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Séparation des Protéines par Électrophorèse

Le document décrit la séparation de protéines par électrophorèse IEF puis SDS-PAGE en fonction de leur poids moléculaire et de leur charge. Il explique ensuite les concepts de salting in, salting out, et donne les résultats d'un exercice sur la séparation de protéines par chromatographie d'échange d'ions.

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Séparation des Protéines par Électrophorèse

Le document décrit la séparation de protéines par électrophorèse IEF puis SDS-PAGE en fonction de leur poids moléculaire et de leur charge. Il explique ensuite les concepts de salting in, salting out, et donne les résultats d'un exercice sur la séparation de protéines par chromatographie d'échange d'ions.

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Correction

Exercice 1 :

Protéome : C’est la séparation des protéines en fonction de leurs poids moléculaires et leurs
charge .Les protéines sont séparées par une électrophorèse IEF puis en SDS-PAGE.

La focalisation isoélectrique (IEF de l'anglais isoelectric focusing ou electrofocusing) est une


technique de séparation des molécules, tel que les protéines, par des différences dans leur point
isoélectrique.

Salting in augmente la solubilité des protéines. Ce phénomène est observé

Salting out aboutit à la précipitation des protéines : solutions de forces ioniques élevées, la
solubilité diminue avec la concentration en sel, on parle alors de précipitation saline

C’est la séparation des protéines en fonction de leurs poids moléculaires et leurs charge .Les
protéines sont séparées par une électrophorèse IEF puis en SDS-PAGE.

Exercice

1- Selon le résultats de l'électrophorèse, la protéine A et D migrent vers la cathode (-). Se sont


des cations dont le pH de l'électrophorèse (pH 7) est inferieur à leurs pHi. pHi A = 8, pHi D =
8,5 (selon la distance de la migration).
- Selon le résultats de l'électrophorèse, la protéine B et C migrent vers l'anode (+). Se sont des
anions dont le pH de l'électrophorèse (pH 7) est supérieur à leurs pHi. pHi B= 6,2, pHi C = 5,1
(selon la distance de la migration).
2- 2-Si le mélange est déposé sur une colonne de résine échangeuse d'anions, seules les protéines
B et C se fixent à la colonne. Tandis que les protéines A et D ne sont pas fixées, elles sortent
de la colonne avant l'élution. La protéine C se fixe plus fortement que la protéine B car elle est
plus chargée négativement que B.
3- La libération de ces protéines (l'élution) est réalisée par un gradient de pH décroissant à partir
de pH 7.
4- L'ordre d'élution est : B ensuite C.

Si le pH est égal à 7, la solution contient autant d'ions


hydrogène \ce{H+} que d'ions hydroxyde \ce{OH-} . Plus le pH
est proche de 0, plus la solution est acide et concentrée en ions
hydrogène \ce{H+} . Plus le pH est proche de 14, plus la solution
est basique et concentrée en ions hydroxyde \ce{OH-} .

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