LABORATOIRE Procédure de l’examen parasitologique des selles :KAOP

MOHAMMED REDACTRICE APPROBATRICE DATE D’APPLICATION

ZEFZAF
Dr : KHAFALLAL SOUKAINA Dr : BERRA MOUNA 12/10/2020
FONCTION : BIOLOGISTE FONCTION : DIRECTRICE
ASSISTANTE

1. But

 Le but de ce mode opératoire est de décrire les conditions et les différentes

étapes pour la recherche de parasites dans les selles .

2. Etendue

 Ce mode opératoire s’applique à toute demande d’examen parasitologique

des selles.

3. Responsabilité
 Le technicien responsable en microbiologie doit veiller à la mise en
application des dispositions prises dans ce mode opératoire.
4. Documents de référence
 cours de parasitologie :l’examen parasitologique des selles,département de
biologie clinique ,faculté de médecine et de pharmacie de Casablanca.
 traveaux paratiques des protozoaires 2eme annee DES de biologie clinique,
université cheikh Anta Diop, dakkar, senegale.
5. Définition
 K.A.O.P :Kystes,Amibes,Œufs ,Parasites .
 CCL : cristaux de charquot leiden.

6. Circonstances de la demande d’EPS

 L’examen parasitologique des selles (EPS) est indiqué devant

différentes situations cliniques ,épidémiologiques et radiologiques .
 Devant des signes cliniques évocateurs d’une parasitose ,il convient de
prescrire 3 EPS à 2-3 jours d’intervalle.
o Diarrhée aigue persistante plus de 3 jours malgré un traitement
symptomatique.
o Diarrhée persistante (15j) ou chronique (supérieure à 1 mois).

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 o Diarrhée glairo-sanglante chez un malade ayant séjournée dans
une zone à risque(EPS :rechercher la forme végétative d’EH).
o Devant les signes cliniques :
− Douleur abdominal
− Troubles digestifs (tel que le prurit : recherche d’helminthe
/EPS ou mieux par scotch test).
o Devant les signes biologiques :
− Anémie
− Hyperéosinophilie(supérieures à 500/mm3) :évoquer une
helminthiase.
− VS élevée :abcès amibien ou destruction tissulaire
parasitaire .
− Devant des signes radiologiques.
− Chez le sujet sujet immunodéprimé(ID) :
− En cas de VIH(+) si CD<200 :recherche de Cryptocoques et
de microsporidie.

7. Limites de l’EPS

 Il est inutile de demander l’EPS :

o Lorsque le parasite n’est pas éliminé par voie intestinale.
o Quand la ponte s’effectue dans la marge anale(oxyure) et
non pas dans l’intestin.
o Le Parasite en phase muette coprologiquement (migration
tissulaire).
o Lors d’une impasse parasitaire chez l’homme.
o Infestation trop récente (pas de reproduction).

8. Recueil des selles

8.1-La demande d’EPS
 Elle doit contenir :
o L’identification du patient :âge(+++),origine.
o Les signes cliniques
o Le résultat des examens biologiques(NFS).
o La notion d’un traitement en cours.
o L’historique d’autres EPS et leurs dates respectives :les
antécédents.
o L’heure du prélèvement et sa date.

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 8.2-Préparation du malade et recueil des selles
 c’est une étape cruciale qui conditionne la validité des résultats (si
possible fournir un imprimé contenant les instructions).

8.2-1-les règles avant l’émission des selles

 Durant le jour précédant l’EPS :régime pauvre en résidus,car surchargent

les préparations microscopiques .
 Pas de produits opaques d’examen radiologique (<4 jours).
 Eviter les antibiotiques ou antiseptiques.
 Pas de médicaments contenant le charbon,huils
laxative,suppositoires,…etc.
 Eviter les laxatifs qui diminuent la concentration des parasites.

8.2-2-Règles pendant l’émission des selles

 Eviter la souillure par les urines (lyse et altération morphologique des

parasites).
 Recueillir les selles (30-50 g de selles suffisent) :
o Dans un pot propre à fermeture hermétique et transparent.
o Emission des selles de préférence au laboratoire.

8.2-3-Règles après émission des selles

 identifier l’échantillon.
 si en dehors du laboratoire :
o acheminement rapide pour éviter la déshydratation des selles et
préserver la viabilité des parasites.
o la conservation ne se fait pas à +4°C et pas à 37 °C ( car la
température élevée dégrade les formes végétatives.
 si retard d’examen :
o <30 min :pour les selles liquides.
o 1h :pour les selles molles,divers.
 N.B :
- préférer l’émission des selles au laboratoire.
- En cas de suspicion d’helminthe :utiliser le formol à 10 % :attention il ne
permet pas la conservation des formes végétatives de protozoaires.
- En cas de suspicion d’amibes :fixation par le MIF(Methiolate-Iode-
Formol) :qui permet la conservation des formes végétatives.

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 8.3-Métériels et réactifs

 Lugol à 4%.
 l’eau physiologique.
 lames porte objet et lamelles.
 microscope optique.

9. Recherche de K.A.O.P
9.1-Principe
les principes utilisés dans ce mode opératoire consistent à identifier les
parasites soit par leurs morphologies et mobilités(formes végétatives) soit par le
contenu du cytoplasme après coloration et concentration.
9.2-Réalisation
9.2-1-Examen macroscopique
 Consistance
o Pâteuse.
o Moulée : kystes.
o Liquide.
o Diarrhéique.
 Homogénéité des selles
o Sang
o Pus
o Glaire
 Couleur
o Marron
o Noirâtre ou verdâtre
o Brunâtre
 Odeur
o Fétide ou non.
 Présence ou absence de parasites adultes :oxyure,anneau de
tenia,ascaris,douves,ert.
 N.B :
− L’examen macroscopique des selles oriente vers l’urgence de
l’examen :examiner les selles sanguinolentes –glaireuses-liquidiennes en
premier.

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 9.2-2-Examen microscopique direct
 étape essentielle de l’examen ,elle permet d’étudier :
9.2-2-1-la coprologie fonctionnelle
 étude qualitative de la digestion (fibre mal digéré).
 recherche de cristaux de Charquot Leiden(CCL) :qui traduisent la
distruction locale des PNE (helminthiase,coccidiose).(il existe un
parallélisme entre CCL et hyperéosinophilie sanguine).
 Etudier la cellularité :hématies et leucocytes=caractère invasif du
processus.
9.2-2-2-La recherche et l’identification du parasite
elle peut se faire à l’état frais ou après coloration
 Etat frais
o Prélever quelques mg de selles en superficielle et en profondeur et à
différents endroits ,surtout les zones contenant du sang,mucus ou
glaire.
o Préparer des lames couvertes de lamelles par :
− Etalement par dilution si les selles sont liquides ou
glaireuses :déposer une noisette de selles prélevès à différents endroits
sur une lame propre et recouvrir d’une lamelle.
− Etalement après dilution :déposer une goutte d’eau
physiologique sur une lame ,prélever le fragment de selles en piquant
l’anse de platine à plusieurs endroits et réaliser un mélange en tournant
l’anse dans la goutte.
o Lecture au microscope
− Parcourir méthodiquement la surface de la lamelle à l’aide de
l’objectif 10 pour repérer les éléments suspects surtout les hélminthes.
− Observer à l’objectif 40 pour rechercher des éléments de
petites tailles.
 Examen direct après coloration
o Si difficulté de l’examen direct à l’état frais
o Coloration au lugol à 4% :sur la même lame utilisée pour l’examen
à l’état frais.
− Colore la forme kystique
− Tue la forme végétative
− Colore la chromatine en foncé.
− Différencie les formes parasitaires selon leurs inclusions
(vacuole,nombre de noyaux ..).
o Coloration au MIF
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 − Conserve les formes végétatives
− Méthode de choix pour les protozoaires.
− Fixe immédiatements les formes végétatives ,permet
d’apprécier les pseudopodes
− Colore la membrane nucléaire en rouge foncé,la chromatine
est incolore et le cytoplasme en rouge clair.
o Autres coloration spécifiques :
− Ziehl Neelsen modifiée :oocystes de cryptosporidies :rose sur
fond bleu
− Coloration au trichrome :microsporidies
− Hématoxyline ferique :protozoaire :méthode de référence non
adaptée à la routine.

9.2-3-Techniques de concentration

 Méthode diphasique (physico-chimique)

o Technique de Ritchie :
- Mélanger 2-3 g de selles dans un volume de 10ml de solution de
formol dilué au 1/10e
- Tamiser à travers une passoire métallique ou filtrer à travers de la
gaze dans un verre à pied ou un tube conique.
- Laisser reposer 1 minute: gros débris sédimentent au fond
- Décanter le liquide dans un tube à centrifuger conique
- Ajouter 1/3 du volume total d’éther
- Boucher le tube et agiter de façon à obtenir une émulsion
homogène
- Centrifuger 2-5 minutes à 2500 tours/min
- 4 couches :
• Couche éthérée chargée de graisses
• Couche adhérente formée de débris lipophiles
• Couche aqueuse: liquide de dilution
• Culot contenant les parasites
− Rejeter le surnageant (3 couches supérieures) en retournant le tube
− Essuyer les parois du tube avec 1 tampon de coton ou une
compresse
− Récupérer le culot avec pipette Pasteur en ajoutant au besoin une
goutte de sérum physiologique
− Examiner le culot entre lame et lamelle
− Permet de concentrer la plupart des œufs et kystes de parasites

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 o Technique de Bailenger
− Mélanger 2-3 g de selles dans 10 X leur volume de liquide de
Bailenger (solution acéto-acétate pH 5)
− Tamiser à travers une passoire métallique ou filtrer à travers de la
gaze dans un verre à pied ou un tube conique
− Laisser reposer 1 minute: gros débris sédimentent au fond
− Décanter le liquide dans un tube à centrifuger conique
− Ajouter 1/3 du volume total d’éther 9 Technique de Bailenger
− Boucher le tube et agiter de façon à obtenir une émulsion homogène
− Centrifuger 2-5 minutes à 2500 tours/min
− 4 couches :
• Couche éthérée chargée de graisses
• Couche adhérente formée de débris lipophiles
• Couche aqueuse: liquide de dilution
• Culot contenant les parasites 10 Technique de Bailenger
− Rejeter le surnageant (3 couches supérieures) en retournant le tube
− Essuyer les parois du tube avec 1 tampon de coton ou une
compresse
− Récupérer le culot avec pipette Pasteur en ajoutant au besoin une
goutte de sérum physiologique
− Examiner le culot entre lame et lamelle
− Permet de concentrer la plupart des œufs et kystes de parasites

9.2-4-Techniques spécialisées

 Méthode de Kato Katz

o Préparation des réactifs pour la technique de Kato-katz
− 100ml eau + 100ml glycérine
− 3 gouttes de vert de malachite à 3%
− Bien mélanger les trois ingrédients et conserver en flacon en verre
brun.

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 Examen de comptage après coloration: technique de Kato-Katz
o Déterminer l’intensité de l’infection: nombre d’œufs par gramme de
selles
− faible : 1 à 4999 œufs/g
− moyenne : 5000 à 49 999 œufs/g
− forte : ≥ 50 000 œufs/g
 Méthode de Bearmann
o Méthode d’extraction basée sur les propriétés d’hygrotropisme et de
thermotropisme des larves d'anguillules
o Repose sur l’attraction des larves d’anguillules mobiles contenues
dans les selles par l’eau tiède
o Ces larves sont ensuite concentrées par sédimentation et visualisées
par microscopie
o Réalisation de la méthode d’extraction de Baermann:
− Mettre des selles sur de la gaze disposée sur une passoire
− Poser la passoire dans un entonnoir (fermé) contenant de l'eau tiède
− Laisser reposer 2-3H
− Récupérer le liquide
− Centrifuger 3 min à 1500tr/min
− Réaliser un examen microscopique sur le culot de centrifugation

9.2-5- culture mycologique

 sur milieu de Sabouraud Chloramphénicol (SC).

 elle est indiquée si présence de levures bourgeonnante en quantité
abondante à l’examen direct

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 ou lors de certaines indications comme bilan de greffe ,ID
,corticoidothérapie,immunosuppresseurs,chimiothérapie.

10. Etape post-analytique

10.1-compte rendu de l’EPS

 doit contenir les informations suivantes :

o Examen macroscopique
o Résidus de digestion :
− Fibre musculaire mal digérée ou bien digérée
− Graisses
− Amidon
− Cellulose
o Autres éléments :
− Cristaux de CCL
− Cellularité :GR,leucocytes et cellule épithéliales
− Flore bactérienne et champignons
o Parasites retrouvés :
− Protozoaires :forme végétatve et kystique
− Helminthes :les œufs
 N.B :la présence de GR et des leucocytes :rechercher le caractère
invasif :forme végétative d’Entameaba histolitica.

10.2-interprétation

 doit prendre en considération les renseignements cliniques et les

traitements utilisés.
 quelques parasites peuvent être retrouvés dans les selles sans étant
pathogènes.
 d’autres doivent obligatoirement traités.
 Parasites pouvant être retrouvés sans étant pathogènes :
o Amibes
- Entameaba(coli,hartmani,dispar)
- Endolimax nana
- Pseudolimax butshilii
o Flagellés
- Trichomonas intestinalis
o Coccidies
− Sarcocystis hominis

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 o Autres :Blastocystis hominis
 Parasites pathogènes
o Protozoaires
− Entamoeba histolitica
− Giardia intestinalis
− Isospora bili
− Cyclospora
− Cryptosporidies
o Helminthes
 Suivi d’un malade ayant un EPS + :
Après traitement refaire l’EPS de contrôl 2 à 6 semaines

10.3-délai de réponse

 dans la journée pour la plupart des cas

 24 à 48h en cas de culture mycologique

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