Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche scientifique
Université ABDERRAHMANE MIRA de Bejaïa
Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie
Département de Biologie Physico –Chimique M2
Biochimie Fondamental
Compte rendu TP 2 : Dosage colorimétrique des
protéines sériques par la méthode du biuret.
Réaliser par :
Ouahrani ismahane
Moussaoui lydia
Kassouri naoual
ANNEE UNIVERSITAIRE : 2023 - 2024
I. Introduction :
Le dosage colorimétrique des protéines sériques par la méthode de biuret est
une technique couramment employée en biochimie pour évaluer la
concentration des protéines dans un échantillon. Cette méthode repose sur la
formation d'un complexe coloré entre les liaisons peptidiques des protéines et
le réactif de biuret en milieu alcalin. La couleur mauve à violette développée
lors de cette réaction est mesurée à une longueur d'onde spécifique, offrant
ainsi une base quantitative pour la détermination des concentrations
protéiques.
Ce travail expérimental vise à appliquer la méthode du biuret pour quantifier
les concentrations de protéines sériques dans des échantillons inconnus. En
utilisant une gamme étalon avec du sérum albumine bovine (BSA), nous
établirons une courbe d'étalonnage pour interpoler les concentrations
inconnues. Ces résultats auront des implications importantes dans des
domaines tels que la recherche biomédicale, où la mesure précise des protéines
sériques est cruciale pour la compréhension des processus physiologiques et
des pathologies associées.
II. But de TP :
Quantifier la concentration de protéines sériques en utilisant la méthode
colorimétrique de Biuret, qui forme un complexe coloré proportionnel à la
concentration en protéines
III. Principe : En milieu alcalin, les protéines contenant au moins 4
liaisons peptidiques réagissent avec le réactif du Biuret pour former
un complexe coloré mauve à violet, avec une absorption maximale à
540-550 nm. Les ions Cu²⁺ ajoutés sous forme de sulfate de cuivre se
lient aux atomes d'azote des liaisons peptidiques dans des conditions
de pH alcalin, produisant ce complexe. La méthode tire son nom de la
structure du biuret (NH₂-CO-NH-CO-NH₂), qui favorise
spécifiquement cette réaction. L'intensité de la coloration est
proportionnelle à la concentration en protéines.
IV. Matériels Utilisé :
1. Échantillons de protéines sériques
2. Sérum Albumine Bovine (BSA)
3. Réactif de Biuret
4. Sulfate de Cuivre (II)
5. Solution de NaCl 0,9%
6. Tubes à Hémolyse ou Tubes Eppendorf
7. Spectrophotomètre
8. Tube à Essai
9. Pipettes
10. Incubateur
11. Cuvettes ou Tubes pour Spectrophotomètre
Mode opératoire :
Préparation d’une gamme étalant de BSA (Bovine Sérum Albumine).
- Réalise des dilutions de 2 en 2 avec du NaCl 0,9%. À partir de
l’échantillon standard de départ.
- A partir de la solution étalant de BSA à 64g/l, réaliser une gamme de 6
tubes eppendorf (tubes 1 à 6) contenant de 2 à 64g/l de BSA par tube.
- Préparer en même temps les tubes expérimentaux qui contiendront une
prise d’essai de sérum de concentration inconnue en protéines (tubes 7-
8).
Réalisation de la réaction de Biuret pour la courbe standard, le blanc et
les échantillons inconnus.
- Prélever de chaque tube eppendorf, un volume de 20 µL de la solution
standard (BSA) ou de l'échantillon et déposer dans un tube à hémolyse.
- Ajoutez dans chaque tube a hémolyse un millilitre de réactif de biuret.
- Incuber pendant 15 minutes à température ambiante et à l'obscurité.
- Lire les absorbances à 540 nm.
Résultas :
Tube 0 1 2 3 4 5 6 P1 P2
Volume de 0 35 35 35 35 35 35
solution BSA
a 64 g/l (ul)
Volume deau 20 35 35 35 35 35 0
physiologique
(ul)
Concentration 0 2 4 8 16 32 64
de la BSA (ul)
Volume de la 0 20 20 20 20 20 20
BSA
Volume de 20 20
sérum (ul)
Réactif de
Biuret
Absorbance 0.347 0.380 0.423 0.485 0.524 0.580 0.789 0.714 0.593
a 540 nm
Courbe d’étalonnage :
Conclusion :
La méthode du Biuret s'est avérée efficace pour déterminer les concentrations en
protéines sériques. Les résultats pour les échantillons inconnus indiquent des
concentrations respectives de 34 g/L et 56 g/L. Cette méthode offre une approche
fiable et reproductible pour le dosage colorimétrique des protéines, ouvrant des
perspectives dans divers domaines de recherche biologique et médicale.
Cependant, il est important de noter que l'exactitude des résultats dépend de la
précision des étalons utilisés et de la technique expérimentale. Des investigations
ultérieures pourraient explorer des adaptations ou des améliorations potentielles
de la méthode.