Fiches techniques – Hem-image
Coloration et numération des réticulocytes
Principe
Les réticulocytes ou proérythrocytes (issus de l’érythroblaste acidophile ayant éjecté son noyau) sont mis en évidence
grâce aux traces d’ARN ribosomal et de protoporphyrine qu’ils possèdent encore (fin de synthèse de l’hémoglobine)
pendant environ 36 heures. Ces substances peuvent être précipitées et colorées par des colorants basiques (Bleu de
Crésyl Brillant, Bleu de Unna, New Methylen Blue). Ils apparaissent alors comme un réseau de grains et de filaments
plus ou moins important selon l’âge de la cellule. Cette numération présente un intérêt dans le cadre des anémies
pour distinguer les causes centrales (arégénératives) des causes périphériques (régénératives).
Technique
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Mélanger volume à volume le sang à tester et le Réaliser un frottis mince.
colorant (deux volumes de sang pour un de colorant en
cas d’hématocrite faible). Le sécher rapidement.
Laisser incuber durant 10 minutes à 37°C.
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Observer au grossissement 1000. Calculer le pourcentage.
Dénombrer dans plusieurs champs toutes les Exprimer cette valeur en G/L grâce à la numération
hématies colorées en bleu vert puis distinguer les des hématies.
réticulocytes présentant sur ce fond bleu des grains
et/ou des filaments violet noir.
Résultats
Les valeurs de référence de l’individu normal ne présentent pas un grand intérêt. Seule la valeur seuil de 120 G/L
permettra de faire la différence entre un état arégénératif (inférieur) ou régénératif (supérieur ou égal).
Causes d’erreur
Par défaut : les réticulocytes « âgés » ne présentant plus un précipité important peuvent être « oubliés ».
Par excès : de nombreux artéfacts (points ou traits noirs) sont fréquemment présents sur les frottis (un peu
épais ou séchés trop lentement) et doivent être identifiés par leur aspect réfringent lors de la variation de la vis
micrométrique.
Remarque
De nombreux automates d’hématologie possédant un système d’analyseur en flux permettent maintenant une numération
automatisée des réticulocytes. C’est sur la mise en évidence des traces d’ARN ribosomal et de protoporphyrine par des
colorants qu’est également basé le principe de ces numérations. Elles permettent une analyse plus fine (visualisation des
réticulocytes « limites ») et plus étendue (de nombreuses cellules sont analysées) que la technique manuelle.