‫الجمهورية الجزائرية الديموقراطية الشعبية‬

République Algérienne Démocratique et Populaire

‫وزارة التعليم العالي و البحث العلمي‬
Ministère de l’Enseignement Supérieur de la Recherche Scientifique
‫جامعة امحمد بوقرة بومرداس‬
Université M’hamed Bougara Boumerdès

Faculté des Sciences

Département de Biologie
Domaine : Science de la nature et de la vie
Spécialité : Biochimie appliquée

Analyser un article scientifique

Thème
Polymorphisme génétique des glutath
ion-s- transférase GSTM1 et GSTT1 et survenue d’un
cancer colorectal dans un échantillon de la population
tunisienne.

Réaliser par : Groupe : 03

 BENKACI SOUAD
 BADACHE BOUCHRA
Année universitaire :2023-2024
 Sommaire :

I. INRODUCTION

II. PATIENTS ET METHODES

III. RESULTATS

IV. DISCUSSION
 I. INTRODUCTION :
Le polymorphisme génétique des enzymes glutathion-S-transférase (GST) est un sujet d'intérêt dans
le domaine de la recherche sur le cancer. Dans cette introduction, nous allons discuter du
polymorphisme génétique des formes GSTM1 et GSTT1, ainsi que de son lien avec la survenue du
cancer colorectal dans un échantillon de la population tunisienne.
Le cancer colorectal (CCR) est une cause majeure de mortalité et de morbidité dans le monde, sa
fréquence augmentant chaque année. C’est un type de cancer qui se développe dans le côlon ou le
rectum. , il peut toucher les hommes et les femmes de tous âges, bien qu'il soit plus fréquent chez les
personnes âgées.
Ce type de cancer se forme lorsque des cellules anormales se développent dans la paroi du côlon ou
du rectum. Ces cellules anormales peuvent former une masse appelée tumeur. Si la tumeur devient
cancéreuse, elle peut se propager à d'autres parties du corps.
Les enzymes GST jouent un rôle important dans la détoxification des substances potentiellement
cancérigènes dans le corps. Elles interviennent dans le processus de conjugaison du glutathion avec
ces substances, ce qui facilite leur élimination par le corps. Cependant, certaines variantes génétiques
de ces enzymes peuvent affecter leur activité et leur efficacité dans la détoxification, ce qui peut
augmenter le risque de cancer . Les gènes GSTM1 et GSTT1 codent pour des enzymes impliquées
dans l'élimination des Xénobiotiques, et une délétion de ces gènes peut conduire à l'absence totale de
produit génique fonctionnel. Les aliments sont une source importante d’exposition aux xénobiotiques
mais peuvent également fournir des antioxydants pour se protéger du stress oxydatif, impliqué dans
le développement et le maintien de plusieurs pathologies humaines
De nombreuses études ont rapporté que les génotypes nuls de GSTM1 et GSTT1, conduisant à un
déficit fonctionnel en protéines, sont associés à une susceptibilité accrue à diverses maladies,
notamment le cancer , l'asthme , la cataracte et le diabète .
L’OBJECTIF :
Le but de ce travail était d’abord d’analyser l’association entre les délétions de la glutathion-s-
transférase thêta classe 1 (GSTT1) et de la glutathion-s-transférase du classe 1 (GSTM1) et le risque
de développer un CCR. Deuxièmement, nous avons examiné la relation entre l’alimentation, le tabac
et le cancer colorectal en utilisant échantillon de notre population .
II. 1. Patients :

L'étude a porté sur deux groupes appariés non apparentés de la région du Sahel. Le premier groupe,
composé de 91 individus atteints du cancer colorectal sporadique, a été recruté au microscopique sur
des échantillons de tumeur prélevés lors de rectoscopies ou de coloscopies. Le deuxième groupe,
constitué de 127 sujets témoins en bonne santé, a été recruté parmi les donneurs de sang à l'hôpital
Taher Sfar de Mahdia. Les procédures de collecte des données ont été identiques pour les patients et
les témoins, incluant une enquête sur les habitudes alimentaires pour chaque participant.
Les sujets de la population d'études ont signé un consentement, et les données cliniques et
démographiques sont récapitulées dans le Tableau 1.

Tableau 1 Séquences et tailles des amorces utilisées pour l’amplification des gènes de GSTM1,
GSTT1 et albumine.
Gène Séquences sens Séquences anti-sens Taille du
fragment
amplifié (pb)
GSTM1 5’AA-CTC-CCT-GAA-AAG- 5’TT-GGG-CTC-AAA-TAT- 215
CTA-AAG-C3’ ACG-GTG-G3’
Albumin 5’CC-CTC-TGC-TAA-CAA- 5’ CC-CTA-AAA-AGA-AAA- 380
e GTC-CTA-C3’ TCG-CCA-ATC3’
GSTT1 5’C-CTT-ACT-GGT-CCT- 5’TCA-CCG-GAT-CAT-GGC- 480
CAC-ATC-TC3’ CAG-CA3’

II. 2. Méthodes :

2.1. Extraction de l'ADN :

L'extraction de l'ADN génomique a été réalisée à partir de prélèvements de sang total effectués de
manière stérile sur un anticoagulant EDTA.
Cette technique garantit la préservation de l'intégrité des échantillons.
La phase essentielle de cette méthode implique l'extraction de l'ADN à partir des globules blancs au
moyen de la technique de salting-out. Cette méthode est parti de la libération des protéines provoquée
par une force ionique élevée, obtenue par la saturation en chlorure de sodium.
Se déroule en 7 étapes :

1. Lyse cellulaire : Les cellules sont d'abord lysées pour libérer leur contenu, y compris
l'ADN.

2. Ajout d'une solution saline concentrée : Une solution saturée de sel, généralement du
chlorure de sodium (NaCl), est ajoutée à l'échantillon.
3. Précipitation des protéines : La force ionique élevée induite par la solution saline conduit à
la précipitation des protéines, des lipides et d'autres composants cellulaires indésirables. Ces
impuretés forment un précipité.

4. Centrifugation : Le mélange est ensuite centrifugé pour séparer le précipité des autres
composants en suspension.

5. Récupération de l'ADN : L'ADN, qui reste en solution, peut être récupéré dans la partie
liquide du mélange.

6. Précipitation de l'ADN :Une deuxième étape de précipitation peut être réalisée en ajoutant
de l'alcool (généralement de l'éthanol) pour regrouper l'ADN, facilitant ainsi sa récupération.

7. Lavage et réhydratation .

2.2. amplification des gènes GSTT1 ET GSTM1 par PCR multiplex :

- Utilisation d'une PCR multiplex pour amplifier simultanément les gènes GSTT1, GSTM1 et
l'albumine.
- L'albumine sert de contrôle positif interne.
- Trois paires d'amorces (sens et anti-sens) utilisées, séquences répertoriées dans le Tableau 1.
- Amplification de 100 mg d'ADN génomique dans un volume final de 20 µL avec différentes
concentrations d'amorces.
- Composition du mélange réactionnel incluant le tampon GoTaq Flexi, MgCl2, dNTP, et Taq
polymérase .
- PCR réalisée avec un thermocycleur Mastercycler selon un programme spécifique de 30
cycles de 94° C pendant 30 secondes , 64° C pendant 30 secondes , 72° C pendant 30
secondes et une extension finale à 72° C pendant cinq minutes .
- Les produits PCR multiplex, indiquant la présence de GSTM1 (215 pb), GSTT1 (480 pb) et
albumine (350 pb), séparés par électrophorèse sur agarose à 2% gel coloré au bromure
d'éthidium et visualiser par détection UV .
- Visualisation des fragments par détection UV.
- Classification des sujets en valeurs non nulles (délétion hétérozygote) ou nulles (délétion
homozygote) pour GSTM1 et GSTT1.
- Regroupement des génotypes hétérozygotes et non nuls homozygotes pour l'analyse
statistique en raison d'activités enzymatiques et taux d'expression similaires selon des études
antérieures .

2.3. analyse statistique :

Les données sont analysées à l'aide du logiciel Statistical Package for Social Science version
19 (SPSS 19).
Les fréquences génétiques des polymorphismes des gènes GSTT1 et GSTM1 chez les patients
et les témoins sont obtenues par comptage direct.
 Le test du Chi carré de Pearson est employé pour comparer les variables qualitatives et
examiner une éventuelle corrélation entre les polymorphismes, l'alimentation, le tabagisme et
le CCR. L'intensité de l'association entre les polymorphismes des gènes GSTT1, GSTM1 et le
CCR est évaluée à travers le calcul du rapport de cotes (OR) et l'intervalle de confiance (IC) à
95 %.
Le test de Student est utilisé pour la comparaison des moyennes quantitatives entre les deux
groupes.
La corrélation de Pearson est employée pour étudier l'intensité de la relation entre la
consommation alimentaire et l'occurrence du CCR. Une valeur de p inférieure à 0,05 indique
une différence statistiquement significative..

III. RESULTATS :

Notre étude cas-témoins a concerné 91 patients et 127 témoins d’âge moyen de 56,5 ans et 55 ans
dans une population tunisienne pour explorer l'impact des polymorphismes des gènes GSTT1 et
GSTM1 sur le risque de développer un cancer colorectal (CCR) .

Ce tableau représente les données cliniques de la population d’études

On remarque que l’âge et le sexe et l’indice de masse corporelle (IMC) n’ont pas présenté de
différence significative entre le groupe de patients et le groupe de témoins .
Une minorité de cette population étudiée sont des fumeurs. Bien que la différence entre les fumeurs
atteints de cancer colorectal et les témoins soit légère, Ces informations peuvent indiquer un léger
potentiel, non statistiquement significatif, d'augmentation du risque chez les fumeurs.
L'analyse de 3éme tableau a montré que le génotype nul GSTT1 était moins présent chez les patients
que chez les témoins, tandis que le génotype nul GSTM1 était également moins présent chez les
patients que chez les témoins, mais de manière non statistiquement significative.
 Donc la polymorphisme de gène GSTT1 été associé à un risque accrue de CCR chez la
population tunisienne .
 Les patients attient de cancer colorectal a une fréquence très faible de génotype nul de
GSTT1 par rapport au témoins de bonne santé .
 Le géne GSTM1 n’étais pas significativement associe à la maladie CCR .
L'étude a également examiné la corrélation entre les habitudes alimentaires et la survenue du CCR,
la consommation de restauration rapide étant significativement corrélée à la maladie. Cependant,
aucune corrélation significative n’a été trouvée entre la consommation de viandes rouges, de salamis
et de volaille avec le risque de développer un CCR.

Poisson : Une corrélation faible a été observée entre la consommation de poisson et le cancer
colorectal. Les acides gras oméga-3 présents dans le poisson pourraient avoir des effets protecteurs.
Nourriture de la Restauration Rapide : Les aliments de la restauration rapide sont souvent riches en
graisses saturées, en sucres et en additifs, ce qui pourrait contribuer à accroître le risque de cancer
colorectal.

Viande Rouge, Salami, Volaille : Aucune corrélation significative n'a été trouvée entre la
consommation de ces aliments et le risque de cancer colorectal dans cette étude.
IV. Discussion :
Cette étude explore le rôle des gènes GST, en particulier GSTM1 et GSTT1, dans la prédisposition
au cancer colorectal (CCR) chez une population tunisienne. Une association significative est
observée entre le polymorphisme GSTT1 et l'incidence du CCR, suggérant que la délétion du gène
T1 peut agir comme un facteur protecteur. Les résultats divergent dans la littérature, soulignant la
complexité du rôle de l'enzyme GSTT1. Pour le polymorphisme GSTM1, aucune association
significative n'est observée dans notre étude. La combinaison des délétions des gènes GSTT1 et
GSTM1 ne montre pas de différence significative entre les groupes de patients et de témoins. Une
analyse alimentaire révèle une corrélation significative entre la consommation de restauration rapide
et le CCR, soulignant les risques liés à une alimentation pauvre en éléments nutritifs. En revanche, la
consommation de poissons présente une corrélation plus faible, suggérant un effet protecteur grâce
aux nutriments antioxydants. En ce qui concerne les viandes, la fréquence de consommation ne
semble pas être un facteur de risque significatif pour le CCR, bien que des études antérieures aient
rapporté des résultats contradictoires.