nature & Technologie / C-Science de l’Environnement.
Kamal, R., Kharbach, M., Vander Heyden, Y., Doukkali, Z., Ghchime, R., Bouklouze, A.,
Cherrah, Y., & Alaoui, K. (2019). In vivo anti-inflammatory response and bioactive
compounds’ profile of polyphenolic extracts from edible Argan oil (Argania
spinosa L.), obtained by two extraction methods. Journal of Food Biochemistry, 43(12),
e13066. [Link]
Khallouki, F., & al. (2003). Consumption of argan oil (Morocco) with its unique profile of fatty
acids, tocopherols, squalene, sterols and phenolic compounds should confer valuable
cancer chemopreventive effects—PubMed. [Link]
Khallouki, F., Eddouks, M., Mourad, A., Breuer, A., & Owen, R. W. (2017). Ethnobotanic,
Ethnopharmacologic Aspects and New Phytochemical Insights into Moroccan Argan
Fruits. International Journal of Molecular Sciences, 18(11), 2277.
[Link]
Kharrassi, Y. E., & El Kebbaj. (2018). Chemical and phytochemical characterizations of argan
oil ( Argania spinosa L. skeels ), olive oil ( Olea europaea L. cv. Moroccan picholine ),
cactus pear ( Opuntia megacantha salm-dyck ) seed oil and cactus cladode essential oil
| SpringerLink. [Link]
Khovidhunkit, W., Kim, M.-S., Memon, R. A., Shigenaga, J. K., Moser, A. H., Feingold, K. R.,
& Grunfeld, C. (2004). Effects of infection and inflammation on lipid and lipoprotein

77
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Références Bibliographiques

metabolism : Mechanisms and consequences to the host. Journal of Lipid Research,

45(7), 1169‑1196. [Link]
Kono, K., Kamijo, Y., Hora, K., Takahashi, K., Higuchi, M., Kiyosawa, K., Shigematsu, H.,
Gonzalez, F. J., & Aoyama, T. (2009a). PPAR{alpha} attenuates the proinflammatory
response in activated mesangial cells. American Journal of Physiology. Renal
Physiology, 296(2), F328-336. [Link]
Kono, K., Kamijo, Y., Hora, K., Takahashi, K., Higuchi, M., Kiyosawa, K., Shigematsu, H.,
Gonzalez, F. J., & Aoyama, T. (2009b). PPAR{alpha} attenuates the proinflammatory
response in activated mesangial cells. American Journal of Physiology. Renal
Physiology, 296(2), F328-336. [Link]
Kuzmich, N. N., Sivak, K. V., Chubarev, V. N., Porozov, Y. B., Savateeva-Lyubimova, T. N.,
& Peri, F. (2017). TLR4 Signaling Pathway Modulators as Potential Therapeutics in
Inflammation and Sepsis. Vaccines, 5(4). [Link]
Lauranne, A., Justine, P., Noura, F., Julie, H., Andréa, S., & Laurine, H. (s. d.). ANATOMIE ET
PHYSIOLOGIE DU CŒUR. 11.
Li, G., Lee, M.-J., Liu, A. B., Yang, Z., Lin, Y., Shih, W. J., & Yang, C. S. (2012). The
antioxidant and anti-inflammatory activities of tocopherols are independent of Nrf2 in
mice. Free Radical Biology & Medicine, 52(7), 1151‑1158.
[Link]
Majourhat, K., Jabbar, Y., Araneda, L., Zeinalabedini, M., Hafidi, A., & Martínez-Gómez, P.
(2007). Karyotype characterization of Argania spinosa (L.) Skeel (Sapotaceae). South
African Journal of Botany, 73(4), 661‑663. [Link]
Margis, R., Dunand, C., Teixeira, F. K., & Margis-Pinheiro, M. (2008). Glutathione peroxidase
family—An evolutionary overview. The FEBS Journal, 275(15), 3959‑3970.
[Link]
Masuda, T., Shimazawa, M., & Hara, H. (2017). Retinal Diseases Associated with Oxidative
Stress and the Effects of a Free Radical Scavenger (Edaravone). Oxidative Medicine
and Cellular Longevity, 2017, 9208489. [Link]
Matthäusa, B., Guillaume, D., Gharby, S., Haddad, A., Harhard, H., & Charrouf, Z. (2010).
Effect of processing on the quality of edible argan oil—ScienceDirect.
[Link]
McClements, D. J., Decker, E. A., & Weiss, J. (2007). Emulsion-based delivery systems for
lipophilic bioactive components. Journal of Food Science, 72(8), R109-124.
[Link]
Münzel, T., Camici, G. G., & Maack, C. (2017). Impact of Oxidative Stress on the Heart and
Vasculature : Part 2 of a 3-Part Series—PubMed.
[Link]
Nations, U. (2021). Journée internationale de l’arganier | Nations Unies. United Nations;
United Nations. [Link]
Paoletti, F., Aldinucci, D., Mocali, A., & Caparrini, A. (1986). A sensitive spectrophotometric
method for the determination of superoxide dismutase activity in tissue extracts.
Analytical Biochemistry, 154(2), 536‑541. [Link]
2697(86)90026-6
Papa, S., Bubici, C., Zazzeroni, F., & Franzoso, G. (2009). Mechanisms of liver disease : Cross-
talk between the NF-kappaB and JNK pathways. Biological Chemistry, 390(10),
965‑976. [Link]
Rao, A. V., & Janezic, S. A. (1992). The role of dietary phytosterols in colon carcinogenesis.
Nutrition and Cancer, 18(1), 43‑52. [Link]

78
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Références Bibliographiques

[Link]., & Am, Cadenas. (2002). Fighting the stranger-antioxidant protection against
endotoxin toxicity. Toxicology, 180(1). [Link]
5
Serrano, M., Bouaid, A., Martínez, M., & Aracil, J. (2013). Oxidation stability of biodiesel from
different feedstocks : Influence of commercial additives and purification step. Fuel, 113,
50‑58. [Link]
Singh, R. J. (2002). Glutathione : A marker and antioxidant for aging. Journal of Laboratory
and Clinical Medicine, 140(6), 380‑381. [Link]
Sinha, N., & Dabla, P. K. (2015). Oxidative stress and antioxidants in hypertension-a current
review. Current Hypertension Reviews, 11(2), 132‑142.
[Link]
Song, J.-G., & Li, J. (2019). Development and Validation of a QuEChERS-LC-MS/MS Method
for the Analysis of Phenolic Compounds in Rapeseed Oil | Journal of Agricultural and
Food Chemistry. [Link]
Taoufik, F., Zine, S., El Hadek, M., Idrissi Hassani, L. M., Gharby, S., Harhar, H., & Matthäus,
B. (2015). Oil content and main constituents of cactus seed oils Opuntia Ficus Indica of
different origin in Morocco. Mediterranean Journal of Nutrition and Metabolism, 8(2),
85‑92. [Link]
Waring, W. S., Convery, A., Mishra, V., Shenkin, A., Webb, D. J., & Maxwell, S. R. J. (2003).
Uric acid reduces exercise-induced oxidative stress in healthy adults. Clinical Science
(London, England: 1979), 105(4), 425‑430. [Link]
Yang, H., Hua, C., Yang, X., Fan, X., Song, H., Peng, L., & Ci, X. (2020). Pterostilbene
prevents LPS-induced early pulmonary fibrosis by suppressing oxidative stress,
inflammation and apoptosis in vivo. Food & Function, 11(5), 4471‑4484.
[Link]
Zamocky, M., Furtmüller, P. G., & Obinger, C. (2008). Evolution of catalases from bacteria to
humans. Antioxidants & Redox Signaling, 10(9), 1527‑1548.
[Link]
Zawislak, R., Vincendon, G., Flori, J., & Geisert, J. (1981). [Determination of proteinuria in
children : Changes in results according to the methods used (author’s transl)]. Archives
Francaises De Pediatrie, 38(3), 171‑175.

79
80
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI webographie

81
82
A. BELKASSIOUIA & M. MEZGANI Annexes

83
 Résumé Abstract
L’huile d’argane, produite à partir des fruits d’arganier (argania spinosa) est Argan oil, produced from the fruits of the argan tree (argania spinosa) is
considérée comme l’huile comestible et cosmétique la plus chère au monde considered the most expensive edible and cosmetic oil in the world which is
qui est aussi utilisée en médecine traditionnelle. Par sa composition also used in traditional medicine. By its particular composition saponifiable
particulière saponifiable (les acides gras saturé et les acides gras insaturé) et (saturated fatty acids and unsaturated fatty acids) and unsaponifiable (sterols,
insaponifiables (les stérols, les tocophérols et les polyphénols), cette huile tocopherols and polyphenols), this oil has been found to have antioxidant
s’est avérée d’avoir des propriétés antioxydantes avec une capacité à traiter properties along with the ability to treat several diseases and the ability to
plusieurs maladies ainsi la capacité d’exclure le stress oxydatif. rule out an oxidative stress.
Cependant, le stress oxydant est un déséquilibre pro-oxydant et antioxydant However, oxidative stress is a pro-oxidant and antioxidant imbalance which
qui se traduit par l’augmentation des radicaux libres tels que les espèces results in the increase of free radicals such as reactive oxygen and nitrogen
réactives de l’oxygène et de l’azote, et/ou une diminution des antioxydants, species, and / or a decrease in antioxidants, this imbalance causes damage to
ce déséquilibre entraine des dommages sur l’ADN, les protéines et les DNA, proteins and lipids.
lipides. The aim of the work of our study was to explore the molecular basis of the
L’objectifs des travaux de notre étude a été d’explorer les bases moléculaires effects of argan oil on the heart metabolism of mice. A reason why we
des effets d’huile d’argane sur le métabolisme au niveau du cœur des souris. performed a study by treating the overall effects of oils (argan oil, cactus
Une raison pour laquelle nous avons réalisé une étude en traitant les effets seed oil, and rapeseed oil) on the heart metabolism of mice affected by an
d’ensemble des huiles (l’huile d’argane, l’huile de graine de cactus et l’huile oxidative stress generated by LPS, by monitoring the enzymatic activity of
de colza) sur le métabolisme du cœur des souris affecté par un stress oxydatif some antioxidant such as superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT),
engendré par le LPS, en suivant l’activité enzymatique de quelque and the quantification of the oxidative stress marker glutathione (GSH).
antioxydant telle que le superoxyde de dismutase (SOD) et la catalase According to our study, it was found that the oils do not have a direct and
(CAT), et la quantification du marqueur de stress oxydant le glutathion significant impact on the enzymatic activity of catalase, at the level of the
(GSH). metabolism of the heart of mice, either by inducing oxidative stress or not by
D’après notre étude, on a pu constater que les huiles n’ont pas un impact the LPS. The same for the stress marker GSH, the oils do not have a
direct et significatif sur l’activité enzymatique de la catalase, au niveau du significant effect against stress, except that the effect of argan oil is not yet
métabolisme du cœur des souris, soit en induisant le stress oxydatif ou non conclusive, since we had found the level reached of GSH in mice treated by
par le LPS. Pareil pour le marqueur de stress GSH, les huiles n’ont pas un LPS lower than those treated with HA + LPS. On the other hand, argan oil
effet significatif contre le stress, sauf que l’effet d’huile d’argane n’est triggers an increasing effect of the enzymatic activity of SOD in the presence
encore conclusif, puisqu’on avait trouvé le taux de GSH des souris traitées of oxidative stress. However, cactus seed oil exerts the same effect, in the
par le LPS inférieur à ceux traités par HA+LPS. Par contre, l’huile d’argan e absence of stress.
déclenche un effet augmentatif de l’activité enzymatique de la SOD en To conclude, argan oil and cactus seed oil are able to fight against oxidative
présence du stress oxydant. Cependant, l’huile de graine de cactus exerce le stress induced by LPS in the heart.
même effet, en absence de stress.
Pour conclure, l’huile d’argane et l’huile de graine de cactus sont capable de
lutter contre le stress oxydant induits par le LPS au niveau du cœur.

‫ملخص‬
‫يعتبر زيت األركان المنتج من ثمار شجرة األركان (أركانيا سبينوزا) أغلى‬
‫ بتكوينه‬.‫زيت لألكل ومستحضرات التجميل في العالم ويستخدم أيضًا في الطب التقليدي‬
)‫ قابل للتصبن (األحماض الدهنية المشبعة واألحماض الدهنية غير المشبعة‬،‫الخاص‬
‫ لقد ثبت أن لهذا الزيت‬,)‫وغير القابل للتصبن (الستيروالت والتوكوفيرول والبوليفينول‬
‫خصائص مضادة لألكسدة مع قدرته على عالج العديد من األمراض وكذلك قدرته على‬
‫التخلص من اإلجهاد‬
. ‫التأكسدي‬

‫فإن اإلجهاد التأكسدي هو خلل مؤيد األكسدة ومضاد األكسدة مما يؤدي إلى‬
‫ أو انخفاض في‬/ ‫ و‬،‫زيادة الجذور الحرة مثل األكسجين التفاعلي وأنواع النيتروجين‬
‫ وهذا الخلل يسبب تلف الحمض النووي والبروتينات‬،‫مضادات األكسدة‬
. ‫والدهون‬

‫كان الهدف من دراستنا هو استكشاف األساس الجزيئي لتأثيرات زيت األركان‬

‫ أحد أسباب إجرائنا دراسة من خالل معالجة‬.‫على التمثيل الغذائي في قلب الفئران‬
‫التأثيرات الكلية للزيوت (زيت األرغان وزيت بذور الصبار وزيت بذور اللفت) على‬
‫عملية التمثيل الغذائي لقلب الفئران المتأثرة باإلجهاد التأكسدي الناتج عن عديد السكاريد‬
‫ من خالل مراقبة النشاط األنزيمي لبعض مضادات األكسدة مثل ديسموتاز الفائق‬،‫الدهني‬
. ‫ والتقدير الكمي لعالمة اإلجهاد التأكسدي الجلوتاثيون‬،‫والكتالز‬
‫ فقد وجد أن الزيوت ليس لها تأثير مباشر وهام على النشاط‬،‫وفقًا لدراستنا‬
‫ إما عن طريق إحداث‬،‫ على مستوى التمثيل الغذائي لقلب الفئران‬،‫األنزيمي للكاتاالز‬
‫ نفس الشيء بالنسبة لعالمة‬.‫اإلجهاد التأكسدي أو عدمه بواسطة عديد السكاريد الدهني‬
‫ باستثناء أن تأثير‬،‫ فإن الزيوت ليس لها تأثير معنوي ضد اإلجهاد‬،‫اإلجهاد الجلوتاثيون‬
‫ حيث وجدنا أن مستوى الجلوتاثيون للفئران المعالجة‬،‫زيت األركان لم يكن نهائيًا بعد‬
‫بعديد السكاريد الدهني أقل من الواتي عولجن بزيت األركان مع عديد السكاريد الدهني‬
‫ يؤدي زيت األركان إلى زيادة تأثير النشاط األنزيمي لـ ديسموتاز‬،‫من ناحية أخرى‬.
‫ فإن زيت بذور الصبار يعمل بنفس‬،‫ ومع ذلك‬.‫الفائق في وجود اإلجهاد التأكسدي‬
.‫الطريقة دون إجهاد‬
‫ زيت األركان وزيت بذور الصبار قادران على محاربة اإلجهاد التأكسدي‬،‫في الختام‬
.‫الناجم عن عديد السكاريد الدهني في القلب‬