République Algérienne Démocratique et Populaire
Ministère de l’enseignement supérieur et de la recherche scientifique
Ecole Nationale Polytechnique de Constantine
Département du Génie des Procédés
Constantine, le 31/10/2022
Compte-rendu : MICROBIOLOGIE
TP n°1:
« DÉNOMBREMENT BACTÉRIES SUR GÉLOSE
NUTRITIVE ORDINAIRE »
Groupe : BETCH SOUHILA
BAHOUH INSAF
CHAABNA RANIA WISSAL
GHOUMRIENE HANADI
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1. Introduction :
Les bactéries sont des microbes, des germes, au même titre que les virus ou les parasites. Elles
peuvent devenir pathogènes dans certaines [Link] dernières incubent dans un milieu de
culture , il ya plusieurs milieux de culture comme gélose nutritive . La gélose
nutritive est dépourvu d'indicateur, d'agent sélectif, d'ingrédients différentiels et de substances
enrichissantes, donc utilise pour une meilleure expression de la pigmentation, test biochimique
et même pour le sérotypage.
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2. But et principe de la manipulation :
Cette manipulation a pour but de déterminer le nombre de micro-organismes en se basant sur le
nombre de colonies observées dans la boîte de pétri, en suivant les instructions suivantes :
- Ensemencement d’un échantillon(viande hachée) par mélange à un milieu de culture défini,
dans une boîte de pétri.
- Incubation de la boite ensemencée à 37°c durant 48h.
- Dénombrement du nombre de colonies observées dans la boîte de pétri.
3. Appareillage et verrerie :
- Enceinte thermostatée à 37°c.
- 6 boîtes de pétri.
- Pipettes stériles. - micropipette
- Bain d’eau thermostatée.
- tubes d'eau distillée stériles
Enceinte thermostatée à 37°c
Bain d’eau thermostatée.
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Micropipette pipettes steriles
- boîte de pétri.
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tube a essai
[Link] de culture :
.Gélose nutritive normale ou ordinaire
5. Mode opératoire :
Etape I : Ensemencement :
- Bien agiter l’échantillon.
- A l’aide d’une pipette on prend 1ml de l’échantillon et on la met dans une boîte de pétri.
- On fait couler le milieu fondu dans la boîte de pétri.
- On mélange le milieu et l’inoculum jusqu’à obtenir une répartition homogène.
- On laisse la boîte de pétri se solidifier.
Etape II : Incubation :
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On place la boîte de pétri préparée dans une enceinte thermostatée à 37°c pendant 48h.
Etape III : Dénombrement des colonies :
On compte le nombre des colonies observées par un compteur de colonies dans chaque boîte
pétri puis on détermine le nombre de bactéries par ml d’eau.
4. Résultats expérimentaux :
Volume de Solution Solution Solution Solution
l’inoculum diluée 10-1 diluée 10-2 diluée 10-3 diluée 10-4
(1 ml)
Nombre de 550 179 114 9
colonies
6
10-1 10-2
10-3 10-4
6.Réponses aux questions :
a) On a choisi la gélose nutritive comme milieu de culture car c’est un milieu non sélectif
contenant les sources de nutrition nécessaire pour la culture des microorganismes. Cet isolement
nous permet aussi de les étudier séparément.
b) La méthode d’ensemencement utilisée est l’inondation (la technique des quadrants).
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Il existe aussi d’autres méthodes d’ensemencement, on cite :
- L’ensemencement en Strie.
- L‘incorporation.
- Ensemencement d’un bouillon.
- Ensemencement en tapis.
- Ensemencement sur un milieu solide.
- Ensemencement sur un milieu liquide.
c-
V d n3 n2 ∑c UFC/mL
−2
1 10 1 1 293 26636,36
Donc on trouve N=26636,36 UFC/mL
Selon les normes Algerienne on peut utulisee ce produit car notre valeur est inferieur a 5*
5
10 UFC /g .
Conclusion : Le but des techniques de numération (ou dénombrement) est de déterminer la concentration en
bactéries contenues dans une préparation initiale. Elles nécessitent une ou plusieurs dilutions décimales (au
dixième). Elles peuvent se réaliser :
• en milieu solide , en surface ou dans la masse et en milieu liquide
Et dans notre tp on a choisis le principe des dilutions . Ce dernier et la meillieure methode pour determiner le
nombre de colonies