UM5
ENSAM-Rabat CF (GMQE) S3 Février 2021
Les méthodes chromatographiques
Durée (1heure)
A) CCM
1- Après la synthèse de l'acétate d'isoamyle à partir de l'alcool isoamylique, on
réalise une chromatographie sur couche mince. On dépose :
En C, de l'acétate d'isoamyle pur
En A, de l'alcool isoamylique
En S, le produit synthétisé
En F, un sucre, le fructose
En B, un extrait de banane.
Après élution et révélation, on obtient le chromatogramme suivant :
Cocher la ou les bonne(s) réponse(s)
1. Le produit synthétisé contient encore de l'alcool isoamylique
2. L’extrait de banane contient du fructose
3. Le produit synthétisé est vraisemblablement de l'acétate d'isoamyle pur
B) les différentes chromatographies
Parmi les propositions suivantes concernant les méthodes chromatographiques
avec une phase stationnaire silice greffée octadécyle, quelles sont celles qui
sont exactes ?
1- La phase est utilisable en chromatographie liquide d'exclusion-diffusion pure
2 - La phase est utilisable en chromatographie d'échange d'ions
3 - La phase est utilisable en chromatographie en phase normale
4 - La phase est utilisable en chromatographie de partage
C) Les paramètres physico-chimiques sur lesquels reposent les principes de
séparation
Quelles sont celles qui sont exactes ?
- La chromatographie d’échange d'ions
1 ) la charge électrique
2 ) la taille et la forme
3) la polarité
4) la polarité et l'hydrophobicité
- La chromatographie d’ exclusion ou gel de filtration
1 ) la charge électrique
2 ) la taille et la forme
3) la polarité
4) la polarité et l'hydrophobicité
5) la forme
D) Chromatographie d'échange d'ions
On dispose d’un mélange de 5 acides aminés: glycine (pHi = 6), méthionine
(pHi = 5), glutamate (pHi = 3), lysine (pHi = 9) et arginine (pHi = 10). Afin de les
séparer, on va utiliser différentes colonnes échangeuses d’ions.
1. Si l’on souhaite n’avoir que l’arginine retenue sur la colonne, on peut utiliser
une colonne échangeuse de cations à un pH de 9,5.
2. À pH = 5,5 sur une colonne échangeuse de cations, seuls la méthionine et le
glutamate sont retenus.
3. À pH = 5,5 sur une colonne échangeuse d’anions, seules la lysine et l’arginine
sont retenus.
4. À pH = 5,5 sur une colonne échangeuse de cations, seules la glycine, la lysine
et l’arginine sont retenus.
5. Si tous les acides aminés sont fixés à une colonne échangeuse de cations à
un pH de 2, alors l’augmentation du pH pour éluer entraînera en premier
l’élution de l’arginine.
E) Quelle Chromatographie
Dans un mélange se trouvent 3 protéines : P1 avec PM = 120kDa, pI=3 / P2
avec PM = 120kDa, pI = 5 / P3 avec PM = 120kDa, pI = 9. Laquelle ou lesquelles
de ces méthodes permettraient de les séparer afin d’obtenir des solutions
pures de chacune des protéines?
1. Chromatographie d’exclusion.
2. Chromatographie échangeuse d’ion.
3. Chromatographie d’adsorption
4. Chromatographie de partage.
5. Chromatographie sur couche mince.
F. Détermination des MM par chromatographie
On détermine les temps de rétention (tr) au cours d'une chromatographie sur Sephade
des protéines suivantes dont on connaît la masse moléculaire (MM) (Le débit de la colonne e
de 5 ml / min)
Coche la colonne correspondante aux volumes d'élution (Ve)
Le temps de rétention (tr) de la glucokinase, est tr = 21 min.
On trouve sa masse moléculaire à l'aide d’un graphique
Cocher la bonne réponse
1. 72070 g/mol
2. 70066 g/mol
3. 66070 g/mol
4. 56071 g/mol
5. 77070 g/mol