RÉPUBLIQUE ALGÉRIENNE DÉMOCRATIQUE ET

POPULAIRE
Ministère de l’enseignement supérieur et de la recherche scientifique

Université SAAD DAHLEB de Blida

Département de chimie

Mémoire de fin d’étude pour l’obtention d’un diplôme de master

professionnelle en chimie pharmaceutique

Formulation d’une crème hydratant à base de

chitosane et l’étude de stabilité

Responsable de la spécialité :
Madame :HADJ ZIANE

Réalisée par :
Melle Galizra Ibtisséme

Encadrées par :
MEME LARIBI .H
Promotion : 2012/2013
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Résumé :
Le but recherché dans ce travail consiste a développé une toute nouvelle formulation d’une
crème hydratante anti fongique efficace et stable. Cet objectif à été réalisé et ce après
plusieurs essais physico-chimiques et microbiologiques. Les résultats obtenus dans notre étude
ont montré significativement l’effet anti bactérien et anti fongique du chitosane testé était
achevé ainsi que la durée de la stabilité de cette crème était 3 mois.

Abstract:
The aim of this work is developing a whole new formulation at a moist wising cream
antifungal effective and stable. The objective has been realized after Cheverly tests physical,
chemical and microbiological. The resultants obtained in our study have showed significantly
the effect anti bacterial and anti fungal chitosane tested was completed as well the duration of
the stability of the cream was three months.

The aim in this work is has developed a new formulation of an effective and stable moisturizer
anti fungal. This objective has been achieved and what after several physico-chemical and
microbiological tests. The results obtained in our study showed significant anti bacterial and
anti fungal chitosan tested effect was completed and the shelf life of this cream was 3 months
 Sommaire :

Introduction générale…………………………………….…….…………1

I. Synthèse bibliographique
Chapitre .1: la chitine et le chitosane
Historique ........................................................................................................................2
I-1 Définition …..............................................................................................................2
I-2.L’obtention du chitosane ………………………………………………..……….…3
I.2.1 Les principales sources de la chitine………………………………….………....3
I.2.2 Préparation de la chitine et de ces dérivés………………………….………....3
A) Préparation des carapaces……………………………………………….……….….3
A.1 : Analyses physico-chimiques des carapaces :……………………….……………4
A.1.1 : Le taux de cendre……………………………………………….……………4
A.1.2 : La teneur en chitine……………………………………………….…………...4
A.1.3 : Teneur en protéines……………………………………………….……….……4
A.1.4 : Détermination de la densité apparente….............................................................4
B) Déprotéinisation…………………………………..……………………..…………..4
C) Déminéralisation…………………………………………………….………………4
D) Désacétylation …………………………………………………….………………..5
[Link]étés antimicrobiennes du chitosane …………………………….……………..7
I.3.1. Activité antibactérienne du chitosane ……………………..………………….…..7
I.3.2. Activité antifongique du chitosane………………………………………………..8
I.4. Mode d’action du chitosane…………………….……………………………..…….9
[Link]é du chitosane en fonction des paramètres abiotiques ……………….….….10
I.6 Caractéristiques physique chimiques de chitosane …………………………..…….10
A) Le Degré de Désacétylation (DD) ou le Degré d’Acétylation ( DA)……………...11
B) La viscosité ……………………………………………………………….……..11
C) La solubilité ……………………………………………………………………..12
I.7. Propriétés et applications du chitosane…………………………………………….12
Chapitre 2 : la physiologie la peau
II. 1. Introduction………………………………………………………………………..14
[Link] générale de la peau …………………………………………….………...14
[Link]…………………………………………………………………..……...15
[Link] basale (germinative) …………………………………..………….……15
[Link] couche spineuse (ou corps muqueux de Malpighi) …………………………15
[Link] granuleuse ou stratum granulosum …………….………………………15
[Link] couche cornée ……………………………………..………………………...15
[Link] …………………………………………………………………………….16
[Link] ………………………………………………………….……………17
Les poils ………………………………………………….……………………..17
Les glandes sébacées ……………………………………………………………17
Les glandes sudoripares ……………………………..………………………….17
[Link] d’absorption des molécules ……………………........………………………..18
II.3 .[Link] entre la surface de la peau et les molécules……….….………………….18
II.3 .2Pénétration……………………………………………………….……………….18
II.3 .3Absorption ……………………………………………………………………….18
[Link] ………………………………………………………………………19
Chapitre III : Les crèmes et les émulsions
Introduction …………………………………………..……………..………………….20
III.1.Définition ……………………………………..….…….…………………………20
III.1.1.L’hydratation, processus naturel…………………….…………………………..20
[Link] crème hydratant ……………………………….…………………………….20
[Link] différents types des crèmes cosmétique………………………………………20
[Link] rôles des crèmes ……………………………………………….……………..21
[Link] d’utilisation ……………………………………………………………..21
[Link] formulé une crème cosmétique ………………….…………………....22
Une émulsion « huile dans eau » ………………………………………………….22
Une émulsion « eau dans huile » ……………………………….…………………22
III.6.L'émulsion ………………………………………………………..………………22
[Link] aqueuse ………………………………….……………………………….22
Composition de la phase aqueuse …………….…………………………..22
Fonctions …………………………………………..…………………….23
[Link] grasse ……………………………….……………………………….23

Composition de la phase grasse …………………………………………...23

Fonctions : …………………………………………………………………23
III.6. 3. Rupture du l'émulsion ……………….……………………………………24
[Link] phénomènes d’instabilité des émulsions ………….……………………….25
[Link] ……………………………………………………….………………25
[Link]étés des tensioactifs ……………….…………………………………….26
[Link] des tensioactifs ……………………………………………………...26
• Les détergents……………………………………………………………..………….26
• Les agents moussants………………………………….………………………………26
• Les agents mouillants………………………………………………………………….26
• Les agents dispersants………………………………..………………………………..26
• Les émulsifiants………………………………………….…………………………….26
[Link] de tensioactifs …………………………....……………………………….27
[Link] d’une crème à l’échelle industriel …………….…………...…………..27
III.10 structure générale des produits cosmétique ………….……………………………28
III.10 .1 Principes actifs ……………………………………………………………28
III.10.2 Excipient ………………………………………………………....…………28
III.10.3 Des additives …………………………………………………..……………29
III.10.4 Adjuvants (pour parfumer, faire mousser, etc.) ……………...…………….29
III.10.5 Conservateur …………………………………………………...…………………29
III.10 5.1 Antibactériennes …………………………………………………………..29
III.10.5.2Antifongique ………………………..……………………………………..30
III.10.6 Un colorant…………………………………………..…………………………….30
III.10 .7 Un antioxydant ………………………………………….…………………………30
III.10.8 Les émulsifiants ………………………………………..………………………….30
Partie expérimentale
Matériels et méthode…………..…………………………….……………….……………..31
VI.1 Introduction ………………………………………….……………………………….31
VI.2 Etude du pouvir antimicrobien et antifongique de chitosane ……..…..…...………...31
II.2.1Détermination de la Concentration Minimale Inhibitrice (CMI)………........................31
VI.2.2 Méthode de l’antibiogramme ………………………………………………………..31
Principe ………………………………………………………………………………31
Mode opératoire ………………………………………..……………………………32
Préparation de l’inoculum………………………….………………………………..32
Préparation des milieux de culture ………………………………..…………………32
Ensemencement ….……………………………………………...………....………..32
Dépôtdes disques …………………………………………………………………….33
VI.2.3 Caractéristique des souches testées ……………………….………………..…..33
VI.3 Les composés de la formulation d’une crème hydratante……………………..…..33
VI.3 .1 Le principe active (le chitosane) …………………………………………….….33
VI.3 .1.1 Solubilité du chitosane ………………………………………………………..33
VI.3 .2 Les ingrédients entrant dans la phase aqueuse …………………………………33
VI.3 .3Les ingrédients entrant dans la phase huileuse .…………………………………34
VI.4 Choix du Type d’émulsion…………………………………………………………35
VI .5 Contrôle de la qualité microbienne de la crème ………………………………….35
V I.5.1 Equipement et matériel ……………………………………….……………35
VI.5 .2 Milieux de cultures …………………………………………..……………35
VI.5.3 Procédure de détermination…………………………………..……………35
VI.6 Les paramètre physique …………………………………………………………..36
VI.6.1 Détermination du pH ……………………………………………………………36
VI.6 .2Mesure de la densité ……………………………………………………………36
Définition………………………………………………………………………36
Principe…………………………………………………………………………36
VI.6 .3Mesure de la viscosité …………………………………………………………...37
Définition ……..………………………………………………………………..37
Principe ………..…………………………………………………………….…37
Résultats et discutions …………………………………..……………………..38
V.1Résultats de l’antibiogramme ………………..…………..……………………….38
V.2 Préparation de la crème ……………..…………..………………………………..38
1ére Expérience ………………………………………………………………………39
1) L’objectif………………………………………………..…..………….………….39
2) La Formule ……………………………………………...………………………....39
2.1) Préparation de la phase huileuse ……………….……………………………….39
2.2) Préparation de la phase aqueuse ……………………….……………………….39
V.2 .1Contrôles physico-chimiques et organoleptique de produit ………….………40
A .La viscosité (5500 ≤ viscosité ≤ 6500 ) centpoise) …………………….…………….40

B. Détermination du pH ………………………………………………….……40

2éme Expérience ……………………………………….……………………………41

1) L’objectif ………………………………………………………………………..41
2) La Formule …………………………………………………………………….41
2.1) Préparation de la phase huileuse …………………...……………………….42
2.2) Préparation de la phase aqueuse ……………………………………………42
3) Résultat ……………………………………………….………………………42
3éme Expérience …………………………….……………………………………42
1) L’objectif ………………..……………………………………………………42
2) La Formule……………………….……………………………………………42
2.1) Préparation de la phase huileuse ……….…………………………………..43
2.2) Préparation de la phase aqueuse …….……………………………………..43
3) Résultat ………………………………………………………………………43
4éme Expérience ………………………………………………………………..44
1) L’objectif ………………………………………..…………………………..44
2) La Formule…………………………………………………………………..44
2.1) Préparation de la phase aqueuse …………………………………………..45
3) Résultat ………………………………………………………………………45
V.2 .2 Préparation de la crème au niveau des laboratoires VENUS … …45
1) La Formule …………………………………………………………………45
2) Résultat de produit fini ………………………….…………………………46
2.a) les paramètres organoleptiques ……….………………………………47
2. b) les paramètres physico-chimiques ……………………………………47
2. c) les paramètres microbiologiques. ..…………………………………..47
V.2 .2.1Resultat de la qualité microbienne de la crème ……………………47.
V.3 L’étude de Stabilité au cours du temps ……………………..….……….48
V 3.1 Objectif …………………………………………………………..……48
V.3.2 Les contrôles réalisés …………………………………………….…..48
A) La centrifugation ………………………...………………………….48
B) Le choc thermique……………………...……………………………49
C) L’étuve ………………………………………………………………49
D) La répétabilité………………………………..………………………50
E) La reproductibilité …………………………………………………..50
F) Répitabilité:………………………………………………………….50
V.3.3 Les paramètres physico-chimiques ……………..……………………51
Conclusion générale…………………………………………………….52
Liste des figures :
Figure 1 : Structure chimique du chitosane…………………………………………………2
Figure 2 : Le processus d’obtention du chitosane à partir des carapaces de crustacées………7
Figure 3: Les unités de répétitions structurales de la chitine et du chitosane…………...…..11
Figure 4: Présentation de la peau………………………………………...…………………14
Figure5: Image d'une section de la peau vue sous le microscope optique du derme vers
l'épiderme supérieur (section demi-fines)……………………………………………………15
Figure 6: adipocytes vu au microscope électronique à balayage…………..………………..17
Figure 7: Schéma d’absorption des molécules d’une crème……………………………….19
Figure 8 : processus industrielle d’une crème……….……………………………………..28
Figure 9 : Illustration de la méthode d’antibiogramme sur boite de pétrie ……………….32
Figure 10: Représentation d’un densimètre………………………………………………..36
Figure 11 : Représentation d’un Viscosimètre……………………………………………..37
Figure 12: Préparation de la crème…………………………………………………………40
Figure 13: Viscosimètre type Customer ………………….……………………………….40
Figure 14:PH-mètre………………………………………………………………………..40
Figure 15: présentation de la crème……………………………………………………….44
Figure16: turbo émulsionner type COMER……………………..………………………..46
Figure 17 : L’obtention d’une crème hydratante brillante………………………………..46
Figure 18:l’échantillon de teste microbiologique…………………………………….……47
Figure 19 : photo de centrifugeuse………………………………………………….…….49
Figure 20 : les flacons des échantillons de crème hydratant…………….…………..……49
Figure21:photo de l’étuve…………………………………………….……………..……50
Liste des photos :
Photo1 : candidas albicans……………...………..………………..…………….………38
Photo2 : Pseudomonas aeruginosa……………………….…………..……….…………38
Photo3 : S .aureus……………………………………………………...…….…………..38
Photo4 : Aspergillus Niger…………………………………………….…….…………..38
Liste des tableaux :
Tableau 1 : Les concentrations minimales d’inhibition de quelques bactéries par le
Chitosane. ……………………………………………………………………………………8

Tableau 2 : Taux d’inhibition de quelques souches fongiques en fonction de la

concentration du chitosane…………………..………………………………………………8
Tableau 3 : Les concentrations minimales d’inhibition de quelques moisissures par le
Chitosane……………………………………………………………………………………..9
Le tableau 4 : présente quelques applications de la chitine et du chitosane………..………..13
Tableau 5 : Les causes de l’instabilité des émulsions ………………………………………25
Tableau 6 : les souches testées………………………………………………………………33
Tableau 7: résume le nom des ingrédients et, leurs caractéristiques et usages, selon
lesquelles ils ont été choisis pour former la phase aqueuse…………...……………………..34
Tableau 8: résume le nom des ingrédients et, leurs caractéristiques et usages, selon
lesquelles ils ont été choisis pour former la phase huileuse……………..…………………..34
Tableau 9 : D i a m è t r e d’inhibition de quelques souches fongiques………………..38
Tableau 10: Résultats physico-chimiques et organoleptiques…………………..…………..41
Tableau 11: les différents résultats et observation obtenu………………………………….42
Tableau 12: Les caractéristiques organoleptique de produit fini ……………….…………47
Tableau 13: les résultats de contrôle microbiologique…………………………..…………47
Tableau 14: Les résultats de contrôle physico-chimique pendant 90 jours………….…….51
Liste des annexes :
Annexe 1 : Carbopol
Annexe 2 : Emulgin B1
Annexe 3 : Lanette o
Annexe 4 : Allantoïne
Annexe 5 : E.D.T.A
Annexe 6 : Glycérine
Annexe 7 : L’huile d’Amandes douces
Annexe 8 : Turbo-émulseur
Conclusion générale:
La crème préparé comporte des résultats très importants grâce à ses propriétés,
hydratant et traitante.
Les analyses physico-chimiques et bactériologiques sont satisfaites.
Le stage effectué au niveau de la société Venus [Link] me permet d'améliorer les
connaissances à la fois théorique et pratique, de plus d’acquérir une deuxième
expérience sur le domaine industriel.
Ce projet de fin d’étude il nous permettons la partie théorique que nous avons acquise
aux cours de notre formation à la pratique. Et surtout, il nous permettons de découvrir
le monde professionnel à la fin de nous permettons une adaptation rapide du passage
estudiantin au milieu professionnel.
Nous souhaitons ; si nous avons plus de temps d‘améliorer cette étude , nous ajoutons
dans notre application des études plus détailler sur la concentration exact pour inhiber
l’activité des autres fongique sans oublier à construire une base forte de la
microbiologie pour satisfaire a consommation locale .
En fin, nous souhaitons que nos efforts puissent satisfaire les besoins des utilisateurs.
 Introduction générale

Introduction générale :
L’activité humaine, particulièrement industrielle, produit des quantités phénoménales de
déchets de crevette. Certains de ces déchets ont une grande valeur que la biotechnologie permet
de matérialiser.
Les déchets de la production commerciale piscicole et coquillière et de la transformation des
produits de la mer sont, synonymes de problème, mais ils offrent également d’excellentes
possibilités d’exploitation. L’élimination de ces déchets a toujours été dispendieuse et a
souvent eu un impact nuisible sur l’environnement. En effet, pendant longtemps, les
conserveries de crustacés produisaient de grande quantité de déchets qui n’étaient pas recyclés
et étaient simplement rejetés à la mer, créant de sérieux problèmes de pollution au voisinage
des sites de production.
D’après les données statistiques fournies par la FAO (Organisation des Nations Unies pour
l’Alimentation et l’Agriculture), et à titre d’exemple, la production globale de crevettes, toutes
espèces confondues, issues de la pêche et des élevages aquacoles, a augmenté de 4 millions de
tonnes durant l’année 1999. Ce qui conduit, à une augmentation inévitable des déchets de
l’industrie de la crevette, et avec elle l’augmentation des risques de pollution. Mais grâce aux
progrès techniques et au développement des marchés, il est maintenant possible, de
transformer ce flux de déchets en produits utiles et commercialisables [1].
Dans cette optique, nous nous sommes attelés, dans le cadre de ce travail, à valoriser
Les déchets, constitués de carapaces de crevette. Nous avons utilisés ces polymères comme un
principe actif, dans une crème cosmétique, notre choix a porté sur une crème hydratant.

Ce procédé utilise en général des ingrédients visqueux pour cela une crème VENUS a été
utilisée comme référence on a utilisé des émulsifiants afin de stabiliser l’émulsion composé de
deux phases l’une organique ou huileux ; l’autre aqueuse, et ce pour obtenir une crème qui
repend aux normes en vigueur soit l’efficacité stabilité, stérilité...etc.

Plus que L’hydratation cette crème, sont destinés aussi pour traite la peau contre, les fongique
et les bactéries

Ce mémoire est structuré en deux parties :

Une partie théorique organiser en trios chapitre :

Chapitre I: Etude sur la chitine et le chitosane : nature, obtention, propriétés et application
Chapitre II : l’anatomie et la physiologie de la peau,
Chapitre III : les crèmes et les émulsions.
 Introduction générale
La deuxième partie, représente le travail expérimental réalisé, qui comporte les étapes
suivantes :
La 1ere étape base sur l’activité anti fongique de chitosane.
La 2éme étape et une reproduction de la crème à l’échelle laboratoire de chimie industrielle
de l’université de [Link] tentative de développement de la formule type, en remplaçant
Allantoine Par le chitosane .
La 3eme étape est consacrée à la préparation de la crème hydratante, au niveau du laboratoire
VENUS [Link] (la zone industrielle Ouled Yaich Blida) et on va terminer par l’étude de
stabilité , et ses propriétés physico-chimiques et microbiologiques de notre crème .
 Chapitre I : La chitine t le chitosane

Historique :
En 1811, le Professeur Henri Braconnot, Directeur du jardin biologique à Nancy (France) a
isolé une substance fibreuse d'un certain type de champignon. De plus, il a observé que cette
substance n'est pas soluble dans les solutions aqueuses d'acides. Une décennie plus tard, en
1823, la même substance a été trouvée dans certains insectes (coléoptère) et a été ensuite
nommée chitine (provient du mot grec "kitos" qui signifie l'enveloppe). En 1859, le Pr. C.
Rouget a soumis la chitine à un traitement alcalin et a observé les différentes solubilités de la
chitine. La substance, résultat du traitement alcalin, a pu être dissoute dans les acides.
Cependant, ce n’est qu’en 1894 que cette substance a été nommée chitosane par Hoppe-Seyler
[1].
Entre 1930 et 1940, ces biopolymères (la chitine et le chitosane) ont suscité beaucoup d'intérêt
dans le monde oriental, principalement pour l'application dans le domaine médical et la
purification de l'eau. Et depuis 1970, La production industrielle et l'utilisation de ces deux
biopolymères sont en constante augmentation puisque nous savons qu’ils se trouvent
abondamment dans la nature et sont des ressources renouvelables [2].
Actuellement, la production de la chitine et du chitosane à partir des carapaces de crabes et de
crevettes, est économiquement rentable [3].
I-1 Définition :
Le chitosane est un polysaccharide de structure linéaire. C’est un biopolymère cationique
de glucosamine partiellement acétylé [4].Le terme chitosane, loin de répondre à une seule et
unique structure chimique bien définie, s’adresse à toute une famille de copolymères linéaires
à arrangement aléatoire d’unités N – acétyle – D – glucosamine et de D – glucosamine en
proportions variables (figure 1) [5], et liées entre elles par des liaisons (1-4) qui confèrent au
chitosane de bonnes caractéristiques filmogènes [6]. Le terme chitosane est habituellement
utilisé quand les polymères sont solubles dans une solution d’acide dilué [7]
Ce biopolymère, naturel et non toxique, est actuellement largement produit commercialement
à partir des déchets des carapaces de crabes et des crevettes [8].

Figure 1 : Structure chimique du chitosane.

2
 Chapitre I : La chitine t le chitosane

Généralement, le chitosane a trois types de groupes fonctionnels réactifs : les groupes amines
sur le carbone C(2), les groupes hydroxyles primaires et secondaires sur le carbone C(3) et
le carbone C(6).La nature chimique du chitosane fournit beaucoup de possibilités alternatives
pour des modifications covalentes et ioniques qui permettent l’ajustement étendu des
propriétés mécaniques et biologiques.
I-2.L’obtention du chitosane :
Il se trouve plus rarement dans la nature , il n’est présent que dans les parois d’une classe
particulière de champignons, les zygomycètes et chez quelques insectes. La chitine est ainsi la
source la plus intéressante du chitosane [9].Le chitosane commercialisé provient
essentiellement de la désacétylation alcaline de la chitine.
I.2.1 Les principales sources de la chitine :
La chitine est un copolymère de 2-acétamido-2-deoxy- -D- glucose et 2-amino-2- deoxy D-
glucose reliée par des liaisons (1-4). Elle diffère des autres polysaccharides par la présence
d’azote en plus du carbone, d’hydrogène et d’oxygène dans la chaîne macromo léculaire [10].
La chitine est le deuxième polymère naturel le plus abondant, facile à obtenir et renouvelable,
après la cellulose. Universellement, des millions de tonnes de chitines sont récoltées
annuellement [11, 12].Elle se trouve dans les carapaces de crustacées, les exosquelettes des
insectes et les parois cellulaires des champignons [13]. Elle est extraite principalement de la
carapace de crustacés tels que les crabes, les crevettes ou les homards [6].
I.2.2 Préparation de la chitine et de ces dérivés :
Le chitosan est le plus souvent fabrique à partir de carapaces de crevettes et Le [Link]
déchets de l’industrie des crustacés sont une source inépuisable de chitine et chitosane.
A) Préparation des carapaces
La matière première set constituée de carapaces de crevettes .la langouste ou le crabe
peuvent être utilisées. Des leur récupération, les carapaces sont laver et conserver sur la
glace 3°C. Elles sont ensuit séchées dans un flux d’aire a 103°C pendant 20heures puis
pulvérisées de façon a obtenir des particules dont le taille est de l’ordre du millimètre .plus
les carapaces sont finement broyées, plus les réaction ultérieures seront complètes .C’est
ainsi la viscosité de la solution finale de chitosane a 1 %peut évoluer 313 mPa.s a 2449
mPa.s pour des granulométries initial respectivement de 6,4mm et 1mm. [14]
A.1 : Analyses physico-chimiques des carapaces :
A.1.1 : Le taux de cendre : Le taux de cendre est déterminé selon le protocole suivant.
[15]

3
 Chapitre I : La chitine t le chitosane

Placer 2g de carapaces broyées dans un creuset en verre, préalablement chauffé pendant

15 minutes dans le four à moufle, refroidi et pesé. Le poids de la cendre est exprimé en
pourcentage par rapport au poids initial. [16]
A.1.2 : La teneur en chitine : La détermination de la teneur des carapaces en chitine est
réalisée par dosage des résidus N-acétyle glucosamines libérés par hydrolyse acide de
la chitine, réalisée avec de l’acide chlorhydrique 6N pendant 6heures. [17]
A.1.3 : Teneur en protéines : La détermination de la fraction protéique des carapaces a été
réalisée par la méthode de Kjeldähl..
A.1.4 : Détermination de la densité apparente : La densité apparente est déterminée par le
rapport du poids d’un échantillon à son volume apparent. On utilise pour cela un pycnomètre
de volume connu. [16]
B) Déprotéinisation:
La procédure standard pour extraire les protéines consiste a faire bouillir les copeaux de
carapaces dans une solution alcalin ( NaOH a 3%) sous agitation pendant une heure .Cette
Déprotéinisation peut également être accomplie par voie enzymatique au moyen d’une
carbohydrase que l’on fait agir pendant 6heur a 60°C sous agitation et dans un milieu maintenu
a pH =[Link] résultats obtenus en utilisant les deux méthodes ont révélé que la digestion
protéique par voie alcaline permet d'obtenir un produit final à viscosité et masse moléculaire
supérieures. Ainsi la digestion par voie enzymatique serait plus drastique pour le polymère
.l’emploi de l’une ou l’autre méthode n’a aucune incidence sur le pourcentage de matières
minérales du produit final. [16]
C) Déminéralisation :
Les substances minérales, surtout composées de carbonate de calcium, sont extraites avec une
solution acide. Les carapaces broyées et déprotéinisées sont traitées par une solution d’acide
chlorhydrique 1N a température ambiante. La décalcification des carapaces se produit selon la
réaction suivant : CaCO3 +2HCL Cacl2+CO2 +H2O
Le résidu est collecté par filtration et rincé à l’eau déminéralisée. Une telle décalcification de
la chitine permet d’obtenir un produit final avec un pourcentage de matières minérales compris
entre 0,73%. Si cette déminéralisation était supprimée, le chitosane renfermerait entre 31et
34% de matières minérales. La présence de carbonate de calcium a pour effet de diminuer la
viscosité tandis que la masse moléculaire moyenne du polymère n’est pas significativement
modifiée. Il peut être effectué un traitement supplémentaire a l’éthanol afin d’éliminer les

4
 Chapitre I : La chitine t le chitosane

composés lipidiques .il permet aussi de déshydrater la préparation qui est ensuit séchée a
l’étuve a 65°C pendant 16 heurs. [14]
D) Désacétylation :
Il est procdé a l’hydrolyse des groupements acétyle de la chitine. Le produit est introduit dans
un réacteur avec une solution de NaOH a 50% et chauffé a 145°C -150°C pendant 5a10
minutes. La réaction est la suivant :

R NH CO CH3 +NaOH R NH2 + CH3COONa

Chitine chitosane
La réaction à lieu Sous atmosphère inerte(N2) et sous agitation .la quantité de soude à 50 %
doit être cinq fois supérieure en poids a la quantité de chitine déterminée en matière sèche.
Le mélange bouillant est ensuite refroidi a l’eau fraiche. Le chitosane est collecté par
filtration, lavé a l’eau distillée jusqu'à neutralité du mélange .Il est finalement séché dans un
flux d’aire chaud a 65°C pendant 16 heurs. [16]
Au regard des résultats obtenus il est remarqué que le produit désacétylé pendant 15 min a
une viscosité significativement inférieure a celui désacétylé pendant 5 min. Cela est
également vrai pour la masse moléculaire dans des proportions [Link] phénomène est
du a hydrolyse des liaisons glycosidiques du polymère en milieu basique.
Il est aussi démontres que purger l’air du réacteur en insufflant de l’azote en flux continu
permit d’obtenir un chitosane de viscosité supérieure. L’oxygène de l’aire hydrolyse par
oxydation le polymère lors de l’élimination de ses groupements acétyle.
La désacétylation qui est une étape primordiale dans la synthèse du chitosane, demande des
conditions drastiques et doit être menée avec précaution. Elle met en jeu des paramètres qu’il
convient de régler précisé[Link] concentration basique ,la température et l’atmosphère du
milieu réactionnel ainsi que la durée de réaction sont les plus important .Ils permettent de
définir les propriétés physico-chimies du chitosane parmi lesquelles le degré d’acétylation, la
masse moléculaire, la viscosité et la pureté. [16]

5
Chapitre I : La chitine t le chitosane

6
 Chapitre I : La chitine t le chitosane

Figure 2 : Le processus d’obtention du chitosane à partir des carapaces de crustacées

[Link]étés antimicrobi
biennes du chitosane :
Le chitosane présente dees propriétés très intéressantes, il est non-toxique,
biodégradable, renouvelable, antibactérien
a et antifongique.
I.3.1. Activité antibactériienne du chitosane :
Plusieurs travaux de rechercches ont illustré l’activité anti-bactrienne
nne du chitosane.
Ainsi, I. l’utilisation du chit
itosane à forte concentration a un effet bac
actéricide sur des
bactéries Gram négatif comm
mme l’Escherichia Coli et la Salmonella typh
phimurium. Blaise
Ouattara et al ont montré que des films obtenus à partir d’une soluti
tion du chitosane
présentent un effet inhibiteur sur
s les bactéries lactiques Lactobacillus sake
[Link] on l’a
déjà souligné, des films compo
posites obtenus par combinaison dans les mêêmes proportions

7
 Chapitre I : La chitine t le chitosane

du chitosane et de l’HPMC, inhibent complètement la croissance du Listeria

monocytogenes. [18]
L’enrobage des fruits par le chitosane a également permis l’inhibition de la croissance la
bactérie à Gram positif Candida lambicans . [19]
Le chitosane agit sur les bactéries à Gram positif et sur les bactéries à Gram
négatif, cependant, son action sur ces dernières est moins importante que celle qui est sur les
bactéries à Gram positif (Tableau7) présente les concentrations minimales d’inhibition de
quelques bactéries . [18]
Tableau 1 : Les concentrations minimales d’inhibition de quelques bactéries par le
Chitosane. . [20]

Bactéries CMI
(ppm)
Bacillus cereus 1000
Agrobacterium tumefaciens 100
Pseudomanas fluorescens 500
Escherchia coli 20
Micrococcus luteus 20
Staphylococcus aureus 20
I.3.2. Activité antifongique du chitosane :
L’utilisation du chitosane à partir d’une concentration de 1 g/l réduit considérablement la
croissance des souches fongiques suivante: Cylindrocladium floridanum, Cylindrocarpon
destructans et Fusarium oxysporum. [21] Les concentrations minimales d’inhibition
Présentés dans le Tableau suivant :
Tableau 2 : Taux d’inhibition de quelques souches fongiques en fonction de la
concentration du chitosane . [18]. [22]

Inhibition (%) Inhibition (%) Inhibition

(%)
Souches fongiques avec du chitosane avec du chitosane
avec du
à 0,5 g/l à 1 g/l
chitosane à 2 g/l
5
Cylindrocladium floridanum 20 41
6
7
Cylindrocarpon destructans 23 43
1
5
Fusarium oxysporum 25 53
5

8
 Chapitre I : La chitine t le chitosane

Le chitosane a un effet antifongique à partir d’une concentration de 0,3 % (m/V). [23]

L’action du glutamate du chitosane sur la croissance d’Aspergillus flavus, de Cladosporium
cladosporioides, de Mucor racemosus, de Penccillium aurantiogriseum et de Saccharomyces
cerevisiae. L’obtention d’une action inhibitrice contre toutes ces souches a nécessité une
concentration de chitosane de 5 g/l. (Tableau 3) présente les concentrations minimales
d’inhibition de quelques souches fongiques par le chitosane . [24]
Tableau 3 : Les concentrations minimales d’inhibition de quelques moisissures par le
Chitosane. [25]. [26]

Moisissures CMI (ppm)

Botrytis cinerca 10
Fusarium oxysporum 100
Piricularia oryzae 5000
Tichophyton equinum 2500
I.4. Mode d’action du chitosane :
Le mécanisme d’action du chitosane contre les bactéries et les souches fongiques est jusqu’à
aujourd’hui mal connu. Cependant, il existe plusieurs éléments qui peuvent expliquer cette
action:
•La formation de liaisons électrostatiques entre les charges positives du chitosane
(transformation des motifs NH2 du chitosane en motifs +NH3 en milieu acide) et les
phospholipides de la membrane cellulaire qui ont une charge négative, perturbant ainsi
les échanges entre la cellule microbienne et le milieu extérieur. [27]
•La présence du chitosane peut aussi entraîner des déformations morphologiques au niveau
de la membrane cellulaire. [28]
•L’inhibition peut aussi être due à l’enrobage des cellules microbiennes par le
chitosane, éliminant ainsi toute échange avec le milieu extérieur . [29]
•L’action du chitosane peut aussi se faire par formation de liaison avec les protéines et les
électrolytes présents dans le cytoplasme . [30]
•Formation des liaisons entre le chitosane et l’ADN des bactéries et l’inhibition de la
synthèse du mRNA . [31]
•Le chitosane peut aussi agir de façon indirecte sur les bactéries et les moisissures, et cela
par complexation des métaux nécessaires pour leur croissance . [32]

9
 Chapitre I : La chitine t le chitosane

[Link]é du chitosane en fonction des paramètres abiotique

les deux paramètres qui caractérisent le chitosane sont le degré de déacétylaltion et la masse
moléculaire, d’ailleurs son activité antimicrobienne en dépend beaucoup. Cependant il existe
d’autres éléments qui influencent l’activité du chitosane. Ainsi :
•L’action du chitosane est, à son maximum, à des pH faibles entre 6 et 6,5, puisque c’est dans
cette zone où les groupements NH2 sont protonés (le chitosane n’est soluble que dans des
acides dilués). Cependant, à des pH plus faibles (entre 1 et 4) l’activité du chitosane diminue.
Ceci est dû à la compétition entre les protons et les groupes ammonium vis-à-vis des cellules
microbiennes. . [33]
•Il a été montré que la masse moléculaire a également une influence sur l’activité anti-
microbienne du chitosane. Cependant, une règle générale définissant cette influence ne peut
être établie, car elle varie différemment d’un organisme à un autre. Ainsi, un chitosane avec
une masse moléculaire élevée semble plus efficace contre les bactéries Gram négatif, qu’avec
les bactéries Gram positif . [34]
De plus, au sein du même type de bactérie, cette influence peut varier. Par exemple, avec
Escherichia coli, bactérie Gram négatif, l’activité augmente avec la masse moléculaire
jusqu’à un certain niveau (9,16 104 g/mol) puis elle diminue car avec l’augmentation de la
masse moléculaire, il y a plus d’interaction intramoléculaire entre les groupes ammonium et
les groupes hydroxyle du chitosane ce qui les rendent indisponibles. . [35]
L’action du chitosane sur les bactéries Gram négatif est limitée par la présence de cette
membrane externe, mais son association à l’EDTA augmente son efficacité, car l’EDTA
s’adsorbe (complexation des Mg2+et Cu2+) à cette membrane externe augmentant ainsi sa
perméabilité . [33]
•La présence des métaux comme Zn2+, Ca2+et Mg2+ diminue l’activité anti-
microbienne du chitosane, car ce dernier complexe ces métaux. . [33]
C’est d’ailleurs, ce caractère qui est mis à profit dans le traitement des eaux usées.
I.6 Caractéristiques physique chimiques de chitosane :

A) Le Degré de Désacétylation (DD) ou le Degré d’Acétylation ( DA) :

En dépit de leur désignation chimique spécifique, les noms chitine et chitosane correspondent
actuellement à la même famille de polymères. Ils varient seulement sur le contenant en groupe
acétyle qui est désigné par le degré d’acétylation. Le degré d’acétylation présente le taux de
groupe acétylé par rapport au groupe non acétylé (figure 4) [11].

10
 Chapitre I : La chitine t le chitosane

DA = 100% - D% N – désacétylation.

Figure 3 : Les unités de répétitions structurales de la chitine et du chitosane

Le degré de désacétylation (DD) est l’un des propriétés les plus importantes du chitosane. Il
influe, non seulement sur les caractéristiques chimiques et physiques, mais aussi sur la
biodégradation et l’activité immunologique du chitosane [30].

Dans les 30 ans passés, beaucoup de méthodes ont été développées pour la détermination du DD,
y compris la spectroscopie infra rouge [31], la spectroscopie U-V, la résonance magnétique
nucléaire, la titration colloïdale et la titration potentiométrique [32]. Cependant, la méthode la
plus simple est celle de la spectroscopie IR proposée par Khan et al [33]. Le degré d’acétylation
(DA) est déterminé en utilisant la formule :

DA% = (A1655 cm-1/A3450cm-1) * 100/1,33-1-1

Où
DD% = % NH2 = [1 – (A1655/ A3450)* 1/1,33] *100

• A1655 cm -1est l’absorbance à la longueur d’onde 1655 cm-1 (Amide I 1655 cm-1)
• A3450 cm -1 est l’absorbance à la longueur d’onde 3450 cm-1 (Hydroxyle 3450 cm-1)
• Le facteur 1,33 représente le rappo rt (A1655/ A3450) pour un chitosane entièrement N- acétylé.
B) La viscosité :

La viscosité du chitosane dépend du degré d’acétylation de ce polymère. Plus il est désacétylé,

plus il y a de groupements amines libres, plus le chitosane est soluble et par voie de
conséquence sa viscosité est plus importante [34]. La viscosité dépend également : de la
concentration du polymère (elle augmente avec la concentration), de la température (elle chute
lorsque la température augmente) [35], du poids moléculaire (la viscosité intrinsèque augmente
en fonction de l’augmentation du poids moléculaire) [36] et enfin du pH (plus il est bas plus la
viscosité est élevée). Pour déterminer la viscosité, il existe différentes méthodes. La plus
employée est « la viscosimétrie ». Elle nécessite la connaissance des paramètres K et a de la
relation de Mark-Houwink [37].
>] = K.M
>] : la viscosité intrinsèque.

11
 Chapitre I : La chitine t le chitosane

M : le poids moléculaire moyen du polymère.

K et a : des paramètres qui dépendent du système polymère-solvant à une température donnée.

C) La solubilité :

La chitine n'est soluble que dans des solvants peu communs, ce qui limite son utilisation et
sa valorisation. En effet, elle n'est soluble que dans le 2-hexafluoropropanol, et dans des
mélanges tels que le diméthylacétamide/chlorure de lithium, le diméthylformamide/chlorure
de lithium ou l'acide trichloroacétique / dichloroéthane [38]. Contrairement à la chitine qui est
insoluble dans les solvants aqueux, le chitosane est soluble dans les acides faiblement dilués
(comme l’acide acétique, lactique, citrique,...) à des pH < 6,0 formant des sels. L'étude
bibliographique a montré que la solution aqueuse de l'acide acétique est le solvant le plus
approprié pour solubiliser le chitosane. La solubilité du chitosane varie en fonction de son
DA et la méthode de la désacétylation mise en ouvre. La distribution des groupes N- acétyle
sur la chaîne polymérique peut contrôler aussi la solubilité des solutions données chitosane)
est plus désordonné que le type II. Celui-ci a un fort degré de désacétylation (90 %) (forme
amine libre) [13].

I.7 Propriétés et applications du chitosane :

Les applications du chitosane sont variées et les nouvelles études pour en développer ne
cessent de se multiplier à cause de ses propriétés physico-chimiques et biologiques .
[26]
Il est entre autres non fermentable, biocompatible, biodégradable et non toxique. De plus, son
coût de fabrication est peu élevé.
A titre d’exemple, quelques propriétés utilisées dans les différents champs d’application du
chitosane sont données dans le Tableau suivant ;

12
 Chapitre I : La chitine t le chitosane

Le tableau 4 : présente quelques applications de la chitine et du chitosane [1].

Champ d’application Applications Propriétés

Matériel absorbable avec possibilité

Encapsulation de de contrôle de libération de principes
Pharmacie médicaments actifs (enzyme, médicament)

Membrane de dialyse, Rétention d’eau, d’ions, stimulation

Clinique Pansements de la régénération des tissus
Rétention de l’humidité, anti-
Crème, shampooing, électrostatique, surfactant
Cosmétiques Démêlant antifongique anti bactérien
cicatrisant, conservateur
Restructuration des
purées de fruits, de
Industrie agro-alimentaire Formation de film, épaississant
légumes ou de viande
Agent flocculant de Polyélectrolytes ; chélation de
Traitement des eaux Cations Métaux

Il est donc d’un grand intérêt en pharmacie, dans l’industrie agro-alimentaire, pour les
cosmétiques à cause de ces propriétés viscoélastiques qui peuvent varier de manière très
significative même pour des petites quantités de polymère. Il peut donc être utilisé comme
modificateur de texture, stabilisant. [22]

13
 Chapitre II : la physiologie de la peau

[Link] :
« Ce que l’on met sur sa peau est aussi important que ce que l’on met dans son assiette.
Notre peau, organe sensible, reliée à l’ensemble des fonctions vitales de notre corps, besoin
d’une nourriture saine, de l’intérieur comme de l’extérieur. » Jean- Philippe Naboulet,
(Pharmacien, Responsable Qualité et Affaires Réglementaires chez Weleda France).
La peau est le plus grand organe du corps. Elle couvre 1,5 à 2 mètres carrés et
représente16 % de total du poids du corps. La peau ne constitue pas seulement une barrière
contre les agressions mécaniques comme les pressions ou les frottements, les produits
chimiques, la chaleur, le froid et les rayons UV ainsi que les micro-organismes dangereux
pour la santé, elle est également nécessaire pour préserver l’équilibre de l’humidité et de
l’hydratation du corps et de pouvoir percevoir les stimuli des sens via les récepteurs de
pression, de réception et de douleur [36].

[Link] générale de la peau :

Figure 4: Présentation de la peau.

La structure cutané est une structure hétérogène compose, de trois couches superposes :
- La couche la plus superficielle est l’épiderme.
- La couche moyenne, le derme et un tissu de soutien, par de nombreux vaisseaux et nerfs.
- La couche profonde, l’hypoderme (figure 1).
[Link] :

14
 Chapitre II : la physiologie de la peau

L’épiderme à une épaisseur moyenne d’environ 100 µm, Il est constitué principalement
de cellules vivantes, les Kératinocytes, qui ont la particularité de se transformer
progressivement au cours de phénomène de Kératinisation pour former différentes couches
ayant chacune leur spécificité. [37]
Ils finissent par perdre leur noyau pour fournir des cellules quasi-mores les cornéocytes. C’est
ainsi que, l’intérieur vers l’extérieur (de bas en haut du schéma), on trouve que les différentes
couches de l’épiderme sont bien visibles (figure 4).

Figure 5: Image d'une section de la peau vue sous le microscope optique du derme vers
l'épiderme supérieur (section demi-fines)

[Link] basale (germinative) :

C’est la couche la plus profonde de l’épiderme, elle est faite d’une unique rangée de
cellules cubiques ou cylindrique. Elle est implantée sur la membrane basale,mince couche
extra-cellules qui épouse les papilles dermiques ,elle apparait donc ondulée sur une
transversale.
[Link] couche spineuse (ou corps muqueux de Malpighi) :
Il est forme de 5 ou 6 couches de cellules par fois moins, selon la localisation ; les cellules
ont une forme de polygone et s’aplatissent de plus en plus dans les couches les plus
superficielles
[Link] granuleuse ou stratum granulosum :
Elle se présente comme une bonde sombre, elle est forme de 3 à 5 couches de kératinocyte
aplatis.
[Link] couche cornée :
C’est la couche la plus superficielle de l’épiderme, elle formée de trios sous couches :

15
 Chapitre II : la physiologie de la peau

La couche brillante.
La couche desquamant de Ranvier.
La couche compacte L’ensemble de ces trois couches à une épaisseur d’environ 10 µm.
Et on trouve aussi plusieurs types de cellules :
• Kératinocytes : représentent 80% de la population cellulaire de l’épiderme, ils sont
d’origine ectoblastique. Ce sont eux qui en migrant de la profondeur vers la superficie et
subissant des modifications spectaculaires, donnent à l’épiderme sa morphologie. Un
kératinocyte migre de la profondeur vers la superficie en 15 jours de telle sorte que
l’épiderme est renouvelle en 6 à 8 semaines. [38].
• Mélanocytes :
Constituent la deuxième grande population cellulaire de l’épiderme .Ils proviennent des
crêtes neurales et colonisent secondairement l’épiderme d’abord formé par kératinocytes.
La fonction des mélanocytes est la synthèse des mélanines : phéomélanines et eumélanines,
dans des organites spécialisés, les mélanosomes qui sont ensuite transférés aux
kératinocytes. [37]
• Cellules de Langerhans :
Troisième population cellulaire de l’épiderme, représentent 3 à 8 % des cellules
épidermiques, Ces cellules sont situées au-dessus de la couche basale et, comme les
mélanocytes.
• Cellules de Merkel :
Ces cellules se trouvent principalement dans certaines zones du corps: le bout des doigts, la
muqueuse buccale, les lèvres, et les follicules pileux. Ils sont facilement visibles sous le
microscope électronique et sont toujours associés à un nerf fibres. Pour cette raison, les
cellules de Merkel sont considérées comme des «récepteurs tactiles», c'est qu'ils sont les
structures responsables de notre sens du toucher.
[Link] :
Le derme à une épaisseur varie de 500 µ à 1 mm (figure 2). .
On distingue le derme papillaire, le plus proche de la jonction épidermique, et le derme
réticulaire, plus profond, qui représente environ 80 % de l’épaisseur totale du derme .Tous
deux sont des tissus conjonctifs, il est constitues par
Des protéines :
Synthétisent par les fibroblastes. En particulier le collagène, macromolécule assemblée en
fibres conférant à la peau sa résistance, et l’élastine, macromolécule qui s’organise en

16
 Chapitre II : la physiologie de la peau

faisceaux, essentiellement localisée dans les couches superficielles du derme (couche

papillaire).L’élastines est responsable de l’élasticité de la peau.

Les fonctions de derme sont :

• D’assurer le maintien des propriétés de la peau et de servir de réservoir d’eau par
l’intermédiaire du gel de protéoglycanes.
[Link] :
L'hypoderme est le compartiment le plus profond et le plus épais de la peau. Il s'invagine
dans le derme et est rattaché au derme sous-jacent par des fibres de collagène et d'élastine.
Il est essentiellement constitué d'un type de cellules spécialisées dans l'accumulation et le
stockage des graisses, les adipocytes. Les adipocytes constituant l'hypoderme sont des cellules
regroupées en lobules séparés par des tissus conjonctifs (figure 3).

Figure 6: adipocytes vu au microscope électronique à balayag

L'hypoderme joue le rôle de réserve énergétique. Les graisses contenues dans les
adipocytes, peuvent être remises en circulation, via la voie veineuse, lors d'un effort intense ou
lors d'une déficience en apport énergétique, et seront transformées en énergie. Lorsque l'on dit
" brûler des calories ", on brûle en particulier les graisses. L'hypoderme participe, au moins
passivement, à la thermorégulation puisque la graisse est un isolant thermique. [37].
• Les poils : formés d’une tige constituée de cellules kératinisées et d’une racine. La racine est
implantée dans l’épaisseur du derme par le bulbe pileux ou follicule pileux avec la glande
sébacée

17
 Chapitre II : la physiologie de la peau

• Les glandes sébacées : annexées aux poils et forment les follicules pilo-sébacés elles
sécrètent le sébum (substance riche en corps gras qui sert à lubrifier le poil et apporte à la
couche cornée hydratation et imperméabilité).
• Les glandes sudoripares : sécrètent deux types de la sueur:
Encrines : paumes de la main, plantes des pieds et dos. Synthétisent une sueur aqueuse et
salée. Leur cavité excrétrice siège dans le derme et leur canal excréteur traverse le derme et
l’épiderme pour s’aboucher à la surface de la peau par un pore. Ont essentiellement un rôle
dans la thermorégulation et participent également à l’hydratation de la peau.
Apocrines : creux axillaires, pubis et région périanale. Synthétisent une sueur grasse. Leur
cavité sécrétrice est située dans l’hypoderme et leur canal excréteur s’abouche dans le conduit
pilo-sébacé.
La sueur comprend 99% d’eau, des sels minéraux avec essentiellement du chlorure de sodium
et des déchets.
• Cellules matricielles: Cellules permettant la croissance du poil.
• Cellules adipeuses (graisseuses): Cellules fabriquant la graisse.
• Réseau artériel: Réseau de vaisseaux sanguins transportant le sang du cœur aux organes.
• Réseau veineux: Réseau de vaisseaux sanguins transportant le sang des organes au coeur.
• Muscle érecteur du poil: Muscle permettant l'érection du poil.
• Capillaires: Vaisseaux sanguins permettant l'échange de divers nutriments et de déchets
avec les cellules.
• Pore de transpiration: Trou minuscule par lequel s'échappent les gouttes de transpiration.
• Terminaison nerveuse: Partie de la peau permettant de capter le stimulus.
• Les récepteurs cutanés : Il se trouve au niveau du derme et de l’épiderme, son des
terminaisons nerveuses aboutissent dans la racine postérieure du nerf rachidien [37].
II.3 : Type d’absorption des molécules :
Le processus de contact entre l'épiderme et les différentes molécules se déroulent en
trois étapes successives :
II.3 .1 :Contact entre la surface de la peau et les molécules : En effet, lors de l’étalement de
la crème de soin sur la peau, différentes molécules entre en contact avec la partie superficielle
de l’épiderme : la couche cornée ou stratum corneum*.
II.3 .2Pénétration : des molécules dans la couche cornée. Lors de cette étape, les molécules
s’introduisent dans la couche cornée afin de la remplir. Elles se dirigent vers la profondeur.
II.3 .3Absorption : des molécules par le tissu vivant. Une fois que les molécules ont rempli
18
 Chapitre II : la physiologie de la peau

la couche cornée, elles sont absorbées par le tissu vivant puis elles sont dirigées vers le derme
superficiel où elles subiront un métabolisme*, c'est-à-dire qu’elles vont agir et utiliser
l’énergie afin de se renouveler [36].

• Figure 7: Schéma d’absorption des molécules d’une crème

[Link] :
La peau est un organe à multiples facettes. C'est un organe frontière essentiel à la protection
du corps face aux agressions de l'environnement ; c'est un organe de contact sensoriel et
d'échanges thermiques, hydriques, essentiels au maintien de l'homéostasie. Il participe à la
communication sociale ; c'est un organe miroir au niveau duquel se man. [16]

19
 Chapitre III : Les Crèmes et les émulsions

Introduction :
Il est essentiel l’hydrater sa peau pour en conserver l’élasticité naturelle et la souplesse,
pour préserver l’intégrité du fragile film hydrolipidique qui la protège de l’agression des
agents externes (froid et vent, air condition ou sec, etc.). Une crème hydratante est utile sur le
visage comme sur le corps, voire sur les mains. Rappelons que la composition et les
caractéristiques des crèmes destinées à ces diverses utilisations sont vraiment très différentes.
III.1.Définition :
Les crèmes hydratantes sont des produits cosmétiques qui apportent dans une certaine
mesure une réponse pratique aux problèmes de la perte d'eau de la peau. Bien que l'eau soit
l'ingrédient absent, dans les peaux sèches, application seule de l'eau n'est pas la solution car
ceci a seulement un effet provisoire. Bien que l'huile soit également essentielle (elle sert à tenir
l'eau dessus sur la surface de peau), elle ne peut pas également seul hydrater la peau.[16].
III.1.1.L’hydratation, processus naturel :
L’eau qui "hydrate" la peau provient du derme, situé en dessous de l’épiderme. Elle passe
du derme à la couche cornée (couche en contact avec l’extérieur) par le processus dit de
"perspiration insensible". La couche cornée est recouverte du film lipidique, mélange de
graisse et de sueur, qui limite l’évaporation de l’eau en formant un film à la surface de la peau.
Dans le film lipidique, on trouve également des Facteurs Naturels d’Hydratation qui retiennent
l’eau comme de petites éponges
Cette "perspiration insensible" peut être perturbée par les variations climatiques, l’utilisation
de produits de soin, l’état de santé, la pollution, le tabac, le soleil.
[Link] crème hydratant :
La crème hydratante a donc pour mission de freiner l’évaporation de l’eau, sans l’arrêter.
C’est une action préventive car aucun produit ne peut apporter de l’eau à la peau et l’irriguer
comme un jardin.
On ignore souvent que 80% du vieillissement visible du visage est d’origine extérieure (soleil,
tabac, pollution, alimentation déséquilibrée...), le vieillissement biologique n’intervenant que
pour les 20% restant. [34]

[Link] différents types des crèmes cosmétique:

Il existe un grand nombre de types de crèmes cosmétiques, mais toutes sont des crèmes
hydratantes, auxquelles on ajoute différents additifs selon l'effet recherché :
crème hydratante pour le visage, crème de jour, crème de nuit.

20
 Chapitre III : Les Crèmes et les émulsions

crème teintée donne à votre peau une tonalité uniforme et naturelle. elle harmonise,
grâce à des substances végétales sélectionnées, le processus d’hydratation et de
production de sébum. Grâce à son pouvoir légèrement couvrant, elle lisse les
manifestations cutanées, typiques des peaux sensibles et réactives.
crème pour le contour des yeux.
Crème antirides ou anti-âge.
crème pour le corps, crème pour le buste.
crème pour les mains, crème pour les pieds.
crème solaire, qui contient des filtres ultraviolets.
crème après-soleil.
crème amincissante ou raffermissant, crème anticellulite.
[Link] rôles des crèmes :
Comme indiqué précédemment, le film hydrolipidique qui recouvre la peau est un
mélange de sébum, de substance grasse et de sueur. Une crème hydratante a une
composition inspirée de celle du film hydrolipidique. Cette émulsion, ce mélange
homogène d'huile et d'eau vont jouer un double rôle dans l'hydratation * d'abord amener
de l'eau : hydrater (c'est d'abord éviter la déshydratation) * ensuite éviter qu'elle ne
reparte trop rapidement : c'est le rôle de la phase huileuse. [36].
Bien sûr, le rôle de la crème hydratante ne s'arrête pas là. Nourrir la peau c'est lui amener
des éléments extérieurs, soit qu'elle fabrique déjà, soit qu'elle ne fabrique pas. Il n'y a pas
d'éléments (oligo-éléments, vitamines, acides gras essentiels qui font qu'une crème
deviendrait la panacée. Le marketing agressif nous l'annonce régulièrement, mais la
vérité est plus simple : il vous appartient de vous connaître, de prendre le temps de
comprendre les bases du fonctionnement de votre organisme et dans ce cas de la peau, et
de compléter vos besoins. Les éléments principaux ne sont pas nombreux et avec moins
d'une dizaine de vitamines, d'Oglio éléments et d'acides gras essentiels, vous pouvez
satisfaire votre peau.
Améliorer l'hydratation de la couche cornée.
Rétablir le FHL (Film Hydrolipidique) car la sécrétion sébacée diminue avec l’âge.
Favoriser l'activité épidermique, pour corriger l'amincissement de l'épiderme.

[Link] d’utilisation :

21
 Chapitre III : Les Crèmes et les émulsions

Appliquez votre crème hydratante le matin sur votre peau (visage et cou) préalablement
bien nettoyée. Faites ensuite pénétrer la texture en massant délicatement du bout des doigts.
Pensez que la quantité de crème appliquée doit être entièrement absorbée par la peau.
[Link] formuler une crème cosmétique :
Une crème est avant tout une émulsion, un peu comme une mayonnaise. On mélange une
phase aqueuse (eau) avec une phase huileuse, un émulsionnant faisant ensuite le lien entre les
deux phases pour assurer la stabilité de l'émulsion. Suivant le type de crème que l’on veut
obtenir, on peut réaliser.[16].
Une émulsion « huile dans eau » : les gouttelettes d'huile sont en suspension dans l'eau. L'eau
forme une phase continue dans laquelle sont incorporées les gouttelettes d'huile, constituant la
phase discontinue. Puisque la phase continue est aqueuse, cette émulsion à un fort pouvoir
nourrissant et hydratant, s'étale facilement et est absorbée rapidement. C'est une excellente
crème de jour.
Une émulsion « eau dans huile » : les gouttelettes d'eau sont enfermées dans l'huile, cette
dernière formant la phase continue. Un film lipidique se crée sur la peau. Une telle émulsion
couvre les besoins de la peau en graisse et en eau, elle est mieux adaptée aux soins de nuit,
c'est un soin plus protecteur. [16].

III.6.L'émulsion :
Une émulsion est formée de deux liquides non miscibles, dont l'un est finement réparti
dans l'autre en gouttelettes dont le diamètre est généralement supérieur à 0.10um. La phase
dispersée est aussi appelée phase interne ou discontinue, et la phase dispersante peut être
appelée phase externe ou continue. Selon la pharmacopée, les émulsions dans lesquelles la
phase dispersée est lipophile (ex.: huile végétale ou minérale) et la phase dispersante
hydrophile (ex.: eau) sont dites de type aqueux L/H; les émulsions dans lesquelles la phase
dispersée est hydrophile et la phase dispersante lipophile sont quant à elles dites de type
huileux H/L. [39]
[Link] aqueuse :
Composition de la phase aqueuse :
- Eau déminéralisée
- Agents de consistance : ce sont des polymères ayant la capacité de modifier le
comportement rhéologique des formulations.
- Séquestrant : molécule spécialisée dans la capture et l’immobilisation des espèces
ioniques issues des eaux de rinçage pour diminuer les risques d’oxydation.

22
 Chapitre III : Les Crèmes et les émulsions

- Humectant : il est ajouté afin de limiter la perte en eau du produit.

- Régulateur de pH : il permet d’ajuster le pH de la formule.
- Hydratant : il provoque un effet immédiat et à long terme d’hydratation cutanée.
Fonctions :
- Former l’une des phases émulsionnées.
- Accueillir les actifs, conservateurs et colorants qui sont hydrosolubles.
- Restaurer l’hydratation de l’épiderme par apport direct d’eau et d’agents hydratants
pouvant fixer l’eau dans la couche cornée.
- Permettre le développement de polymères viscosants.

E/H

[Link] grasse :
Composition de la phase grasse :
- Emollient : il nourrit la peau et joue sur le toucher et la texture du produit fini.
- Conditionneur : il forme un film sur la peau ou le cheveu pour limiter l’agression des
tensioactifs.
- Emulsionnant : molécule amphiphile permettent la formulation de l’émulsion.
- Phase parfum : antioxydant, conservateur, solubilisant. [39]
Fonctions :
- Former l’une des phases émulsionnées.
- Accueillir les actifs, conservateurs, colorants liposolubles.
- Participer à la reconstruction du film hydrolipidique favorisant le maintien de
l’hydratation de l’épiderme.

- Donner un toucher particulier à la formule

23
 Chapitre III : Les Crèmes et les émulsions

H/E

III.6. 3. Rupture du l'émulsion :

Une émulsion est rompue soit:
• par inversion de phase
• par crémage ou sédimentation
• par coalescence
• à la fois par coalescence et crémage ou sédimentation
La rupture de l'émulsion est une séparation complète qui se produit en deux étapes. Dans
un premier temps, lors de la floculation, les gouttelettes de la phase dispersée forment des
agrégats et chacun de ces agrégats conserve encore son identité; l'agrégation est réversible. Il y
a seulement crémage ou sédimentation, donc l'homogénéité peut être facilement rétablie par
simple agitation. Théoriquement, le crémage et la sédimentation sont des phénomènes
réversibles, car il suffit en principe d'agiter modérément les préparations pour redistribuer les
particules de façon homogène. Par contre, s'il y a coalescence, alors il y a rupture complète et
irréversible de l'émulsion. Mais, il doit être compris que si la floculation constitue l'étape
nécessaire à la coalescence des particules, elle n'est cependant pas une étape suffisante. Il n'est
pas rare, en effet, de constater que des émulsions floculées rentent stables pendant très
longtemps sans présenter de coalescence. Le phénomène de coalescence dépend de la tension
interfaciale entre les deux phases liquides. La tension inter faciale entre deux liquides tend à
rendre la surface de séparation aussi petite que possible. En faisant une émulsion, on augmente
la surface de séparation de façon considérable et ceci d'autant plus que les gouttelettes
dispersées sont très fines. On accroît ainsi l'énergie libre du système, donc son instabilité. [39]
La vitesse de crémage ou de sédimentation d'une particule sphérique dans un milieu liquide
et visqueux est exprimée par la loi de Stokes.

24
 Chapitre III : Les Crèmes et les émulsions

Un des facteurs les plus importants est le rayon des particules. L'opération d'homogénéisation
a précisément pour but de réduire au maximum ce rayon et en même temps de le rendre aussi
uniforme que possible; il en résulte alors une amélioration de la stabilité et un accroissement
de la viscosité du milieu. D'autre part, le crémage sera d'autant plus spontané que la différence
entre les densités des deux phases sera plus grande. Si la phase dispersée est plus dense que la
phase continue, la vitesse de sédimentation est positive, c'est-à-dire que les globules huileux
sédimenteront vers le bas. Inversement, quand la phase dispersée a une densité moindre que la
phase continue, la vitesse de sédimentation est négative, c'est-à-dire que les globules vont
s'accumuler en surface. On peut réduire la vitesse de crémage (ou de sédimentation) soit en
réduisant la dimension des globules par homogénéisation, soit en augmentant la viscosité de la
phase externe par addition, en concentration appropriée, d'un agent épaississant. [40]

[Link] phénomènes d’instabilité des émulsions :

Tableau 5 : Les causes de l’instabilité des émulsions
Cause Effet Rende (solution)
Tension interfacial Coalescence Emulsion- ant (TA)
Crémage
Pesanteur Epaississant
sedimentation
Potential
Flocculation Electrolyte
Electro cinétique
T C° (temperature) Inversion de phase Changement de TA
Heterogeneities Mûrissement affinage

[Link] :
Un tensioactif ou agent de surface est un composé qui modifie la tension superficielle entre
deux surfaces. Les composés tensioactifs sont des molécules amphiphiles, c'est-à-dire qu'elles
présentent deux parties de polarité différente, l'une lipophile (qui retient les matières grasses)
et apolaire, l'autre hydrophile (miscible dans l'eau) et polaire.
25
 Chapitre III : Les Crèmes et les émulsions

Il permet ainsi de solubiliser deux phases non miscibles, en interagissant avec l'une apolaire
(c'est à dire lipophile donc hydrophobe), par sa partie hydrophobe; tandis qu'avec l'autre phase
qui est polaire, il interagira par sa partie hydrophile.
Au Canada notamment, on parle aussi de sur-factif, transposition du mot anglais surfactant qui
est la compression de « surface active agent » (agent de surface actif). [41]
[Link]étés des tensioactifs :
Les propriétés des tensioactifs sont dues à leur structure amphiphile. Cette structure leur
confère une affinité particulière pour les interfaces de type huile/eau et eau/huile et donc, par
là même, leur donne la capacité d'abaisser l'énergie libre de ces interfaces. Ce phénomène est à
la base de la stabilisation de systèmes dispersés.
En tant qu'agents émulsifiants ou stabilisants, on peut détailler leur action en trois points:
• Ils facilitent la formation de gouttes en diminuant cette tension de surface, car l'énergie
nécessaire à leur formation est directement proportionnelle à la tension de surface
• Ils stabilisent les gouttes formées en diminuant le gradient de pression au niveau de
l'interface
• Ils stabilisent les gouttes vis à vis de l'agrégation, en apportant des répulsions
électrostatiques ou/et stériques entre les gouttes. [42]
[Link] des tensioactifs :
Les tensioactifs sont parfois dénommés selon la fonction qu'ils remplissent.
• Les détergents
Un détergent (ou agent de surface, détersif, surfactant) est un composé chimique,
généralement issu du pétrole, doté de propriétés tensioactives, ce qui le rend capable d'enlever
les salissures. La détersion est un élément d'hygiène fondamental, puisqu'il permet d'éliminer
une grande partie des bactéries présentes sur les surfaces nettoyées, en particulier la peau, les
ustensiles servant à la préparation et à la consommation des repas.
• Les agents moussants
La formation de mousse, dispersion d’un volume important de gaz dans un faible volume
de liquide, nécessite la présence d’agents tensioactifs qui s’adsorbent à l’interface eau-air.
• Les agents mouillants
Le mouillage d'un solide par un liquide correspond à l'étalement du liquide sur le solide. En
diminuant la tension superficielle, les agents mouillants permettent un plus grand étalement du
liquide.
• Les agents dispersants

26
 Chapitre III : Les Crèmes et les émulsions

Les agents dispersants permettent de fixer les particules hydrophobes contenus dans une
solution hydrophile, telle que de l'eau, ce qui permet de créer une dispersion, c'est-à-dire une
solution aqueuse contenant des particules en suspension. Ces agents préviennent la floculation
des particules, c'est-à-dire leur regroupement en plus grosses parties, qui pourraient alors
facilement sédimenter dans le fond de la solution.
• Les émulsifiants
Un émulsifiant permet de mélanger deux liquides non miscibles, par exemple de et de
l'huile. Un des liquides est dispersé dans le second liquide sous forme de petites gouttelettes.
[Link] de tensioactifs :
On distingue quatre types de composés tensioactifs, regroupés selon la nature de la partie
hydrophile :
Tensioactifs anioniques : leur partie hydrophile est chargée négativement.
Tensioactifs cationiques : leur partie hydrophile est chargée positivement.
Tensioactifs zwitterioniques ou amphotères : leur partie hydrophile comporte une charge
positive et une charge négative, la charge globale est nulle.
Tensioactifs non ioniques : la molécule ne comporte aucune charge nette. [41]
[Link] d’une crème à l’échelle industriel :
Les crème sont des émulsions fines, le plus souvent une phase discontinue huileuse dans
une phase continue aqueuse (émulsion huile dans eau). Le procédé industriel consiste en une
succession d’opération. Par exemple pour une émulsion huile dans eau, on peut réaliser le
logigramme de préparation (diagramme de production) suivant :[36]

27
 Chapitre III : Les Crèmes et les émulsions

Conservateur Phase aqueuse

T° solubilisation
hydrosoluble

Conservateur T° solubilisation
Phase grasse
liposoluble
Durée d’agitation

Principe actif T° Durée d’agitation

Parfum /arôme T° Durée d’agitation

Figure 8 : processus industrielle d’une crème

III.9 structure générale des produits cosmétique :

Quelles que soient leurs formes (crèmes, gels, émulsion, etc.), les produits cosmétiques ont
généralement tous la même structure :
III.9 .1 Principes actifs :
Substances actives qui assurent l'efficacité du produit. Le terme principe actif est
couramment utilisé même si l'expression principe actif est normalement réservée aux
médicaments , Différent du principe actif thérapeutique.
D'un point de vue pharmaceutique, la substance active (autrefois : principe actif) est celle qui
dans un médicament possède un effet thérapeutique. Cette substance est, la plupart du temps,
en très faible proportion dans le médicament par rapport aux excipients. Ce peut être une
substance pure chimiquement définie (abusivement qualifiée de molécule) ou un mélange de
plusieurs substances chimiquement proches (isomères) ou encore une substance définie par
son mode
L'emploi du terme substance active a été étendu aux biocides et phytopharmaceutiques, mais
aussi aux cosmétiques, voire à l'alimentaire. [36]
III.9.2 Excipient :

28
 Chapitre III : Les Crèmes et les émulsions

Support du principe actif. Par exemple dans une crème ce qui permet de véhiculer le
principe actif c'est l'émulsion; dans une lotion c'est le solvant; dans le vernis à ongles c'est la
résine.L'excipient est le vecteur ou véhicule du principe actif. Il permet au principe actif de
parvenir là ou il est censé agir. L'excipient n’interfère donc pas avec le principe actif. Les
excipients possèdent parfois certaines propriétés cosmétologiques et peuvent alors jouer le rôle
de substance active. L'excipient est toujours bien plus important en volume que les principes
actifs. De plus, c'est lui qui définit la galénique du produit c’est-à-dire sa consistance (crème,
gel...) et son aspect. Les excipients les plus utilisés sont les huiles, l'eau et l'alcool. Par
exemple, l'amande douce, l'avocat ou le beurre de karité sont des excipients d'origine végétale.
Les silicones sont un exemple d'excipient d'origine synthétique. Un pas défini par une
composition chimique particulière mais par son utilisation, qui découle de ses propriétés
physico- excipient n'est donc chimiques qui le rendent aptes à remplir son rôle d'excipient.
[35]
III.9.3 Des additives :
En général ils sont rajoutés en faibles quantité (conservateurs, colorants, anti- oxydants,
parfums,Quand il est utilisé comme un nom, un additif désigne une substance qui est introduite dans un
mélange pour apporter une propriété spécifique.
III.9.4 Adjuvants (pour parfumer, faire mousser, etc.) :
Molécule qui favorise le rôle de l'excipient et du principe actif.
Un adjuvant est quelque chose ou quelqu'un qui aide à l'accomplissement d'un processus,
renforçant ou ajoutant des propriétés recherchées. On utilise des adjuvants dans des domaines
variés : en boulangerie, dans le bâtiment, cosmétique, etc.
III.9.5 Conservateur :
Un conservateur est défini comme toute substance capable de s’opposer aux altérations
d’origines chimiques ou microbiologiques d’un produit, par exemple le parabène. [16]
III.9 5.1 Antibactériennes :
Un antibiotique (du grec anti : « contre », et bios : « la vie ») est une molécule qui détruit
ou bloque la croissance des bactéries. Dans le premier cas, on parle d'antibiotique bactéricide
et dans le second cas d'antibiotique bactériostatique. Un même antibiotique peut être
bactériostatique à faible dose et bactéricide à dose plus élevée.
Un grand nombre d'antibiotiques sont des molécules naturelles, fabriquées par des micro-
organismes, des champignons ou d'autres bactéries. Ces derniers les produisent pour éliminer
les bactéries concurrentes avec les quelles ils sont en compétition dans leur biotope.

29
 Chapitre III : Les Crèmes et les émulsions

Les antibiotiques agissent de manière spécifique sur les bactéries, en bloquant une étape
essentielle de leur développement : synthèse de leur paroi, de l'ADN, des protéines, production
d'énergie. Ce blocage se produit lorsque l'antibiotique se fixe sur sa cible, une molécule de la
bactérie qui participe à l'un de ces processus métaboliques essentiels. [16]
III.9.5.2Antifongique :
Cette interaction entre l'antibiotique et sa cible est très sélective, spécifique des bactéries et
ces composés ne sont en général pas actifs ni sur les champignons ni sur les virus. Il existe
aussi d'autres molécules actives sur ces autres types d'agents infectieux que l'on 'appelle des
antifongiques ou des antiviraux et qui sont distincts des antibiotiques.
III.9.6 Un colorant :
Est une substance utilisée en pour apporter une couleur à un objet à teinter.
III.9 .7 Un antioxydant :
Est une molécule qui diminue ou empêche l'oxydation d'autres substances chimiques.
III.9.8 Les émulsifiants :
Les émulsifiants, appelés parfois émulsionnants, stabilisent l'émulsion. Ce sont le plus
souvent des tensioactifs ou agents de surface. Cependant, des particules solides (émulsions de
Pickering), des polymères synthétiques ou des macromolécules biologiques peuvent aussi
jouer ce rôle. Le jaune d'œuf sert d'émulsifiant dans la préparation de sauces en cuisine. Cette
propriété est due à la lécithine qu'il contient. La lécithine se trouve également dans le soja et
est très utilisée dans les préparations industrielles. La caséine est une protéine du lait qui est
émulsifiante. [36]

30
 Chapitre IV : matériels et méthodes

IV .1 .Introduction :
Notre travail expérimental consiste à :
• Déterminer la Concentration Minimale Inhibitrice ; il s’agit de la concentration de
chitosane la plus faible pour laquelle la croissance bactérienne est inhibée.
• préparer une crème hydratante pour la peau au nivaux de laboratoire physico-chimique
microbiologique, [Link] (la zone industrielle de Ouled Yaich Blida) et au
laboratoire de la faculté de chimie industrielle de l’université de Blida. De plus, nous
avons modifié cette formulation en ajoutant le chitosane qui a un effet thérapeutique et
qui a été largement prouvé dans de précédentes recherches, ce qui nous laisse croire que
cette crème aura un double effet , Un effet hydratant et un effet thérapeutique (anti
fongique, antibactérien,)
• L’étude de la stabilité au cours de temps.
IV.2 .Etude du pouvoir antimicrobien et antifongique de chitosane :
IV.2.1 Détermination de la Concentration Minimale Inhibitrice (CMI)
Afin de pouvoir conclure sur la sensibilité d’une souche ; il faut déterminer sa CMI Par
l’antibiogramme. La détermination du diamètre de la zone d’inhibition permet une estimation
de la concentration minimale inhibitrice
IV.2.2 Méthode de l’antibiogramme :
Un antibiogramme est une technique de laboratoire visant à tester la sensibilité d'une souche
bactérienne vis-à-vis d'un ou plusieurs antibiotiques supposés ou connus. Le principe consiste
à placer la culture de bactéries en présence du ou des antibiotiques et à observer les
conséquences sur le développement et la survie de celle-ci. On peut par exemple placer
plusieurs pastilles imbibées d'antibiotiques sur une souche bactérienne déposée dans une boîte
de Pétri.
• Principe :
Pour cette méthode, nous utilisons des disques de papier Wattman, absorbants et stériles de 9
mm de diamètre. Imbibé de chitosane à différentes concentrations (0.5g/ l, 0.75g/l ,1g/l,) le
disque sera déposé sur boite de Pétri contenant un milieu gélosé préalablement inoculée et
uniformément ensemencée par une suspension bactérienne ou fongique,(Pseudomonas
aeruginosa, [Link], Aspergillus Niger, Candidas albicans).
Durant l’incubation, les souches ensemencées entreront en contact avec le chitosane et
l’inhibition se traduira par une zone circulaire stérile (Zone d’Inhibition) dont le diamètre sera
en fonction de la sensibilité ou de la résistance du germe. [47]

31
 Chapitre IV : matériels et méthodes

Figure 9 : Illustration de la méthode d’antibiogramme sur boite de pétrie refference

Mode opératoire :
Le protocole adopté est celui de la Pharmacopée européenne (2010),
(2010 communément
utilisés dans les laboratoires de microbiologie de l’entreprise VENUS.
• Préparation de l’inoculum :
• Réaliser une suspension
spension microbienne à partir d’une culture jeune de bactéries (18-24h)
(18 ou de
levure (48h),
), prélever quelques colonies isolées et incorporer dans 5 ml d’eau physiologique.
• Agiter et homogénéiser la suspension a l’aide de l’agitateur Vortex jusqu’à dissolution totale
des colonies dans l’eau physiologique.
• Troiss tubes de la solution de chitosan de concentration connue 0.5g/ l,, 0.75g/l ,1g/l,
• Incuber les suspensions bactériennes et fongiques respectivement
respectivement dans des étuves à 37 C°
et 25 C° pendant 20 à 25 mn.
• Préparation des milieux de culture :
• Liquéfier les milieux de cultures Muller Hinton pour les Bactéries) et Sabouraud
S (levures et
moisissure)) dans un bain mari à 95 C° et garder en surfusion dans une étuve à 45°C.
• Sous hotte à flux laminaire, verser aseptiquementt les milieux de culture gélosés
gélosé sur boites de
Pétri à raison de 15 ml par boite.
• Laisser refroidir et solidifier à température ambiante, et conserver dans des conditions évitant
toute
te modification de leur composition.
• Ensemencement :
• Imbiber aseptiquement un écouvillon avec la suspension microbienne.

32
 Chapitre IV : matériels et méthodes

• Essorer l’écouvillon en pressant fermement et en tournant sur la paroi interne du tube, afin de
le décharger du surplus de suspension.
• Ensemencer aseptiquement une boite de Pétri en frottant délicatement l’écouvillon sur la
surface de la gélose en stries serrées.
• Dépôt des disques :
• Prélever aseptiquement un disque stérile de 9 mm de diamètre avec une pince stérile.
• Mettre en contacte le bout du disque avec la solution de chitosan de concentration
connue, qui va être absorbée par le disque par capillarité.
• Déposer le disque ainsi imbibé de chitosane à la surface de la gélose, au centre de la boite de
pétri.
• Incuber les boites à 37°C durant 24h pour les bactéries et à 25°C durant 48h pour les levures
et moisissure.
• Le chitosan à tester peut également être directement mélangées en concentration connue,
sans oublier que les techniques de dilution exigent une dispersion homogène. Le milieu est
ensuite inoculé à un taux déterminé de microorganismes et, après incubation, on note la
présence ou l'absence de culture; la lecture peut être visuelle ou spectrophotométrique, car le
degré d'inhibition est en rapport avec la turbidité du milieu. [49]
IV.2.3 Caractéristiques des souches testées :

Tableau 8 : les souches testées

Souches test Milieu de culture Caractéristiques

Pseudomonas aeruginosa Gélose mulher-HintonBacille a Gram negative
(B G N)
[Link] Gélose mulher-Hinton Cocci a Gram positif
(C G P)
Aspergillus Niger Milieu sabouraud Moisissures
Candidas albicans Milieu sabouraud Levure
IV.3Les composés de la formulation d’une crème hydratante:
IV.3 .1 Le principe actife (le chitosane) :
IV.3 .1.1 Solubilité du chitosane :
Le chitosane est typiquement insoluble dans l’eau et les solutions alcalines. Il
est cependant, solubles dans une solution d’acide dilué (exemples, l’acide sulfurique et
à un moindre degré dans l’acide phosphorique. [43]
IV.3 .2 Les ingrédients entrant dans la phase aqueuse :

33
 Chapitre IV : matériels et méthodes

Tableau 7: résume le nom des ingrédients et, leurs caractéristiques et usages, selon
lesquelles ils ont été choisis pour former la phase aqueuse.

Nom d’ingrédient Caractéristique Usage

L’eau déminéralisée Liquide incolore et inodore. Solvant

Poudre blanche, a odeur Il gélifie les formules en

Carbopol caractéristique il se dispersé l’absence des sels et
dans l’eau. stabiliser la mousse

E.D.T.A (acide éthylène

solide incolore à blanc, inodore complexant
diamine tétracétique)

Poudre fine, couleur blanche, Utiliser en cas de plaie

Allantoïne
aucun odeur. ou brulure

Utiliser comme additif pour

Poudre blanche légèrement prolonger le pouvoir
Glycérine
jaunâtre. Inodore hydratant d’une crème c’est
un excellent adoucissant

IV.3 .3 Les ingrédients entrant dans la phase huileuse :

Tableau 8: résume le nom des ingrédients et, leurs caractéristiques et usages, selon lesquelles ils
ont été choisis pour former la phase huileuse

Nom d’ingrédient Caractéristique Usage

Lanetteo (Cetyl-Stearyl Paillètes blanche cireuses Agent Emulsifiant
Alcohol) onctueuse au toucher tension actif non anionique
Agent épaississant augment la
EmulgineB1 (Cetereth-12) Ecailles blanche incolore
consistance d’une émulsion
Liquide huileux, elle a une
Il très bénéfique pour la peau
Huile d’amande douce odeur agréable facilement
sèches
adsorbe par la peau
Liquide huileux incolore Utiliser pour le traitement des
Huile de Vaseline
transparent brulures

Notre choix pour l’excipient a été motivé par des critères standardise (nature physique- chimique) et
selon sa bonne tolérance cutanée.

34
 Chapitre IV : matériels et méthodes

IV.4Choix du type d’émulsion:

Les émulsions sont généralement constituée d’une phase aqueuse, E, et d’une phase
huileuse, H, si la phase dispersée est la phase huileuse, H, l’émulsion est dite directe, de type
huile dans l’eau et on note (H/E).
Tandis que si la phase continue(ou phase externe) l’émulsion est inverse de type eau dans
l’huile E/ H,
Dans ce type de crème on utilise l’emulsion (H/E), cette émulsion est très nourrissante,
hydratante et protectrice car elle crée un film lipidique sur la peau, Formulation idéale pour
nourrir les peaux
IV.5 Contrôle de la qualité microbiologique de la crème hydratante :
L’objectif est de vérifier que la crème hydratante répond aux exigences microbiologiques
spécifiées dans les monographies.
Les analyses à effectuer se résument en la recherche et le dénombrement des germes aérobies
viables totaux et la recherche des germes spécifiés.
IV.5.1 Equipement et matériel :
• Seringues de 5 et de 10 ml ;
• Instruments stériles : scalpel, ciseaux, spatules,… etc.
• Flacons à bouchons à vis de 16×125/ 20×150 mm stériles.
• Autoclave.
• Balance analytique.
• Boites Pétri 55 et 90 mm.
• Etuves bactériologiques de 22±2°C, 32±2°C et 48±2°.
• Compteur de colonies
• Poste de sécurité microbiologique de type II (hotte à flux laminaires avec filtre HEPA) Lampe
ultra violet.
IV.5.2 Milieux de cultures :
• Agar de SABOURAUD
• Agar Plate-Count
• D/E Neutralizing Broth.
IV.5.3 Procédure de détermination:

L'essai a été effectué dans des conditions d'asepsie en un endroit exempt de contamination
(lampe UV). Les manipulations ont été accomplies sous une hotte à flux laminaire.

35
 Chapitre IV : matériels et méthodes

La préparation des dilutions (1/10) s’effectue par dissolution de 10 g de la crémé hydratante à

analyser dans un flacon contenant 90 ml de diluant (solution tampon).la
tampon).la quelle ???
On a ensemencé, en profondeur 2 boites Pétri stériles, avec 1 ml dans chacune, pour la
dilution de 1/10. On a ajouté 10 à 15 ml de milieu de culture (PCA et Sabouraud) par la suite
chaque boite est portée à une température de 44 à 48°C. On a aussi bien homogénéisé
ho pour
une meilleure dispersion. Enfin on a incubé comme suit :
La première boite de Pétri est incubée à 32°C pendant 72±06 heures pour détecté les
bactéries aérobies mésophiles (milieu de culture sélectif Agar Plate-
Plate Count), l’autre boite est
incubée à 22°C pendant 5 jours pour détecter les levures et moisissures (milieu sélectif Agar
SABOURAUD).
IV.6 Les paramètres physiques
physique :
IV.6.1 Détermination du pH :
• une fois l’appareil étalonné, laver les électrodes d’abord à l’eau distillée.
• homogénéiser l’échantillon, en introduire un volume suffisant dans le récipient de mesure
et y plonger les électrodes.
• vérifier que l’indication donnée par le pH-mètre
pH mètre est stable au bout d’une minute.
• Relever ensuite le pH.

IV.6 .2Mesure de la densité :

Définition :
C’est le rapport de la masse d’un volume d’extrait à 20°C, à celle du même volume d’eau
distillée à 20°C.
Principe :
La méthode la plus usuelle est la densimétrie. La densité du crème,, exprimé en pourcentage
de matières solides, peut se lire directement sur l’échelle Brix de la tige du densimètre.

Figure 10: Représentation d’un densimètre ref

36
 Chapitre IV : matériels et méthodes

Densimètre normalisée correspondants caractéristiques essentiels suivants :

• Type à carène cylindrique.

• Lestage au mercure ou à la grenaille de plomb.
• Longueur total 23 à 25cm.
• Longueur de la graduation 10cm.
• Graduation par 0.001 avec lecture sous le ménisque.
• Eprouvette de 250ml.
• Thermomètre gradué on demi degré.

IV.6 .3Mesure de la viscosité :

Définition :
Est un instrument qui sert à mesurer la viscosité du fluide à des taux de cisaillement donné.
Viscosimètre à affichage digital, donnant une lecture directe de la viscosité.

Figure 11 : Représentation d’un Viscosimètre

Principe :
Le principe de fonctionnement du viscosimètre est de faire tourner une broche (après le choix
du mobile et la vitesse de rotation) qui est immergé dans le liquide d'essai
La mesure de la viscosité (en centipoises ou secondes millipascal) est déterminée par la
vitesse de rotation de la broche, la taille et la forme de la broche.

37
 Références bibliographiques :
[1] : Grégorio Crini , Pierre-Marie Badot. Application of chitosan, a natural
aminopolysaccharide, for dye removal from aqueous solutions by adsorption processes
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[5] : Nugraha Edhi Suyatama , Développement de films biodégradables à base de chitosane:
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 Carbopol

Caractéristiques :

Poudre blanche présentant une légère odeur acétique

Nom INCI : Carbomer.

Solubilité : Insoluble, se disperse dans l’eau
Conditions de stockage : à conserver à l’abri de l'humidité.
Conditions d’emploi

À incorporer de 0.2 à 0.5%. Gélifiant stabilisant possédant d’excellentes propriétés de

mise en suspension,

PH d’utilisation : 5-10

Emulgin B1

Page 1 sur 12
Nom INCI :(Cetereth-12)
N ° CAS: 68439-49-6
apparence: pellets
Point d'éclair : 249,00 °C
Couleur: Blanc à jaunâtre
L’utilisation :
Ceteareth-20. Utilisé dans émulsions H / E cosmétiques. Agit comme un
émulsifiant non-ionique.
Neutralisation : ajouter une quantité suffisante d’agent neutralisant pour atteindre
le pH
Applications / Recommandé
Point Stabilité :Ce produit est stable
Conservation :
Conserver dans un récipient hermétique, à l'abri des matières oxydantes.
Conserver dans un endroit frais, sec et bien ventilé.
Conserver à l'écart de toute source de chaleur

Lanette o

Formule moléculaire brute : C14H30O

Apparence : Solide sous forme de cristaux ,plaquettes,blanc
Principaux synonymes

Noms français :A myristylique,alcool myristique,Alcool tetradecylique

Noms anglais :-TETRADECANOL,Myristic alcohol

Page 2 sur 12
État physique : Solide
Masse moléculaire : 214,44
Densité : 0,834 g/ml à 20 °C
Solubilité dans l'eau : Insoluble
Densité de vapeur (air=1) : 7,39
Point de fusion : 39,5 °C
Point d'ébullition : 263,2 °C
Tension de vapeur : 0,01 mm de Hg (0,00133322 kPa) à 20
Concentration à saturation : 13,1578 ppm
Facteur de conversion (ppm->mg/m³) : 8,771
Stabilité :Ce produit est stable
Incompatibilité :Ce produit est incompatible avec ces substances: Les agents
oxydants forts, les chlorures d'acides, les anhydrides d'acides
Conservation :
Conserver dans un récipient hermétique, à l'abri des matières oxydantes.
Conserver dans un endroit frais, sec et bien ventilé.
Conserver à l'écart de toute source de chaleur
Effets aigus : Irritation possible yeux, peau, voies respiratoires et digestive

Allantoïne

Page 3 sur 12
 L'allantoïne est un composé chimique azoté, de formule C4H6N4O3, d’origine organique ou
végétale découvert par Louis-Nicolas
Nicolas Vauquelin dans le liquide amniotique de la vache; il a été
trouvé également dans l'urine du veau (Friedrich Wöhler) puis chez
chez de nombreux mammifères à
l'exception des grands primates (dont l'Homme). L'industrie cosmétique utilise l'allantoïne extraite
du mucus de certains gastéropodes (escargots). Chez les végétaux, on en trouve dans les racines de
la grande consoude.

L'allantoïne
ïne est le produit de l'oxydation de l'acide urique.

Synonymes :Uureidohydantoin , Glyoxyldiureide ,Hemocane ,5-ureidohydantoin

ureidohydantoin
Formule chimique :

Aspect : poudre fine

Couleur : blanche
Odeur : aucune
Dénomination INCI : allantoïne
Structure chimique

Propriétés :

L'allantoïne est présente naturellement dans le corps humain où elle provient de la dégradation de
l'acide urique par des enzymes. Elle est reconnue pour ses vertus :

Apaisante
Hydratante
Cicatrisante et réparatrice
Régénérant
Adoucissante
Régule les sécrétions de sébum, anti-transpirant
anti
Déodorant peaux sensibles

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 E.D.T.A

L'EDTA comporte six sites basiques, quatre correspondant aux bases conjuguées
(carboxylates) des fonctions carboxyliques et deux correspondant aux fonctions amines.
Ces sites basiques sont également des centres ligands, sa principale caractéristique,
son fort pouvoir chélatant(ou complexant) par lequel il forme des complexes métalliques

très stables, ce qui en fait un poison. Dans les complexes, l'EDTA est lié aux cations
métalliques sous la forme d'une de ses bases conjuguées

Dénomination INCI : acide éthylène-diamine-tétraacétique

Apparence : solide incolore à blanc, inodore
Formule brute : C10H16N2O8 [Isomères]
Masse molaire : 292,2426 ± 0,0119 g/mol
C 41,1 %, H 5,52 %, N 9,59 %, O 43,8 %,
T° fusion 245 °C (décomposition)
Solubilité 1 g·l-1 (eau, 25 °C) 400 mg·l-1 (eau, 20 °C)
Masse volumique 0,86 g·cm-3 (20 °C) 4
T° d'auto-inflammation > 200 °C
Pression de vapeur saturante :< 0,013 mbar (20 °C) 4

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Glycérine
Le glycérol, ou glycérine, est un composé chimique de formule HOH2C–CHOH–CH2OH.
C'est un liquide incolore visqueux et inodore au goût sucré et faiblement toxique, utilisé
dans de nombreuses compositions pharmaceutiques. Sa molécule possède trois hydroxyles
correspondant à trois fonctions alcool responsables de sa solubilité dans l'eau et de sa
nature hygroscopique. Un résidu glycérol constitue l'articulation centrale de tous.
Apparence :
Le glycérol se présente sous la forme d'un liquide transparent, visqueux, incolore, inodore,
non toxique et au goût sucré.
La solubilité :
Le glycérol peut se dissoudre dans les solvants polaires grâce à ses 3 groupes hydroxyles.
Il est miscible dans l'eau et l'éthanol ; et insoluble dans le benzène, le chloroforme et le
tétrachlorométhane.
Propriétés chimiques :
Dans les organismes vivants, le glycérol est un composant important des glycérides
(graisses et huiles) et des phospholipides. Quand le corps utilise les graisses stockées
comme source d'énergie, du glycérol et des acides gras sont libérés dans le sang.
Autre propriété :
Le glycérol a un goût sucré de puissance moitié moindre que le saccharose, son pouvoir
sucrant est de 0,56-0,64 à poids égal1
Le glycérol a des propriétés laxatives et diurétiques faibles
Comme d'autres composés chimiques, tels que le benzène, son indice de réfraction (1,47)
est proche de celui du verre commun (~1,50), permettant de rendre « invisibles » des
objets en verre qui y seraient plongés.
Utilisation :

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 Dans les cosmétiques, le glycérol est souvent utilisé comme agent
hydratant, solvant et lubrifiant.

Il a meilleur goût et est plus soluble que le sorbitol qui le remplace souvent.
Utilisé dans les dentifrices, les bains de bouche, les crèmes hydratantes, les
produits capillaires et les savons.

L’huile d’Amandes douces

Dénomination INCI : prunus amygdalus dulcis oil

N° CAS : 8007-69-0
Description :
L’huile d’Amandes est obtenue par le pressage des graisses de l’arbre ≪PRUNUS
AMYGDALUS ≫.
Caractéristiques :
Densite relative a 20 °C :0.910 - 0.920

Indice d’acide (mg KOH/g) < 2

Indice de peroxyde (meq O2/kg) < 5
Indice de refraction a 20 °C 1.461 - 1.473
Indice de saponification (mg KOH/g) 185 – 200
Indice d’iode (gI2/100g) 92 – 109
Point de congelation (°C) < - 10
Composition en Acides Gras (%) :

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 C16 3.0 - 9.0 C18:3 ≤0.4
C16 1 ≤ 2 C20 ≤ 0.5
C18 2 20 - 30
C18 ≤ 3.0 C20:1 ≤ 0.5
C18 1 60 - 86 C22 ≤ 0.2
Applications :
L’huile d’amande douce, riche en acide oléique, est connue depuis longtemps pour ses
propriétés dermatologiques. Elle contient de la vitamine D et est très bénéfique pour les
cheveux, la peau sèche et les ongles cassants. On l’utilise L'huile d'amande douce est
utilisée en cosmétique pour adoucir et hydrater la peau en dermatologie, l'huile d'amande
douce permet de réduire les inflammati
ons cutanées.
Stabilité
L’huile d'amande douce est stable, se conserve au sec, à l'abri de la chaleur et de la lumière
Conditionnement :
Fut de 190 Kg. Tonnelet de 50 Kg.

Turbo-émulseur

Principe de fonctionnement :

Turbo-émulseur sous vide modèle DUMOTURBO 1000 ayant le mélangeur lent de type CO-
AXIAL (contre-rouant) ;

Page 8 sur 12
Soit équipé, en standard, des caractéristiques suivantes:

Bâti réalisé en acier inoxydable poli Scotch Brite. INCLUS

Cuve basculante. INCLUS
Vanne de vidange de la cuve. INCLUS
Système de chauffage par résistances électriques. INCLUS
Chemise de calorifugeage de la cuve. INCLUS
Variation électronique de la vitesse du mélangeur lent. INCLUS
Groupe d’homogénéisation en fond de cuve. INCLUS
Circuit du vide. INCLUS

Page 9 sur 12
Page 10 sur 12
1. [Link]

Sci., 1997, 7, 403–437.

3. M. Paulsson et K. Edsman, J. Pharm. Sci., 2001, 90, 1216-

1225.

1. [Link]

4. R. Barreiro-Iglesias, C. Alvarez Lorenzo et A. Concheiro,

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5. C. Alvarez-Lorenzo et A. Concheiro, Amer. J. Drug

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6. R. J. Majithiya, P. K. Ghosh, M. L. Umrethia et R.S.R.

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Page 12 sur 12
 Chapitre V : Résultats et discutions

V.1 Résultats de l’antibiogramme :

Le diamètre des zones d’inhibitions relevées, varie de 10 à 15 mm Observée pour la souche
Pseudomonas aeruginosa et Aspergillus Niger respectivement
La concentration 1g/l présente une activité bactéricide forte avec une zone d’inhibition de
plus de 14 mm La concentration 0,75 g/L moins actives. La concentration 0,5 g/L n’a révélé
aucune activité comme le montre le tableau suivant :
Tableau 9 : D i a m è t r e d’inhibition de quelques souches fongiques
Diametre
Diametre Diametre
D’Inhibition
Souches fongiques D’Inhibition D’Inhibition
à 1g/l à 0,75 g/l à 0.5 g/l
Pseudomonas 10 mm 2mm 0 mm
aeruginosa
S .aureus 14 mm 0 mm 0 mm
Aspergillus Niger 15 mm 3 mm 0 mm
Candidas albicans 12 mm 5 mm 0 mm

Photo1 :candidas photo2 :[Link]

Albiicans

photo3 :[Link] photo4 :[Link]

38
 Chapitre V : Résultats et discutions

V.2 Préparation de la crème :

Cette partie est indispensable pour maitriser l’influence de tous les constituants et de choisir
un intervalle convenable pour effectuer la formulation. Elle consiste à faire des formulations
primaires d’émulsion avec les produits proposés par le fournisseur.
Dans un premier temps nous avons essai de prépare une crème a même propriétés physico-
chimiques que la formule type des laboratoires VENUS mais à petit échelle, en utilisant la
verrerie et le matériels du département de chimie industriel de l’université Saâd DAHLAB
de Blida.
Par la suite, nous avons modifié la formule type classique de la crème en utilisant comme
principe actif le chitosane.
1ére Expérience :
1) L’objectif :
C’est la création d’une formule de base.
2) La Formule :
Tableau 10 : Le pourcentage et les ingrédients entrant dans l’expérience n°1

Produit Concentration (%) Quantité pour 100g

Composition de la phase n°1 :

Phase huileuse
Lanette O 0.1% 1g
Emulgine B1 0.4% 4g
Vaseline 1% 10g

5g
L’huile d’amande douce 0.5%

Composition de la phase n°2 :

Phase aqueuse :
Carbopol 00.8% 0.8g

E.D.T.A 0.1% 1g
GLycerine 0.6% 6g
Allantoine 0.05% 0.5g
Eau déminéralisé 7.02% 70.2g
la Phase n°3 :Additif +Regulateur
Vitamine E 0.05 % 0.5g
TEA 0.1 % 1g

39
 Chapitre V : Résultats et discutions

2.1) Préparation de la phase huileuse :

On a déposé dans un bécher la quantité appropriée de vaseline, huile
uile d’amande douce, lanette O
et l’Emulgine le tous a été chauffé jusqu'à T= 80 C° pendant 20 minutes.
2.2) Préparation de la phase aqueuse :
Onn a disposé dans un deuxième bécher l’eau, glycérine, carbopol, E.D.T.A et l’allantoïne. On a
chauffé Jusqu’à T=80 C° pendant 20 minutes.
Les deux phases sont soumises à une agitation rapide. Après fusion complète des différents
ingrédients, la phase huileuse sera versée dans la phase aqueuse laissé refroidir.
refroidir Quand le mélange
est tiède (35-40°C),
40°C), nous ajoutons TEA avec un compte goutte sous agitation continue.
continue
Le protocole de fabrication est celui d'une émulsion classique indiqué dans
dans la figure N°12

Phase huileuse

Emulsion

(Crème)

Phase aqueuse

Figure 12: Préparation de la crème

V.2 .1 Contrôles physico-chimiques

chimiques et organoleptique du produit
Les contrôles organoleptiques réalisés se résument à apprécier l’odeur, la couleur et l’aspect
de notre crème. Les contrôles physico-chimiques
physico chimiques sont basés sur la mesure du pH, de la

A. La viscosité (5500 ≤ viscosité ≤ 6500) centpoise)

La viscosité a été mesuré
esuré par le viscosimètre rotatif "mobile 7 réglé à une vitesse 20 (Fig.
13).

Figure 13:: Viscosimètre : Customer calibration record "mobile 7"

40
 Chapitre V : Résultats et discutions

B. Détermination du pH :

• Crème hydratant (5,5 ≤ pH ≤ 6,2)

Figure14:pH-mètre
3) Résultat:
Le tableau suivant Résume les différents résultats et observation obtenu pour l’expérience n°1.
Tableau 11: Résultats physico-chimiques et organoleptiques.

Paramètre de contrôle Méthodes Résultats

Couleur Contrôle visuel Blanc
Odeur Contrôle olfactif Odeur spécifique
Aspect Contrôle visuel Crème très visqueux
Ph PH mètre 5,8
(5,5 ≤ pH ≤ 6,2)
Viscosimètre
Viscosité 6900 cps
(5500 ≤ viscosité ≤ 6500) cps
Densimètre
Densité 0.99
0.90<densité>1.03

En utilisant la vaseline, la formule ne donne pas une crème mais une pate qui contient beaucoup de
suspension solide et se solidifie avec le temps. Pour remédier à cela, nous avons remplacé la vaseline
par l’huile de vaseline en diminuant la concentration de TEA.
2éme Expérience :
1) L’objectif :
Utilisation de l’huile de Vaseline pour éviter la formation de suspension solide et se solidifie avec le
temps.

2) La Formule :

41
 Chapitre V : Résultats et discutions

Tableau 12 : Le pourcentage et les ingrédients entrant dans l’expérience n°2

Produit Concentration (%) Quantité pour 100g

Composition de la phase n°1 :
Phase huileuse
Lanette O 0.1% 1g

Emulgine B1 0.4% 4g

L’huile de Vaseline 0.7% 7g

L’huile d’amande douce 0.6% 6g

Composition de la phase n°2 :
Phase aqueuse :
Carbopol 0.08% 0. 8g

E.D.T.A 0.1% 1g

Glycérine 0.6% 6g

Allantoine 0.06% 0.6g

Eau déminéralisé 7.12% 71.20g

la Phase n°3 :Additif +Regulateur
Vitamine E 0.1 % 1g
TEA 0.05 0.5g

2.1) Préparation de la phase huileuse :

On a déposé dans un bécher la quantité appropriée d'huile de vaseline, huile d’amande douce, lanette
O, et l’Emulgine B1 le tous a été chauffé jusqu'à T= 80 C° pendant 20 minutes.
2.2) Préparation de la phase aqueuse :
On a disposé dans un deuxième bécher les mêmes ingrédients que l’expérience n°1et a même
protocole.
3) Resultat :
Tableau 13 : les différents résultats et observation obtenu.

Paramètre de contrôle Méthodes Résultats

Couleur Contrôle visuel Blanc

Odeur Contrôle olfactif Odeur spécifique

Aspect Contrôle visuel Crème visqueux

PH mètre
Ph 5.9
(5.5 ≤ pH ≤ 6.2)

42
 Chapitre V : Résultats et discutions

Viscosimètre
Viscosité 6200 cps
(5500 ≤ viscosité ≤ 6500 ) cps

Densimètre
Densité 1.041
0.90<densité>1.02

Après refroidissement complet du mélange nous avons obtenus une crème hydratante brillante
très homogène
Le développement de la formulation de la crème au niveau des laboratoires universitaire, et de
constater sur terrain les difficultés pratiques pour réaliser cela.
3éme Expérience :
1) L’objectif :
Nous avons introduit le chitosane comme principe actif, au lieu de l’allantoïne, dans la
formulation de notre crème. Toutefois, cette étape à nécessité l’optimisation du processus.
2) La Formule :
Tableau 14 : Le pourcentage et les ingrédients entrant dans l’expérience n°3

Produit Concentration (%) Quantité pour 100g

Composition de la phase n°1 :

Phase huileuse
Lanette O 0.1% 1g

Emulgine B1 0.4% 4g

L’huile de Vaseline 0.7% 7g

L’huile d’amande douce 0.6% 6g

Composition de la phase n°2 :

Phase aqueuse :
Carbopol 0.08% 0. 8g

E.D.T.A 0.1% 1g
0.6% 6g
Glycérine
0.5%
Chitosane 0.1% 1g

Eau déminéralisé 7.00% 70.0g

la Phase n°3 :Additif +Regulateur
Parfum 0.1 % 1g

TEA 0.05 % 0.5g

43
 Chapitre V : Résultats et discutions

2.1) Préparation de la phase huileuse :

Une quantité appropriée de l’ml d’huile de vaseline, huile d’amande douce, lanette O, et l’Emulgine
B1 a été chauffé jusqu'à une température de 80 C° pendant 20 minutes.
2.2) Préparation de la phase aqueuse :
L’eau, glycérine, carbopol ,chitosane ,E.D.T.A et vitamine E ont été chauffé jusqu'à température de
80 C° pendant 20 minutes.
Les deux phases sont soumises à une agitation rapide. Apres fusion complète des différents
ingrédients, la phase huileuse sera versée dans la phase aqueuse par petites fractions en mélangeant
entre chaque deux adjonction, et cela jusqu'au refroidissement. Quand le mélange est tiède (35-40°C),
nous ajoutons TEA avec un compte goutte sous agitation continue.
3) Résultat :
• La température très élever elle influencer sur les propriétés de chitosane Par le changement
de la couleur blanc de chitosane vers la couleur jaune voire la figure n°1.

Figure 15: présentation de la crème

4éme Expérience :
1) L’objectif :
Garder les propriété physique chimique et microbiologique de chitosane par une petite modification
sur la formulation, On met touts les ingrédients de la phase aqueuse sauf le chitosane , après 20min
de l’agitation a température 80°c on met le chitosane.
2) La Formule :
Tableau 15 : Le pourcentage et les ingrédients entrant dans l’expérience n°4

Produit Concentration (%) Quantité pour 100g

Composition de la phase n°1 :
Phase huileuse
Lanette O 0.1% 1g
Emulgine B1 0.4% 4g
L’huile de Vaseline 0.7% 7g
L’huile d’amande douce 0.6% 6g

44
 Chapitre V : Résultats et discutions

Composition de la phase n°2 :

Phase aqueuse :
Carbopol 0.08% 0.8g
E.D.T.A 0.1% 1g
Glycerine 0.6% 6g
Eau déminéralisé 7.13% 71.3g

Composition de la phase n°3:

La partie active
Chitosane 0.1% 1g
la Phase n°4 :
TEA 0.05 0.5g

2.1) Préparation de la phase aqueuse :

Dans un deuxième bécher l’eau, glycérine, carbopol, et l’allantoïne. Comme précédemment on été
chauffé jusqu'à 80 C° pendant 20 minutes.
Les deux phases sont soumises à une agitation rapide. Après fusion complète des différents
ingrédients, la phase huileuse sera versée dans la phase aqueuse sous une agitation de 10 min. Après
l’ajout du chitosane, le tout a été refroidi (35-40°C), le TEA avec un compte goutte sous agitation
continue a été ajouté.
3) Résultat :
Du point de vu aspect, la crème obtenu est une réussite, sauf que l’agitation en utilisant un barreau
aimanté ne nous permet pas de bien mélanger et d’augmenter la quantité de la préparation. Pour cela
nous avons prépare la crème au niveau des laboratoires VENUS pour obtenir une quantité
suffisante, qui permit de faire l’étude de stabilités.
V.3 Préparation de la crème au niveau du laboratoire VENUS :
La préparation de 1000g de la crème s’est faite dans un turbo émulsionner type COMER, pour
lequel le chitosane représente le principe actif.
1) La Formule :
Tableau 16 : Le pourcentage et les ingrédients entrant dans la crème

Produit Concentration (%) Quantité pour 1000g

Composition de la phase n°1 :
Phase huileuse
Lanette O 1% 10g
Emulgine B1 4% 40g
L’huile de Vaseline 7% 70g

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 Chapitre V : Résultats et discutions

L’huile d’amande douce 5% 50g

Composition de la phase n°2 :
Phase aqueuse :
Carbopol 8% 80g
E.D.T.A 1% 10g
Glycérine 5% 50g
Eau déminéralisé 68.00% 680g
Composition de la phase n°3:
La partie active
Chitosane 1% 10g
la Phase n°4 :
Parfum 0.1 % 1g
TEA 0.3 3g

Suivant la figure N° 16 les étapes de fabrication de la crème sont comme suit :

Figure16: turbo émulsionner type COMER

• Dans la cuve nº 1 on dépose les ingrédients de la phase aqueuse : l’eau, glycérine,
l’allantoïne et Carbopol on ferme la cuve et on la chauffe jusqu’à 80° C pendant 20 minutes
sous forte agitation,
• Dans la cuve nº 2 on dépose les ingrédients de la phase huileuse : huile de vaseline, huile
d’amande douce, lanette O, émulgine B1 ,EDTA et de même, on la chauffe jusqu’à 80°C
pendant 20 minutes sous forte agitation,
• Apres 20 minute on ouvre le robinet afin de permettre au deux phases de ce mélanger (phase
huileuse dans la phase aqueuse) pour obtenir une émulsion H/E sous une agitation lente de 10
minutes, par la suite, on stoppe le chauffage ajouter le chitosane et on laisse refroidir le
mélange jusqu'à 40° - 35°C, enfin, on ajoute le TEA (triéthanolamine) pour neutraliser le pH
et gonfler le carbopol (stabilisant).

46
 Chapitre V : Résultats et discutions

Figure 17 : L’obtention d’une crème hydratante brillante

2) Résultat de produit fini :
Le produit est devenu efficace tout en restant dans les normes.
2.a) les paramètres organoleptiques : l’aspect, l’odeur, couleur …
2. b) les paramètres physico-chimiques : notamment pH et viscosité, et la densité, teneur en
matière active.
2. c) les paramètres microbiologiques.
Tableau 17: Les caractéristiques organoleptique de produit fini
Spécifications Résultats Méthodes
Aspect Crème Visqueux Visuelle
Couleur Opaque Visuelle
Odeur Agréable Olfactif

V.3.1 Résultat de la qualité microbienne de la crème :

Les résultats d’analyses microbiologiques exprimées dans le tableau suivant révèlent une absence de
toute contamination bactérienne et fongique permettant de dire que notre produit final (crème) est de
bonne qualité microbiologique (tableau n°13).

Tableau 18: les résultats de contrôle microbiologique.

Germes recherchés Température (C) Duré (h) Résultat Normes

Germes Aérobies 32±2 °C 72 h Absence < 103 g/ml

Levures , moisissures 22-25 °C 120 h Absence < 102 g/ml

47
 Chapitre V : Résultats et discutions

Figure 18:l’échantillon de teste microbiologique.

V.4 L’étude de Stabilité au cours du temps :

V.4.1 Objectif :
Les études de stabilité ou de durée de conservation permettent de suivre et d’observer la
façon dont différentes conditions d’environnement (telles que la température, la lumière ou
l'humidité) peuvent affecter un composé chimique, un article ou un lot sur une certaine
période. Pour cela, vous créez des échantillons physiques de l'article ou des lots et vous les
placez dans des conditions contrôlées pour la durée de l'étude. Pendant l’étude, et à des
intervalles précis, vous retirez ces échantillons physiques ou une partie d’entre eux des
diverses conditions auxquelles ils sont soumis et vous les testez selon des gammes de contrôle
prédéfinies. Vous pouvez ensuite utiliser les résultats de ces tests, qui se sont accumulés au
cours de l'étude, notamment pour vérifier et confirmer que la durée de vie souhaitée ou
garantie du produit est conforme aux recommandations prédéfinies pour le stockage.
La stabilité des produits cosmétiques est un des paramètres clé pour une garantie de qualité
du produit et la satisfaction du consommateur. De plus, la grande variété de formes des
produits dans ce domaine (lait, crème, mousse, etc.), la diversité des propriétés d’usage ainsi
que les conditions de stockage rendent les tests de stabilité longue et fastidieuse. Pour finir, le
nombre important de composants dans ces produits conduits à une interprétation complexe
des données obtenues par les techniques analytiques classiques.
La mise à l’échelle d’une nouvelle formulation depuis le laboratoire jusqu’à la production
est une étape clé du développement d’un produit. Cette étape est coûteuse et sensible à de
nombreux paramètres qui la rendent particulièrement délicate. Son succès est souvent

48
 Chapitre V : Résultats et discutions

fortement dépendant de l’expertise des personnes en fonction et il peut être difficile d’obtenir
des résultats répétables.
Le processus de mise à l’échelle est une étape difficile du développement d’un produit qui est
rarement optimisé par une approche scientifique [44].
IV.4.2 Les contrôles réalisés :
Les analyses de stabilité des produits cosmétiques sont réalisées par observation visuelle
des échantillons stockés à basse température (+4°C), ambiante et haute température (+35 à
+50°C) pendant des périodes allant jusqu’à six mois.

A) La centrifugation :
Est une technique utilisant la force centrifuge pour sépares des fluides de densités
différents ou pour isoles des éléments solides en suspension dans un fluide permet de séparer
les éléments d’un mélange en le faisant tourner à grande vitesse 40000 tour/min.

La stabilité de notre formulation au cour du temps et sous des conditions physique

rigoureuse a été déterminée en utilisant une centrifugeuse régler à une vitesse de 40000 tours
par minute pendant 20 minutes,ceci est réalisé en employant deux flacons remplie à la même
hauteur avec notre crème (50 g), qu’on met dans deux godets en face à face dans l’appareille [44]

Après les 20 minute de rotation notre crème présente toujours une parfaite stabilité.

Figure 19 : photo de centrifugeuse

Figure 20 : les flacons des échantillons de crème hydratant

49
 Chapitre V : Résultats et discutions

Apres 20 min ; retirer les deux flacons et enregistre les remarques.

Résultats:
Les résultats de la centrifugation se sont montres aucun déphasage
N’a été signalé pour la crème hydratant concernée durant les 90 jours de Stabilité permettent
de dire qu’il s’agit une stabilité de mélange.
B) Le choc thermique :
Il est recommandé de vérifier la stabilité du produit cosmétique en conditions extrêmes à
des températures, par exemple : à titre indicatif entre-10ċ et +50ċ en fonction de l’utilisation
prévisible du produit sous forme de cycle alternatif, définis en fonction des températures
retenues.
C) L’étuve :
Les analyses de stabilité des produits cosmétiques à la chaleur sont réalisées par
observation visuelle des échantillons stockés dans l’étuve à haute température (+35 à +50°C)
pendant des périodes allant jusqu’à trois mois selon la température. Remarque : l’instabilité de
produit ; déphasage pour les crèmes

Figure21:photo de l’étuve.
D) La respectabilité:
Il consiste à effectuer plusieurs fois la même analyse dans un court intervalle de temps, par
le même manipulateur, dans le même laboratoire à l’aide du même appareillage et avec les
mêmes réactifs.
• Les mêmes mesures organoleptiques et physico-chimiques.

E) La reproductibilité :

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 Chapitre V : Résultats et discutions

Conditions où les résultats d'essai sont obtenus par la même méthode sur des individus
d'essais identiques dans différents laboratoires, avec différents opérateurs et utilisant des
équipements différents. [44]

Ces résultats d’analyse organoleptique sont comparés aux normes internes de venus, ce qui
nous permet de déduire sa bonne qualité sensorielle et sa bonne stabilité

F) Respectabilité:
Elle consiste à effectuer plusieurs fois la même analyse dans un court intervalle de temps
par la même méthode sur la crème, par le même manipulateur, dans le même laboratoire à
l’aide du même appareillage et avec les mêmes réactifs. Les mêmes mesures organoleptiques
et physico-chimiques.
V.4.3 Les paramètres physico-chimiques :
Tableau 19: Les résultats de contrôle physico-chimique pendant 90 jours

Jours Température PH Viscosité Densité

0°C 6.1 6000 cps 1.01

15 Jours 25°C 6.0 5600 cps 0.90

45°C 5.8 4400 cps 0.86
0°C 6.2 5900 cps 1.02

30 Jours 25°C 5.9 5700 cps 1.00

45°C 5.6 4100 cps 0.88
0°C 6.4 6000 cps 1.02
45 Jours 25°C 6.1 5600 cps 0.90
45°C 5.4 4600 cps 1.01

0°C 6.1 5700 cps 1.03

70 Jours 25°C 6.0 5500 cps 1.02
45°C 5.7 4300 cps 0.89

0°C 6.2 5900 cps 1.02

90 Jours 25°C 6.00 5900 cps 1.03
45°C 5.9 4100 cps 0.99

Les résultats de la mesure du pH aux températures 0°, 25°et 45° sont conformes comparés aux normes
internes de venus.

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