Dosage des composés phénoliques : Do (760 nm)
On met 25 µl de l’extrait+2500 µl de l’eau distillé +125 µl RFC (réactif de foline ciocalteu) avec
agitation. Puis on le reste au repos pendant 3 min. Et finalement, on ajoute 1250 µl de Na₂CO₃ (5%).
Apres l’agitation .On additionne 1100(Eau distillé).
Incubation a une température ambiante pendant 90 min.
L’intensité de la couleur est proportionnelle aux taux des composes phenoliques oxydés
(boizet et charpentier, 2006)
Les résultats trouvés :
1-0.3612
2-0.3724
3-0.3720
Dosage des flavonoïdes totaux :
La détermination de la teneur en flavonoïdes de l’extrait de pissenlit est effectuée par cette
méthode :
(Do=500nm)
On prend 250µl de l’extrait (non dilué) avec 75µl NaNo₂à5%.On a 5 g > 100ml(eau
distillée) Après 6 min d’incubation et à température ambiante +150µL ALcl3 à10% ( 0,5 >5
ml de méthanol) Puis on l’incube nouveau à température ambiante pendant 5 min et par
l’ajoute de 500µl de soude puis ajustés à 2500µl de l’eau ultra pure. On ajoute 1525 eaux
distillées.
Tanins : (Do=500 nm)
On prend: 2ml de vermilline (1%) + méthanol avec 2ml d’acide sulfurique + 25%
Me oH + 0,5 ml d’extrait dilué Incubation pendant 15 min à l’obscurité.
Résultat
1) 0,1220
2)0,1224
3)0,1226
Mesure de pouvoir antioxydant :
Des nombreuses méthodes sont utilisées pour l’évaluation de l’activité antioxydant des
composés phénoliques purs ou d’extrait. Dans notre étude nous avons utilisé des tests
chimiques qui mesurent la réduction de radical libre c’est le DPPH.
Principe de pouvoir anti- radiculaire :
Le test DPPH est un des tests le plus utilise pour déterminer le pouvoir anti
radiculaire de l’extrait. La réduction de radical libre DPPH par un antioxydant
peut être suivie par une spectrophotométrie UV –visible, en mesurant La
diminution de l’absorbance par la présence de l’extrait. Le DPPH initialement
violet mais se décolore lorsque l’électron libre s’apparie. 6 mg du produit DPPH
est introduit dans 25 mL de méthanol. Le contenu a été bien
mélangé pendant 30 min à l’obscurité. Cette solution mère doit être préparée 2
heures avant le
test. Après l’incubation, la solution précédente doit être ajustée à l’aide d’un
spectrophotomètre
à une DO 550 nm égale à 1,1 ±0,02 par l’ajout de méthanol.
210 μL, du même extrait qui a été préparé pour le dosage des polyphénols, ont été
additionnés
avec 1940 μL de la solution DPPH et mis dans des tubes à essais tout en effectuant
une agitation.
Les mélanges ont été incubés à l’obscurité pendant 45 min et on procède ensuite à
la
Lecture des absorbances à l’aide d’un spectrophotomètre à une longueur d’onde
égale à 517 nm
En présence d’un témoin tout en remplaçant l’extrait par du méthanol.
Une courbe d’étalonnage a été réalisée en utilisant l’acide ascorbique (1 mg/ml)
comme
Standard (Brand-Williams et al, 1995).
Req : au spectrophotomètre, le méthanol est le zéro
Puis on faire la lecture de l’absorbance de la solution témoin et l’absorbance des
échantillons
On calcule Δ DPPH= absorbance de témoin- absorbance de l’échantillon.
La courbe d’étalonnage est Δ DPPH= f (concentrations)
Les résultats obtenus :
1-0.1914
2-0.1986
3-0.2375
DPPH (contrôle) : 1.1081
Le blanc : 1.242
Le pourcentage % de l’activité de radical DPPH est calculé comme suit :
% de de l’activité de radical DPPH = [(AC-AE)/AC]*100
Avec
AC : absorbance du contrôle
AE : absorbance de l’extrait
Application numérique :
1- [(1.108 1 -0.1914)/1.1081]*100 = 8272
2- [(1.108 1 -0.1986)/1.1081]*100 = 8207
3- [(1.108 1 -0.2375)/1.1081]*100 = 7856
Les résultats de l'analyse phytochimique effectuée sur l'extrait aqueux de
feuilles sèches de Taraxacum officinale a révélé l'existence des plusieurs
principes actifs. Des saponines, des tanins, le phénol, les Fibre, les flavonoïdes
et sucres réducteurs sont été trouvées dans l'extrait.
Les testes DO Incubation Lecture spectrophotomètre
Premier Deuxième Troisième
lecture lecture lecture
Polyphénols 760 90 min 0,3612 0,3724 0,3720
Tana 500 15 min 0,1220 0,1224 0,1226
Flavonoïdes 500 6min 0,4894 0,5089 0,5239
Les bienfaits des flavonoïdes : qu'on nomme aussi vitamine P, viennent
essentiellement de leurs qualités anti-inflammatoires, immunostimulantes,
anti oxydantes. Ils renforcent considérablement tous les vaisseaux sanguins et
améliorent ainsi la circulation
Les polyphénoles : Les poly phénols sont capables de diminuer les facteurs de
risque des maladies cardiovasculaires. En effet, ils favorisent un bon équilibre
glycémique, ils luttent contre l'oxydation du cholestérol, ils diminuent
l'obstruction des artères, ils jouent sur l'insulinorésistance et sur l'hypertension
artérielle
Les tanins : sont des molécules végétales utilisées par les Hommes pour leur
capacité naturelle à précipiter les protéines. Elles servent principalement au
tannage des peaux, de manière à rendre le cuir imputrescible
Après l'avoir analysé, comparé avec les résultats d'autres travaux, et nous avons trouvé
une différence, et cette différence est due à plusieurs facteurs, qui sont :
Facteurs climatiques :Les changements climatiques( les inondation, les
sécheresses
Facteurs géographiques: la latitude, l'altitude, la continentalité, l'influence
maritime et les réalisations de l'être humain.
Facteurs météorologiques :la température, la pression atmosphérique, le
vent, l'humidité et les précipitations,
Facteur écologiques
Facteurs d’ordre thermodynamique : L’échange du dioxyde de carbone
entre l’eau et la phase gazeuse au contact de laquelle on la manipule ;
Changement des conditions physiques (température, pression, pH ...)
d’une eau contenant des ions capables de donner un précipité en se
recombinant ; modification par évaporation et augmentation des
concentrations
Facteur du milieu naturel