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Grossissement et résolution en microscopie

Le document décrit le fonctionnement du microscope optique et les principes de la microscopie comme la résolution, le grossissement et leur limite. Il présente également la formule pour calculer le pouvoir séparateur d'un microscope.

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Abderrahmane Lakhdar Toumi
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TP1 : Analyse de surfaces par la technique de microscopie

Le microscope optique est le plus connu, le plus ancien, des microscopes, qui utilise :

Principe de fonctionnement:

- Un objectif effectue le grossissement primaire et


donne une image réelle.
- Un oculaire effectue le grossissement secondaire.
Il permet à l’œil de former une
image virtuelle agrandie de l’image réelle formée
par la lentille de l’objectif.
- Un condenseur qui concentre la lumière sur
l’objet

Pouvoir séparateur ou limite de résolution


Est la plus petite distance séparant deux points voisins que l'on peut distinguer à l'aide du microscope. La limite
de détection D peut se calculer d’après la formule suivante :
D = 0,61 λ / n . sin α
D = pouvoir séparateur
λ = longueur d’onde du rayonnement utilisé
α= demi angle d’ouverture de l’objectif
n = indice de réfraction du milieu transparent qui sépare l’objet de l’objectif

Le pouvoir de résolution est une propriété de l’instrument, et c’est une valeur absolue et théorique.
La résolution sera toujours égale ou inférieure au pouvoir de résolution, et c’est une valeur qui va dépendre des
conditions expérimentales d’observation.
Le pouvoir résolutif de l’œil humain correspond à des conditions de vue moyenne est : de 250µm
Critère de résolution d’Abbe
Le caractère ondulatoire de la lumière pose des limites dans la taille des détails qui peuvent être observés. Abbe
(1893) a montré que le plus petit détail « discernable » correspond à ½ de la longueur d’onde utilisée pour
l’observer. Donc la moitié de la longueur d’onde correspond au pouvoir de résolution ultime que peut donner un
Instrument.

Microscopie Optique λ= 500 nm donc sa résolution ultime est ~ 250 nm

Grossissement limite Ainsi, pour la microscopie optique, avec


Le plus grand grossissement que puisse produire un instrument un pouvoir de résolution de 0.25µm.
est limité par la relation suivante: Le grossissement limite (utile) est de :

Pouvoir de résolution de l’œil ~250µm ÷ 0.25µm = 1000X


Grossissement limite = -----------------------------------------
Pouvoir de résolution du microscope
Taille d’un objet photographié

:
Pour chaque cliché :

1. Calculé la dimension réel d’une zone agrandi,


de votre choix en précisant votre choix par
une bordure de cette zone
2. Calculé le grossissement x……utilisé pour
chaque cliché de microscopie
3. Le quelle de ces clichés est obtenue avec un
microscope de très haute résolution (avec
justification de calcule)

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