BIOLOGIE DU

DÉVELOPPEMENT
PCEM1 PARIS DESCARTES
2007-2008

JEREMY DO CAO
I- Les étapes du développement
1) Les principales étapes de l’embryogenèse .............................................................................1
2) Les caractéristiques de la différenciation cellulaire .................................................................2
3) Les caractères généraux de l’œuf fécondé .............................................................................3
4) Les différents types de segmentation......................................................................................4
5) Les plans de coupes histologiques .........................................................................................4

II- Embryologie descriptive : développement des amphibiens

1) L’œuf d’amphibien ...................................................................................................................5
1.1 Description de l’œuf ...................................................................................................................... 5
1.2 Rotation d’orientation .................................................................................................................... 6
1.3 Rotation de symétrisation (ou corticale)........................................................................................ 6
2) L’embryogenèse ......................................................................................................................7
2.1 Segmentation ................................................................................................................................ 7
2.2 Transition blastuléenne ................................................................................................................. 8
2.3 Blastula ......................................................................................................................................... 9
2.4 Gastrulation................................................................................................................................. 12
a. Initiation de la gastrulation ..................................................................................................................... 12
b. Carte des territoires présomptifs ............................................................................................................ 13
c. Mouvements de la gastrulation .............................................................................................................. 15
d. Fin de gastrulation (fente blastoporale) ................................................................................................. 17
2.5 Neurulation.................................................................................................................................. 18
a. Neurectoderme ...................................................................................................................................... 18
b. Mésoderme ............................................................................................................................................ 18
c. Endoderme............................................................................................................................................. 18
d. Stade bourgeon caudal .......................................................................................................................... 18

III- Embryologie Expérimentale

1) Expériences in vitro ...............................................................................................................20
2) Expérience de Nieuwkoop.....................................................................................................21
3) Expérience de Spemann .......................................................................................................21
4) Recherche des molécules inductrices ...................................................................................22
4.1 Technique in vitro........................................................................................................................ 22
4.2 Technique in vivo ........................................................................................................................ 22
4.3 Stratégies de « perte de fonction » ............................................................................................. 23
a. Injection d’ARN antisens ........................................................................................................................ 23
b. Expression de dominants négatifs ......................................................................................................... 23

IV- Induction et régionalisation du mésoderme

1) Trois grands types de molécules sont impliqués...................................................................24
1.1 Facteurs de croissance ............................................................................................................... 23
1.2 Facteurs de Transcription ........................................................................................................... 26
1.3 Déterminants cytoplasmiques (œuf de xénope) ......................................................................... 26
2) Induction du mésoderme .......................................................................................................27
2.1 Rôle de la !-caténine .................................................................................................................. 27
2.2 Rôle de Vg1 ................................................................................................................................ 28
2.3 Théorie des trois signaux… ........................................................................................................ 29
2.4 Gastrulation – réalisation du patron mésodermique ................................................................... 30

V- Mise en place du neurectoderme

1) Induction du neurectoderme..................................................................................................31
2) Détermination et régionalisation du tube neural ....................................................................31
3) Organogenèse.......................................................................................................................32
Notes
Cet ensemble de 32 pages sur la biologie du développement a été rédigé avec les
cours du Pr. Chanoine à Paris Descartes, durant l’année 2007-2008.
Le cours de biologie du développement variant énormément d’année en année, il est
important de se référer aux cours magistraux ainsi qu’aux diapositives pour le
concours.
Le concours 2007-2008 de Biologie est tombé sur une unique protéine, l’ectine, et
portait sur le mode de fonctionnement des FGF (voir cours sur le cycle cellulaire) et en
très grande partie sur celui des TGF-! (IV-§2.1, p. 24).
Il a donc été considéré pour beaucoup comme « ne portant que sur la bio du dev ».
Attention, donc, à ne pas négliger cette partie du cours, même si elle n’est abordé que
lors de la dernière semaine.
Ce cours a été rédigé par Jeremy Do Cao. Il a été conçu de façon à être imprimé recto-
verso (sauvons des arbres !), et contient en annexes quelques fiches de bio cell et
d’anatomie.
Le V-§2 a été emprunté du texte de Benjamin Coyac*. J’espère qu’il ne m’en veut pas.
Je vous donne ce cours, prévenez moi si vous le faites passer à d’autres gens.
Vous savez où me trouver.
Plein de bisous.

* Les fiches de Benjamin Coyac sont ici : [Link]

 Biologie du Développement
PCEM1 – Médecine Paris Descartes

I- Les étapes du développement

Le développement est caractérisé par deux phases principales : l’embryogenèse et la période

fonctionnelle.

1) Les principales étapes de l’embryogenèse

L’embryogenèse commence avec la formation du zygote lors de la fécondation.

Ce zygote est totipotent, il possède tous les moyens pour former un individu adulte. Le zygote entre
ensuite dans une phase de segmentation, où il passe d’un état unicellulaire à un état pluricellulaire.
Durant cette phase, il y a peu ou pas d’expression du génome.
Le début de la morphogenèse est la phase de gastrulation, qui est une étape clé de l’embryogénèse. On a
alors expression du génome dans certaines cellules. Lors de cette gastrulation, on passe d’un embryon
pluricellulaire à un embryon tridermique (composé de trois feuillets distincts), c'est-à-dire d’une phase
cellulaire à une phase tissulaire. Chacun des feuillets est à l’origine de cellules spécifiques. Puis, lors de
l’organogenèse (mise en place progressive des différents organes), on s’intéressera à la neurulation,
première période de l’organogenèse.

La période fonctionnelle correspond à l’édification de l’organisme adulte : c’est un développement post-

natal.

Le zygote entre en phase de segmentation, c’est-à-dire de

multiplication. Cette segmentation est caractérisée par des
cycles cellulaires courts : les cellules n’expriment pas leurs
potentiels.
Lors de la segmentation, le zygote passe au stade de
blastula, embryon monodermique pluricellulaire. On ne
remarque toutefois pas d’augmentation de volume : lors
de la segmentation, les blastomères deviennent de plus en
plus petites. L’embryon se creuse d’une cavité : le
blastocœle, qui permettra la gastrulation.

La gastrulation est caractérisée par l’allongement des

cycles cellulaires (l’embryon exprime sa potentialité), mais
aussi par des interactions cellulaires importantes : le
blastocœle permet des mouvements cellulaires
(mouvements amibiens et de reptation). Cela conduit à la
spécialisation cellulaire et la mise en place des trois
feuillets : à la périphérie, l’ectoderme (à l’origine de
l’épiderme, du neuroctoderme); au centre, l’endoderme
(jaune ou vert, à l’origine du tube digestif); et entre les
deux, le mésoderme (muscles squelletiques, derme, ...) qui
est le résultat de phénomènes d’induction.

L’induction concerne un groupe de cellules dont le devenir est fixé de manière irréversible. Le
territoire endodermique secrète des molécules inductrices dans le milieu extérieur (facteurs de
croissances), qui vont jouer sur des cellules réceptrices, dites compétentes. Ce sont les cellules de
l’ectoderme : elles réagissent à un signal inducteur, et deviennent déterminées (formation du
mésoderme).

Biologie du Développement – Jeremy DC 1

Suite à la gastrulation, on obtient un embryon tridermique et l’organogenèse s’engage avec la
neurulation : c’est la mise en place du tube neural.

Les mécanismes essentiels de construction de l’organisme pluricellulaire sont :

- la prolifération cellulaire (la multiplication par mitoses successives : cycles très courts, reflet de
l’inexpression du génôme, essentiel pour la segmentation)
- puis lors de la gastrulation, les mouvements cellulaires. En se déplaçant les uns par rapport aux
autres, les cellules interagissent entre elles par des phénomènes d’induction.

2) Les caractéristiques de la différenciation cellulaire

L’état différencié est un état stable, dans lequel la cellule est dans un cycle long voire inexistant (G0).
Elle ne peut pas revenir à l’état indifférenciée.
Cette différenciation est le résultat de deux types de mécanismes fondamentaux : l’existence de
déterminants cytoplasmiques (protéines, ARN, complexes ribonucléiques, localisés dans une région
particulière du cytoplasme) et d’interactions cellulaires, impliquées dans des phénomènes d’induction.

Division asymétrique

Au cours de la division cellulaire, il peut y avoir une répartition hétérogène du contenu cytoplasmique :
une cellule va hériter du déterminant cytoplasmique alors que l’autre non. Si ce déterminant est un facteur
de transcription, alors une cellule pourra réguler l’expression d’un gène grace à ce facteur de
transcription, l’autre cellule ne le pourra pas. On parle de division asymétrique.

La différenciation est caractérisée par l’activation et par la répression de gènes spécifiques, qui
implique l’utilisation de facteurs de transcription. Pour cela, la chromatine doit être dans un état de
permissivité (fibre décondensée) afin que ce facteur puisse se lier à l’ADN et qu’il y ait
expression/répression du gène. Ainsi, la notion de remodelage de la chromatine est essentielle.

Ce remodelage s’effectue à l’aide de différentes enzymes :

- HAT (Histones Acétyl-Transférases),
- HDAC (Histones Désacétylases),
- Méthylases et Enzymes de méthylation.
On rappelle que l’acétylation des histones permet la décondensation de la fibre chromatinienne
(activation des gènes), et que la méthylation au niveau des cytosines du promoteur entraîne la répression
du gène.

Biologie du Développement – Jeremy DC 2

 3) Les caractères généraux de l’œuf fécondé

Le zygote est polaire, totipotent, et possède de nombreuses réserves cytoplasmiques.

La cellule totipotente peut donner naissance à tout type cellulaire d’un organisme, voire à un organisme
entier. En cela, le zygote est la cellule totipotente par excellence.
Il possède un indice mitotique élevé : les cycles cellulaires sont courts, donc il y a très peu ou pas
d’expression des gènes de la cellule.
La cellule totipotente ne présente évidemment pas de caractère morphologique spécialisé.
Le génome est largement inexprimé, mais peut répondre très rapidement à des mécanismes de
contrôle (fibre décondensée) de telle façon à ce que dans un environnement nouveau, les cellules peuvent
se réadapter très rapidement.

Exemple chez l’oursin et chez la souris :

Au stade 4 cellules, on peut séparer les quatre blastomères et chacun des blastomères, isolé, peut former
une larve pluteus : on rend compte d’une régulation des déficiences.

Au contraire, chez les souris (et les mammifères en général) : au stade 8 cellules, on peut prélever deux
embryons chez deux femelles en gestation, et associer ces 16 blastomères dans un milieu adéquat. Si on
laisse le développement aller jusqu’au stade blastocyste, et que l’on réimplante cet embryon dans une
souris pseudo-gestante, il y a alors un développement harmonieux de l’embryon : le souriceau paraît
normal, mais il est en réalité chimère. (Au niveau de tout les tissus, des cellules proviennent de l’un des
deux embryons de départ). Il y a eu régulation des excédents.

D’autre part, les œufs (fécondés ou non), présentent une polarité : d’un côté on définit le pôle animal
(lieu d’expulsion des globules polaires) et de l’autre, le pôle végétatif.

Toute une série de réserves s’est accumulée pendant l’ovogenèse. C’est, d’une manière générale, le
vitellus (la grande partie des réserves vitellines étant d’origine exogène). Ces répartitions en réserves
peuvent être hétérogènes.
La composition en vitellus est essentielle pour la segmentation, qui sera faite en fonction de sa
répartition.

Ainsi on définit différents types d’œufs :

- les oligolécithes (oursins) sont très pauvres en réserves,
- les hétérolécithes (amphibiens) possèdent des réserves, mais réparties de manière inégale,
- les télolécithes (oiseaux et poissons), sont riches en réserves,
- les alécithes (mammifères placentaires), qui ne possèdent pas de réserves (échanges entre la mère
et l’enfant via le placenta).

Biologie du Développement – Jeremy DC 3

 4) Les différents types de segmentation

Elle se fait en fonction des réserves vitellines :

• Segmentation totale ou holoblastique : elle se fait dans le cas des œufs oligolécithes,
hétérolécithes, et alécithes.
• Segmentation partielle (méroblastique) dans le cas des œufs télolécithes. Chez les poules, cela
correspond au jaune d’œuf (réserves protéiques).
Plus un blastomère est riche en vitellus, plus il va avoir du mal à se diviser, cela pour des raisons
mécaniques.

On observe, de plus, deux types de segmentations totales :

- la segmentation radiaire, où les plans de segmentation sont tour à tour méridiens et
latitudinaux,
- la segmentation spirale (chez le mollusque en particulier).

5) Les plans de coupes histologiques

La coupe méridienne passe par le pôle animal et le pôle végétatif,

La latitudinale est perpendiculaire à l’axe des deux pôles,
L’équatoriale est un cas particulier de la coupe latitudinale, passant à équidistance des deux pôles
(équateur).

La coupe sagittale passe par le plan de symétrie bilatérale,

La coupe parasagittale est parallèle à la coupe sagittale,
La coupe transversale est perpendiculaire à la coupe sagittale,
La coupe frontale est perpendiculaire au plan sagittal, passant par l’axe céphalo-caudal.

Biologie du Développement – Jeremy DC 4

II- Embryologie descriptive : développement des amphibiens
1) L’œuf d’amphibien

Deux modèles d’études existent :

- les amphibiens urodèles (pleurodeles watlii), qui gardent leur nageoire caudale toute leur vie,
- les xénopes, qui connaissent une réduction de leur nageoire caudale.

La fécondation chez les amphibiens

L’œuf est très volumineux (1,5mm), la fécondation et le développement se passent dans l’eau. C’est donc
un modèle facile à étudier.
Chez le pleurodèle, le mâle arrive sous la femelle, l’accroche par les bras et entame sa danse nuptiale,
qui dure quelques heures. La fécondation est externe : le mâle dépose ses spermatozoïde (spermatophore)
sur le sol, et la femelle dépose des chapelets de 200 à 400 œufs non fécondés dessus(ovocytes II bloqués
en métaphase II). On observe déjà une polarité des ces œufs, l’hémisphère pigmenté correspondant au
pôle animal.
Ces ovocytes II sont entourés de plusieurs enveloppes protectrices : notamment, une gangue gélatineuse
commune, formés de mucopolysaccharides (polysaccharides qui se sont accumulés à l’ovocyte à mesure
de son trajet dans les voies génitales femelles).
On met aussi en évidence une gangue de même composition, autour de chaque œuf, la coque.
Puis il y a une troisième couche protectrice, le chorion (représenté généralement en bleu), étroitement
accolée à la membrane plasmique de l’ovocyte. Ce chorion est constitué de polysaccharides, ayant pour
origine les cellules folliculaires, au niveau de l’ovaire (il correspond à la zone pellucide).

1.1 Description de l’œuf

Coupe méridienne xx

On peut observer sur l’œuf une pigmentation hétérogène ;

Une première tâche de maturation dépigmentée au pôle animal, correspondant au lieu d’expulsion du
premier globule polaire (ainsi que celui du deuxième GP) ;
On met en évidence des enveloppes protectrices : le chorion, la coque et la gangue ; et surtout deux
gradients opposés :
- le gradient vitellin (plaquettes vitellines composées à plus de 80% de deux protéines : la
lipovitelline et la phosvitine), croissant du pôle animal vers le pôle végétatif,
- le gradient ribosomal [ribonucléoprotéique : ARN] (révélable au bleu de toluidine), croissant du
pôle végétatif vers le pôle animal.

C’est le cytoplasme cortical qui est pigmenté, juste sous la membrane plasmique, au niveau de
l’hémisphère animal.
On met aussi en évidence la plaque métaphasique (blocage en métaphase II), disposée tangentiellement
à la membrane plasmique, juste sous la région de la tâche de maturation. Il n’y a pas de vésicule
germinative (correspondant au noyau).

Biologie du Développement – Jeremy DC 5

Au moment de la fécondation, l’impact du spermatozoïde s’effectue toujours dans l’hémisphère animal
de l’ovocyte II. Cela provoque une série de réactions : les réactions d’activation.

1.2 Rotation d’orientation

D’une manière générale, la rotation d’orientation se produit dès les

10 premières minutes qui suivent la rencontre avec le spermatozoïde.

Les ovocytes II n’ont pas d’orientation particulière. Au moment de

la rencontre des deux gamètes, au niveau du pôle animal, il y a une
réaction d’activation : exocytose de granules corticaux, ce qui
entraîne une sortie d’eau, et la membrane plasmique se décolle
alors du chorion. Un espace périvitellin s’est formé entre la
membrane plasmique et la zone pellucide.
L’ovocyte s’oriente alors suivant la gravité : l’hémisphère végétatif,
riche en vitellus, est plus lourde et donc orientée vers le bas.
C’est le premier critère de fécondation.

1.3 Rotation de symétrisation (ou corticale)

Elle s’effectue 30 minutes après l’impact du spermatozoïde. Ce n’est pas

une rotation de l’œuf, mais une rotation des pigments corticaux.
Dans 60% des cas, la bascule pigmentaire se fait vers le point d’impact
du spermatozoïde.
En même temps, il y a reprise de la deuxième division de méïose et
expulsion du deuxième globule polaire. Cette expulsion se fait au niveau
de la tâche de maturation, qui disparaît avec la symétrisation : il y a
apparition d’un croissant dépigmenté (le croissant gris chez le
xénope). Ce croissant dépigmenté correspond à la région dorsale de
l’embryon.
On a donc mise en place de l’axe de symétrie bilatéral (antéro-
postérieur), dès la 30ème minute : cela est très précoce chez l’amphibien.

Dans 40% des cas, la rotation de symétrisation se fait de manière

aléatoire.
Cette rotation de symétrisation constitue un deuxième critère de
fécondation.

Biologie du Développement – Jeremy DC 6

 2) L’embryogenèse
2.1 Segmentation

Chez les amphibiens, elle dure 24h à 18°C (température de référence).

La segmentation est totale, holoblastique : l’intégralité de l’œuf se segmente ; elle est inégale, et cela dès
le troisième cycle. Ceci est le reflet du caractère hétérolécithe de l’œuf : l’hémisphère végétatif, plus
riche en vitellin, subit une segmentation plus lente.

Le premier plan de clivage passe toujours par le pôle végétatif et le pôle animal, il est méridien. Dans
50% des cas, le plan de clivage passe par le plan de symétrie bilatérale (formant deux hémi-embryons).
Sinon, cela se fait au hasard.

Le deuxième, perpendiculaire au premier, est aussi méridien (segmentation radiaire).

Le troisième plan de segmentation est latitudinal, sus-équatorial. Cela est du à la présence de réserves
vitellines extrêmement importantes au niveau végétatif : à partir de maintenant, la segmentation est
inégale.

Les blastomères sont classés selon deux types de cellules :

- les micromères, cellules de l’hémisphère animal, pauvres en réserves vitellines : ils vont se
segmenter plus rapidement (cycles cellulaires courts) ;
- les macromères, cellules de l’hémisphère végétatif, riches en vitellus : ils vont se diviser plus
difficilement pour des raisons mécaniques (cycles cellulaires longs).

! A ce stade de la segmentation, il y a toujours aucune expression des gènes.

Au terme de ces 24h, il y a eu 12 à 14 cycles cellulaires, ce qui donne un embryon pluricellulaire

caractérisé par 6 000 à 10 000 blastomères. Le volume de l’embryon n’a pas augmenté : au terme des
différentes divisions de mitose, les blastomères sont donc de plus en plus petits.
La segmentation est donc totale, inégale et radiaire.

2.2 Transition blastuléenne

Biologie du Développement – Jeremy DC 7

Au début de la segmentation, les cellules sont en phase synchrone, avec des cycles courts d’environ
80min pour les 9 premières divisions, chez l’amphibien pleurodèle. Il n’y a alors pas d’expression du
génome, les phases G1 et G2 sont inexistantes.
A partir du 10ème cycle, l’embryon entre dans une phase asynchrone : dans certaines cellules, le cycle
commence à s’allonger, les phases G1 et G2 apparaissent. C’est le reflet du début de l’expression du
génome embryonnaire : c’est la transition blastuléenne ou la mi-blastula.

Avant la transition blastuléenne, il n’y a pas d’expression du génome. Les fibres chromatiniennes sont
pourtant peu condensée : il n’y a pas d’hétérochromatinisation, mais une répression des gènes (à
l’origine de la totipotence).

Le recrutement d’histones désacétylases (HDAC) au niveau du promoteur des gènes participe à

l’inactivation de la chromatine de l’embryon à partir de la transition blastuléenne.
Deux grands mécanismes permettent aux gènes embryonnaires d’être ainsi réprimés :

- la méthylation intervient dès l’œuf fécondé. Il y a une activité très importante d’ADN
Méthyltransférase : reconnaissance des boîtes C-G au niveau des promoteurs (XDnmtl) méthylés,
reconnus par des facteurs de transcription : en l’occurrence, ces facteurs de transcription sont des
répresseurs.
Cas de la protéine KAISO : facteur de transcription répresseur à domaine MBD (methyl-
CpG-binding domain), qui vient reconnaître des séquences d’ADN méthylés. Kaiso se fixe
à une région cis méthylée, et recrute par des interactions protéines-protéines des HDACs.
Cela entraîne la désacétylation des histones et la répression de la transcription de
nombreux gènes avant la transition blastuléenne (empêchant le déplacement des ARN
Polymérases).
Puis, la déméthylation de l’ADN lèverait la répression.

- dans le cas de l’ADN non méthylé, il existe des co-répresseurs de la transcription.

Cas de la protéine Groucho : le gène codant pour la protéine Siamois est réprimé par un
mécanisme méthylation-indépendant : un facteur de transcription, Tcf-3, vient se fixer sur
le promoteur du gène. Tcf-3 est une protéine possédant le domaine HMG (80 aa),
nécessaire à son association avec l’ADN.
Tcf-3 n’est cependant pas suffisant pour entraîner la trans-activation du gène : il va être
associé à des cofacteurs (corépresseurs ou coactivateurs).
Avant la transition blastuléenne, Tcf-3 est associé à la protéine Groucho, qui recrute des
HDACs : désacétylation du gène et répression de la transcription (il n’y a cependant pas de
condensation en fibre de type B… Cela ne veut pas dire qu’il n’existe pas encore de fibre
B à l’intérieur du noyau : hétérochromatine constitutive…).
Au moment de la transition blastuléenne, il va y avoir une compétition avec la !-
caténine, coactivateur de la transcription. !-caténine va remplacer Groucho et lever
l’inhibition du gène (transcription de Siamois) : il est probable que !-caténine recrute des
HATs.

Biologie du Développement – Jeremy DC 8

La fréquence de division cellulaire chute considérablement après la phase de segmentation. Lors de la
gastrulation, la prolifération se fait de manière asynchrone.

2.3 Blastula

Au terme de la segmentation, on obtient une blastula : c’est un œuf en cours de division, dans lequel il se
creuse le blastocœle (dès le stade 8 blastomères).
NB : On parle de blastula chez les amphibiens, et de blastocyste chez les mammifères.

Ce blastocœle, chez les amphibiens, est excentré au niveau de l’hémisphère animal, composé de deux à
trois assises de micromères dynamiques, alors que l’hémisphère végétatif est composé de macromères
inertes, riches en plaquettes vitellines.
Le toit du blastocœle est tapissé par des protéines de la matrice extracellulaire comme le collagène, la
fibronectine et la laminine, qui sont essentiels aux mouvements de reptation. Ces protéines ne sont
synthétisées que par les cellules du toit du blastocœle.
Le plancher du blastocœle, composé de macromères végétatifs, ne contient aucune protéine de la matrice
extracellulaire.

Les activités de synthèse commencent après la transition blastuléenne : les ARNm codants les
tubulines, les histones sont stables et d’origine maternelle.
De plus, du fait de la multiplication très active des cellules, on a une synthèse d’ADN très active, et des
phases S répétées.

Biologie du Développement – Jeremy DC 9

 Protéines de la MEC

Fibronectine : homodimère glycoprotéique de 460kDa, possédant deux chaînes polypeptidiques

associées par deux ponts disulfures, dans la région C-Terminale.
On met en évidence différents domaines de liaison : du collagène, de la cellule. Ce dernier domaine est un
tripeptide nécessaire et suffisant à la liaison de la cellule, caractérisée par sa séquence Arg-Gly-Asp
(RGD*). Une fibronectine peut donc être associé à deux cellules différentes.

* Correspondance du nom des acides aminés en code à une lettre.

Laminine : hétérotrimère (A-B1-B2) glycoprotéique de 400kDa. Il existe un domaine de liaison du

collagène, et un domaine de liaison de la cellule.

Les récepteurs cellulaires à la fibronectine, à la laminine et au collagène sont les intégrines, qui sont des
hétérodimères "/!. (" est lui-même constitué de deux chaînes polypeptidiques, reliées par des ponts
disulfures).
La région C-Terminale, hyaloplasmique, est relativement courte. Une région est ensuite hydrophobe,

Biologie du Développement – Jeremy DC 10

présente dans les deux sous-unités, traversant la membrane en hélice ". La région N-Terminale est
extracellulaire, elle permet la fixation aux protéines de la MEC.

Il existe un polymorphisme au niveau des intégrines " et ! : cela permet de former des sites de fixation
aux différentes protéines de la MEC.
Les intégrines sont présentes sur toutes les cellules de l’embryon.

Ce sont donc le lien entre les microfilaments d’actine du hyaloplasme et la MEC.

Exemple de la liaison à la fibronectine par les intégrines

Biologie du Développement – Jeremy DC 11

 2.4 Gastrulation

C’est le début de la morphogenèse. Comme la segmentation chez l’amphibien, la gastrulation dure 24h à
18°C. Pendant cette phase de gastrulation, on a la mise en place d’un embryon tridermique (présentant
les trois feuillets : ectoderme, mésoderme et endoderme).
La durée des cycles cellulaires des blastomères s’allonge : c’est le reflet de l’expression des gènes
embryonnaires. Le volume de l’embryon évolue peu.

Les différents mouvements morphogénétiques :

- l’invagination : chez l’oursin, c’est le seul mouvement morphogénétique lors de la gastrulation :
tout l’hemisphère végétatif rentre à l’intérieur de l’embryon ;
- l’épibolie : c’est un mouvement de recouvrement conduit par la multiplication des cellules de
l’hémisphère animal sur le pôle végétatif, qui est en cours d’invagination ;
- l’élongation ;
- la convergence : une série de cellules converge vers le blastopore (lieu d’invagination) ;
- la divergence : une série de cellules à l’intérieur de l’embryon diverge.

En fin de segmentation, on peut observer l’embryon suivant un axe dorso-végétatif :

a. Initiation de la gastrulation

Au niveau de quelques macromères végétatifs, certaines cellules

s’invaginent (elle vont rentrer dans l’embryon) : ce sont les cellules en
bouteille. Cette invagination se fait dans la région dorso-végétative à
l’endroit où le croissant dépigmenté est le plus large.
Une petite dépression se met en place : l’encoche blastoporale.

Ce mouvement commence par un phénomène de contraction : mise en

place de faisceaux d’actine qui se contractent avec les microfilaments
de myosine, avec en parallèle une polymérisation des
microtubules (apparition d’une polarité : région apicale et basale). La
cellule s’allonge, s’enfonce dans l’embryon.

La mise en place de ces cellules en bouteille est conditionnée par des

facteurs que l’on met en évidence dans la région dorso-végétative.

L’invagination des cellules en bouteille entraîne l’invagination des macromères, et des micromères au-
dessus par un phénomène de recouvrement (épibolie), où ils vont s’associer au toit du blastocœle : c’est
le moteur de la gastrulation, les micromères se déplacent par des mouvements de reptation.
Au terme de la gastrulation, les micromères de la région animale recouvrent complètement l’embryon
(partie pigmentée), et les macromères végétatifs se retrouvent à l’intérieur de l’embryon.

Au stade lèvre dorsale du blastopore, les micromères convergent en direction de la fente. Le phénomène
est engagé : ils s’invaginent par un mouvement de tapis roulant (migration sur la matrice extracellulaire

Biologie du Développement – Jeremy DC 12

du toit du blastocœle). Il y a élongation de ces cellules.
Ainsi, les macromères végétatifs sont tractés par les mouvements des micromères, tandis que les
micromères de la région animale convergent en direction du lieu d’invagination.
Les cellules en bouteille ne servent plus à rien (rôle initiateur).

b. Carte des territoires présomptifs

L’étude des mouvements de la gastrulation se faisait à l’origine par l’utilisation des marques colorées : on
prend un embryon en fin de segmentation, que l’on met dans de l’eau avec de la pâte à modeler. Entre la
pâte et l’embryon, on peut mettre de l’agar dans lequel on met un colorant : bleu de nils ou rouge
ponceau. Il y a diffusion du colorant à l’endroit où l’on a posé l’agar et ainsi un groupe de blastomères
est marqué, et l’on pourra suivre le devenir de ces cellules durant la gastrulation.
Cela a permit d’établir la carte des territoires présomptifs de l’embryon.

Il existe maintenant d’autres techniques comme la technique de lignage cellulaire, qui permet de suivre le
devenir d’une seule cellule. Elle se fait par injection d’une grosse molécule (dextran) couplée à un
fluorochrome : cette molécule ne va pas diffuser, on aura donc marquage de toutes les cellules filles du
blastomère initial.

Biologie du Développement – Jeremy DC 13

La carte des territoires présomptifs de l’embryon a été établie grâce aux techniques précédentes. Chez le
pleurodèle : vue latérale, dorsale et méridienne, sagittale :

Nomenclature : tant que le territoire est présomptif (pas encore déterminé), on parle de blaste. A partir du
moment où le territoire a une destinée, irréversible, on parle de derme.

L’ectoblaste : neuroblaste (neurectoderme) et épiblaste (épiderme).

L’endoderme correspond globalement aux macromères végétatifs. La région est déterminée très
précocément durant la segmentation (c’est le premier feuillet à l’être).

Entre les deux, on a une zone marginale, le mésoblaste :

- dans la région dorsale, on a le mésoblaste chordal (chorde) qui correspond à la zone du croissant
dépigmenté.
- Sous cette région, le mésoblaste préchordal (mésoderme de la région céphalique de l’embryon).
C’est le premier territoire mésodermique à s’invaginer durant la gastrulation : c’est là que se
forme l’encoche blastoporale.
- De part et d’autre de la chorde, le mésoblaste somitique (somites) : ce sont de petits blocs
segmentés paraxiaux. Ils donneront le derme, la musculature, le squelette, …
- Le mésoblaste ventro-latéral (lames latérales).
- Le mésoblaste caudal s’invagine en dernier, il se situe au niveau de la limite d’invagination.

Au dessus de la limite d’invagination, durant la gastrulation, les cellules ne s’invagineront jamais. Il y

aura convergence et épibolie.

Biologie du Développement – Jeremy DC 14

 c. Mouvements de la gastrulation

1- Stade encoche blastoporale

Il y a invagination de cellules en bouteille. On observe

un phénomène d’élongation des cellules du m. chordal
qui convergent vers l’encoche blastoporale.

2- Lèvre dorsale du blastopore

A ce stade, il y a mouvement d’élongation du m.

somitique, en direction du lieu d’invagination. Le m.
chordal y converge aussi.
Il commence à y avoir invagination du m. chordal. On
peut observer de plus en plus de pigments : c’est le
reflet du phénomène d’épibolie des micromères de la
région animale (ectoblaste).

3- Anse de panier

Le phénomène d’invagination continue : la lèvre

dorsale se poursuit par deux lèvres latérales.
Le m. chordal est complètement invaginé, et le m.
somitique s’invagine au niveau des lèvres latérales. Le
mouvement d’épibolie de l’ectoblaste se poursuit.

i- Fer à cheval
Stade intermédiaire : correspond au stade où la lèvre
ventrale du blastopore se met progressivement en place.

4- Lèvre ventrale du blastopore

Au niveau de cette lèvre ventrale, il y a invagination du m. ventral au niveau de la lèvre ventrale

ainsi que du m. latéral au niveau des lèvres latérales. L’épibolie se poursuit.

5- Bouchon vitellin

L’essentiel du mésoblaste est alors invaginé. Une petite bande (correspondant au m. caudal) n’est
toutefois pas encore invaginé : le bouchon vitellin est constitué de ces derniers macromères
végétatifs : c’est de l’endoderme, à la fois tracté et poussé par des cellules plus dynamiques.
L’épibolie se poursuit.

6- Fente blastoporale

Ce stade correspond à l’invagination complète des macromères végétatifs : le bouchon se réduit puis
disparaît. A terme, on a formation d’une petite fente : la fente blastoporale. Tout le mésoderme s’est
invaginé, l’embryon est complètement recouvert par l’ectoderme.

Biologie du Développement – Jeremy DC 15

 Vue dorsale | Coupe méridienne, sagittale

On voit le stade lèvre dorsale (2), anse de panier (fer à cheval, i), et bouchon vitellin (5).

1- Au stade lèvre dorsale, il y a déjà invagination du m. préchordal. Finalement, cette zone correspond à
du mésoblaste chordal (croissant dépigmenté).
Tout ce qui est en dessous de la limite d’invagination, représenté par le m. caudal, va se retrouver à
l’intérieur de l’embryon (invagination), et il va y avoir épibolie des cellules au dessus.
Le blastocœle est toujours très développé, il n’y a pas encore eu rotation de l’embryon.

2- Au stade anse de panier, le m. chordal est presque complètement invaginé. Le mésoblaste chordal s’est
allongé : c’est le reflet de phénomène d’élongation. Une nouvelle cavité se forme : le tube digestif
primitif, l’archentéron, qui va tendre à faire disparaître le blastocœle. L’arrivée de grosses cellules à
l’intérieur de l’embryon entraîne un phénomène de bascule.
! Au terme de la gastrulation, après la bascule, on ne peut ainsi plus parler de pôle animal / pôle végétatif.

3- Au stade bouchon vitellin, l’embryon est recouvert du neurectoblaste et de l’épiblaste. Le m. caudal est
le dernier territoire à s’invaginer. Le blastocœle a disparu : l’archentéron est au maximum de son
développement. L’endoderme s’est complètement invaginé.
A noter, il y a un contact très étroit entre le m. caudal et le neurectoderme (phénomènes d’induction).

Biologie du Développement – Jeremy DC 16

Mouvement de divergence : ce mouvement concerne
essentiellement le mésoderme ventro-latéral.

Le m. chordal va subir directement un mouvement

d’élongation et de convergence en direction du
blastopore. Il subira l’invagination : mouvement en tapis
roulant. En se fixant sur le toit du blastocœle, il se
déplace par des mouvements de reptation vers la région
céphalique.
Le m. somitique converge et s’invagine au niveau dorso-
latéral, et s’étale de part et d’autre de la chorde : les
somites sont de petites structures paraxiales.

Le m. ventro-latéral s’invagine au niveau des lèvres

ventrales et latérales, et tout de suite, va avoir tendance à
s’étaler : il diverge à l’intérieur de l’embryon.

Coupe sagittale de gastrula, au stade anse de panier.

d. Fin de gastrulation (fente blastoporale)

Durant la gastrulation, l’embryon augmente peu de volume, mais à la fin, on observe qu’il s’allonge très
légèrement. Tout le matériel endodermique s’est invaginé, à part le mésoblaste caudal. L’archentéron est
alors très développé. L’embryon est devenu tridermique : les trois feuillets sont déterminés. On a une
symétrie bilatérale : axes antéro-postérieur (ou céphalo-caudal) et dorso-ventral.

Biologie du Développement – Jeremy DC 17

 2.5 Neurulation

La neurulation est la première étape de l’organogenèse, durant laquelle le tube nerveux se met en place,
avec du côté céphalique le cerveau, et du côté caudal la moelle épinière. A ce stade, il y a aussi une
régionalisation du mésoderme et au niveau de l’endoderme, il y a fermeture du toit de l’archentéron.

a. Neurectoderme

L’étape initiale de la neurulation est l’épaississement du neurectoderme, qui forme d’abord une plaque
neurale du côté dorsal.
Cette plaque se soulève sur les côtés latéraux et forme ainsi des bourrelets neuraux qui donnent à
l’embryon une forme en raquette (large à la région céphalique).
Les bourrelets neuraux se soulèvent progressivement et s’accolent d’abord du côté médian, puis
caudal, puis céphalique, ils forment ainsi une gouttière neurale.
Les bourrelets vont ensuite fusionner progressivement
et former un tube nerveux. Au niveau caudal, il existe
un espace où les bourrelets n’ont pas complètement
fusionné : c’est le neuropore postérieur.
A ce stade, le neurectoderme est toujours en contact
avec l’épiderme.

b. Mésoderme

Le deuxième grand événement de la neurulation est la

régionalisation du mésoderme, qui va s’individualiser
en différentes structures :
- La chorde, qui est un organe axial, transitoire,
dégénérant en fin de développement.
- Du côté dorsal, on assiste à un épaississement du mésoderme somitique qui se creuse d’une
cavité, et qui va se régionaliser : la région la plus dorsale est la partie la plus épaisse, elle donne
les somites cavitaires qui se prolongent par le mésoblaste latéral.
- En dessous, la pièce intermédiaire (donnant le rein primitif) commence à se différencier. Elle se
termine par les lames latérales qui vont fusionner du côté ventral.

c. Endoderme

On assiste à la fermeture progressive du toit de l’archentéron par le soulèvement latéral de

l’endoderme.

d. Stade bourgeon caudal

C’est le dernier stade de la neurulation. Un massif mésodermique dans la région postérieur de l’embyon
donnera la queue : le bourgeon caudal.

- Au niveau de l’ectoderme : il y a séparation et individualisation de l’épiderme qui recouvre

l’embryon, et du neurectoderme qui forme le tube nerveux. Du côté céphalique, on distingue le
champ morphogénétique de l’œil.
- Au niveau du mésoderme : il y a eu individualisation des somites du côté dorsal (muscles
squelettiques, os, ..) et des pièces intermédiaires. Les lames latérales sous la chorde viennent
s’accoler au niveau du mésentère dorsal. Elles se creusent d’une cavité, le cœlome.
La partie la plus interne des lames forme la splanchnopleure et la partie la plus externe la
somatopleure.

Biologie du Développement – Jeremy DC 18

 - Au niveau de l’endoderme, le toit de l’archentéron est fermé, il constitue la future lumière du tube
digestif.

Coupe sagittale d’un embryon au stade bourgeon caudal

Biologie du Développement – Jeremy DC 19

III- Embryologie Expérimentale
1) Expériences in vitro

Cette expérience a lieu au stade 32 cellules, donc avant la transition blastuléenne : il n’y a aucune
expression du génôme zygotique.
L’embryon présente trois régions : la région animale (micromères pigmentés A), végétative (macromères
D1 à D4, de dorsal à ventral) et la zone marginale (cellules B et C).

• Si à ce stade on met la calotte animale en culture, on obtient de l’épiderme.

• Si on met des macromères végétatifs en culture, on n’obtient que de l’endoderme.

• Si on met en culture un blastomère végétatif avec la calotte animale, il y a induction de

mésoderme. Les macromères sont déjà déterminés (endoderme) et les micromères de la région
animale sont des cellules récepteurs, compétentes.
o Si on associe D1 à la calotte animale, on obtient de l’épiderme, du neurectoderme, le
mésoderme dorsal (présence de structures chordales et musculaires), et bien sûr de
l’endoderme.
o Avec D4, on induit de l’épiderme, [pas de neurectoderme], du mésoderme ventral
(mésenchyme, cellules sanguines) et de l’endoderme.

• Si on met la zone marginale en culture, on a mise en place d’épiderme, de neurectoderme et de

mésoderme : il y a déjà eu induction de la part des macromères végétatifs.

Il s’avère donc qu’au stade 32 cellules, l’endoderme est déjà déterminé, il induit la calotte animal à
donner soit du mésoderme ventral, soit du dorsal : pour cela, il secrète des molécules diffusibles
(inducteurs du m. ventral ou dorsal).

Biologie du Développement – Jeremy DC 20

 2) Expérience de Nieuwkoop

On prend un premier embryon, qui se développe normalement, présentant les deux axes (céphalo-caudal
et dorso-ventral).
On prend ensuite un deuxième embryon que l’on traite aux U.V. dans la région végétative, ce qui bloque
la polymérisation des microtubules. Cela entraîne la formation d’un embryon ventralisé : pas de
rotation de symétrisation, donc pas de mise en place de croissant dépigmenté : pas de région dorsale. Cet
embryon est abortif, il ne se développera pas complètement.

On laisse le développement continuer jusqu’au stade 32 cellules, puis on prend le blastomère D1 de

l’embryon témoin. On transfère alors cette cellule D1 sur l’embryon irradié, à la place d’un blastomère
végétatif. On constate que l’embryon irradié se développe normalement : restauration de l’axe dorso-
ventral.

Ainsi, D1 a induit une organisation embryonnaire complète, et plus particulièrement l’induction du

mésoderme dorsal.
Par des techniques de lignage cellulaire, on met en évidence que D1 ne donne que de l’endoderme.

L’endoderme est l’inducteur primaire du mésoderme, il est donc déterminé avant la transition
blastuléenne. L’endoderme possède deux centres inducteurs : D4 est le centre inducteur ventral, D1 le
centre inducteur dorsal (de Nieuwkoop).

Des molécules d’origine maternelle ont donc entraîné la mise en place

de l’endoderme : on a mis en évidence que cette autodétermination se
fait grâce à un facteur de transcription, VegT.

VegT est exprimé au niveau du cortex végétatif : en injectant un ARN

antisens VegT, on empêche la formation de l’endoderme et une
organisation correcte du mésoderme : ainsi, VegT est essentiel à la
mise en place de l’endoderme, il joue aussi sur l’organisation
correcte du mésoderme.

3) Expérience de Spemann

Cette expérience est réalisée au moment de la gastrulation : on prélève la lèvre dorsale du blastopore
d’une jeune gastrula (nous sommes chez les tritons), que l’on greffe au niveau ventral d’un embryon
receveur, au même stade de développement.
On constate que le greffon s’invagine et une deuxième lèvre dorsale se forme. L’embryon double
présente deux plaques neurales : une plaque neurale primaire, située en position dorsale, et une autre
plaque neurale, secondaire, en position ventrale de l’embryon, où a été implanté le greffon.

En coupe histologique, on peut identifier les cellules du receveur : le receveur donne une petite partie
des cellules de la chorde et une petite partie des somites de l’embryon secondaire (les deux embryons
sont parfaitement constitués).
Les cellules du greffon étaient déjà déterminées à donner du mésoderme dorsal.

Le centre organisateur de Spemann a différentes capacités inductrices : neurogène, mésoblastogène.

Ainsi le receveur donne un embryon primaire normalement constitué, le greffon poursuit son
invagination et donne du chordomésoderme.

Biologie du Développement – Jeremy DC 21

 - La zone du croissant dépigmenté en début de gastrulation représente donc le champ
morphogénétique, déjà déterminé, du chordomésoderme.

- L’ectoblaste de l’embryon receveur aurait du fournir de l’epiderme ventral normal ; il édifie un

tube neural : le greffon exerce une induction neurogène sur le feuillet ectoblastique.

- Le mésoblaste des lames latérales du receveur sert à édifier la chorde et les somites de
l’embryon secondaire : le greffon a exercé une induction mésoblastogène d’ordre supérieur
sur ce groupe de cellules.

- L’evolution de l’endoderme du receveur n’est pas affecté : ce territoire était déjà déterminé.

Ces trois expériences montrent que l’induction du mésoderme est un phénomène progressif, avec tout
d’abord l’inducteur primaire du mésoderme (le feuillet endodermique), qui émet des signaux dorsalisants
et ventralisants, et dans un second temps, quand le chordomésoderme va être induit, la régionalisation
progressive de la zone marginale par ce chordomésoderme.

4) Recherche des molécules inductrices

4.1 Technique in vitro

C’est la technique la plus simple : on prend un territoire compétent (le plus facilement appréhendable : la
calotte animale), que l’on met en culture dans un milieu salin où l’on rajoute à différentes dose un
inducteur potentiel. On regarde ensuite l’évolution
histologique de la calotte animale, on peut extraire les
ARN et faire un Northern Blot, hybrider avec différents
types de sondes : marqueurs du mésoderme ventral,
dorsal, …

Toutefois, certaines molécules ont un rôle in vitro, mais

pas de rôle in vivo.

4.2 Technique in vivo

Il existe deux façons de montrer que l’on a, par

exemple, un inducteur du mésoderme dorsal :

- On prend un œuf que l’on traite aux UV :

l’embryon sera ventralisé, abortif. On injecte
alors l’ARNm de l’inducteur potentiel : si on a effectivement un inducteur primaire du mésoderme
dorsal, on va restaurer un axe embryonnaire. L’inducteur mime parfaitement le centre de
Nieuwkoop.
Par contre, si la molécule est impliquée dans la mise en place du mésoderme dorsal, il se peut
qu’elle ne puisse pas induire un axe harmonieux…
- On prend un embryon au stade 32 cellules et on injecte l’ARNm de l’inducteur potentiel au niveau
du macromère le plus ventral (D4). S’il s’agit bien d’un inducteur primaire du mésoderme dorsal,
alors il y aura apparition d’un axe surnuméraire.

Biologie du Développement – Jeremy DC 22

 Activine et FGF

Deux grandes familles de facteurs de croissance ont été ainsi étudiées:

- FGF : une famille de 23 membres.
- TGF-! : famille des facteurs de croissance transformants, contenant l’activine, Vg-1…

On prend des calottes animales en culture et l’on injecte de l’activine ou du FGF :

- Sur le témoin, la calotte animale donne de l’ectoderme (épiderme) ;
- Avec de l’activine à forte dose, on s’aperçoit qu’il y a induction de tissu nerveux au niveau de
l’ectoderme (+épiderme) et du mésoderme dorsal (chorde, muscle).
- Avec du FGF, il y a induction du mésoderme ventral (mésenchyme), et de l’ectoderme.

Ainsi, l’activine et le FGF sont des respectivement des inducteurs du mésoderme dorsal et ventral, in
vitro. Il faut alors se demander si ces molécules sont exprimés chez l’embryon, au bon moment et au bon
endroit.

4.3 Stratégies de « perte de fonction »

Pour étudier le rôle d’une molécule inductrice ou d’un facteur de transcription, on utilise différentes
stratégies dites de « perte de fonction », visant à éliminer le rôle fonctionnel de la protéine d’intérêt.

a. Injection d’ARN antisens

On synthétise un ARN antisens complémentaire d’ARNm d’intérêt. On injecte, il y a hybridation : pas de

traduction de la protéine d’intérêt et dégradation.
Mais l’utilisation de ces ARNs antisens a un inconvénient : très souvent ces ARNs vont s’hybrider mais
ils ne sont pas très stables. On utilise donc des oligomorpholinos, qui sont des antisens composés de
nucléotides chimiquement modifiés, et donc stables.

On peut aussi utiliser les ARNs d’interférence (RNA Interference).

Il existe au sein de la cellule des systèmes protéiques de dégradation (RISC) basé sur des petits ARNs
double brins, les ARNs d’interférence. Ils peuvent se fixer par complémentarité aux ARNm et entraîner
leur dégradation.
Ainsi, on injecte les siRNA (small interferent RNA) dans la cellule qui vont réagir avec les ARNm
d’intérêt, et qui vont provoquer leur dégradation par le RISC. Il n’y alors pas de traduction de la
protéine d’intérêt.

b. Expression de dominants négatifs

Pour empêcher le fonctionnement d’une protéine, d’un facteur de transcription ou d’un récepteur, on
injecte en grande quantité au niveau de l’œuf fécondé un ARNm codant pour la protéine tronquée. On
obtient donc une protéine non fonctionnelle, dominante par rapport à la protéine endogène qui devient
minoritaire, et qui perd ainsi sa fonction (il y a compétition entre la protéine tronquée et la protéine
endogène).
L’intérêt est que la protéine n’est pas inhibée, elle est toujours exprimée, car lorsque l’on inhibe la
transcription d’un gène, il y a très souvent compensation.

Chez la souris en particulier, on peut invalider un gène (« knock-out ») et des phénomènes de

compensation permettent à la souris de se comporter normalement.

Biologie du Développement – Jeremy DC 23

IV- Induction et régionalisation du mésoderme
1) Trois grands types de molécules sont impliqués

Les facteurs de croissance sont des molécules diffusibles qui agissent au niveau de cellules cibles en se
fixant sur des récepteurs transmembranaires. Ces récepteurs possèdent un domaine cytoplasmique à
activité protéine kinase, impliqué dans la transduction du signal.

Les protéines de la famille Wnt sont des glycoprotéines diffusibles, riches en cystéines, qui agissent au
niveau de cellules cibles en se fixant sur des récepteurs transmembranaires appartenant à la famille
Frizzled, impliqués dans l'activation d'un coactivateur de la transcription, la !-caténine.

Les facteurs de transcription et leurs cofacteurs agissent au niveau nucléaire, dans les cellules où ils ont
été synthétisés. Ils régulent l’expression de gènes spécifiques en se fixant à des séquences cis
régulatrices sur le promoteur des gènes cibles.

2.1 Facteurs de croissance

Les signaux émis par l’endoderme déterminé induisent des cellules de l’hémisphère animal (zone
marginale) en mésoderme. Ce sont des facteurs diffusibles de la famille TGF-! et FGF.

On a au niveau du centre inducteur dorsal (centre de Nieuwkoop) la présence de protéines de la famille

TGF-! (Vg1, activines) et Nodal (Xnr : Xenopus nodal-related gene), en forte concentration.

Au niveau du centre inducteur ventral (endoderme ventro-latéral), on a les même molécules, mais en
faible concentration, et des protéines de la famille FGF. Le rôle des FGF est cependant plus limité.

Ainsi l’induction du mésoderme est dûe à un gradient de production de molécules de la famille

TGF-!, qui est croissant de la région endodermique ventrale à la région endodermique dorsale.

Voie des FGF : voie des MAP-Kinases (cf. cycle cellulaire)

Les récepteurs aux FGF sont des récepteurs à activité tyrosine kinase, effectuant la transduction du
signal.

Pour éliminer la fonction du FGF, on peut injecter des dominants négatifs de ce récepteur (FGFR mutant)
qui sont des récepteurs sans activité kinasique. Il n’y alors pas de transduction du signal lorsqu’il y a
dimérisation au signal de FGF.
La cellule se développe sans l’effet de FGF.

Biologie du Développement – Jeremy DC 24

 Voie des TGF-!

Les récepteurs transmembranaires sont des hétérodimères formés par un récepteur primaire, TBRII et un
transducteur, TBRI. Lorsqu’il y a reconnaissance du ligand et hétérodimérisation des récepteurs, il y a
autophosphorylation : le récepteur possède une activité Ser/Thr kinase au niveau hyaloplasmique.
Il y a ensuite phosphorylation d’un deuxième messager, SMAD de type 1, 2, 3 ou 5 : le type de SMAD
activé varie suivant le TGF-! reconnu.
Il y a alors transport du SMAD-P en direction du noyau par la protéine SMAD4 (protéine cargo). Ce
SMAD4 est donc essentiel à la transduction du signal.
SMAD-P agit comme un facteur de transcription : on a donc au final régulation de gènes cibles et donc
différenciation de la cellule.

Signalisation Wnt/!-caténine

Les protéines Wnt sont riches en cystéines. C’est le premier messager extracellulaire : ils viennent
s’associer à un récepteur, Frizzled qui possède 7 régions hydrophobe. Le domaine extracellulaire, N-
Terminal, est également riche en cystéines : c’est là qu’il y aura l’association Wnt-Frizzled. Mais pour
que la signalisation Wnt soit fonctionnelle, il faut un corécepteur (qui est une lipoprotéine, nommée
LRP-6).
On a donc formation d’un complexe ternaire : LRP-6 + Frizzled + Wnt.

Il y a alors transduction du signal : intervention d’une protéine G (interrupteur moléculaire) et du

messager intracellulaire, la protéine hyaloplasmique Dsh.
Dans ces conditions de transduction (complexe ternaire), il va y avoir phosphorylation de Dsh (Dsh-P).

Biologie du Développement – Jeremy DC 25

Dsh-P va acquérir une conformation active, elle va inhiber le fonctionnement d’une glycogène synthétase
kinase, GSK-3.

GSK-3 a pour rôle de phosphoryler la !-caténine, et c’est en fait la !-caténine non phosphorylée qui est
active.

Ainsi, quand Dsh-P inhibe GSK-3, !-caténine va être fonctionnelle et va s’accumuler dans le
hyaloplasme. A un moment donné, le coactivateur passe au niveau nucléaire où il rentre en compétition
avec Groucho : activation de gènes cibles.

Lors qu’il n’y a pas de Wnt, la protéine Dsh est inactive : il va y avoir phosphorylation de !-caténine (qui
implique un complexe protéique, formé entre autre par GSK-3).
La forme phosphorylée de !-caténine est peu stable, elle va tout de suite être dégradée par le protéasome.
Pas de transcription.

NB : Il est à noter que !-caténine est présente dans l’embryon dès le stade 16 cellules (donc, avant la
TB.. !)

1.2 Facteurs de Transcription

VegT a un rôle crucial au niveau de l’autodétermination de l’endoderme, et joue sur la mise en place du
mésoderme.

La !-caténine est un coactivateur localisé dans la région dorso-végétative. Elle a peut-être le rôle le plus
important dans l’induction primaire du mésoderme. Elle joue un rôle clé dans la mise en place du
mésoderme dorsal.

Siamois est un facteur de transcription, localisé dans la région dorso-végétative sous contrôle de la
!-caténine. Siamois est un gène embryonnaire.

Il faut comprendre que l’induction du mésoderme est causé

par la cascade d’activation de gènes : tout d’abord des
transcrits d’origine maternelle, puis après la transition
blastuléenne, des gènes embryonnaires seront activés.

1.3 Déterminants cytoplasmique (œuf de xénope)

In vivo, dans l’œuf de xénope non fécondé, on observe une répartition homogène de la !-caténine dans
le cytoplasme. On met en évidence la présence de transcrit Vg1 et VegT au niveau du cytoplasme
cortical et végétatif.

A la fécondation, on a la rotation de symétrisation : bascule de pigments, et mise en place des faisceaux

des microtubules au niveau du cortex et redistribution des dominants cytoplasmiques (Vg1, !-caténine,
…)
Ces déterminants cytoplasmiques se retrouvent localisés dans la région dorsale de l’embryon.

Avec la rotation corticale, il y a la mise en place de l’axe dorso-ventral et du plan de symétrie bilatérale.

Biologie du Développement – Jeremy DC 26

 2) Induction du mésoderme

C’est un mécanisme complexe qui résulte de l’intégration de voies de signalisation multiples impliquant
des facteurs d’origine maternelle et des facteurs d’origine zygotique, exprimés après la transition
blastuléenne.

2.1 Rôle de la !-caténine

La !-caténine est le facteur maître qui intervient dans la mise en place du mésoderme. C’est un
coactivateur de la transcription d’origine maternelle, réparti de manière homogène dans le cytoplasme
avant la fécondation.
Au moment de la fécondation, la !-caténine vient se localiser à la région dorsale et dorsovégétative, et
du stade 2 à 4 blastomères, la protéine est hyaloplasmique. Dans un second temps, à partir du stade 16
blastomère, la !-caténine se stabilise à la région dorsale et passe dans au niveau nucléaire : il y a
activation de gènes à partir de la transition blastuléenne.

Si l’on traite l’embryon aux UV, et que l’on empêche la rotation de symétrisation, il n’y aura jamais de
noyau dorsal exprimant la !-caténine : cette rotation de symétrisation est essentielle à la stabilisation
dorsale de la protéine.

On peut montrer aussi, en utilisant un oligomorpholino spécifique, que la !-caténine est essentielle à la
mise en place du mésoderme dorsal (du chordomésoderme). De plus si on injecte le transcrit au stade
32 cellules de l’embryon dans D4, on mime l’expérience de Spemann : apparition d’un axe
surnuméraire.
On pourrait donc s’attendre à ce que la !-caténine soit un inducteur primaire du mésoderme dorsal.
Toutefois, la voie de signalisation est celle de Wnt/!-caténine : il existe une autre protéine, de la famille
Wnt, permettant la stabilisation de !-caténine.

X-Wnt8 est un membre de la famille Wnt, qui s’exprime durant la gastrulation, au niveau du mésoderme
ventral. En faisant une expérience in vivo, on entraîne la mise en place d’un axe surnuméraire. Toutefois,
X-Wnt8 n’est pas une protéine d’origine maternelle, elle ne s’exprime donc pas durant la gastrulation.
X-Wnt8 ne permet pas la stabilisation de la !-caténine lors de la segmentation.

C’est en fait la protéine Wnt11 qui est impliquée dans cette voie de signalisation.

Biologie du Développement – Jeremy DC 27

Evénements moléculaires conduisant à l’enrichissement en !-caténine de la région dorsale de l’œuf :

L’œuf non fécondé possède différents déterminants

cytoplasmiques (Vg1, VegT, Dsh). La !-caténine est
homogène dans le hyaloplasme, et on met en évidence du
transcrit Wnt11.

Lors de la rotation corticale, il y a mise en place des

microtubules et redistribution des déterminants
cytoplasmiques. Dsh et le transcrit Wnt11 sont
transportés (par des kinésines) vers la région dorsale de
l’embryon. Au fil de la segmentation, les cellules de cette
région auront donc du Dsh, du transcrit Wnt11 et on
s’aperçoit que ce transcrit est rapidement traduit. Wnt11
est sécrété et entraîne l’activation de Dsh dans la
région dorsale.
A ce moment là, Dsh actif inhibe GSK-3 et on va avoir accumulation de !-caténine stable dans les
cellules de cette région dorsale.

Finalement, au stade 16 cellules, !-caténine passe au niveau nucléaire et active des gènes cibles lors de la
transition blastuléenne.

2.2 Rôle de Vg1

Vg1 est un facteur de croissance, de la famille des TGF-!,

d’origine maternelle. Suite à la rotation de symétrisation, Vg1 se
localise (strictement) à la région dorsovégétative. Vg1 s’accumule
et est activée par son clivage.
Au stade 32 cellules, Vg1 se retrouve dans le blastomère D1 et est
secrétée : elle induit les cellules qui lui sont proche (zone
marginale dorsale) à se déterminer en mésoderme.

Si l’on injecte l’ARNm VG1 au niveau de D4, il y a formation

d’un axe surnuméraire.

Famille Molécule Origine Induction…

FGF maternelle In vitro, de mésoderme ventral
- d’un axe surnuméraire,
Vg1 maternelle
- in vitro, à forte concentration, de mésoderme dorsal
embryonnaire - in vitro, l’inducteur le plus puissant de mésoderme
TGF-!
Activine (exprimé après la TB) dorsal,
- d’un axe surnuméraire incomplet.
Nodal embryonnaire - à forte concentration, de mésoderme dorsal
- d’un axe surnuméraire,
!-caténine maternelle
- de mésoderme dorsal
FT Sous contrôle de la voie Wnt/!-caténine,
Siamois embryonnaire - d’un axe surnuméraire,
- de mésoderme dorsal

Biologie du Développement – Jeremy DC 28

! Durant la segmentation, les déterminants cytoplasmiques d’origine maternelle (!-caténine, Vg1,
VegT) entraînent l’expression zygotique d’inducteurs du mésoderme (TGF-! : Xnr, activine) au
niveau de l’endoderme.

Il y a un gradient d’expression des protéines Nodal de la région de l’endoderme ventral à l’endoderme

dorsal :
o Au niveau dorsal, Vg1 + !-caténine + VegT " Nodal et activine " Mésoderme dorsal
o Au niveau ventral, Vg1 (faible qté) + VegT " Nodal, activine (faible qté) " Mésoderme ventral

Nodal et activine sont des morphogènes, c’est-à-dire des molécules diffusibles, agissant sur des cellules
cibles en activant des gènes différents suivant un effet dose.

Si on inhibe la signalisation Nodal, on observe qu’il n’y a pas d’induction de mésoderme du tout.
Une seule famille de molécules permet d’induire du mésoderme ventral et dorsal : à quoi servent les
inducteurs ventralisants, comme FGF ?(Multifactorialité de l’induction)

2.3 Théorie des trois signaux…

L’induction du mésoderme est un phénomène progressif. Au stade 32 cellules, on a de l’endoderme

déterminé qui produit un gradient de protéines diffusibles de la famille TGF-! (activine, Vg1, Xnr),
croissant de l’endoderme ventral à l’endoderme dorsal. On a également au niveau du centre de
Nieuwkoop expression de la !-caténine, puis après la transition blastuléenne, de Siamois. Au niveau du
centre inducteur ventral, on a une faible concentration de TGF-! et du FGF.

Cela a amené la théorie des trois signaux :

- l’endoderme déterminé avant la transition blastuléenne émet un signal ventralisant et un signal
dorsalisant (premier et deuxième signal),
- en fin de segmentation, le premier territoire mésodermique est déterminé : le chordomésoderme
(expérience de Spemann), qui secrète donc forcément des inducteurs secondaires. Il y a
régionalisation de la zone marginale.

On s’aperçoit que cette zone marginale, en fin de segmentation, exprime toute une série de facteurs de
transcription, dont Xbra et Goosecoïd.

Xbrachyury est exprimé dans toute la zone marginale, et in vitro, entraîne la formation de mésenchyme.
Son expression est sous contrôle de FGF et de TGF-! (en faible quantité). C’est un marqueur pan-
mésodermique.

Goosecoïd est exprimé dans un premier temps uniquement dans la zone marginale dorsale (au niveau de
Spemann : chordomésoderme). Puis son ARNm est réparti suivant un gradient dorso-ventral
décroissant (de la chorde, en passant par les muscles, au pronephros = rein primitif).
Si on injecte le transcrit Goosecoïd au niveau de la zone marginale ventrale, on a formation d’un axe
embryonnaire surnuméraire (mime l’organisateur de Spemann).
L’expression de Goosecoïd est sous contrôle de l’activine, de Vg1 et de Xnr en quantité importante.

Quel est l’inducteur secondaire qui a expliqué l’induction neurogène et mésoblastogène d’ordre
supérieur ?

Biologie du Développement – Jeremy DC 29

 2.4 Gastrulation – réalisation du patron mésodermique

La zone marginale se détermine progressivement et on a la régionalisation du mésoderme.

L’organisateur de Spemann produit au moins deux molécules, correspondant à un signal dorsalisant :

Chordin et Noggin, suivant un gradient décroissant de la région dorsale à la région ventrale.
Ces molécules, diffusibles, sont assimilables à des facteurs de transcription, mais elles ne possèdent
pas de récepteurs.

Il existe donc un 4° signal, véritable signal inducteur secondaire du mésoderme, qui est produit par
le mésoderme ventral durant la gastrulation.
Un membre de la famille des TGF-!, BMP4 est produit suivant un gradient décroissant de la région
ventrale à la région dorsale, avec Wnt8.

Ainsi la régionalisation du mésoderme se fait grâce à des gradients opposés de molécules qui
s’annulent : BMP-4 va s’associer physiquement à Noggin ou à Chordin, ce qui va inhiber sa fonction
entre la région dorsale et la région ventrale de la zone marginale.
En fin de gastrulation, le mésoderme est déterminé.

La cellule déterminée ne peut plus être à l’origine que d’une gamme limitée et précise de types
cellulaires. C’est un état stable et transmissible. Il y aura limitation progressive de la capacité
d’expression du génôme (hétérochromatisation). Elle ne possède pas de caractère morphologique visible.

La différenciation : la cellule possède des caractères spécialisés immédiatement discernables, et a perdu

son pouvoir mitotique. En plus des gènes de routine, la cellule différenciée n’utilise que 1 à 2% du
programme génétique (gènes de luxe).

Biologie du Développement – Jeremy DC 30

V- Mise en place du neurectoderme
1) Induction du neurectoderme

Expérience d’exogastrulation
On plonge l’embryon, au début de la gastrulation, dans une solution saline : il n’y aura pas
d’invagination, mais au contraire, il y aura un phénomène d’élongation.
Il y a mise en place d’un territoire ectodermique et endodermique, mais pas de neurectoderme.
On l’avait expliqué par l’absence de contact entre le mésoderme et l’épiderme : on a donc cherché des
inducteurs du neurectoderme produit par le mésoderme dorsal, sans jamais en trouver…

On a donc conduit une deuxième expérience, dans laquelle on joue sur la calotte animale :
- témoin : la calotte animale en culture donne de l’épiderme,
- après dissociation des micromères et réassociation, on obtient du tissu neural.
Finalement, lors de la dissociation, on a dilué les molécules inductrices de l’épiderme, secrétés par les
cellules de la calotte animale et il y a eu différenciation en neurectoderme par défaut.

On a mis en évidence que l’inducteur de l’épiderme est BMP4 (de la famille des TGF-!).

2) Détermination et régionalisation du tube neural

En fin de gastrulation on assiste à la spécialisation du neurectoderme suivant un axe antéro-postérieur.

Le mésoderme caudal, dernier territoire à s’invaginer, va produire le facteur de croissance FGF
selon un gradient planaire décroissant de la région caudale en direction de la région céphalique.

FGF va donc jouer sur la régionalisation du neurectoderme. Lorsqu’il y a beaucoup de FGF, il y a

formation de neurectoderme caudal, lorsqu’il y a moins de FGF, il y a formation de neurectoderme
troncal, et enfin lorsqu’il n’y a pas de FGF, il y a formation de neurectoderme céphalique. Noggin et
Chordin sont émises en gradient vertical elles participent - avec le gradient planaire de FGF - à la
détermination et la régionalisation du tube neural.

Biologie du Développement – Jeremy DC 31

 3) Organogenèse

L’organogenèse est une cascade d’inductions successives : des groupes de territoires déterminés se
mettent en place de proche en proche dans l’embryon, de la gastrula au bourgeon caudal.

Les champs morphogénétiques sont des groupes de cellules pluripotentes dont l’avenir est orienté de
façon irréversible. Leur capacité de régulation est réduite, mais il n’y a pas de différenciation
morphologique visible.

Biologie du Développement – Jeremy DC 32

ANNEXES
BIOLOGIE CELLULAIRE
 Liste des inhibiteurs

Inhibiteur Cible, mécanisme inhibé(e)…

Inhibiteur de la thymidine kinase Bloque la cellule en phase S
Rayonnements radiomimétiques (UV,
Réplication
ionisants)
Actinomycine D Transcription (bactérie + eucaryote)
ARNm Pol I : insensible
!-amanitine II : à faible concentration
III : à forte concentration (eucaryote)
Puromycine Traduction
Cycloheximide Inhibe la synthèse protéique dans le cytoplasme (eucaryote)
Rifamycine Bloque la transcription chez les bactéries
Tétracycline, streptomycine,
Bloque la traduction chez les bactéries
érythromycine
Digitaline, Ouabaïne Pompe Na/K (fixation sur les récepteurs K+)
Synthèse des protéines dans les mitochondries (inhibe
Chloramphénicol
l’activité des mitoribosomes)
Bloque le complexe I (NADH Déshydrogénase) : réduit
Roténone (Insecticide)
fortement la synthèse d’ATP
Bloque le complexe III : pas de transfert d’électron, pas de
Antimycine
synthèse d’ATP
Bloque le complexe IV (cytochrome oxydase a + a3) : pas de
Cyanure (KCN)
gradient de protons, pas de synthèse d’ATP
Transporte les H+ à travers la mb interne suivant le gradient
Dinitrophénol (Ionophore H+)
électrochimique, sans passer par le complexe F0/F1 (Cycle
Agent découplant
court-circuité). Annule la synthèse d’ATP.
Bloque de l’ATP Synthase F0 : transfert d’électrons,
Oligomycine
formation du gradient, mais pas de synthèse d’ATP
Taxol Effet toxique in vivo, empêche la dépolymérisation des
(Taxane extrait de l’if); microtubules (blocage des fonctions motrices).
Immobilisent les tubulines hyaloplasmiques libres sous
Vinblastine – Vincristine
forme de cristal : empêche la polymérisation. Disparition des
(Alcaloïdes extraits de la pervenche)
microtubules.
(Alcaloïdes extraits du colchique)
Colchicine – Colcémide – Nocodazole Se lient aux hétérodimères de tubuline libre. Bloque la
polymérisation (disparition)
Microfilaments d’actine : bloque leurs polymérisation à
Cytochalasine
l’extrémité + . (In vivo : contraction)
Phalloïdine Provoque la polymérisation, empêche la dépol des FA
Urée Dissociation des microfilaments intermédiaires
CKI Inhibiteurs de Kinases cyclines dépendantes

Fiches – Jeremy DC
 Liste des colorants

Colorant Cible, couleur

Hémalun : colorant basique (colore les structures
acides basophiles)
(T) Hémalun / Éosine
Éosine : colorant acide (colore les structures
basiques acidophiles)
Giemsa : colorant basique (éosine + azur de
méthylène),
(T) May-Grunwald / Giemsa
May-Grunwald : colorant acide (éosine + bleu de
méthylène)
(H) Acide Périodique-Schiff Chaînes polysaccharidiques (rouge fuschia)
Colorants basiques (affinité pour les protéines
(T) Bleu de Toluidine, Hématoxiline
chargées négativement)
(T) Hématoxiline Colorant basique
(T) Fuschine basique Colorant basique rouge violacé
(T) Fuschine acide Colorant incolore, rosi par réduction
(H) Feulgen ADN : rouge
(H) Brachet ADN : vert, ARN : rouge
BET Agent intercalant révélé par UV (ADN)
Vert Janus Principal colorant du chondriome
ADN Nucléaire : rouge,
Bromure d’éthidium et DiOC6 Mitochondrie : vert,
ADN Mitochodrial : jaune
Rouge ponceau (Western Blot, SDS-PAGE) Protéines
Bleu de Coomasie (SDS-PAGE) Protéines
Bleu de Nils Utilisé pour les marques colorées

Marqueurs fluorescents :
DAPI (bleu), rhodamine (rouge), fluorescéine (vert)

Fiches – Jeremy DC
 CHONDRIOME
CHAINE RESPIRATOIRE
Transporteurs d’électrons

Une douzaine de transporteurs d’électrons, regroupés en 4 types de composés multi protéiques :

• Déshydrogénases Flavo-Protéiques
FMN + FeS – Transportent 2 électrons.
• Cytochromes
Hèmes (groupement prosthétique: coenzyme lié de façon stable à l’enzyme) : Porphyrine Fer et/ou
Cu2+ (Transportent 1 électron)
• Protéines Fer Souffre (FeS) : 1 électron
• Ubiquinone ou CoQ : liposoluble et non lié à une protéine, transporteur mobile de 1 ou 2
électrons. Isoprénoïde.

Protéines intrinsèques de la membrane interne Complexes transporteurs d’électrons

Complexe I : NADH Déshydrogénase, ou NADH CoQ Réductase

Complexe lipoprotéique transmembranaire, de poids moléculaire 85kDa (40 polypeptides). Accepteur
d’électrons grâce à la flavine et de plusieurs FeS

Complexe II: Succinate Déshydrogénase (enzyme du cycle de Krebs), ou Succinate CoQ Réductase,
FADH2 Déshydrogénase
Complexe lipoprotéique NON transmembranaire. PM = 14 kDa. 4 ppept.
Transporte les électrons grâce à la flavine et 2 FeS.

Complexe III: Cytochrome b+c1, ou CoQ H2-Cytochrome c Réductase

Dimère lipoprotéique transmembranaire. 250 kDa, 20 ppept.
Transporteurs d’électrons: 2x3 hèmes (b – c1) + 2 FeS

Complexe IV: Cytochrome [c] oxydase a+a3

Dimère lipoprotéique transmembranaire. 160 kDa, 24 ppept.
Transporteurs d’électrons : 2 hèmes (a – a3) + 2 ions Cuivre

Transporteurs mobiles

Du complexe I ou II au complexe III : CoQ

Du complexe III au complexe IV : Cytochrome c (soluble, 13kDa, 100 aa + 1 hème), qui est faiblement
lié à la membrane interne.

Complexe F0/F1 : ATPase. PM = 500 kDa

Complexe formé de deux entités structurales : F0 {a, b, c, e, g} et F1 {!, ", #, $, %}

Les sous-unités c et # constituent un rotor moléculaire (100 t/s) : le sens de rotation est déterminé par le
sens du passage des protons H+ à travers F0.

Rotation › Changements de conformations des SU " › Fixation de l’ADP et du Pi sur les SU " › Synthèse
d’ATP (Chambre interne)
a et b font saillie sur la face matricielle de la MI ; !, " , $, et % maintiennent la cohésion de F0/F1

Fiches – Jeremy DC
 CYTOSQUELETTE
MICROTUBULES

Les microtubules sont composés d’hétérodimères de tubulines ! et ". Chaque tubuline possède un site de
fixation au GTP, et fait 55kDa pour 450aa. Le diamètre de l’hétérodimère est de l’ordre de 5 à 8nm.

La polymérisation des hétérodimères nécessite du GTP; le protofilament présente une polarité :

COMT – (-) !" - !" - !" - !" - … - !" (+)

Un microtubule est composé de 13 protofilaments. Son diamètre interne est de 14nm, son diamètre
externe 24nm. Il peut être long de 1 à 25!m.

MICROFILAMENTS
Il existe trois types de microfilaments : d’actine, de myosine, et intermédiaires.

Protéines constituants les microfilaments

Protéine Caractéristiques
42 kDa, 376aa – D : 5-7 nm ;
Actine G Sites de reconnaissance Mg2+, K+, ATP ;
Forme en haltère ; 50% des actines
Microfilament pseudo-hélicoïdal ;
Actine F
D : 5-7 nm ; Pas de l’hélice : 36nm
15nm, 500 kDa ;
Myosine II Deux chaînes lourdes (200kDa, Tête N-term ATPasique, corps en hélice
!), deux paires de chaînes légères (2 ppept : 17 kda, 170aa ; 19kDa, 190aa)
D : 10 nm ;
Microfilaments Longueur des dimères 45 nm ;
intérmédiaires Spécificité : ¢ épithéliales : kératine – fibroblastes : vimentine – neurones :
neurofilaments – cellules musculaires : (actine !), desmine

Protéines associées aux filaments d’actine

Ancrage Fasciculation Fragmentation Réticulation
- vinculine (130), - fimbrine (68),
- !-actinine (190), - gelsoline (90),
gelsoline (Ca2+) filamine (250)
- villine (95),
Plaque d’adhésion :
spectrine et ankyrine - !-actinine

Protéines associées aux filaments de myosine

Troponine et tropomyosine (¢ musculaires)

Fiches – Jeremy DC
 APOPTOSE
L’apoptose, ou mort cellulaire programmée, se fait suivant deux voies, impliquant une cascade
d’activation de protéines appelées caspases, qui sont des protéases à cystéine. Le clivage se fait après un
résidu acide aspartique (D).

Les deux voies de l’apoptose

La caspase
Une caspase se trouve initiallement à l’état de
procaspase, proenzyme inactive, formée de trois sous-
unités (prodomaine N-terminal, grande sous-unité de
20kDa, petite sous-unité de 10kDa).

Le signal apoptotique se fait par cliva de la

procaspase, et hétérodimèrisation de 2 GSU + 2 PSU.

Il existe différents types de caspases, les caspases

initiatrices (8, 9, 10), qui s’auto-activent, et les
caspases effectrices (3, 6, et 7).

Fiches – Jeremy DC
Activation des caspases initiatrices

- Voie externe :

- Voie interne :

Fiches – Jeremy DC
 ACIDES AMINÉS
200 types différents d’acides aminés, 20 types majoritaires

Alanine (ALA/A) Leucine (LEU/L)

Arginine (ARG/R) Lysine (LYS/K)
Asparagine (ASN/N) Méthionine (MET/M)
Acide Aspartique (ASP/E) Phénylalanine (PHE/F)
Cystéine (CYS/C) Proline (PRO/P)
Glutamine (GLN/Q) Sérine (SER/S)
Acide Glutaminique (GLU/D) Thréonine (THR/T)
Glycine (GLY/G) Tryptophane (TRP/W)
Histidine (HIS/H) Tyrosine (TYR/Y)
Isoleucine (ILE/I) Valine (VAL/V)

Chaînes latérales : 10 Hydrophiles / 10 Hydrophobes

3 Basiques — 2 Acides – 5 Polaires Neutres / 10 Non polaires

NOTES GÉNÉRALES

Inclusion
MP : parrafine (coupes fines)
Résines (MET) : épon, araldite, vestopal
Toluène: permet d’enlever la parrafine

Détergents
Doux: Triton (WR 1399), NP6 et NP12, lubrol, digitonine
Forts : SDS (Dodécyl Sulfate de sodium) + saponine (doux, fort ?)

Et puis…
EDTA, trypsine, collagène : permettent la dissociation cellulaire
!-mercaptoéthanol : rompeur de liaisons disulfures

FISH : Fluorescent In Situ Hybridation

Bromodeoxyuridine : nucléoside analogue à la thymidine

Liquide de Boin : mélange alcool-acide-formol (tue les cellules, sans qu’il n’y ait nécrose)

Fiches – Jeremy DC
ANNEXES
ANATOMIE
 Colonne Vertébrale

Corps Processus Processus Processus

Vertèbre Foramen Pédicules Lames
Vertébral Articulaires Transverses Épineux

Type Médian, Limité par la face Antéro- 2 Sup, 2 Inf, Latéraux Se dirigent en Impair, médian,
ventrale, dorsale du CV en postérieurs, pont arrière et en dorsal, palpable
Forment la colonne
massif ; clé de avant, par l’AV en d’union avec le dedans, réunion
des processus
la statique arrière corps entre elles
articulaires
vertébrale

Cervicale Rectangulaire, Triangulaire à Insertion sur la Dir. Vert., Sup En avant, Plus longues Prismatique !,
7 (C3-C6) avec crochet base ventrale face latérale s’articule avec Inf, constituent les que hautes Longs, Inclinés
(uncus) Surface art. planes, gouttières en bas, en
Orientées à 45°. Sup (foramen arrière, Sommet
regarde en haut et transversaire*) bifide,
en arrière. Mvts de bituberculeux
Flex-Ext et Latéralité

Thoracique Demi-cylindre, 2 Cylindrique Insertion sur la Dir. Vert., Facette Se dirigent en Aussi haute que Long, oblique
12 (T4-T8) Demi-facettes face postérieure art. sup. s’oriente dehors, large en bas et en
articulaires du CV, se dirige franchement en franchement en arrière,
costales sur la franchement en arrière, à peine en arrière.
Celui de T6 se
face latérale arrière haut et en dehors. Extrémité libre
projette au
Flex-Ext limitée, renflée, Surface
corps de T8.
Latéralité et Rot. art. costale
atteignent une cartilagineuse
certaine amplitude (trochoïde)

Lombale Réniforme Triangulaire (!) Insertion sur Art. sup taillée en Costiformes, Plus hautes que Massifs, trapus
5 (L2-L4) l’arête séparant segment de cylindre, Dirigés en dehors larges
face latérale de la creux, vertical
face postérieur du (trochoïde). Regarde
CV, Massif, Dirigé en dedans.
en arrière

* Foramen transversaire : passage de l’artère vertébrale, du plexus veineux, et du nerf vertébral

Fiches – Jeremy DC
 Colonne Vertébrale
Variations cervicales : Atlas et axis forment la charnière crânio-vertébrale.
Atlas (C1) présente des masses latérales; Axis (C2) la dent de l’axis (processus odontoïde); C7 possède
un processus épineux long, unituberculeux, proéminent, et facilement palpable.
Variations thoraciques : T11 et T12 n’ont pas de surface articulaire costale.

Colonne fixe : le sacrum (os impair, médian) est la fusion des 5 vertèbres sacrales, le coccyx est la fusion
des 4 à 5 éléments coccygiens. La base du sacrum s’articule avec les os coxaux par les surfaces
auriculaires. Le sommet du sacrum s’articule avec la base du coccyx. Les processus articulaires
supérieurs s’articulent avec les proc. art. inférieurs de L5.
La face ventrale du sacrum est lisse. Les 4 foramens sacraux ventraux laissent passer les rameaux
ventraux des nerfs spinaux sacraux. (Idem Dorsaux)
Le 5ème nerf spinal sacral naît entre le sacrum et le coccyx.

Courbures : lordose cervicale (convexe en avant, C5) ; cyphose thoracique (concave en avant, T6);
lordose lombaire (convexe en avant, L3).
Le sacrum présente une concavité vers l’avant. Le promontoire correspond au bord supérieur de la 1ère
vertèbre sacrale.

Processus articulaires : jointures synoviales ;

Lames reliées par des ligaments jaunes (élastiques) ;
Processus transverses ou épineux reliés par des ligaments ou des muscles (inter-transversaires ou inter-
épineux) ;

Chaque segment de la colonne a une mobilité qui va en diminuant de haut en bas.

Mouvement global : Flexion 120°, Extension 145°, Rotation 90°, Latéralité 75°.

La moelle spinale va de C1 à L2, puis queue de cheval.

Canal vertébral : SNC jusqu’en L2 (moelle, racine) ; Méninges jusqu’en S2 (sac dural) ; Espace épidural
et son contenu.
Foramen intervertébral : SNP- Nerf spinal, ganglion nerveux spinal (sensitif), artère segmentaire, veines
intervertébrales, rameau méningé (SN!), graisse

Examen clinique — RX Standard : face profil " – Scanner : os – IRM : disque.

Ponction lombaire : diag de la méningite ; prélèvement de liq. cérébro-spinal ; ponction dans le sac dural
entre L4-L5 ou L3-L4.
Traversée : peau, ligament interépineux, ligament jaune, espace épidural, sac dural.

Fiches – Jeremy DC
 HORMONES

Axe hypothalamo-hypophysaire
• Hypothalamus-Neurohypophyse :
- Ocytocine (sensibilise la musculature lisse),
- Vasopressione (élève la pression artériel et agit sur la réabsorption de l’eau)
• Hypothalamus-Adénohypophyse :
- Hormones effectrices : somato- et mélanotrope,
- Hormones Glandotropes : contrôle
! Gonadotropes : FSH, LH, Prolactine,
! Non gonadotropes : ACTH (surrénale), TSH (throïde)

Glandes thyroïde et parathyroïdes

• Hormones thyroïdiennes :
- Thyroxine (T4) et tri-iodothyronine (T3) : régulation du métabolisme de base,
- Calcitonine : hormone hypocalcémiante, strimule l’ostéogenèse
• Parathormone, seule hormole hypercalcémiante, qui stimule les ostéoclastes.

Pancréas
• Les ilôts de Langerhans secrètent trois types d’hormone
- Glucagon (A/20%)
- Insuline (B/80%)
- Somatostatine (D/Rares)

Glandes surrénales
• Cortico-surrénale :
- Zone glomérulée : glucocorticoïdes (cortisol),
- Zone fasciculée : minéralocorticoïdes (aldostérone) – rétention de Na+,
- Zone réticulée : Androgènes (DHEA)
• Médullo-surrénale
- Cellule chromaffine : adrénaline et noradrénaline

Hormones sexuelles

Spermatogenèse (poly bio)

- Anté-hypophyse : sécrétion d’hormones gonadotropes
- ICSH (H° de Stimulation des Cellules Interstistielles) agit sur les cellules de Leydig,
! les cellules de Leydig secrètent la testostérone, qui agit sur les cellules de Sertoli et
sur la fréquence de division des spermatogonies
- FSH (H° Folliculostimulante) agit sur les cellules de Sertoli, synthétisant
! des protéines de liaisons,
! des mitogènes
agissant sur la fréquence de division des spermatogonies.

Fiches – Jeremy DC
La testostérone
- stimule la spermatogenèse (action directe sur les tubes séminifères),
- agit sur les voies séminales, développe la vésicule séminale et la prostate (par le système
vasculaire),
- active le développement et le maintien des caractères sexuels secondaires,
- stimule la fonction des glandes sébacées et sudiripares (acné),
- stimule la libido et la puissance sexuelle.

La spermatogenèse est sous rétro-contrôle négatif :

• Les hormones gonadotropes sécrétées par l’adénohypophyse stimulent les testicules :
- FSH active la spermatogenèse et stimule la formation d’Inhibitine par les cellules de
Sertoli,
- LH stimule la synthèse de testostérone par les cellules de Leydig
• Un taux sanguin ascendant de testostérone inhibe la synthèse de gonadotropines par
l’adénohypophyse

Ovogenèse
- Action de l’axe hypothalamo-hypophysaire sur l’ovaire,
- Action de l’ovaire sur la muqueuse utérine (nidation de l’œuf fécondé),
- Action de l’ovaire et de l’utérus sur l’axe hypothalamo-hypophysaire
Les organes cibles sont l’ovaire, l’endomètre et le col de l’utérus à l’accouchement (rôle de l’Ocytocine)

Le cycle ovarien est sous rétro-contrôle négatif :

• Phase folliculaire (œstrogénique) du 5 au 14ème jour : mûrissement d’un follicule
• Ovulation au 15ème jour : pic de LH
- Stimlation de la production d’œstrogènes,
- Déclenche l’ovulation,
- Transforme le follicule vide en corps jaune,
- Déclenche la production de progestérone.
• Phase lutéinique (progestative) du 15 au 28ème jour
Le taux élevé de progestérone et d’œstrogènes inhibe la production de FSH et LH par
l’hypophyse.

Fiches – Jeremy DC
 SNC et SNP

Moteurs
Nerf Sensoriels Sensitifs Moteurs Somitiques Moteurs végétatifs P! Ganglions P!
Branchiaux

I Olfactif Odorat

II Optique Vision

Moteurs du bulbe de Ciliaire, sphincter de

III Oculomoteur Ciliaire
l’œil la pupille

Moteur du bulbe de
IV Trochléaire l’œil

V Trijumeau Face (langue) Masticateurs

Moteur du bulbe de
VI Abducens l’œil

Glandes lacrymales, Sphéno-palatin,

Méat acoustique Moteurs de la
VII Facial Gustation sub-mandibulaire, sub-mandibulaire,
externe face
sub-linguale sub-lingual

VIII Cochléo
Audition
Vestibulaire

IX Glossopharyngien Gustation Pharynx Pharynx Glande parotide Otique

Pharynx, Larynx,
Viscères thoraco- Intra-viscéraux (+
X Vague Gustation Viscères abdominaux Pharynx
abdominaux P! pelvien)
(sensitif P!)

Sterno-cléido-
XI Accessoire Larynx
mastoïdien, Trapèze

XII Hypoglosse Langue

Fiches – Jeremy DC