Ministère de la santé et de la protection sociale
Institut Supérieure des Professions Infirmiers et
Techniques de Santé de Casablanca
Techniques D’analyse Au Laboratoire
De Biologie Médicale
Dr Samiha JADDAOUI
2023-2024
Objectifs
Définir les trois processus Pré-analytique,
Analytique et Post-analytique.
Présenter les appareils et les matériels utilisés dans
un laboratoire d’analyse médicale.
Voir quelques exemples des analyses demandé au
laboratoire
Exposés à faire
1. Les appareils utilisés au laboratoire d’ hématologie.
2. Les appareils utilisés au laboratoire de Biochimie.
3. Les appareils utilisés au laboratoire de microbiologie.
4. Les appareils utilisés au laboratoire d’ immunologie.
5. Les appareils utilisés en génétique/Biologie moléculaire.
6. Les appareils utilisés en anatomo-pathologie.
Biologie Médicale
• Discipline médicale dont l’objectif est l’étude qualitative et
quantitative des liquides biologiques (sang, urines, selles,
sécrétions, liquide céphalo-rachidien,…) afin d’évaluer l’état
physiopathologique d’un individu à des fins de :
évaluer l’état de santé
générale d’une personne.
évaluer le fonctionnement
d’un organe.
s’assurer du bon
fonctionnement d’un TTT.
déceler une lésion au
niveau d’un organe.
Examens de laboratoire
Définition: investigations complémentaires effectués sur
des matières biologiques produits par l’organisme, qui
permettent d’orienter ou de confirmer un diagnostic et
de suivre l’évolution de la maladie.
Importance :
Les examens de laboratoire ont une grande importance
du fait qu’ils sont les piliers du diagnostic clinique, du
contrôle, du pronostic et de la surveillance
thérapeutique.
N.B. D’autres nomenclatures pour les examens de laboratoire tels que: analyses de
laboratoire, analyses biologiques, examens biologiques, analyses médicales …
Examens de laboratoire
Buts :
Dépistage des troubles biologique.
Aider au diagnostic
Estimer les facteurs de risque
Suivre les fonctions biologiques (rénale,
hépatique …)
Contrôler l’efficacité et les effets du traitement
Suivre l’évolution des maladies.
Recherche scientifique.
Pourquoi un module sur les
techniques des laboratoires pour
un technicien de maintenance
biomédicale?
LE SERVICE BIOMEDICAL
Activités du service biomédical
Gestion du parc d’équipements biomédicaux
des services de soins de l’hôpital:
Le service biomédical anticipe en prévoyant, avec les
services de soins, les besoins en dispositifs médicaux
Le service biomédical assure une veille
technologique sur les évolutions biomédicales.
Programmation et l’achat des équipements
biomédicaux et du conseil à l’exploitation de ces
équipements.
s’assurer de la conformité des mises en service sur
les nouveaux équipements
Activités du service biomédical
• Former les utilisateurs de dispositifs médicaux
• Mettre en œuvre les mesures de sécurités
adaptées pour le personnel médico-technique.
• Assurer une bonne utilisation du matériel,
garant de la qualité des soins pour les patients.
Activités du service biomédical
Assurer le service après-vente:
Planifier, réaliser ou fait réaliser la maintenance
préventive et corrective.
Planifier, réaliser ou fait réaliser les contrôles
qualités.
Le service biomédical élabore, planifie-la reforme et
veille au respect règlementaire de conservation des
données techniques.
Activités du service biomédical
• Gestion des risques liés à l’utilisation des
dispositifs médicaux se traduit :
les obligations d’information et de remontées
des déclarations d’incidents vers le niveau
central.
le suivi d’application sur le terrain des
mesures correctives préconisées.
Circuit d’un échantillon
Qu’est ce que la phase pré-analytique?
Phase complexe recouvrant
l’ensemble des étapes qui se
déroulent depuis la prescription
médicale comprenant:
• La demande d’analyse,
• La préparation et
l’identification du patient,
• Le prélèvement de
l’échantillon primaire,
• Son acheminement jusqu’au
laboratoire et au sein du
laboratoire,
jusqu’à l’ analyse de l’échantillon
au laboratoire.
Qu’est ce que la phase pré-analytique?
Source de 70% des résultats
erronés
Importance Toute défaillance de cette
phase aura des
& répercussions sur la phase
analytique et post-
complexité analytique
Garant principal de la
fiabilité des résultats en
biologie médicale
Importance de la qualité du
prélèvement
Prélèvement
de qualité
Analyse de
biologie fiable
Diagnostic Thérapeutique
précis
efficiente
Prélèvement
• Assurer le malade (le taux de fibrinogène
augmente lors de stress majeur)
• Prélèvement fait le matin, à jeun
• Éviter le café, tabac, alcool, exercice
physique dans l’heure qui précède le
prélèvement
• Le malade doit être en position assise, au
repos pendant 5 min
• Pour l’étude de la fibrinolyse, la position
couchée pendant 20 à 30 min est
recommandée
La coagulation et la fibrinolyse sont
fortement influencées par l'exercice
physique.
Prélèvement
Site de ponction
• Ponction veineuse franche au pli du
coude.
• Chez nouveau-né ou prématuré :
prélèvement capillaire au doigt ou au
talon
• Prélever du côté opposé d'une
perfusion (dilution du prélèvement)
• Ne pas prélever sur cathéter
Si nécessaire: rejet des 10 premiers
millilitres + à mentionner sur le bon
de demande
Prélèvement
Utilisation du garrot
!
Desserrer le garrot au
début du prélèvement.
« Peu serré, maintenu moins de 1 min.
Dès que le sang afflue dans le tube, le garrot
doit être desserré. »
Prélèvement
Choix des tubes
• Tubes en verre siliconé ou en plastique
• Vérifier la date de péremption du tube
si périmé:
• Anticoagulant contaminé par les bactéries
• Altération de l'étanchéité → mauvais remplissage
• De préférence : système des tubes sous vide
• Prélèvement rapide et facile
• Le vide induit une aspiration violente: activation plaquettaire
• à ne pas utiliser pour les prélèvements destinés à l'étude des fonctions
plaquettaires.
Prélèvement: Ordre des tubes
Tubes d'hémostase: 2ème position
Prélèvement: Hémostase
Niveau de remplissage
Veuillez respecter le niveau de
remplissage des tubes pour éviter des
conséquences sur les résultats.
• Remplissage à 90% recommandé
• Remplissage ≥ 80% acceptable
• Remplissage < 80% refuser le prélèvement
Si tube peu rempli → plasma hypercitraté → temps d'hémostase faussement allongés
Si tube trop rempli → plasma hypocitraté → temps d'hémostase raccourcis
Conditions de prélèvement: liquides
biologiques
Matériels
• Tous les liquides doivent être recueillis de
préférence sur un tube sec
• Le LCR doit toujours être prélevé sur un tube
sec stérile
• Sur des épanchements très hémorragiques,
on peut ajouter un échantillon prélevé sur
un anticoagulant pour éviter la formation
d’un coagulum de fibrine ou de caillot
• Il faut éviter l’EDTA qui peut donner des
cristaux artefactuels et préférer l’héparinate
de sodium ou le citrate de sodium
Conditions d'acheminement
• Transport:
• Prélèvements rapidement acheminés au laboratoire : l'idéal est
de 1 à 2h sans dépasser 4h
• Tubes maintenus en position verticale
• Éviter les agitations et les vibrations (hémolyse)
• Température :
• Température ambiante: entre 18°C et 22°C
• Le transport dans la glace fondante est proscrit
• Températures excessives : sources d'hémolyse
Accueil
Logiciel OSIRIS/KaliSil
• Permet une meilleure gestion des dossier
d’analyses des patients à partir des
ordonnances
• Préparer une fiche de paillasse avec les
paramètres demandés
• Editer des résultats avec les antécédents
médicales du patient.
Secrétariat
• Enregistrement de la demande
Prise en charge au laboratoire
Accueil des tubes
Absence d'identification
Discordance entre étiquetage et l'identité marquée
sur le bon de demande
Site de prélèvement inapproprié : en aval d’un site
de perfusion intraveineuse. Prélèvement sur le bras
opposé à la perfusion
Stase prolongée pendant la prise de sang : Vérifier les
protéines et molécules liées aux protéines conformités et
plasmatiques faussement élevées rejeter les
Délai d'acheminement > 4h échantillons non
Tube inapproprié conformes
Prélèvement coagulé
Prélèvement hémolysé (fausse augmentation
K+,ASAT, phosphates)
Ratio anticoagulant / sang non respecté
Prise en charge au laboratoire
Centrifugation
Idéalement dans l'heure qui suit le prélèvement
• Si l'étude de l'hémostase ne porte pas sur l'exploration
plaquettaire: Plasma pauvre en plaquettes → Une
seule centrifugation pendant au moins 10 min, à 2000
jusqu'à 2500 trs, entre 18 et 20°C.
• Si exploration plaquettaire : Plasma riche en
plaquettes → Centrifugation douce à 800 trs pendant
10 min, entre 18 et 20°C
Prise en charge au laboratoire
Centrifugation
Double centrifugation séparée par une
décantation du plasma permet d'assurer
un nb de plaquettes résiduel < 10 G/L
Après centrifugation → inspecter le
plasma
Prise en charge au laboratoire
Plasma : phase aqueuse du sang, obtenu en séparant les cellules sanguines du
sang total par centrifugation à partir d’un échantillon recueilli sur anticoagulant.
Sérum : phase aqueuse du sang laissé en contact avec le caillot. Pas de
fibrinogène, pas de facteurs de coagulation
Processus Analytique
Processus Analytique
Un laboratoire d’analyses médicales se décompose en 6 grandes
familles d’analyses :
• Laboratoire de Biochimie : Science qui étudie la
composition et la réaction chimique de la matière vivante et des
substances qui en sont issues.
Examens réalisés: Bilan glucidique, bilan lipidique, bilan hépatique, bilan
rénale, marqueurs tumoraux, ionogramme, bilan d’hémolyse, bilan
protidiques, bilan cardiaque, bilan thyroïdien, bilan pancréatique,
exploration de l’hémolyse, prostate…..
Plateau technique:
Système pour les électrophorèse
Spectrophotométrie analyseur automatique
Système de dosage des ions par électrodes spécifiques
Processus Analytique
• Laboratoire d’hématologie: Science qui étudie la structure
histologique, la composition chimique et les propriétés physiques
du sang.
1. L'hématologie cellulaire qui permet grâce aux hémogrammes :
• Le dosage de l'hémoglobine
• Le comptage des éléments figurés (globule rouge, leucocyte
et plaquette).
• La différenciation des leucocytes
• Le comptage des réticulocytes diagnostiquant les anémies.
2. Hémostase: Cette technique étudie la coagulation, Il s'agit du
passage de la phase liquide « plasmatique » en phase solide «
caillot ».
Processus Analytique
Laboratoire de Microbiologie:
Cette discipline est basée essentiellement sur
l'identification des germes, et la réalisation
d'antibiogramme permettant au médecin d'optimiser le
traitement des patients avec les antibiotiques adéquats.
On cherche:
• Les virus (virologie)
• Les bactéries (bactériologie)
• Les parasites (parasitologie)
• Les champignons (mycologie)
Processus Analytique
• Laboratoire de Pharmacotoxicologie:
La Pharmacologie: le dosage des médicaments afin
d'aider les cliniciens dans leur suivi thérapeutique et
aussi de participer à la surveillance des effets
indésirables des médicaments.
La toxicologie: comprend le dosage des toxiques
divers et des métaux afin d'évaluer de manière
qualitative et quantitative les intoxications
médicamenteuses, industrielles ou ménagères
Processus Analytique
• Laboratoire d’Immunologie: Cette discipline médicale
concerne l'exploration des molécules et des cellules du système
immunitaire. Les déficits immunitaires primitifs, les transplantations
d'organe et les immuno-interventions thérapeutiques en particulier
pour le cancer et le sida, sont les trois types d'activités réalisées au
sein d'un laboratoire d'immunologie.
• Laboratoire d’Anatomo-pathologie: Les principales missions
de ce type de laboratoire sont les examens des prélèvements de
biopsie, les examens des pièces opératoires et la pratique des
autopsies. Il permet de déterminer le grade et le stade des tumeurs.
Processus Analytique
• Laboratoire de Biologie moléculaire:
joue un rôle très important dans le diagnostic et le suivi
thérapeutique des maladies infectieuses, en particulier dans le
domaine des hépatites virales, de la tuberculose et les IST.
Processus Analytique
• Laboratoire de Cyto-génétique:
détecter les anomalies chromosomiques constitutionnelles ou
acquises grâce à des techniques microscopiques (techniques de
bandes, techniques de cytogénétique moléculaire)
Etablir un diagnostic biologique et d'assurer un conseil génétique.
Ces anomalies peuvent être de nombre (plus ou moins de 46
chromosomes), de structure (modification dans la succession de
plusieurs locus) ou de réparation (cassures chromosomiques).
Processus Analytique: Classification
des analyses
Les méthodes classiques : incluant la séparation des
différents composants de l’échantillon, se classe en :
– Précipitation
– Extraction
– Distillation
L’analyse quantitative dans les méthodes classiques
peut être faite par :
– Gravimétrie : poids d’un composant résultant d’une
réaction ou variation de poids pendant la réaction.
– Titration : mesure critique d’un volume pour obtenir la
valeur de la concentration.
Processus Analytique: Classification
des analyses
Par contre dans les méthodes instrumentales on
utilise des équipements qui mesurent une
propriété physique ou chimique d’une substance
ou un facteur qui permet la détermination d’une
propriété de cette substance.
Processus Analytique: Classification
des analyses
Les analyses peuvent donc être classées :
• Selon le type : analyse qualitative ou
quantitative
• Selon le produit cible : analyse organique ou
minérale
• Selon la quantité d’échantillon utilisée : macro
ou micro-analyse. La quantité peut être de
l’ordre de quelques grammes ou des fractions
de milligramme.
Processus Analytique: Classification
des analyses
• Selon l’automaticité : analyse manuelle ou
automatique. L’analyse automatique est
beaucoup utilisée dans le laboratoire.
• Selon le matériel utilisé : l’analyse peut être
réaliser par des méthodes classiques ou
instrumentales.
Processus Analytique: Classification des analyses
Les méthodes instrumentales se divisent en trois catégories :
Processus Analytique: Choix de la méthode
1. Spécifications en matière de performance.
Les méthodes doivent être choisies sur la base de leurs performances compte
tenu des spécifications convenues. Les principales spécifications techniques
sont les suivantes :
Processus Analytique: Choix de la méthode
1. Spécifications en matière de performance.
D’autres caractéristiques qu’on peut être amené à prendre en compte sont la
simplicité, la rapidité et le cout.
Processus Analytique: Choix de la méthode
2. Spécification en matière de référence.
• Méthode de référence : méthode reconnue comme référence par
la pratique quand plusieurs méthodes sont admises. Elle a fait
l’objet d’un grand nombre d’essais comparatifs inter-laboratoires,
et il donne des résultats fiables et performants.
• Méthodes courantes/ officielles : elles peuvent être stipulées par
des organisations commerciales ou par des autorités
réglementaires et sont considérées comme des méthodes qui
peuvent être utilisées quotidiennement pour les travaux
ordinaires. Elles auront fait objet d’un grand nombre d’essais
comparatifs inter-laboratoires et bien qu’elles ne donnent
généralement pas les mêmes caractéristiques de performance et
de qualité que les méthodes de références, elles sont plus
rapides, plus pratiques et moins couteuses et elles ont une fidélité
et une précision suffisantes pour la plupart des substances à
analyser.
Processus Analytique
RÉALISATION DES ANALYSES
Le matériel du laboratoire est entretenu régulièrement selon les
recommandations des fournisseurs. Pour les appareilles, deux
types de maintenance sont assurés :
Maintenance interne: réalisée par le technicien travaillant sur
l’appareil : elle est effectuée rigoureusement selon les
instructions du constructeur et est enregistrée sur un
formulaire prévu à cet effet.
Maintenance externe: réalisée par le fournisseur, elle peut être
curative(à la suite d’une panne) ou préventive et elle est
enregistrée sur un bon d’intervention.
Processus Analytique
Assurer la qualité des procédures analytiques
Afin de démontrer la validité de ses méthodes et de garantir la maîtrise et
la reproductibilité des processus analytiques, le laboratoire soumet ses
méthodes d'analyse à des contrôles réguliers.
Le laboratoire doit concevoir des systèmes de contrôle de qualité
permettant de vérifier que la qualité prévue des résultats est bien
obtenue.
Deux types de contrôles sont réalisés régulièrement au sein du laboratoire
Processus Analytique
Les contrôles internes de qualité:
Il consiste à faire passer dans les séries journalières d’analyse des
spécimens de contrôle. Ces derniers ne doivent pas être traités
d’une façon particulière pour optimiser artificiellement leurs
résultats. Les échantillons de contrôle ne peuvent en aucun cas
se substituer aux échantillons de calibrage et vice versa.
La procédure du contrôle interne de qualité doit préciser la
fréquence de passage des échantillons de contrôle, les valeurs
limites acceptables pour chaque élément et les mesures à
prendre en cas d’anomalies constatées.
Le laboratoire doit disposer de souches de référence pour le
contrôle interne de qualité des étapes d’identification,
d’antibiogramme et/ou d’anti-fongigramme des micro-
organismes isolés des produits pathologiques.
Processus Analytique
Les contrôles internes de qualité:
• Chaque coffret est donc composé de 3
échantillons de contrôle d’hématies humaines
(valeurs normales et pathologiques), se
présentant sous la forme de tubes de 4 ml
Processus Analytique
Les contrôles externes de qualité:
Il est recommandé au laboratoire de participer à des comparaisons
interlaboratoires, telles que celles organisées dans le cadre de
programmes d’évaluation externe de la qualité. La direction du
laboratoire doit surveiller les résultats de l’évaluation externe de
la qualité et participer à la mise en œuvre des actions correctives
lorsque les critères de maîtrise ne sont pas respectés.
Si aucun programme de comparaison interlaboratoires formel n’est
disponible, le laboratoire doit procéder à des échanges
d’échantillons avec d’autres laboratoires. La direction du
laboratoire doit surveiller les résultats de ce mécanisme de
comparaison interlaboratoires et participer à la mise en œuvre et
à l’enregistrement des actions correctives.
Processus Analytique
Etalonnage et Vérification analytiques
Les systèmes de mesure doivent être étalonnés selon un
programme préétabli, qui vérifiera en outre la justesse de ces
systèmes. Ce programme doit être conçu et appliqué afin de
garantir que les mesures sont traçables par rapport au système
international ou toute autre référence.
Post-Analytique: Validation des
résultats
Les résultats sont soumis à une double validation.
• La validation technique doit être effectuée par le personnel
d’exécution sous la responsabilité du directeur du laboratoire,
après avoir vérifié les indicateurs de bon fonctionnement de
l’équipement biotechnique et pris connaissance des résultats du
contrôle de qualité interne, selon des instructions précises
écrites.
• La validation biologique pour s’assurer de la compatibilité des
résultats de l’ensemble des analyses pratiquées conformément
aux informations cliniques disponibles.
Le stockage du spécimen et des autres échantillons de laboratoire
doit être organisé conformément à une politique approuvée.
Post-Analytique: Expression des
résultats et comptes rendus d’analyses
L’expression des résultats doit être précise, univoque et consignée en
unités SI.
Les valeurs de référence doivent être indiquées.
La méthode d’analyse doit être mentionnée chaque fois qu’ils
peuvent influer sur l’expression du résultat.
Les comptes rendus d’analyses après validation doivent chacun
comporter :
• l’identification du laboratoire ;
• l’identité univoque du client pour les analyses ;
• la nature et la date du prélèvement et/ou du dépôt du spécimen analysé ;
• les résultats d’analyses et leur interprétation si nécessaire ;
• la date de la remise du compte rendu ;
• la signature manuscrite du directeur du laboratoire.
Post-Analytique: Transmission des
résultats
Elle doit se conformer à la législation et à la réglementation en
vigueur et doit être assurée dans le respect du secret
professionnel.
Les résultats d’analyses ne peuvent être remis qu’à l’intéressé, à
son représentant légal ou au médecin traitant.
Le directeur du laboratoire doit notifier aux services
compétents du ministère de la santé publique les cas confirmés
des maladies à déclaration obligatoire, dans les conditions
fixées par la législation et la réglementation en vigueur