TP C1.
Bleu de méthylène dans un collyre
Objectif
Doser par étalonnage, à l’aide d’un spectrophotomètre, le bleu de méthylène contenu dans une
solution pharmaceutique.
Présentation de la démarche
La solution pharmaceutique étudiée est ici le collyre bleu LAITER ; il contient de l’hydroxyde de
méthylthioninium. Le bleu de méthylène est le chlorure de méthylthioninium. Les spectres d’absorption
des solutions de collyre bleu LAITER et de bleu de méthylène sont identiques.
La manipulation consiste à :
— tracer la courbe d’étalonnage donnant l'absorbance A en fonction de la concentration massique c
en bleu de méthylène ;
— mesurer l’absorbance de cette solution, déduire de la courbe d’étalonnage la concentration
massique correspondante. Cette concentration massique équivaut à celle d’un collyre qui
contiendrait du bleu de méthylène ; il devient alors possible de déterminer la concentration
massique en hydroxyde de méthylthioninium.
Protocole
Matériel et produits
2 burettes graduées de 25 mL
6 tubes à essais et porte-tubes
Spectrophotomètre et cuves
Solution de bleu de méthylène de concentration massique 5,00 mgL1 obtenue par dilution d’une
solution mère à 1,00 gL1 (les concentrations doivent être précises)
Collyre contenant de l’hydroxyde de méthylthioninium 1
Protocole
À partir d'une solution mère de bleu de méthylène de concentration massique c0 = 5,00 mgL1,
réaliser une échelle de teintes constituée par 10,0 mL de chaque solution fille suivante :
Numéro de la
1 2 3 4 5 6
solution
Concentration
massique 5,0101 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0
(mgL1)
Réaliser les dilutions dans des tubes à essais à l’aide de burettes pour prélever les volumes d’eau et
de solution mère.
À l’aide du spectrophotomètre, mesurer l’absorbance A des solutions préparées.
Régler préalablement le spectrophotomètre à la longueur d’onde = 660 nm et régler le “ zéro ” avec
une cuve contenant de l’eau distillée.
Le collyre a été dilué 100 fois, mesurer l’absorbance de la solution diluée ainsi préparée.
Remarque :
— Compte tenu du coût du collyre, est proposée aux élèves la solution déjà diluée qui, comme le
collyre, est conservée au frais et dans un flacon brun, à l’abri de la lumière.
— Il est alors possible de demander aux élèves comment procéder pour réaliser cette dilution
sachant que, par exemple, 200 mL de solution ont été préparés à partir du collyre.
1
. Dans le collyre bleu LAITER étudié, la concentration massique de l’hydroxyde de méthylthioninium est de
200 mgL1.
Exemples de questions (exploitation de la manipulation)
1. À partir du spectre de la solution mère de bleu de méthylène de concentration massique c0 =
2,50 mgL1, ci-dessous, justifier la valeur de la longueur d’onde choisie pour réaliser les mesures
au spectrophotomètre.
Le pic d'absorption du bleu de méthylène se situe à 660 nm.
2. De la courbe d’étalonnage, déduire la concentration massique d’un collyre qui contiendrait du bleu
de méthylène
3. Le bleu de méthylène utilisé pour réaliser la solution mère a pour formule C 14H18ClN3S,3H2O ; c’est
un sel trihydraté de masse molaire moléculaire 373,90 gmol1. Sachant que la masse molaire
moléculaire de l’hydroxyde de méthylthioninium est 301,35 gmol1, en déduire la concentration
massique en hydroxyde de méthylthioninium du collyre étudié.
Comparer à l’indication portée sur l’emballage.
Éléments de réponse
Courbe d’étalonnage du bleu de méthylène :
Numéro de la Solution de
1 2 3 4 5 6
solution collyre
Concentration
massique 5,0101 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 -
(mgL1)
Absorbance 0,053 0,128 0,243 0,374 0,488 0,659 0,314
L’absorbance mesurée pour la solution pharmaceutique diluée vaut 0.314 ; ce qui, sur la courbe
d’étalonnage de la solution de bleu de méthylène, situe sa concentration massique à 2,45 mgL1.
La solution commerciale a donc pour concentration massique en bleu de méthylène :
2,45 100 = 245 mgL1.
Il s’agit en fait de celle d’un collyre qui contiendrait du bleu de méthylène.
La concentration massique en hydroxyde de méthylthioninium est alors :
valeur très proche de celle figurant sur l’emballage (200 mgL1).
Spectre de la solution diluée de collyre bleu LAITER :
Formules topologiques du bleu de méthylène et de l’hydroxyde et méthylthioninium :