TP
: Effet des UV sur une souche de levure Ade2
Mélanomes et carcinomes sont des cancers de la peau en augmentation ; ils sont
souvent liés à une exposition plus ou moins longue de la peau au soleil ce qui
entraine des brulures graves et des lésions irrémédiables suite à une modification de
l’ADN.
Pour montrer l’effet mutagène des UV, nous allons travailler avec un organisme
unicellulaire, la levure. C’est un champignon unicellulaire qui en se multipliant par
mitose donne un clone.
La souche de levure utilisée est ade2, de couleur rouge. Ces levures
peuvent muter et devenir blanches
1. Proposer une expérience mettant en évidence l’effet mutagène des UV sue
les levures ade2.
- On réalise l’irradiation aux UV d’une boîte de pétri contenant de la levure
ade2.
- Le but est d’observer la mutation des levures après l’irradiation d’UV.
- Etapes : ensemencement d’une boîte de pétri avec une souche de levure
ade2, de couleur rouge, puis irradiation dans la mutabox aux UV pour des
durées différentes d’exposition (0,5,10 et 20 secondes). On laisse la boîte de
pétri pendant une semaine puis on observe le développement des levures et
les anomalies dues à la mutation (ici un changement de couleur : colonies
blanches)
2. Manipulation expérimentale : suivre le protocole joint.
3. Résultats expérimentaux :
On s’intéresse au nombre de colonies blanches se développant sur la boite ainsi
qu’au nombre total de levures.
Temps Nombre de Nombre de Pourcentage de Nombre total de
d’exposition aux colonies colonies colonies blanches colonies
UV blanches rouges
(en s)
0 0 3000 0% 3000
10 17 1733 <1% 1750
20 28 597 4,5% 625
40 10 115 8% 125
60 9 51 15% 60
4. Exploitation des résultats :
a) Sur un même graphique tracer l’évolution du nombre de colonies blanches en %, et du
nombre total de colonies en fonction des durées d’exposition aux UV.
Evolution du nombre de colonies blanches et du nombre total de
nombre total de colonies en fonction des durées d'exposition aux UV colonies
colonies blanches (en %)
3500 16
3000 14
2500 12
10
2000
8
1500
6
1000 4
500 2
0 0
0 10 20 30 40 50 60
temps (en s)
colonies colonies blanches
b) Conclure quant aux effets des UV sur les levures.
Les UV tue les colonies, leur nombre total et donc le nombre de colonies rouges
diminue ainsi considérablement. Les colonies blanches en revanche augmentent
lorsque l’irradiation n’est pas trop longue (≥20secondes), ensuite leur nombre va
également diminuer, mais leur proportion au sein de toutes les colonies poursuit son
augmentation.
c) A l’aide du logiciel ANAGENE, ouvrir les séquences des allèles responsables de la
couleur des levures ade2 (allèles 1 et 2) :
télécharger/ anagène/fichier/ouvrir/ chercher les séquences dans téléchargement
- comparer ces séquences : comparaison simple, puis comparaison avec discontinuité.
- (traduire les séquences en acides aminés)
- observer et conclure.
(Vous pouvez copier une partie significative du traitement de ces séquences pour
illustrer votre compte rendu).
On observe des différences sur les deux séquences du gène responsable de la
couleur des levures : un changement de nucléotide sur l’ADN muté (un nucléotide G
a été remplacé par un nucléotide T) ce qui fait apparaitre un codon stop UAA sur
l’ARN, la protéine ne sera donc plus synthétisée correctement (arrêt prématuré de la
traduction) : la cellule ne fonctionne plus normalement (l’expression des gènes est
différente car la synthèse protéique est perturbée).
L’information génétique est donc modifiée et l’organisme ayant subi la mutation a
désormais un allèle du gène Ade 2.
d) Comment peut-on expliquer l’action des UV sur la population de levures étudiée ?
Les UV provoquent une mutation des levures et vont modifier leur ADN, ce qui fait
apparaitre un nouvel allèle du gène Ade 2. Ce nouvel allèle est responsable de la
coloration des levures en blanc, les protéines désormais synthétisée exprimeront le
gène de l’allèle modifié et les levures seront blanches.
Doc de référence origine de la couleur des levures