Nom et Prénom : Addala Souleyman, Module : Enzymologie.

Ahmed Serier Aniss, Date: 11/12/2023.

Islam Amine Chams Eddine.

COMPTE RENDU DU TP#04:

« Effet de la Température sure l’activité Enzymatique d’une Protéase »

NOTE OBSERVATION
• Tableau des résultats :
T(C°) DO Blanc DO Blanc DO Corrigée [Tyr]=mg/mL Vi=mg/(mL∙min) Vi=µg/(mL∙min) A.E=µM/(mL∙min)
0.000757×1 0 -
0.025225225×1 0 -
30 0.397 0.423 0.026 3 2.52252×1 0-8 5 0.0001 3922×1 0-3
0.01 0339×1 0- 0.000344636×1 0-
40 0.297 0.51 8 0.221 3 3 0.344635545 0.001 902067×1 0-3
0.001 047338×1 0-
50 0.688 1 .338 0.65 0.031 42×1 0-3 3 1 .047338247 0.005780331 ×1 0-3
0.01 5499×1 0- 0.00051 6626×1 0-
60 0.1 52 0.478 0.326 3 3 0.51 662571 7 0.002851 293×1 0-3
0.004786×1 0- 0.0001 59541 ×1 0-
70 0.48 0.588 0.1 08 3 3 0.1 59541 36 0.00088052×1 0-3
0.001 592×1 0- 0.053071 253×1 0-
80 0.465 0.508 0.043 3 5.3071 3×1 0-8 5 0.000292904×1 0-3
0.002722×1 0- 0.090745291 ×1 0-
90 0.368 0.434 0.066 3 9.07453×1 0-8 5 0.000500829×1 0-3
0.00021 6×1 0- 0.007207207×1 0-
100 0.51 5 0.53 0.01 5 3 7.20721 ×1 0-9 6 3.97771 ×1 0-8
• Calcule de DO Corrigée , la concentration de Tyrosine, les vitesses initiales et l’activité enzymatique :

��������é� = ���.� − �������

��������é� −0.0106
��������é� = 20.35 × ��� + 0.0106, ��� = 20.35
. c’est l’équation de la courbe d’étalonnage.

��� ��
�� = → = �� ∙ ��� ;
30 ����
� 6 6
� ��� = 181.19 ��� ; 181.19 � → 1 ���; 181.19 × 10 �� → 10 ����, donc ;
�� ��
�. � = = �� ∙ ���
181.19
• Graph de Vi = f(T°) :

• Discussion:
Le graph représente la variation de la vitesse dans une réaction entre la Caséine et une protéase.
On peut retirer de ce graph la température optimale pour la Caséine, qui est ��������� = 50℃ car il y a

un « peek » de graph dans la température 50℃ qui veut dire, la vitesse de la réaction est maximale.
• Conclusion:
La température optimale de la protéase étudiée est ��������� = 50℃.

Nom et Prénom : Addala Souleyman, Module : Enzymologie.

Ahmed Serier Aniss, Date: 11/12/2023.

Islam Amine Chams Eddine.

COMPTE RENDU DU TP#05:

« Effet de l’inhibiteur EDTA sure l’activité Enzymatique d’une Protéase »

NOTE OBSERVATION
• Tableau des résultats en présence de EDTA :

[Caséine] % 1 2 3 4

[Caséine]= mg∙mL-1 10 20 30 40

DO Blanc 0.267 0.272 0.56 0.205

DO M.R 0.343 0.37 0.767 0.519

[EDTA] = µM 1 4 6 8

DO Corrigée 0.076 0.098 0.207 0.314

[Tyr] = µ[Link]-1 0.003214 0.004295 0.009651 0.014909

[Tyr] = [Link]-1 0.003214×1 0-3 0.004295×1 0-3 0.009651×1 0-3 0.014909×1 0-3
1/[S] = mL∙mg-1 0.1 0.05 0.033333 0.025
1/Vi = mL∙min∙mg -1
9334.862 6985.126 3108.452 2012.195
• Calcule de DO Corrigée , la concentration de Tyrosine et les vitesses initiales:

��������é� = ���.� − �������

��������é� −0.0106
��������é� = 20.35 ��� + 0.0106, ��� = 20.35
. c’est l’équation de la courbe d’étalonnage.

��� ��
�� = → = �� ∙ ��� ;
30 ����
� �
• Graph de � = � �
en présence d’inhibiteur EDTA:
�

1 1
Le graph est une courbe linéaire (droite) d’une équation simple ; � = 94512 × �
+ 437.66
�
• Calcule des paramètres cinétiques :

Le point d’intersection de la courbe avec l’axe des Y (1 � ) représente la valeur inverse de ����, donc ;
�

1 ��
437.66 = → ���� = 0.002285× 10−3 (�� ∙ ���)
����
1 1
On sait que le point �0 d’intersection de la courbe ��
=� �
avec l’axe des abscisses X a des coordonnées
comme suite :
1
�0 �0 =− ; �0 = 0
��
��
Donc � �0 = 0 ��∙��� ;
� �0 = 0 → 94512 × �0 + 437.66 = 0
1
−
=− 0.00463 �� �� , ou "�" est la ponte de la courbe.
1 ���� −437.66
�0 =− � = �
= 94512
�

1 ��
�0 =− =− 0.00463 → �� = 215.9485 ��
��
• Tableau des résultats en absence de EDTA :

[Caséine] % 1 2 3 4
[Caséine]= mg∙mL -1
10 20 30 40
DO Blanc 0.114 0.2 0.236 0.35
DO M.R 0.216 0.382 0.497 0.7
DO Corrigée 0.102 0.182 0.261 0.35
[Tyr] = mg∙mL -1
0.004491 0.008423 0.012305 0.016678
1/[S] = mL∙mg-1 0.1 0.05 0.033333 0.025
Vi = mg∙mL ∙min
-1 -1
0.00015 0.000281 0.00041 0.000556
1/Vi = mL∙min∙mg -1
6679.431 3561.844 2438.099 1798.763
 � �
• Graph de � = � �
en absence d’inhibiteur EDTA:
�

• Calcule des paramètres cinétiques :

Le point d’intersection de la courbe avec l’axe des Y (1 � ) représente la valeur inverse de ����.2 , donc ;
�

1 ��
262.54 = → ����.2 = 0.003809× 10−3 (�� ∙ ���)
����.2
1 1
On sait que le point �'0 d’intersection de la courbe ��
=� �
avec l’axe des abscisses X a des coordonnées
comme suite :
1
�'0 �'0 =− ; �'0 = 0
��.2
��
Donc � �'0 = 0 ��∙��� ;
� �'0 = 0 → 94512 × �'0 + 437.66 = 0
1
−�
=− 0.004072 �� �� , ou "�'" est la ponte de la 2emme courbe.
1 −262.54
�'0 =− � = ���.2
=
�.2 �' 64454

1 ��
�'0 =− =− 0.004072 → ��.2 = 245.5848 ��
��.2
• Conclusion:

On remarque que �� ≈ ��.2 (due aux erreurs de la manipulation) et ���� < ����.2 , donc les deux courbes
1 1 1
s’intersectent en − � avec l’axe des abscisses X 1 � , mais en � et � avec l’axe des ordonnées Y ( 1 � ) pour
� ��� ���.2 �
1 1
la courbe � = � �
avec EDTA et sans EDTA respectivement.
�

En conclusion, ce type d’inhibition n’a pas un effet sure la constante de Michaelis �� mais les vitesses initiales
changent ����.����.���� < ����.����.���� . Il s’agit d’une inhibition non compétitive.

• Les Graphes de la vitesse initiale avec/sans EDTA: