APPORT DU TEST DE KLEIHAUER DANS

LE DIAGNOSTIC DES ANOMALIES QUANTITATIVES

DE L’HÉMOGLOBINE
A.Y. SEGBENA*, I. KUEVIAKOE* , S. MOSSIYAMBA*, A.K. MESSIE**, A. VOVOR**

RÉSUME fœtal hemoglobin, 6 cases of intermediate beta-thalas-

semia, 1 case of minor beta-thalassemia and 5 cases of
Il s’agit d’une étude réalisée de Septembre 1994 à Mai delta-beta-thalassemia.
1995 au laboratoire des hémoglobines du C.H.U.
Key-words : Kleihauer test, Beta-thalassemia, heriditary
Campus de Lomé ayant pour objectif d’apprécier l’ap-
persistance of fœtal hemoglobin.
port du test de Kleihauer dans le diagnostic des thalas-
sémies et autres hémoglobines apparentées. 10 patients
INTRODUCTION
de sexe féminin et 5 de sexe masculin ont été inclus dans
cette étude, ils avaient entre 4 et 42 ans avec une moyen-
L’hémoglobine constitue 33% du poids de l’hématie. Sa
ne d’âge à 23 ans. L’électrophorèse de l’hémoglobine à
fonction essentielle est le transport des gaz du sang. La
pH alcalin, l’hémogramme et le test de Kleihauer ont
baisse du taux d’hémoglobine détermine un syndrome
été réalisés chez chaque patient. Nos résultats montrent
anémique. Les anémies hémolytiques congénitales posent
que la fraction A de l’hémoglobine est dans tous les cas
un important problème de santé publique dans les pays en
supérieure à la fraction F confirmant ainsi la rareté des
voie de développement où elles contribuent à la mortalité
formes majeures de thalassémie en Afrique noire. La
et à la morbidité (1). L’une des causes de ces anémies est la
classification tenant compte des 3 paramètres étudiés a
bêta-thalassémie qui existe en Afrique tropicale, sa fré-
noté 3 cas de PHHF, 6 cas de bêta-thalassémie intermé-
quence varie de 0,3 à 2% selon CABANNES (2). Le test de
diaire, 1 cas de bêta-thalassémie mineure et 5 cas de
Kleihauer, dont le principe est la résistance de l’hémo-
delta-bêta-thalassémie.
globine fœtale aux solutions acide, est utilisé pour détecter
Mots clés : test de kleihauer, bêta-thalassémie, la présence d’hémoglobine F dans les hématies. Cette étude
persistance héréditaire de l’hémoglobine F (PHHF). a permis de préciser l’apport du test de Kleihauer dans le
diagnostic des anomalies quantitatives de l’hémoglobine au
ABSTRACT C.H.U. de Lomé.
Kleihauer test in the diagnosis of hemoglobin
MATÉRIEL ET MÉTHODES
quantitative anomaly
It’s a study realised from September 1994 to May 1995 Ce travail a été réalisé dans l’unité d’électrophorèse et
in the hemoglobin laboratory of Lome Campus teaching étude de l’hémoglobine du laboratoire du C.H.U. Campus.
hospital in order to determine the contribution of Il s’agit d’une étude prospective réalisée de Septembre
Kleihauer test in the diagnosis of thalassemia and 1994 à Mai 1995 portant sur 15 cas de thalassémie/PHHF
related abnormal hemoglobin. 10 femals and 5 males diagnostiqués au C.H.U. Campus sur un total de 2734
were included in this study, they have beetween 4 and 42 électrophorèses de l’hémoglobine réalisées durant cette
years old with an average at 23. Hemoglobin alkaline période.
electrophoresis, blood cells count and Kleihauer test
were performed in each patient. Our results showed Les patients sélectionnés sont ceux qui sont venus au labo-
that A fraction is superior to F fraction confirming the ratoire pour faire à la demande d’un médecin une électro-
rarity of major thalassemia form in black Africa. The phorèse de l’hémoglobine. Lorsqu’une augmentation de
classification showed 3 cases of heriditary persistance of l’hémoglobine F et/ou A2 est constatée à l’électrophorèse,

* Laboratoire d’Hématologie du C.H.U. CAMPUS

** Laboratoire d’Hématologie du Service de Microbiologie du C.H.U.
TOKOIN

Médecine d'Afrique Noire : 1997, 44 (10)

APPORT DU TEST… 502

le patient est convoqué pour un prélèvement de sang RÉSULTATS

veineux sur tube contenant de l’EDTA pour des tests
complémentaires à savoir hémogramme et test de Kleihauer. L’âge des patients a varié de 4 à 42 ans avec une moyenne
de 23 ans et un écart type de 10,48. 73,33 % des patients
E l e c t rophorèse de l’hémoglobine à pH alcalin : l a étaient des adultes. 10 patients étaient de sexe féminin et
technique utilisée est celle des laboratoires HELENA dont 5 de sexe masculin.
le principe est fondé sur le déplacement d’ions ou de parti-
cules chargés en solution ou en suspension sous l’influence L’électrophorèse de l’hémoglobine a noté la présence de la
d’un champ électrique. Les protéines étant des corps fraction A (taux variant entre 69,6 et 90%) chez tous les
amphotères, leur mobilité dépend du pH de la solution. patients avec un pourcentage toujours supérieur à celui de
Ainsi à pH alcalin, la protéine se comporte comme un la fraction F (taux variant entre 9,1 et 28,7%).
acide et devient un donneur de proton; la protéine migre
alors de la cathode vers l’anode et sa mobilité est dite L’étude de l’hémogramme a concerné la lignée érythrocy-
négative. taire et a noté : taux d’hémoglobine moyen de 11,7g/dl (8,7
- 15,1 g/dl, SD : 2,41), VGM moyen de 84,32 fl (59,2 -
Hémogramme : c’est l’étude quantitative et qualitative 90,7 fl, SD : 7,96), TCMH moyenne de 26,1 pg (17,1 -
des éléments figurés du sang. L’étude quantitative est faite 29,3 pg, SD : 3,09), CCMH moyenne de 31,57 g/dl ( 28,9 -
à l’aide d’un automate d’hémoglobine : appareil 33 g/dl, SD : 0,94). L’étude du frottis sanguin a noté une
COULTER T 540. Le taux d’hémoglobine (Hb), le volume poïkilocytose,la présence de cellules cibles et d’annulocy-
globulaire moyen (VGM), la teneur corpusculaire moyenne tes sur certains frottis. Le désordre hématologique absurde
en hémoglobine (TCMH) et la concentration corpusculaire n’a pas été retrouvé.
moyenne en hémoglobine (CCMH) ont été utilisés pour
classer les bêta-thalassémies. Le test de KLEIHAUER a noté une répartition homogène
dans 3 cas (20%) et une répartition hétérogène dans 12 cas
Test de KLEIHAUER : le principe est basé sur la non (80%). L’analyse des différents résultats fournis par l’élec-
élution de l’hémoglobine F contenue dans les hématies en trophorèse de l’hémoglobine, l’hémogramme et le test de
milieu acide (3). Le test utilise l’éthanol à 80% pour la KLEIHAUER a permis de réaliser une classification
fixation, une solution acide d’hématoxyline pour l’élution (tableau 1). Nous notons 3 cas de PHHF (20%), 6 cas de
de l’hémoglobine A et de l’éosine à 0,5% pour la contre bêta-thalassémie intermédiaire (40%), 5 cas de delta-bêta
coloration. La lecture se fait à l’objectif 10 et 40 pour l’étu- thalassémie hétérozygote (33,33%) et un cas de bêta-tha-
de de la répartition des cellules contenant de l’hémoglobine lassémie mineure (6,67%).
F ( cellules F) sur le frottis et à l’objectif 100 pour la
numération des cellules F. Les globules rouges ne conten-
ant pas l’hémoglobine F sont incolores, seul leur contour DISCUSSION
est visible. Ceux qui contiennent l’hémoglobine F sont
nettement colorés en rouge ou rose. On parle de répartition Sur la période d’étude 2734 électrophorèses de l’hémoglo-
hétèrogène de l’hémoglobine F quand l’Hb F est présente bine ont été réalisées et il a été relevé 15 cas de ß-thal /
dans certaines hématies seulement et de répartition homo- P H H F, soit 2,56% de l’ensemble dont 3 cas de PHHF
gène quand l’Hb est présente dans toutes les hématies. Le (20%) et 12 cas de ß+ thalassémie (80%).
sang doit dater de 24 heures au plus. L’étalement fixé peut
être conservé 8 jours à 4° C avant d’être coloré. Les 12 cas de ß+ thalassémie se répartissent en 6 cas de ß
thal intermédiaire, 5 cas de dßthal hétérozygote et 1 cas de
Les données recueillies ont été regroupées dans un dossier ß thal mineure.
individuel comportant les données épidémiologiques
(identité, sexe, âge) et les examens du diagnostic. L’analy- L’étude de l’hémoglobine a montré que chez tous les patients
se statistique a comporté le calcul de la moyenne et de étudiés, la synthèse de la chaîne ß n’est pas annulée ; par
l’écart type. ailleurs on ne note aucun cas où la fraction F est plus élevée

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en pourcentage que la fraction A. On a donc une électro- Le gène ß-thalassémique est présent au Togo et dans cette
phorèse de type AFA2, ceci confirme la rareté de la ß-tha- étude sa fréquence est de 2,45 %, ce pourcentage concorde
lassémie majeure en Afrique noire (2). Cependant, avec celui de CABANNES qui trouve qu’au Togo, la
CONDAT J.M. (4) trouve en Côte d’Ivoire à propos d’une fréquence de ce gène est de 2,4 à 9%. AMEGNIZIN (6)
étude de 11 cas de ß thalassémie une électrophorèse de type trouve sur une étude de 2684 sujets au Togo une fréquence
FAA2. Que ce soit une électrophorèse de type AFA2 ou de 3,4%.
FAA2, la synthèse de la chaîne ß n’est pas totalement
annulée, confirmant ainsi les travaux de CABANNES (2) L’incidence de ce gène en Afrique Noire se situe à peu près
qui remarquent que chez le noir thalassemique la synthèse dans la même marge, ainsi on trouve 5 à 10 % au Bénin
des chaînes ßA n’est jamais totalement déprimée sauf dans
(2), 5% à Khartoum (2), 4 à 6 % au Libéria (7), 1,7 à 11 %
certains cas de thalasso-drépanocytose.
au Ghana (8), 14% au Cameroun (2), 1 à 4 % au Tchad (2),
1% en Ouganda (2) et 2,3 à 11 % en Côte d’Ivoire (2).
L’étude de l’hémogramme a montré en cas d’anomalie une
anémie microcytaire ou normocytaire normochrome ou
Cette étude a montré aussi l’existence de la PHHF au Togo
hypochrome. Cette constatation est en concordance avec
celle de CONDAT qui trouve une anémie hémolytique avec une fréquence de 0,1% soit 3 cas sur 2734 électro-
microcytaire ou normocytaire normochrome ou hypo- phorèses de l’hémoglobine ; cette PHHF apparaît dans sa
chrome, tandis que les données de l’O.M.S. (1) rapportent forme hétérozygote, on note l’absence de forme homozy-
que dans la majorité des cas de ß-thalassémie, il y a une gote. AMEGNIZIN (6) trouvait une fréquence de 3,3% de
anémie microcytaire hypochrome, ce qui est plus confor- PHHF dans son étude. ORSINI (9) remarquait déjà que les
me aux données de la littérature. Cette discordance pourrait noirs constituent la principale ethnie affectée par cette
être expliquée par le faible nombre de cas de notre série, anomalie. La fréquence de 0,1% permet d’affirmer avec
ceci ne permettant qu’une comparaison limitée. ORSINI qu’elle est nettement inférieure à la fréquence de
la drépanocytose et de l’hémoglobinose C.
La classification de ß thalassémies est basée sur les résul-
tats de l’électrophorèse de l’hémoglobine notamment le
pourcentage des différentes fractions, l’hémogramme CONCLUSION
(VGM, TCMH, CCMH) et le test de KLEIHAUER(1,2,5).
En cas de PHHF, la répartition de l’Hb F dans les hématies Ce travail a permis d’apprécier l’apport diagnostique du
est homogène, tandis qu’en cas de ß thalassémie, on note test de KLEIHAUER en hématologie, test utile dans le
une répartition hétérogène. diagnostic des ß-thal/PHHF.
Il a contribué à une meilleure connaissance de l’aspect
Cette classification a montré : biologique de ß-thal/PHHF.
- 3 cas de PHHF (20%)
La prévalence du gène ß-thalassémique est de 2,45%
- 12 cas de ß- thalassémie (80%) avec :
* 6 cas de ß thalassémie intermédiaire (50%) contre 0,1% de PHHF, l’électrophorèse de l’hémoglobine
* 5 cas de dß thalassémie hétérozygote (41,67%) est de type AFA2 dans l’ensemble, confirmant l’absence de
* 1 cas de ß thalassémie mineure (8,33%). formes majeures de ß-thalassémie au Togo.

On note ainsi l’absence de forme homozygote de ß thalas- L’hémogramme a montré une anémie microcytaire ou
sémie, ce hiatus avait déjà été remarqué par CABANNES normocytaire normochrome ou hypochrome. Dans les 15
et coll. (2) qui constataient que la thalassémie dans sa for- cas étudiés, on a noté des cas de PHHF; de ß-thalassémie
me majeure reste très modeste parmi les africains de race notamment de ß-thalassémie intermédiaire, de dß thalassé-
noire. mie et de ß- thalassémie mineure ou trait thalassémique.

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APPORT DU TEST… 504

Tableau I : Tableau récapitulatif et classification des ß-thal/PHHF

N° Hb g/dl VGM - fl TCMH- pg CCMH - % Electrophorèse de l’Hb Kleihauer Classification
% des fractions
1 10,7 83,6 26 31,2 A 76,9 RHE ß-thal
F 21,5 intermédiaire
A2 1,6
2 8,7 89,5 28,6 31,9 A 84,7 RHE d-ß-thal
F 13,4 hétérozygote
A2 1,9
3 12,4 90,7 29,3 32,3 A 77 RHE ß-thal
F 21,2 intermédiaire
A2 1,8
4 11,9 85,3 27,7 32,5 A 90 RHE trait ß-thal (ß-thal
F 9,1 mineure)
A2 8,9
5 10,1 88,2 28,3 32,1 A 85,5 RHO PHHF
F 13,3 hétérozygote
A2 1,2
6 12,7 84,2 26,2 31,2 A 86,1 RHE d-ß-thal
F 11,8 hétérozygote
A2 2,1
7 15,1 81 27 33 A 72,8 RHE ß-thal
F 21,3 intermédiaire
A2 5,2
8 10 86,3 26,5 30,7 A 69,6 RHE ß-thal
F 28,7 intermédiaire
A2 1,7
9 10,3 86,3 26,8 31 A 82,3 RHE d-ß-thal
F 15,2 hétérozygote
A2 5,1
10 10,9 90 28 31,1 A 70,4 RHE ß-thal
F 24,5 intermédiaire
A2 5,1
11 13,9 87,4 28,3 32,3 A 81,7 RHE d-ß-thal
F 16,4 hétérozygote
A2 1,9
12 9,9 59,2 17,1 28,9 A 84,2 RHO PHHF
F 14,3 hétérozygote
A2 1,5
13 12,8 88,4 28 31,7 A 79,4 RHE d-ß-thal
F 17,6 hétérozygote
A2 3
14 11 91 22 32 A 83,6 RHO PHHF
F 14,2 hétérozygote
A2 2,2
15 12,2 73,7 23,3 31,6 A 74,5 RHE ß-thal
F 24,2 intermédiaire
A2 1,3

RHO = Répartition Homogène; RHE = Répartition Hétérogène

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505 A.Y. SEGBENA, I. KUEVIAKOE , S. MOSSIYAMBA, A.K. MESSIE, A. VOVOR

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