SENESCENCE OVARIENNE & QUALITÉ
OVOCYTAIRE
DR DJ .AMAROUCHE. IVF CENTER EL WALIDAYN ALGER
SENESCENCE OVARIENNE & QUALITÉ
OVOCYTAIRE
Objectifs:
• limites du sujet de la présentation: éliminer toute
étiologie d’atteinte ovarienne non liée à l’âge
• Quelles altérations géniques, endocrines et
paracrines , génèrerait l’effet de l’âge sur la
qualité ovocytaire ?; est il possible d’y remédier?
• y aurait il des moyens de prévenir la Sénescence
Ovarienne occulte et/ou des thérapeutiques
adjuvantes pour la freiner ? : le futur ???
GENERALITES & DEFINITIONS
• Le Veillissement naturel débute à la conception:
L’apoptose folliculaire débute déjà des la 24 semaine in utero
« L’horloge temps est dans l’ovaire »
le veillisement est asymptomatique et inéluctable
• La Senescence ovarienne : débute après la phase de
maturité de l‘ovaire
Kline ( 2000) disait:
« le temps biologique n’est pas le temps chronologique »
• Programmation et détermination génétiques dans les 2 cas
L’atrésie est l’évolution la plus fréquente d’un follicule: 99,9%
Oktem O , and Urman B Hum. Reprod. 2010;25:2944-2954
Age & Reserve Ovarienne
Taux de conception par cycle selon
l’âge
• 25 ans : 24-25 %
• 35 ans : 12 %
• 40 ans : 6 %
Senescence Ovarienne
• Chute des Taux de Grossesses.
• Augmentation des Taux d’ABRTs
• Chute de la Reserve Ovarienne
• Augmentation des Taux d’Aneuploidies
dans l’ovocyte et l’embryon.
Malfaisance du temps qui passe
Broekmans F J et al. Endocrine Reviews 2009;30:465-493
Senescence ovarienne
Le génome embryonnaire humain n’est actif qu’au
stade d’embryons à 8 cellules(Braude et al, 1998)
-les premières divisions sont entièrement dépendantes
des transcrits géniques d’origine maternelle et des
protéines stockées dans les ovocytes
___Cela peut donc conduire à des erreurs de ségrégation
chromosomique dans la 1° division des embryons
humains et ainsi a 1 mosaïsme (Qiao,Wang,feng et al
MAM 2013)
__une étude récente: les ovocytes de femmes âgées ont
peut être des mécanismes de point de contrôle du cycle
cellulaire affaiblis et des mitochondries compromises,
avec perte de la polarité
Ovocyte « agé » et Don d’ovocyte
F PELLESTOR Med Sci. 2004
• La qualité de
l’ovocyte est une
donnée de base
pour le biologiste qui
ne dépend pas de
lui, qu’il peut parfois
altérer (chaîne du
chaud), qu’il peut
rarement corriger
(maturation in vitro)
mais qu’il peut
observer.
• Notation ovocytaire en 2011:
- structure et forme
- maturation nucleaire et cytoplasmique: asynchrones
- notation du cytoplasme: SER
- COC
- zone pellucide
- espace perivitellin: inclusions
- notation du GP (Ebner et al 2005)
- vacuoles: taille > 14π
FEMALE MEIOSIS
• oocytes arrestin a late stage of prophase for
decades.
• Asymmetric division
• Fast meiosis II following fertilization
MALE MEIOSIS
• Initiated in puberty.
• Proceed uninterrupted
• symmetric division(spermatogenese)
Qualité de l’ovocyte ?
• Maturité (nucléaire et cytoplasmique)
• Absence d’atrésie
• Morphologie normale (dysmorphies)
• Absence d’anomalies ultrastructurales
• Absence d’anomalies chromosomiques
• Absence d’anomalies géniques
Meiose ovocytaire et anomalies: 2
Diverses combinaisons « naturelles »
Incidence des Aneuploidies
Senescence et aneuploidies
F Pellestor et al , 2003
Aneuploïdies chromatidiennes et âge maternel
Senescence ovarienne et Pic d’Aneuploïdies
dérivant des ovocytes « âges »
Hassold et al., Nature Genetics. 2001
ORIGIN %
Trisomy No of Paternal Maternal Post-zygotic
cases MI MII MI MII mitosis
2 18 28 - 54 13 6
7 14 - - 17 26 57
15 34 - 15 76 9 -
16 104 - - 100 - -
18 143 - - 33 56 11
21 642 3 5 65 23 3
22 38 3 - 94 3 -
XXY 142 46 - 38 14 3
XXX 50 - 6 60 16 18
Immunofluorescence images: le taux
d’anomalies passe de 20% environ avant 35 ans à 70%
ensuite
(Mandelbaum et al, 2004)
Fuseau marqué par un anticorps primaire anti-α tubulin et un
secondaire anti-FITC
Chromosomes colorés en bleu (DAPI) ou rouge (Propidium Iodide)
Cohesines et age
Mecanisme de Separation Prematurée
de Chromatides Soeurs
Les dysmorphies ovocytaires augmentent avec l’age
senescence
• Anomalies du cytoplasme : bull’seye, inclusions denses,
corps réfractile, amas de SER, grandes vacuoles, perte de
sphéricité
• Anomalies de la ZP : épaisse ou fine, uniforme, dédoublée
ou feuilletée, ovale, hérissée . ( ZP3)
• Anomalies de l’EPV: élargi, granuleux
• Anomalies du globule polaire : polylobé, fragmenté, trop
grand, trop petit
Défauts de qualité ovocytaire liés à l’Age
1. ALTERATIONS DU CYCLE CELLULAIRE
1. DEFAUT DE RESERVES (ARN , protéines)
1. DEFAUTS ENERGETIQUES
1. DEFAUTS TELOMERIQUES
1. SENSIBILITE ACCRUE AUX STRESS
Senescence Ovarienne & Alterations
qualitatives Ovocytaire
Effets sur :
. La fécondabilité de l’ovocyte ( cohorte et repetition)
• La ségrégation chromosomique
• Les mécanismes de réparation de l’ADN
• L’intégrité du cycle cellulaire
• Le fonctionnement mitochondrial
Luo et al Cell 2010
Hypothèse
Le dysfonctionnement mitochondrial ovocytaire
joue un role majeur dans la senescence reproductive
• L’ovocyte possède approximativement 200 000
mitochondries
• L’ATP ovocytaire est la seule source d’energie
pour la méiose et pour le développement
ultérieur embryonnaire jusqu’au stade de
blastocyste
Rôle des mitochondries dans l’ovocyte
1. SYNTHESE ENERGETIQUE: ATP ; LIPIDES(CCO)
1. EQUILIBRE REDOX (Stress oxydatif : ROS)
1. REGULATION DE L’APOPTOSE
1. STOCK CALCIQUE (activation)
Age et Mitochondrie Ovocytaire
• L’age avancée maternel est accompagné de :
- Augmentation des mutations de l’ADNmt
avec diminution des copies d’ADN MT
- Changements dans la fonction mitochondriale :
o Activité métabolique altérée
o Production d’energie réduite
Les mitochondries sont les organelles les plus abondantes dans l’ovocyte et l’embryon
de mammifères.
La respiration mitochondriale est la première source d’ ATP,, nécessaire pour la
maturation nucléaire et cytoplasmique, la formation du fuseau, l’activité motrice etc.
Les mitochondries sont directement impliquées dans la régulation du Ca2+
intracellulaire libre (Tesarik et al, 02, Liu et al, 01 ) .
Le nombre de copies de ADNmt semble corrélé avec la fécondabilité ovocytaire :
250 à 500 000 copies vs 100 000 pour les ovocytes non fécondés; le nombre moyen
de copies par ovocyte décroît avec l’âge des femmes ( 35 ans) et l’épuisement
ovarien (FSH élevée). Santos TA (FS, 2006, 85:584); Chan CC (MHR, 11: 843); May-
Panloup P (HR, 2005, 20: 593); Reynier P (MHR, 2001, 7: 425)
DEFAUTS DE RESERVES: (ARN, Proteines)
• DEFAUTS D’EXPRESSION GENIQUES:
copies D’ADN mt diminuées
• DEFAUTS DE MATURATION MEIOTIQUE:
fuseau;microtubules ;cohesines
• DEFAUT DE REPARATION ADN
• DEFAUT DU METABOLISME ENERGETIQUE:ATP
DEFAUTS DE RESERVES: (ARN, Proteines)
Stress oxydatif et mitochondries
Mitochondria and Aging
STRESS OXYDATIF
SUIRTINES: SIRT3 ADN mt maternel dans la mitochondrie et qui
régule son métabolisme: glutamate déshydrogénase
EQUILIBRE REDOX ET STRESS
Telomere and Ovarian Aging
Futur: G TEST ; Tests Génomiques
• Evaluer l’expression génique dans les cellules (CC) de
l’ovocyte
- corrélation avec la qualité des ovocytes et leur
maturation
- différence entre les profils d’expression génique du
CC des ovules qui ont conduit à une grossesse par
rapport aux autres
Anomalies ovocytaires et risque d’ Aneuploidies
Stratégies pour dépister l’aneuploidie
ovocytaire
Diagnostic préimplantatoire :
- FISH : analyse des deux GP ?
- L’hybridation génomique comparative : CGH
(NAGAOKA,HASOLD,HANT 2012)
- L’hybridation génomique comparative : Array CGH (puces)
++++ Néo ovogénèse après la naissance : ?
Nouveau concept ([Link] 2004)
très controversé (Johnson 2004 et Zou ;2009)
Stratégies pour améliorer la qualité ovocytaire
- Traitements adjuvants :
• Hormones de Croissance( GH)
• DHEA et Androgènes
• anti-oxydants +++
CoQ10 (Co Enzyme Q10):Ubiquinone
- Restrictions caloriques
Stratégies pour améliorer la qualité ovocytaire
(Van Blerkom,Fragouli 2011,Kim 2013)
- Traitements adjuvants
- Don d’ovocytes: Pbs éthique , religieux des pays musulmans
- Transfert de cytoplasme ([Link])
- Transfert de cellules souches autologues (AUGMENT)
- Vitrification des ovocytes avant le mariage: quel âge ?
CONCLUSION = MESSAGES
• Conseiller les couples à enfanter tôt ?
• Depister les Insuffisances Ovariennes occultes
• La P M A ne peut traiter la qualité ovocytaire!
• La VITRIFICATION des Ovocytes: oui , mais ……
• Améliorer (Coq10) et booster la réserve
ovarienne(GH) ?
Pour les pays musulmans comme le notre:
• Pas de DON d’Ovocytes (gamètes en général)
• Pas de transfert de cytoplasme ou de cellules
germinales autologues