REPLUBLIQUE DU CAMEROUN REPUBLIC OF CAMEROON

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PAIX-TRAVAIL-PATRIE PEACE –WORK- FATHERLAND
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MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT MINISTRY OF HIGHER EDUCATION
SUPERIEUR *************
************* THE UNIVERSITY OF MAROUA
UNIVERSITE DE MAROUA *************
************* FACULTY OF SCIENCE
FACULTE DES SCIENCES *************
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DEPARTEMENT DES SCIENCES SCIENCE
BIOLOGIQUES

LICENCE PROFESSIONNELLE EN ANALYSE BIOLOGIQUES ET BIOCHIMIQUES

UE : BACTERIOLOGIE ET VIROLOGIE (ABB331)

TRAVAIL PERSONNEL DE L’ETUDIANT

THÈME :
COLORATION DES BAAR

PRESENTE PAR :

Nom : SOUSSEE

Prénom : ODETTE

Matricule : 21A0057FS

Enseignant: Dr. Baané

ANNÉE ACADÉMIQUE : 2023-2024

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 PLAN DE L’EXPOSE

Introduction
I. DEFINITION DES BAAR
II. LES METHODES DE COLORATION DES BAAR
1. méthode de ziehl neelsen
2. la méthode de kinyoun
3. la méthode à l’auramine-rhodamine
III. NUMERATION DES BAAR
Conclusion

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 INTRODUCTION
Les BAAR Bactéries Acido Alcoolo Résistantes sont des bactéries caractérisées par leur
résistance à l’action des acides et des alcools. Elles comprennent notamment le
Mycobacterium tuberculosis, agent pathogène de la tuberculose. La coloration des BAAR est
une technique cruciale en microbiologie pour détecter ces bactéries et diagnostiquer des
infections telles que la tuberculose. Le mycobacterium tuberculosis est une bactérie pathogène
responsable de la tuberculose, une maladie infectieuse qui affecte principalement les
poumons. La tuberculose reste un problème de santé publique majeur dans de nombreuses
régions du monde. Pour mieux approfondir notre travail, nous allons définir les BAAR,
ensuite évoquer les différentes méthodes de coloration et en fin la numérotation des BAAR.

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 I. DÉFINITION DES BAAR
Les BAAR sont un groupe de bactéries caractérisées par leur capacité à résister à l’action des
acides et des alcools. Ces bactéries présentent une paroi cellulaire particulière qui les rend
plus résistantes aux traitements conventionnels utilisés pour éliminer les bactéries. Les BAAR
comprennent des genres bactériens comme le Mycobacterium, qui inclut des espèces
pathogènes telles que le Mycobacterium tuberculosis, agent responsable de la tuberculose. La
résistance des BAAR à l’action des acides et des alcools est due à la composition spécifique
de leur paroi cellulaire, qui est riches en lipides et en mycolates. Ces composants confèrent
aux BAAR une capacité de rétention du colorant même après traitement à l’alcool acide, ce
qui les distingue des autres types de bactéries lors de la coloration en microbiologie. La
coloration des BAAR est technique essentielle en microbiologie pour détecter et identifier ces
bactéries, en particulier dans le contexte du diagnostic de maladies infectieuses telles que la
tuberculose. La résistance des BAAR à certains traitements antibiotiques rend leur détection
précoce cruciale pour un traitement efficace et une prise en charge adéquate des infections
qu’elles causent.

II. LES MÉTHODES DE COLORATION DES BAAR

Les méthodes les plus courantes sont celles de Ziehl-Neelsen, de Kinyoun et la coloration à
l’auramine rhodamine.
1. Méthode de Ziehl Neelsen
La coloration de Ziehl-Neelsen est une technique spécifique de coloration des bactéries acido-
alcolo-résistantes (BAAR), notamment utilisé pour la détection de mycobacterium
tuberculose. Voici les étapes détaillées de la coloration de Ziehl-Neelsen :
Matériel nécessaire :
- Lames de verre avec échantillon à colorer
- Fuchsine phéniquée (colorant primaire)
- Alcool-acide (décolorant)
- Bleu de méthylène (contre-colorant)
- Bunsen ou source de chaleur
- Microscope
Etapes de la coloration de Ziehl-Neelsen
1. Fixation : Déposez une goutte d’échantillon sur une lame de verre et faites chauffer
doucement pour fixer les bactéries.

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 2. Coloration primaire : Recouvrez l’échantillon fixé avec de la fuchsine phéniquée.
Chauffez la lame à l’aide d’un bunsen pour faire pénétrer le colorant dans les parois
des BAAR. Laissez agir pendant quelques minutes.
3. Décoloration : Rincez la lame à l’aide d’alcool-acide pour éliminer l’excès de colorant
des bactéries non résistantes. La décoloration doit être effectuée jusqu’à ce que
l’échantillon ne soit plus coloré.
4. Contre-coloration : Appliquez du bleu de méthylène sur la lame pour contre-colorer
les bactéries non résistantes. Laissez agir pendant quelques minutes.
5. Rinçage et observation : Rincez la lame à l’eau pour éliminer l’excès de colorants.
Placez la lame sous le microscope et observez les bactéries. Les BAAR apparaîtrons
en rouge ou rose vif, tandis que les autres bactéries seront en bleu.
La coloration de Ziehl-Neelsen permet une visualisation claire des BAAR grâce à leur
résistance aux acides et aux alcools, facilitant ainsi le diagnostic des infections telles que la
tuberculose. Cette méthode est largement utilisée en microbiologie clinique pour détecter et
identifier les bactéries acido-alcoolo-résistantes avec précision.
2. La méthode de Kinyoun
La coloration de Kinyoun est une méthode de coloration similaire à la coloration de Ziehl-
Neelsen, mais elle utilise des concentrations plus élevées de colorations pour augmenter la
sensibilité de détection des bactéries acido-alcoolo-résistantes (BAAR) telles que
Mycobacterium tuberculosis. Voici les étapes détaillées de la coloration de Kinyoun :
Matériel nécessaire :
- Lame de verre avec échantillon à colorer
- Fuchsine phéniquée concentrée (colorant primaire)
- Alcool-acide (décolorant)
- Vert malachite (contre-colorant)
- Bunsen ou source de chaleur
- Microscope
Étapes de la coloration de Kinyoun
1. Fixation : Déposez une goutte d’échantillon sur une lame de verre et faite chauffer
doucement pour fixer les bactéries.
2. Coloration primaire : Recouvrez l’échantillon fixé avec de la fuchsine phéniquée
concentrée. Chauffez la lame à l’aide d’un bunsen pour faire pénétrer le colorant dans
les parois des BAAR. Laissez agir pendant quelques minutes
3. Décoloration : Rincez la lame à l’aide d’alcool-acide pour éliminer l’excès de colorant
des bactéries non résistantes. La décoloration doit être effectuée jusqu’à ce que
l’échantillon ne soit plus coloré.
4. Contre-coloration : Appliquez du vert malachite sur la lame pour contre-colorer les
bactéries non résistantes. Laissez agir pendant quelques minutes.
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 5. Rinçage et observation : Rincez la lame à l’eau pour éliminer l’excès de colorants.
Placez la lame sous le microscope et observez les bactéries. Les BAAR apparaîtront
en rouge ou rose vif, tandis que les autres bactéries seront en vert.
La coloration de Kinyoun est une technique plus sensible que la coloration de Ziehl-Neelsen
en raison de l’utilisation de concentrations plus élevées de colorants, ce qui permet une
meilleure visualisation des BAAR. Elle est également utilisée en microbiologie clinique pour
détecter et identifier les bactéries acido-alcoolo-résistantes, en particulier dans le contexte de
la tuberculose.

3. Méthode à l’auramine-rhodamine
La coloration à l’auramine-rhodamine est une méthode de coloration utilisée pour détecter les
bactéries acido-alcoolo-résistantes (BAAR) telles que Mycobacterium tuberculosis. Voici les
étapes détaillées de la coloration à l’auramine rhodamine
Matériel nécessaire :
- Lame de verre avec échantillon à colorer
- Auramine O (colorant primaire)
- Rhodamine (décolorant)
- Alcool-acide (contre-colorant)
- Bunsen ou source de chaleur
- Microscope à fluorescence
Étapes de la coloration à l’auramine-rhodamine
1. Fixation : Déposez une goutte d’échantillon sur une lame de verre et faites chauffer
doucement pour fixer les bactéries.
2. Coloration primaires : Recouvrez l’échantillon fixé avec de l’auramine O. Chauffez la
lame à l’aide d’un bunsen pour faire pénétrer le colorant dans les parois des BAAR.
Laissez agir pendant quelques minutes.
3. Rinçage : Rincez la lame à l’eau pour éliminer l’excès de colorant.
4. Contre-coloration : Appliquez de la rhodamine sur la lame pour contre-colorer les
bactéries non résistantes. Laissez agir pendant quelques minutes.
5. Décoloration : Rincez la lame à l’acide d’alcool-acide pour éliminer l’excès de
colorants des bactéries non résistantes. La décoloration doit être effectuée jusqu’à ce
que l’échantillon ne soit plus coloré.
6. Rinçage final et observation : Rincez la lame à l’eau pour éliminer l’excès de
colorants. Placez la lame sous un microscope à fluorescente et observez les bactéries.
Les BAAR apparaîtront en jaune-vert sous la lumière ultraviolette, tandis que les
autres bactéries seront en rouge.

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 III. NUMEROTATION DES BAAR
La coloration à l’auramine-rhodamine est une technique de coloration fluorescente qui permet
une visualisation plus précise et spécifique des BAAR, en particulier lorsqu’elles sont
présentes en faible concentration. Elle est largement utilisée en microbiologie clinique pour le
diagnostic de la tuberculose et d’autres infections causées par des bactéries acido-alcoolo-
résistantes.
La numération des bactéries acido-alcoolo-résistantes (BAAR) peut être réalisée en utilisant la
méthode de coloration à l’auramine-rhodamine. Voici comment procéder pour effectuer la
numération des BAAR :
1. Préparation de l’échantillon : Fixez un échantillon contenant des BAAR sur une lame
de verre et réalisez la coloration à l’auramine-rhodamine selon les étapes décrites
précédemment.
2. Observation au microscope : Placez la lame sous un microscope à fluorescence équipé
d’un objectif à immersion. Utilisez une lampe UV pour exciter les colorants
fluorescents et observez les bactéries.
3. Numération des BAAR : Utilisez le grossissement adéquat pour visualiser les bactéries
avec précision. Comptez le nombre de bactéries acido-alcoolo-résistantes (BAAR)
présentes dans plusieurs champs de vision choisis de manière aléatoire.
4. Calcul de la concentration : Pour calculer la concentration de BAAR dans
l’échantillon, utilisez la formule suivante :
Concentration des BAAR = (Nombre moyen de BAAR observées par champ de
vision)=) x (Facteur de dilution) x (Volume de l’échantillon)
5. Interprétation des résultats : Comparez les résultats obtenus avec les seuils de tétection
et de diagnostic recommandés pour les BAAR. Une concentration élevée de BAAR
peut indiquer une infection active, tandis qu’une concentration latente ou à une
contamination.
La numération des BAAR est une étape importante dans le diagnostique et le suivi des
infections causées par Mycobacterium tuberculosis et d’autres bactéries acido-alcoolo-
résistantes. Elle permet d’évaluer la charge bactérienne dans l’échantillon et d’orienter le
traitement médical en conséquence.

CONCLUSION
En conclusion, la numération des bactéries acido-alcoolo-résistantes (BAAR) est une
étape essentielle dans le diagnostic et le suivi des infections causées par des agents
pathogènes tels que Mycobacterium tuberculosis. La méthode de coloration à l’auramine-

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 rhodamine permet de visualiser et de quantifier efficacement les BAAR dans les
échantillons biologiques, fournissant ainsi des informations précieuses pour la prise en
charge des patients. Une interprétation correcte des résultats de la numération des BAAR
peut guider les décisions thérapeutiques et contribuer à la lutte contre les infections
bactériennes résistantes. Cette approche diagnostique constitue donc un outil précieux
dans la lutte contre les maladies infectieuses et la promotion de la santé publique.