UNIVERSITE NORBERT ZONGO BURKINA FASO

UNITE DE FORMATION ET DE Unité-Progrès-Justice

RECHERCHE EN SCIENCE ET
TECHNOLOGIE (UFR/ST)
DEPARTEMENT DE BIOCHIMIE FONDAMENTALE
ET APPLIQUEE
NIVEAU : L3/S6
Module : GENIE GENETIQUE
ENSEIGNANT : Dr KONATE

THEME EMPREINTE GENETIQUE : TEST DE PATERNITE PAR

ANALYSE DES MARQUEURS MICROSATELLITES

GROUPE 6

Les membres du groupe

N° NOM PRENOM

01 GOUBA Zibouré

02 KONKOBO Hervé

03 NAMOUNTOUGOU Mariam
04 SAWADOGO Sechna
05 SAWADOGO W. Othniel

06 SORE Moussa

07 ZOUNDI Kady

ANNEE ACADEMIQUE : 2022-2023

 PLAN

INTRODUTION

I/ EMPREINTE GENETIQUE

1/ Définition

2/ Méthodes d’analyses des empreintes génétique

II/ TEST DE PATERNITE

1/ Définition de test de paternité

2/ Processus des tests de paternité

III/ LES MARQUEURS MICROSATELLITES

1/ Définition de marqueur microsatellite

2/ Classification
3/ Utilisation des marqueurs microsatellites dans les tests de paternité

4/ Avantage des marqueurs microsatellites

CONCLUSION
 INTRODUCTION
L’empreinte génétique et les tests de paternité basés sur les marqueurs
microsatellites sont des outils essentiels dans le domaine de la génétique et de
l’identification. Les marqueurs microsatellites, également connus sous le nom de
SSR (Simple Séquence Repeats), sont des régions d’ADN constituées de courtes
séquences d’ADN répétées en tandem. Ces marqueurs sont hautement
polymorphes, ce qui signifie qu’ils varient d’une personne à l’autre et sont donc
utilisés dans les tests de paternité pour établir des liens de parentés.

I/ EMPREINTE GENETIQUE
1/ Définition
L'expression empreinte génétique provient de l’expression « genetic fingerprint
» par analogie avec les empreintes digitales (propres à chaque individu) utilisées
dans le cadre de l'identification des criminels. Une empreinte génétique ou profil
génétique est le résultat d'une analyse génétique, rendant possible l'identification
d'une personne à partir d'une petite quantité de ses tissus biologiques (bulbe de
cheveux, sang, salive, sperme). Elle repose sur le fait que bien que deux
humains aient une large majorité de leur patrimoine génétique identique, un
certain ensemble de séquences dans leur ADN reste spécifique à chaque individu
(en raison du polymorphisme). L’analyse de cette empreinte permet de comparer
des séquences spécifiques d'un individu. Un échantillon de cellules présentant la
même empreinte génétique qu'un individu confirme la provenance de ces
cellules de cet individu ou de son éventuel jumeau monozygote. Le procédé des
empreintes génétiques intéresse la médecine, la recherche et le droit, en
identifiant des espèces animales, végétales ou l’homme par la connaissance de
leurs caractéristiques génétiques... Les domaines d’expertise des laboratoires
d’empreintes génétiques concernent donc le domaine de l’agriculture, légal et
médical par génotypage de la trace (dosage de l’ADN nucléaire, séquençage de
l’ADN mitochondrial à partir d’une trace isolée ou d’un prélèvement salivaire
ou sanguin) et tests de paternité (dossiers civil ou pénal avec génotypage direct
pour confirmation/infirmation des liens de parenté directs, de fratrie ou encore
de liens complexes de parenté).
 2/ Méthode d’analyse des empreintes génétique
Les empreintes génétiques peuvent être faites à partir de deux techniques. La
première se fait en prélevant un échantillon d'ADN sur un individu, puis en
l'amplifiant à l'aide d'une technique appelée réaction en chaîne par
polymérase (PCR). L'ADN amplifié est ensuite séparé en fonction de sa taille
par un procédé appelé électrophorèse sur gel. L'empreinte génétique qui en
résulte peut-être utilisée pour identifier des individus avec un haut degré de
précision.
La deuxième technique se fait en coupant l'ADN en morceaux à l'aide
d'enzymes de restriction. Ces enzymes coupent l'ADN en des points
spécifiques, créant ainsi des fragments de différentes tailles. Les fragments sont
ensuite séparés par taille à l'aide de l'électrophorèse sur gel. Ainsi, les
empreintes génétiques peuvent être utilisées pour déterminer si deux personnes
sont apparentées.
II/ TEST DE PATERNITE
1/ Définition
Un test de paternité consiste à analyser l'ADN de deux personnes dans le but
d'établir un lien de parenté génétique (filiation) avec les conséquences juridiques
qui peuvent en découler. Le génome peut être utilisé en biométrie : c’est-à-dire,
analyse mathématique des caractéristiques biologiques (empreintes digitales, les
indices de l'iris, de la rétine, de la main et des empreintes vocales) d'une
personne pour déterminer son identité précise. Elle repose sur le principe de la
reconnaissance de caractéristiques physiques. A l’exception des jumeaux
monozygotes, tous les humains ont un génome sensiblement différent en raison
du polymorphisme génétique.
2/ Processus des tests de paternité
La génétique permet d'apporter des réponses complètes et fiables aux questions
de filiation soit par des méthodes simples soit par l’analyse de l’ADN.
*Les méthodes simples
Il existe deux méthodes simples qui ne demandent aucune analyse poussée et
qui donnent des hypothèses quant au lien de parenté :
° Méthode des gènes récessifs : En étudiant les caractères exprimés par des
gènes récessifs, il est possible d'écarter certaines parentés. Exemple : le caractère
couleur des yeux étant codé sur plusieurs gènes distincts, il est rare que deux
parents aux yeux bleus (allèle récessif) donnent naissance à un enfant aux yeux
d'une autre couleur plus foncés.
° Méthode des groupes sanguins : Les groupes sanguins donnent aussi des
indications sur la filiation. Une mère de groupe « A » ne pourra pas avoir
d'enfants de groupe « AB » avec un père de groupe « A » ou « O » (les
caractères A et B des groupes sanguins d'un enfant doivent nécessairement avoir
été hérités soit du père, soit de la mère car les gènes exprimant ces deux
caractères sont codominants). Un couple de groupe sanguin A et B peut avoir un
enfant de groupe O (car le gène exprimant le groupe « O » est récessif : il ne
s'exprimera qu'en l'absence des autres caractères). Si le père et la mère sont de
groupe A avec, dans les deux cas, un allèle « A » et un allèle « O », alors ils
pourront avoir des enfants : de groupe « A » avec deux allèles « A », ou de
groupe « A » avec un allèle « A » et un allèle « O », ou de groupe « O » avec
deux allèles « O ». De même, le rhésus- est récessif, il ne s'exprimera qu'en
l'absence du caractère +. Si les parents sont de rhésus-, ils ne pourront pas avoir
d'enfant au rhésus+.
* Analyse de l’ADN
Cette méthode, contrairement aux précédentes, nécessite une analyse poussée
de l'ADN de l'individu qui recherche ses parents ainsi que celui de son père
et/ou de sa mère potentielle. Elle demande plusieurs jours mais permet d'arriver
à des réponses tranchantes : soit écarter la filiation, soit au contraire conclure à
une très forte probabilité de filiation (> 99 %). Grâce à la PCR (facile, peu
couteuse et sensible) la détermination des « empreintes génétiques » (ou profil
génétique) d’un individu est réalisée par analyse des minisatellites et
microsatellites.
- Principe : Le test de paternité consiste donc à évaluer la taille de certains mini
ou microsatellites bien spécifiques et à comparer pour chaque chromosome, ces
caractéristiques entre les chromosomes de l'enfant et ceux de ses parents
potentiels.
- Technique : Extraction d’ADN d'un échantillon prélevé sur l'individu (sang,
salive, etc.) puis amplification PCR de l'ADN de chaque paire de chromosome
puis digestion de l’ADN amplifié par une enzyme de restriction qui va isoler les
minisatellites ou microsatellites en préservant leur longueur et enfin analyse des
fragments d’ADN digérés par électrophorèse.
III/ LES MARQUEURS MICROSATELLITES
1/ Définition de marqueur microsatellite
En génétique, les microsatellites (SSR ou STR pour ses sigles en anglais pour
les répétitions simples et les répétitions courtes en tandem) sont des séquences
d'ADN dans lesquelles un fragment est répété de manière consécutive. La taille
des fragments varie de deux à six paires de bases. La variation du nombre de
répétitions, et non la séquence répétée, crée des allèles différents.
Les microsatellites se trouvent généralement dans des zones non codantes de
l'ADN. Ils sont neutres, codominants et ont un taux de mutation élevé, ce qui les
rend très polymorphes. Ils sont utilisés comme marqueurs moléculaires dans une
grande variété d'applications dans le domaine de la génétique, telles que les
études de parenté et de population. Cela est dû à sa capacité à générer
une empreinte génétique personnelle ou un profil génétique.
2/ Classification
Les microsatellites sont classés en fonction du nombre de nucléotides que le
motif répétitif possède : mono, di, tri, tétra, penta ou hexa nucléotide.
La classification comprend également le modèle d'ordre des raisons :
• Pur ou parfait : Une seule raison répétée n fois en série. Ex : (AC)9.
• Pure interrompu : un seul motif répété n fois, où les nucléotides sont
intercalés entre les différentes répétitions. Ex : (CA)2AA(CA)12.
• Composés : deux motifs ou plus répétés en série. Ex : (GT)2(TG)10.
• Composés interrompus : au moins un de ses motifs contient des
nucléotides intercalés. Ex : (CT)4(GT)2CTAT (GT)15.
• Complexes : combinaisons entre les classes précédentes, sans modèle
d'ordre défini. Ex : (ACC)8 + TG + (GA)12 + (TTA)5 + GC + (TTA)4.

3/ Utilisation des marqueurs microsatellites dans les tests de paternité

Traditionnellement, les tests de paternité ont été effectués principalement au
moyen de groupes sanguins, comprenant des tests sérologiques et des tests de
groupe sanguin (hémotypes) ; ainsi que l'analyse électrophorétique du
polymorphisme des protéines et des enzymes sanguines (allozymes).
Actuellement, ces tests ont été remplacés par l'utilisation de microsatellites.
La combinaison de ces systèmes offre une probabilité de 97 % de détecter ou
d'assigner un père ou une mère correcte(e) et environ 100 % de probabilités de
croisement entre individus.
Le développement de méthodologies d'analyse de l'ADN, et en particulier
l'utilisation de la technique de PCR pour le typage des microsatellites, modifie
radicalement le champ de l'identification individuelle, non seulement chez
l'homme, mais aussi chez l'animal domestique.
C'est pour cette raison et étant donné le grand nombre de rapports de synthèse
signalés pour différentes espèces, que la Société internationale de génétique
animale (ISAG) et l'Organisation pour l'alimentation et l'agriculture (FAO) ont
sélectionné et normalisé différents microsatellites appartenant à différentes
espèces d'animaux domestiques (bovins, équidés, porcs, chiens, ovins, caprins)
afin d'être utilisés pour des études d'identification et des travaux sur
la diversité génétique des races domestiques.

Une autre application des microsatellites est la construction de cartes de liaison

plus complètes et détaillées ; ainsi que l'identification des gènes d’intérêt (QTL).
Tous les marqueurs peuvent être utilisés pour créer des cartes de liaison.
Cependant, il est nécessaire que les allèles se séparent indépendamment et qu'ils
puissent également être surveillés via le pedigree. La progéniture peut être
informative si les parents sont des doubles hétérozygotes aux locus analysés.
Les loci situés sur différents chromosomes pourraient librement se recombiner
au cours de la gamétogenèse parentale jusqu'à 50 % (ségrégation indépendante);
alors que s'ils se trouvaient dans le même chromosome, ils se recombineraient
avec une fréquence qui oscille entre 0 et 50 % en fonction de la distance en
centimètres-centimètres (cM) présente entre eux.
Ainsi, une carte génétique bien fournie des marqueurs devient un outil très utile
pour identifier les gènes responsables des caractères d'intérêt.
L'objectif est de rechercher une association entre plusieurs allèles, dans
n'importe lequel des marqueurs, en effectuant une ségrégation en populations
présentant un caractère intéressant, afin d'identifier les régions du génome où le
gène responsable de ce caractère a le plus de chance d'être trouvé.
En plus des applications qu'ils présentent précédemment, les DOS peuvent
également être utilisées en investigation médico-légale, car avec une très petite
quantité d'ADN, un profil génétique adéquat peut être obtenu. Cela permet
l'identification d'échantillons se trouvant sur les lieux du crime, en plus de la
création d'une base de données contenant les profils génétiques des criminels
signés par la police.
Lors de la comparaison de deux profils génétiques, il est important de considérer
quelle serait la probabilité que le profil génétique trouvé sur les lieux du crime
provienne d'une personne aléatoire de la population. Ceci est particulièrement
important dans le cas où vous avez des profils génétiques partiels, c'est-à-dire
qui ne contiennent pas le minimum de 16 DOD légiférées pour l'Homme. Si
nous avons un suspect que nous voulons comparer à l'ADN de la scène du
crime, nous devons nous assurer que les échantillons correspondent.
La probabilité que les 16 STR d'un échantillon coïncident avec celles d'un autre
échantillon est de 1 × 10-18, ce qui nous donne une idée de la fiabilité de cette
méthode d'identification.
La législation en matière de stockage et de traitement de ces informations varie
d'un pays à l'autre. Elle trouve des cas dans lesquels ces informations sont
conservées dans les dossiers de la police sous une forme indéterminée ou
d'autres où elles sont supprimées après un certain délai ou lorsque les
informations sont conservées. Personne n’a prouvé son innocence.
Les raisons pour lesquelles ces informations entrent dans ces bases de données
sont également variables, pouvant être ajoutées au moment où une personne est
considérée comme suspecte ou attendent la résolution du procès pour déterminer
son entrée ou non.
4/ Avantages de l’analyse des marqueurs microsatellites
* doués d’une fréquence équilibrée des différents allèles
*identiques d’un groupe ethnique (racial) à l’autre
* puissants et fiables : considérées comme sûres à 100%
* ont été standardisés à l’échelle internationale grâce à des « kits »
commerciaux disponibles sur le marché (en 2007 10 000 tests ont été vendus à
200 - 500 euros par examen) permettant de tester simultanément 11 à 16
microsatellites indépendants et localisés sur les autosomes.
* le dispositif juridique actuel autorise environ 1500 examens annuels.

CONCLUSION
L’empreinte génétique et les tests de paternité basés sur des marqueurs
microsatellites représentent des avancées significatives dans la science médicale
et légale. Leur précision et fiabilité joue un rôle essentiel dans la résolution de
question de filiation et de paternité. Néanmoins ; il est crucial de mener ces tests
dans le cadre légal et éthique approprié pour garantir des résultats pertinents et
fiables.