UriSelect™4

20 63726
100 63727
500g 64694
Milieu chromogène non sélectif pour l'isolement, la différenciation et la numération directe
des germes urinaires

882044 – 2013/11

Sommaire

1. INTÉRET CLINIQUE

2. RÉSUMÉ ET EXPLICATION DU TEST

3. PRINCIPE DU TEST

4. RÉACTIFS

5. PRÉCAUTIONS D'UTILISATION

6. ÉCHANTILLONS

7. PROCÉDURE

8. LIMITES DU TEST

9. VALEURS ATTENDUES

10. PERFORMANCES

11. BIBLIOGRAPHIES

1 [FR]
1. INTÉRET CLINIQUE
UriSelect™4 est un milieu chromogène non sélectif, pour l'isolement, la différenciation et la numération des germes pathogènes
urinaires. UriSelect™4 permet la différenciation et l'identification directe des Escherichia coli, Enterococcus spp. et Proteus
mirabilis ainsi que l'identification présomptive d’autres agents pathogènes, en particulier les entérobactéries du groupe KESC
(Klebsiella, Enterobacter, Serratia et Citrobacter) et du groupe PMP (Proteus-Morganella-Providencia).

2. RÉSUMÉ ET EXPLICATION DU TEST

Les infections urinaires (IU) figurent parmi les infections bactériennes les plus courantes et constituent une partie importante de
la charge de travail en laboratoires d'analyses de microbiologie clinique. Les organismes fréquemment rencontrés dans les cas
d'infections urinaires sont les Escherichia coli, les entérocoques, le groupe KES (Klebsiella-Enterobacter-Serratia) et le groupe
Proteus-Morganella-Providencia. Staphylococcus saprophyticus et Streptococcus agalactiae peuvent également être isolés
chez la femme, bien que moins fréquemment.
Du fait des différents profils de susceptibilité aux antibiotiques des micro-organismes, une identification de l'espèce s’avère être
nécessaire pour assurer l'efficacité du traitement antimicrobien(1). Le laboratoire doit dénombrer les cultures microbiennes afin
de déterminer la pertinence clinique de la souche isolée.
UriSelect™4 est un milieu chromogène non sélectif pour la différenciation et le dénombrement de tous les micro-organismes
urinaires :
 L’identification directe par la mise en évidence d'activités enzymatiques des bactéries les plus souvent isolées dans
les infections urinaires (Escherichia coli, Proteus mirabilis et les entérocoques);
 L’identification présomptive de quelques autres agents pathogènes urinaires, notamment les entérobactéries du
groupe KESC (Klebsiella, Enterobacter, Serratia and Citrobacter) et du groupe PMP (Proteus-Morganella-Providencia).

3. PRINCIPE DU TEST
UriSelect™4 est constitué d’une base nutritive riche associant différentes peptones, du tryptophane et un mélange de substrats
chromogènes pour la détection des activités enzymatiques spécifiques permettant la différenciation de certaines espèces ou de
certains groupes d'organismes, tout en limitant le nombre de tests de confirmation.
La concentration élevée en agar évite l’envahissement de la gélose par les Proteus.

Détection de diverses activités enzymatiques :

 Examen direct
Après 18 à 24 heures d’incubation à 35-37°C, observer la couleur des colonies :
o ß-galactosidase : Colonies roses,
o ß-glucosidase : Colonies bleu-turquoise,
o ß-galactosidase et ß-glucosidase : Colonies bleu-violet,
o Tryptophane désaminase (TDA) : Colonies brun-orangé avec un halo brunâtre.

 Après ajout de réactif

Pour détecter l'activité tryptophanase (production d'indole), déposer une goutte de réactif de Kovac’s (ou de James ou DMACA)
directement sur une colonie bien isolée (voir section 7. Procédure) :

Test Indole Réaction positive Réaction négative

Le réactif devient rose
Réactif de Kovac’s
en moins de 15 secondes
La colonie devient rouge Pas de changement de coloration
Réactif de James
en moins de 15 secondes
La colonie devient bleu-violet
Réactif DMACA
en moins de 2 minutes

4. RÉACTIFS

4.1. DESCRIPTION
UriSelect™4 (URI4) est disponible en trois conditionnements :

Identification sur l'étiquette Description Présentation / Préparation

63726 Boîtes de Petri 20 x 90 mm / Prêt à l'emploi

UriSelect™4 63727 Boîtes de Petri 100 x 90 mm / Prêt à l'emploi

64694 Flacon de 500 g 500 g / Déshydraté

2 [FR]
Formulation approximative du milieu (g/L)
Mélange de peptones 21
Silice 20
Mélange de substrats chromogènes <1
Tryptophane 1
Agar 16

4.2. STOCKAGE ET CONDITIONS DE MANIPULATIONS

Les réactifs peuvent être utilisés jusqu'à la date de péremption indiquée sur l'emballage.

Présentation Conservation
Petri +2-8°C, à l'abri de la lumière
Déshydraté +15-25°C, flacon soigneusement fermé dans un endroit sec

La date de péremption et le numéro de lot sont indiqués sur l'emballage.

Éviter l'exposition à la lumière avant et pendant l'incubation car la lumière peut diminuer les performances du milieu.

5. PRÉCAUTIONS D'UTILISATION
Pour le diagnostic in vitro uniquement.
À usage professionnel uniquement.

5.1. CONSIGNES D’HYGIENE ET DE SÉCURITÉ

 La manipulation de ce milieu est strictement réservée à un personnel qualifié, formé aux procédures de laboratoire et
connaissant les risques potentiels. Porter des vêtements de protection adaptés, des gants et des lunettes/un masque
une protection oculaire/faciale et procéder de manière appropriée en appliquant les bonnes pratiques de laboratoire.
 Respecter la technique d'aseptisation et les précautions d'usage contre les risques microbiologiques durant toutes les
procédures.
 Éliminer tous les échantillons et le matériel utilisé pour réaliser le test comme des déchets infectieux. Les déchets de
laboratoire, chimiques ou biologiques dangereux doivent être manipulés et éliminés conformément à toutes les
réglementations locales, régionales et nationales applicables.
 Pour connaître les recommandations liées aux risques et les précautions relatives à certains produits chimiques
contenus dans ce milieu, consulter le(s) pictogramme(s) figurant sur les étiquettes et les informations fournies à
la fin des instructions d'utilisation. La fiche de données de sécurité (FDS) est disponible sur [Link].

Contient <0,25 % de N,N-Diméthylformamide (DMF) :

Toxique pour la reproduction 1B
DANGER

5.2. PRÉCAUTIONS RELATIVES À LA PROCÉDURE

5.2.1. PRÉPARATION
 Avant l'utilisation, laisser les boîtes de Petri se stabiliser à température ambiante (18-30°C).
 Ne pas utiliser de réactifs périmés.
 Ne pas utiliser les boîtes de Petri qui présenteraient des signes de contamination, dessèchement, fissures ou tout autre
signe de détérioration.
 L'exposition prolongée de l’UriSelect™4 à la lumière peut retarder et/ou réduire la coloration des souches de contrôle
qualité ou des souches isolées d’échantillons de patients.

5.2.2. EXECUTION
 Effectuer le test à température ambiante (entre 18 et 30°C).
 Ne pas modifier la procédure d'analyse.

6. ÉCHANTILLONS
Le recueil approprié des échantillons d’urine a une influence importante sur la pertinence des résultats de culture. Se reporter
aux directives ou normes correspondantes pour de plus amples informations sur les procédures de prélèvement et de
manipulation des échantillons(2).

3 [FR]
7. PROCÉDURE

7.1. EQUIPEMENT FOURNI

 UriSelect™4

7.2. EQUIPEMENT REQUIS NON FOURNI

 Oses calibrées de 10 μL
 Réactif de test Indole : Réactif de Kovac’s, James ou DMACA
 Etuve à 35-37°C
 Récipients pour élimination des déchets (contaminés)
 Disques de papier
 Équipement optionnel non fourni : souches bactériennes de contrôle qualité

7.3. PRÉPARATION DES RÉACTIFS (SI APPLICABLE)

Préparation à partir du milieu déshydraté (64694) : Bien homogénéiser la poudre avant utilisation. Mettre en suspension
56,8 g dans un litre d'eau distillée en mélangeant continuellement jusqu'à l'obtention d'une suspension homogène
(environ 10 min.). Porter à ébullition en remuant fréquemment jusqu'à dissolution complète. Si nécessaire, ajuster le pH
à 7,3. Stériliser à l’autoclave à 120°C pendant 15 min. Répartir en boîtes de Petri 90 mm (environ 18-22 mL/boîte).

7.4. PROCÉDURE DE TEST

1) Utiliser une öse bactériologique calibrées de 10 µL.
2) Tenir l'öse verticalement et l’immerger dans l'urine.
3) Décharger l'öse sur la gélose en réalisant une strie sur un rayon de la boîte (a).
4) A partir du haut du dépôt, sans recharger l'öse, effectuer un étalement en stries serrées sur toute la surface de la
gélose, perpendiculairement au tracé de la strie initiale (b).
5) Incuber la boîte dans une étuve à 35-37°C pendant 18 à 24 heures.

(a) Dépôt de l'öse (b) Ensemencement de l’urine

et strie initiale par stries serrées sur la gélose

7.5. CONTRÔLE DE QUALITÉ

Un contrôle de qualité doit être réalisé selon les recommandations locales, nationales ou législatives en vigueur, les exigences
de certification et les procédures standardisées de contrôle qualité de votre laboratoire.
Les performances culturales du milieu UriSelect™4 peuvent être contrôlées à l'aide des souches suivantes (résultats obtenus
après 18 à 24 heures d'incubation à 35-37°C) :

COULEUR DES COLONIES CARACTÉRISTIQUES

SOUCHES
sur UriSelect™4 ß-GALACTOSIDASE ß-GLUCOSIDASE INDOLE TDA
Escherichia coli
ROSE + - + -
ATCC 25922
Enterococcus faecalis
BLEU TURQUOISE - + - -
ATCC 29212
Klebsiella pneumoniae
BLEU-VIOLET + + - -
ATCC 13883
Proteus mirabilis BRUN-ORANGÉ avec un
- - - +
ATCC 25933 halo brunâtre
Providencia stuartii BRUN-ORANGÉ avec un
- - + +
ATCC 33672 halo brunâtre
Staphylococcus aureus
BLANC - - - -
ATCC 25923

7.6. INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS

7.6.1. NUMÉRATION
Après 18 à 24 heures d’incubation à 35-37°C, l'interprétation des résultats doit être réalisée en tenant compte du contexte
clinique du patient, du mode de prélèvement de l’échantillon, des symptômes cliniques, du taux de leucocytes dans l'urine, de
l'identification des micro-organismes et de leur concentration.
Le dénombrement des colonies bien isolées sur UriSelect™4 devrait être possible jusqu'à 104 UFC/mL d'urine. Au-delà, la
présence de colonies confluentes ne permet plus de dénombrer.

4 [FR]
7.6.2. IDENTIFICATION
Identifier le(s) micro-organisme(s) en fonction de la couleur des colonies, comme décrit dans le diagramme suivant :

 COLONIES ROSES
Activité ß-galactosidase : il y a présomption d’un [Link], qui doit être confirmée par recherche de la production d’indole.
Déposer une goutte de réactif de test indole sur 1 colonie rose bien isolée et interpréter comme détaillé au paragraphe 3.
Pour les cultures polymicrobiennes, déposer 1 à 3 colonies morphologiquement homogènes sur un disque de papier. Ajouter
une goutte de réactif de test indole, et poursuivre l'interprétation.
La production d'indole confirme que le micro-organisme est bien [Link] (toutefois, il est à noter qu’une faible proportion de
souches d’E. coli présente un caractère indole Θ).
En l'absence de production d'indole, identifier le micro-organisme en utilisant une méthode conventionnelle.
Plus de 99% des souches d’[Link] ont une activité ß-galactosidase.
Une faible proportion d'autres micro-organismes produisent une ß-galactosidase et peuvent apparaître de couleur rose sur
UriSelect™4. Il s’agit de micro-organismes rarement isolés au cours des infections urinaires (Salmonella, Shigella) ou de micro-
organismes pouvant être rencontrés dans les infections urinaires mais qui ont un caractère indole Θ (Citrobacter freundii), ou
encore qui produisent des colonies de plus petite taille (S. saprophyticus).

 COLONIES BLEU TURQUOISE

Activité ß-glucosidase : les petites colonies intensément colorées en bleu turquoise (0,5 à 1,5 mm de diamètre), déterminées
comme des cocci Gram  lors de l’examen microscopique sont des entérocoques. S’il manque l'une de ces caractéristiques,
identifier le micro-organisme par une méthode conventionnelle.
Parmi les streptocoques, seuls les entérocoques expriment leur ß-glucosidase en produisant des colonies bleu turquoise
intensément colorées. Ainsi, toutes colonies de cocci qui présenteraient un bleu très pâle, ne devront pas être assimilées à des
entérocoques, elles devront être identifiées par une méthode conventionnelle (elles peuvent appartenir aux streptocoques
du groupe A ou B).

5 [FR]
 COLONIES BLEU-VIOLET
La double expression des activités ß-galactosidase et ß-glucosidase forment des colonies bleu-violet. Les grosses colonies
(2,0 à 3,0 mm de diamètre), déterminées comme des bacilles Gram Θ indiquent un micro-organisme appartenant probablement
au groupe KESC (Klebsiella, Enterobacter, Serratia ou Citrobacter). Identifier le micro-organisme par une méthode
conventionnelle.
Généralement, les bactéries appartenant au groupe KESC possèdent la double activité ß-galactosidase et ß-glucosidase,
formant donc des colonies bleu-violet. Cependant, certaines souches de ce groupe peuvent présenter une activité de
ß-galactosidase faible : les colonies présentent alors une couleur intermédiaire entre le bleu-violet et le bleu-turquoise.
Citrobacter diversus forme des colonies bleu-violet mais avec un caractère indole .

 COLONIES BRUN-ORANGÉ (avec un halo brunâtre)

L'activité tryptophane désaminase (TDA) présume un micro-organisme appartenant au groupe PMP (Proteus-Providencia-
Morganella). La réalisation d’un test de production d'indole permet de différencier l’espèce Proteus mirabilis du reste du groupe.
Déposer 1 goutte d'un réactif de test indole directement sur une colonie brun-orangé présentant un halo brunâtre, bien isolée,
comme décrit au paragraphe 3 « Principe du test ».
Pour les cultures polymicrobiennes : déposer 1 à 3 colonies morphologiquement homogènes sur un disque de papier buvard.
Ajouter ensuite 1 goutte de réactif de test indole et effectuer l'interprétation de production d'indole.
La production d'indole indique la présence d’une souche du genre Proteus spp (autre que P. mirabilis), Providencia spp. ou
Morganella spp. L'identification du micro-organisme doit être effectuée par méthode conventionnelle.
L'absence de production d'indole permet d'identifier le micro-organisme comme Proteus mirabilis (Proteus penneri, qui est rare,
est également indole Θ et présente une activité TDA ).
Certaines bactéries Proteus vulgaris et Providencia rettgeri présentent une activité ß-glucosidase, ils produisent des colonies
bleu-vert ou vertes avec un halo brunâtre. Elles sont identifiées par un test indole .

 Colonies BLANCHES, D'UNE AUTRE COULEUR ou INCOLORES

Identifier le micro-organisme par méthode conventionnelle.

7.6.3. Remarques
i. Les tests de catalase, d'oxidase et d'agglutination au latex peuvent être réalisés directement sur des colonies isolées sur
UriSelect™4.
ii. Les méthodes d'identification conventionnelles et antibiogrammes peuvent être réalisés directement à partir de colonies
prélevées sur UriSelect™4.
iii. Lors de la reconstitution du milieu déshydraté, certains grains peuvent parfois ne pas se dissoudre. Leur présence
n'affecte pas les performances culturales du milieu.

8. LIMITATIONS DU TEST
 Un faible pourcentage de souches de staphylocoques peut ne pas se développer en 24 heures sur UriSelect™4.
 Un faible pourcentage de souches de levure peut ne pas se développer sur UriSelect™4.
 S’il est estimé que la concentration de micro-organismes est supérieure à 107 UFC/mL et afin d'obtenir des colonies bien
isolées, il est recommandé d'inoculer successivement deux boîtes UriSelect™4 sans recharger l'öse ou de diluer
l'échantillon d'urine avant l'inoculation.
 Concernant l’UriSelect™4 préparé à partir du milieu déshydraté : pour une incubation des boîtes au-delà de 24 heures,
un reflet bleuâtre brillant peut apparaître sur quelques souches de Staphylococcus aureus.

9. VALEURS ATTENDUES
Les infections urinaires figurent parmi les infections bactériennes les plus courantes. Elles constituent également les infections
nosocomiales les plus fréquemment rencontrées dans les hôpitaux, représentant 35% des infections nosocomiales, et elles
constituent la deuxième cause la plus courante de bactériémie chez les patients hospitalisés.(2,3)
Dans de nombreux laboratoires cliniques, les tests urinaires par culture constituent les tests culturaux les plus fréquents,
représentant 24 à 40% des cultures demandées dont 80% proviennent de patients en consultation externe.
Les espèces bactériennes isolées sont variables en fonction de facteurs tels qu'un séjour antérieur à l'hôpital et/ou les
pathologies associées (voir tableau).
Au cours de l'évaluation clinique externe du milieu UriSelect™4, la prévalence des infections urinaires détectées par méthodes
conventionnelles et milieux chromogènes était de 75,8% (589/777). Parmi les bactéries isolées, une majorité de souches [Link]
a été rencontrée (43,3% (351/811)), suivie de souches Enterococcus faecalis à hauteur de 19,2% (156/811).

6 [FR]
IU communautaires IU en milieu hospitalier
Escherichia coli (80 %) Escherichia coli (50 %)
Proteus mirabilis Pseudomonas aeruginosa
Klebsiella – Enterobacter – Serratia Enterobacteriaceae
Staphylococcus aureus Enterococcus faecalis
Enterococcus faecalis Staphylococcus aureus
Acinetobacter spp
Bactéries rares Levures
Oligella urethralis
Aerococcus urinae *Particulièrement chez les patients ayant une sonde à demeure
Corynebacterium urealyticum ou après un sondage urinaire
Lactobacillus spp.

10. PERFORMANCES DU TEST

10.1. ÉTUDE DE REPRODUCTIBILITÉ

Un panel de neuf souches a été testé en duplicat par deux opérateurs. Les performances culturales (croissance et coloration de
colonies) ont été testées sur trois lots distincts d'UriSelect™4. Tous les résultats étaient conformes à ceux attendus.

10.2. PERFORMANCES CLINIQUES

Une étude clinique prospective (10) a été conduite sur 777 échantillons d'urine, incluant des urines prélevées en milieu de jet et
des échantillons de sondes : 405 échantillons d'urine (52,1%) provenaient de patients hospitalisés et 372 (47,9%) avaient été
adressés par des médecins généralistes. Ils ont été sélectionnés sur la présence de micro-organismes ou si l'examen
microscopique de routine avait révélé un taux de leucocytes >200/mm3.
1 µL de chaque échantillon a été inoculé en duplicat, par méthode semi-quantitative, sur les milieux UriSelect™4 et CLED
(Cystine Lactose Electrolyte Deficient). La lecture et l'interprétation des résultats ont été réalisées suivant les instructions du
fabricant.
Toutes les souches bactériennes qui présentaient une croissance significative (≥50 colonies) ont été étudiées en fonction de
leur morphologie et de la couleur de la colonie, puis identifiées par méthodes biochimiques.
Sur les 777 échantillons, 589 échantillons d'urine ont révélé une croissance significative pour au moins une souche
(échantillons positifs). Au total, 811 souches ont été isolées sur au moins un des deux milieux. Cette étude a permis d'obtenir
les résultats suivants :

Performances générales
CLED
% Concordance générale
Positif Négatif Total
95% IC
Positif 733 64 797
91,6 %
UriSelect™4 Négatif 4 10 14
[89,5 % - 93,4 %]
Total 737 74 811

10.3. SPECIFICITE
Cette étude a démontré l'utilité du milieu UriSelect™4 pour l'identification présomptive des germes pathogènes urinaires les
plus fréquemment isolés, par une meilleure différenciation des cultures polymicrobiennes.

Sensibilité de Spécificité
Espèce ou groupe Identification présomptive
détection de coloration

Escherichia coli Colonies rouges/roses 97,1 % 98 %

Colonies rouges/roses, indole  97, 1% 100 %

Groupe des entérocoques Petites colonies bleu turquoise 100 % 100 %

Groupe PMP Colonies brun-orange 82,4 % 100 %
Groupe KESC Colonies bleu-violet 100 % 92 %
S. saprophyticus Petites colonies roses 100 % 88,9 %

7 [FR]
Ces données démontrent que le milieu UriSelect™4 permet :
1) l'identification directe :
 D'Escherichia coli avec une spécificité élevé (98%). Les autres souches ont formé des colonies de couleur blanche, du
fait de l'absence d'activité ß-galactosidase. La réalisation d'un test d'indole a toutefois permis d’atteindre 100% de
spécificité pour E. coli (différenciation entre [Link] et Citrobacter freundii).
 Tous les entérocoques (100%) ont formé de petites colonies bleu-turquoise, faciles à distinguer des staphylocoques (qui
génèrent également de petites colonies d'autres colorations bien distinctes).
 Tous les Proteae génèrent une coloration brune diffuse dans la gélose (100%). Un test Indole négatif s'est également
avéré utile pour l'identification spécifique de P. mirabilis.

2) l'identification présomptive de :
 Toutes les entérobactéries du groupe KESC (100%) ont généré des colonies bleu-violet.
 Tous les S. saprophyticus ont présenté une bonne croissance sur UriSelect™4 (100%), formant de petites colonies
roses faciles à différencier des autres souches de staphylocoques, qui forment des colonies blanches. Seule une
souche de Staphylococcus simulans a présenté une couleur similaire, diminuant ainsi la spécificité de l'identification de
S. saprophyticus à 88,9%.

10.4. SENSIBILITE
La sensibilité de détection des micro-organismes sur les milieux UriSelect™4 et CLED a été évaluée sur 589 échantillons
d'urine positifs (croissance significative ≥ 50 colonies). Les résultats sont présentés ci-dessous.
Les limites du test (Section 8) doivent être prises en compte.

Total des Micro-organismes Total des

CLED UriSelect™4
/ Milieux d'isolement souches
Total des souches détectées (1) 811 obtenues à 737 (90,9 %) 797 (98,3%)
partir d'un autre
milieu
Total des souches non détectées - 74 (9,1%) 14 (1,7%)
Acinetobacter spp 8 8 8
Aerococcus viridans 1 1 1
Candida spp 6 5 6
Citrobacter diversus 6 6 6
Citrobacter freundii 11 9 10
Enterobacter aerogenes 5 3 5
Enterobacter cloacae 14 14 13
Enterococcus faecalis (2) 156 119 155
Enterococcus faecium 22 20 21
Escherichia coli (3) 351 344 347
Klebsiella oxytoca 24 21 24
Klebsiella pneumoniae 68 61 68
Morganella morganii 12 9 12
Proteus mirabilis 54 49 53
Proteus penneri 1 0 1
Proteus vulgaris 1 1 1
Providencia stuartii 1 1 1
Pseudomonas aeruginosa 20 17 19
Serratia spp 5 5 5
Staphylococcus aureus 8 8 8
Staphylococcus epidermidis (4) 10 10 7
Staphylococcus saprophyticus 8 8 8
Autres staphylococci à coagulase négative 9 8 8
Stenotrophomonas maltophilia 2 2 2
Streptococcus agalactiae 8 8 8

(1) La sensibilité du milieu UriSelect™4 était de 98,3%, alors que sur milieu CLED seules 90,9% des souches ont été
détectées. Les faibles résultats obtenus sur CLED s'expliquent essentiellement par la difficulté à différencier plusieurs souches
dans des cultures polymicrobiennes.
La distribution des espèces isolées s’est caractérisée par une majorité de souches d'entérobactéries dont une forte proportion
d’[Link] (43%).

(2) Il a été remarqué que cet écart, le plus important entre les souches isolées sur UriSelect™4 et les autres milieux, est dûe à
la détection d'entérocoques. L’UriSelect™4 a favorisé la croissance de 30,3% supplémentaires de ces souches d'entérocoques.
Sur le milieu, les petites colonies d'une couleur bleu-turquoise étaient faciles à distinguer au sein d’une culture polymicrobienne,
alors qu'elles étaient le plus souvent masquées sur le milieu CLED, par de plus grosses colonies de souches Gram Θ.

(3) Les souches E. coli non identifiées étaient β-galactosidase négative et formaient des colonies blanches.

8 [FR]
(4) Trois souches de Staphylococcus epidermidis n'ont pas été détectées sur UriSelect™4. En revanche, toutes les
souches de S. saprophyticus et S. aureus se sont bien développées. UriSelect™4 s'est avéré pertinent pour la détection de
S. saprophyticus qui forme de petites colonies roses (les autres staphylocoques produisent des colonies blanches, à l'exception
d'une souche de S. simulans).

Comme indiqué précédemment, les faibles performances du milieu CLED pour la détection des souches en
mélange polymicrobien ont été relevées : seules 131 souches (78%) ont été détectées dans les 168 échantillons d'urine
(28,5%) contenant un mélange d'au moins 2 souches, alors que 166 souches (99%) ont été détectées sur UriSelect™4.
De plus, sur 51 échantillons contenant au moins 3 souches distinctes, le CLED n’a permis de détecter les 3 souches que dans
22 échantillons (43%), tandis que les 3 types de colonies ont pu aisément être distingués sur UriSelect™4 dans 47 échantillons
(92%).

Nombre d'échantillons d’urine positifs

CLED UriSelect™4

1 453 418

2 109 119
Nombre
de souches isolées
3 22 (43%) 47 (92%)
Cultures
131 (78%) 166 (99%)
polymicrobiennes

10.5. ÉTUDE DE SENSIBILITÉ

Pour déterminer la sensibilité du milieu UriSelect™4, un panel de souches pathogènes urinaires les plus fréquemment
rencontrés - [Link], Enterococcus, P. mirabilis, S. aureus et K. pneumoniae - a été testé à différentes dilutions. Pour chaque
souche, une suspension à 0,5 Mc Farland a été préparée. Des dilutions en séries au 10ème ont été réalisées en solution saline
et inoculées sur UriSelect™4. Les boîtes ont été incubées à 35-37°C à l'air ambiant et lues après 18 à 24 heures. La coloration
et la densité des colonies ont été relevées. Les données ont démontré qu’une concentration minimale de 103 CFU/mL permet
de détecter la majorité des germes pathogènes sur UriSelect™4.

10.6. DÉNOMBREMENT
Un panel de souches pathogènes urinaires les plus fréquemment isolées a été testé aux différentes concentrations de 103 à
107 CFU/mL d'urine, de sorte à couvrir la gamme de concentrations habituellement retrouvées en tests de routine. Pour chaque
souche testée, une suspension a été préparée à 0,5 Mc Farland. Des dilutions en séries au 10ème en solution saline ont été
réalisées et inoculées en 10 réplicats sur UriSelect™4. Les boîtes ont été incubées à 35-37°C à l'air ambiant et lues après 18 à
24 heures.
La couleur et le nombre de colonies ont été relevés : le dénombrement de colonies isolées a pu être effectué jusqu'à la
concentration de 104 CFU/mL d'urine. Au-delà de cette concentration, la présence de colonies confluentes ne permet plus
d‘effectuer un dénombrement.

9 [FR]
11. BIBLIOGRAPHIES
1 Isenberg, H.D. (ed.). 1992. Clinical microbiology procedures handbook, vol. 1. American Society for Microbiology.
Washington, D.C.
2 Miller JM, HT Holmes, K Krisher 2003. General principles of specimen collection and handling. Clinical
Microbiology procedures handbook, ASM Washington DC.
3 NCCLS. Quality controls for commercially prepared Microbiological Culture Media; Approved Standard – Third
Edition. NCCLS document M22-A3 (ISBN 1-5638-536-4). NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne,
Pennsylvania 19087-1898 USA, January 2012.
4 Stamm WE. Scientific and clinical challenges in the management of urinary tract infections. Am J
Med 2002;113:1-4.
5 Weinstein MP, Towns ML, Quartey SM, et al. The clinical significance of positive blood cultures in the 1990s: a
prospective comprehensive evaluation of the microbiology, epidemiology, and outcome of bacteremia and
fungemia in adults. Clin Infect Dis 1997;24:584-602.
6 Clinical and Laboratory Standards Institute. 2005. Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers
from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, PA.
7 Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of
workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the
meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045.
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