Mesure de l'activité de l'invertase
Transféré par
Ben Hamed SiwarMesure de l'activité de l'invertase
Transféré par
Ben Hamed SiwarRépublique Tunisienne
Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche
Scientifique
***
Université de Monastir
Institut Supérieur des Sciences Appliquées et de Technologie de Mahdia
Mastère professionnel en technologies agroalimentaires
Niveau d’étude : 1ére année
TP : Génie et technologie enzymatique
TP2 : MESURE DE L’ACTIVITE DE L’INVERTASE
Réalisé par :
BEN HAMED Siwar
KRIFA Hadil
CHAIEB Rania
Enseignant : Dr. BEN MANSOUR Mohamed
Année universitaire : 2023/2024
1
I. Introduction
L’unité enzymatique est définie comme la quantité d’enzyme qui libère 1 mg d’hexose
réducteur (cas de l’invertase : glucose + fructose).
L’activité enzymatique de l’invertase est définie comme le nombre de micro-moles de
saccharose hydrolysé par minute.
L’activité spécifique est définie comme le nombre de micro-moles de saccharose
hydrolysé par minute et par mg de protéines solubles
II. But :
Cette manipulation consiste a suivre la cinétique d’hydrolyse de saccharose par
l’invertase, ainsi que l’activité spécifique de l’invertase dans l’extrait enzymatique.
III. Principe :
L’hydrolyse de saccharose (sucre complexe) libère deux sucre réducteur par l’invertase.
La détermination de son activité s’effectue à l’aide de DNS (Acide 3,5-dinitrosalicylique) qui
subit une virage de sa coloration initiale « jaune » en « rouge » en présence de sucre réducteur
en milieu chaud (100°C) et alcalin absorbant la lumière à 530nm.
IV. Résultats :
𝑚
1 mg => 1 ml 𝑛=
𝑀
X => 0,2 ml 𝑀𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑒 = 180 𝑔/𝑚𝑜𝑙𝑒
0,2 ∗ 1 0,2∗10−3
=> 0,2 𝑚𝑔 𝑛2 = = 1,11 µ 𝑚𝑜𝑙𝑒
1 180∗106
tube Glucose(g) Glucose (µmole) DO
1 0 0 0
2 0,2 1,11 0,113
3 0,4 2,22 0,337
4 0,6 3,33 0,492
5 0,8 4,44 0,625
6 1 5,55 0,816
2
Gamme d'etalonnage de glucose
0,9
0,8
y = 0,1485x - 0,015
0,7 R² = 0,9944
0,6
0,5
DO
0,4
0,3
0,2
0,1
0
-0,1 0 1 2 3 4 5 6
Glucose ( umole)
Figure 1: Courbe d’étalonnage : DO=f (n glucose en µmol)
Equation de la courbe :
y = 0,1485x - 0,015 avec R² = 0,9944
Quantité des sucres réducteurs apparus :
𝑦 = 0,1485𝑥 − 0,015
𝐲+𝟎.𝟎𝟏𝟓
𝐱= 𝟎.𝟏𝟒𝟖𝟓
0.186+0,015
Essai 1 => DO = 0.186 : 𝑛1 = = 1,353 µ𝑚𝑜𝑙
0.1485
0.183+0.015
Essai 2=> DO = 0.183 : 𝑛2 = = 1,333 µ𝑚𝑜𝑙
0.1485
Mesure de l’activité enzymatique
1 mole de saccharose donne 2 moles sucres réducteurs
𝟏
𝐧𝐬𝐚𝐜𝐜𝐡 = 𝟐 𝐧𝐬𝐮𝐜𝐫𝐞 𝐫𝐞𝐝
𝑋1 ∗ 𝐹𝐷1 ∗ 𝐹𝐷2
𝐴𝐸𝑋 =
𝑉𝑒 ∗ 5 ∗ 2
3
avec :
X1 : nombre de mole de sucre 𝑽𝒇 𝟐
𝑭𝑫𝟏 = = = 𝟒𝟎
2 : coefficient stœchiométrique 𝒇𝒊 𝟎, 𝟎𝟓
FD1 et FD2 : facteur de dilution 𝟏
𝑭𝑫𝟐 =
t : temps d’incubation (min) 𝟐𝟓
Ve : volume d’essai (ml)
𝑿𝟏 ∗ 𝑭𝑫𝟏 ∗ 𝑭𝑫𝟐 𝑿𝟐 ∗ 𝑭𝑫𝟏 ∗ 𝑭𝑫𝟐
𝑨𝑬𝑿𝟏 = 𝑨𝑬𝑿𝟐 =
𝑽𝒆 ∗ 𝟓 ∗ 𝟐 𝑽𝒆 ∗ 𝟓 ∗ 𝟐
1,353 ∗ 40 ∗ 25 1,333 ∗ 40 ∗ 25
= =
2∗5∗2 2∗5∗2
= 67,65 UI/ml = 66,65 UI/ml
L’activité enzymatique moyenne :
𝐴𝐸𝑋1 + 𝐴𝐸𝑋2 67,65 + 66,65
𝐴𝐸𝑚𝑜𝑦 = = = 67,15 𝑈𝐼/𝑚𝑙
2 2
𝐴𝐸𝑡𝑜𝑡 = 𝐴𝐸𝑚𝑜𝑦 ∗ 93 = 67,15 ∗ 93 = 6244,95 𝑈𝐼
Mesure de l’activité spécifique
𝑨𝑬
𝐀𝐒 =
𝒎
6244,95
𝐴𝑁: AS =
1241,55
= 5,029 UI /mg