Université Internationale
Abulcasis des Sciences de la Santé
Faculté de Pharmacie
TRAVAUX PRATIQUES DE CHIMIE ANALYTIQUE INSTRUMENTALE
Méthodes d’extraction
Pr M. EL KARBANE
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I-Généralités
Définition: L’extraction est une technique de séparation sélective d’un
ou plusieurs composés d’un mélange sur la base de ses propriétés
chimiques et/ou physiques
Purification d’un milieu
Objectifs Isolation d’une ou plusieurs molécules
Concentration d’une solution
L’industrie pharmaceutique
L’agroalimentaire
Applications Traitement des eaux
Pétrochimie
L’industrie parfumerie 2
I-Généralités
Différents types d’extraction
Extraction discontinue Extraction continue
Extraction L-L –Solvant Entrainement à la vapeur
Décoction
Hydro distillation
Infusion
Extraction L-S-Cartouches
Macération
Extraction S-L Soxhlet
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II-Extraction liquide- Liquide
Extraction Liquide - Liquide
Extraction par solvatation : Extractant neutre
Extraction à pH contrôlé : Ajout d’un acide ou une base
Extraction par chélation : Ajout d’un agent chélatant
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II-Extraction liquide- Liquide
Protocole expérimentale
Non miscible avec le solvant de départ
Une grande affinité de l’espèce vis-à-vis le solvant
Choix du Solvant Ne doit pas réagir avec l’espèce à extraire
Doit être volatil : faible température d’ébullition
Ne doit pas être toxique 5
II-Extraction liquide- Liquide
Paramètres de l’extraction:
Extraction simple
Extraction multiple
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II-Extraction liquide- Liquide
Application:
1-Extraction du diiode (I2) dans une solution de l’eau iodée
Solution Iodée: 50 mL d’eau iodée
Préparation: Solubiliser 2 g de I2 dans 100 mL d’eau
Solvant Eau *Alcool Chloroforme Benzène Cyclohexane
Solubilité de I2 ( g/L) 0,30 250 210 140 2,72
Densité 1,00 0,80 1,49 0,88 0,78
Température d’ébullition (°C) 100 78 62 80 81
*L’alcool est miscible avec l’eau
1-Quel solvant vaut-il mieux choisir pour extraire l'iode de la phase aqueuse ?
Justifier votre réponse ?
2-Réaliser une extraction simple avec 30 mL du solvant organique et une extraction
multiples (n =3) avec 10 mL du solvant organique
Comparer les couches extraites et les raffinats dans l’extraction simple et multiple 7
II-Extraction liquide- Liquide
2-Extraction par chélation de I2
Augmentation de la solubilité du diiode en utilisant une solution contenant des
ions iodures (formule I– ) comme agent chélatant
I2 + KI KI3 Triiodure de potassium
Contrairement à I2, les sels d'I3− sont particulièrement solubles dans l'eau
Protocole:
Dans une ampoule à décanter qui contient 20 mL d’une solution de chloroforme iodée,
ajouter 20 mL de KI à 10%,
Après extraction récupérer la phase aqueuse et refaire une deuxième extraction par 20 mL
de KI à 10%
1-Dans quelle phase (aqueuse ou organique) le produit obtenu se dissout-il ?
2-Comparer la solubilité de KI3 et I2 dans l’eau? 8
II-Extraction liquide- Liquide
3-Extraction en modifiant le pH
L’acide benzoïque est un composé moléculaire de formule C6H5-COOH. Ce
composé est soluble dans le toluène (solvant organique) mais peu soluble dans
l’eau.
On veut extraire l’acide benzoïque dissout dans le toluène ?
(10 g de l’acide benzoique dans 200 ml de toluène)
- Le pKa de l’acide benzoïque: 4,2
- Solubilité de l’acide benzoïque dans l’eau :2,9g/L
- Densité du toluène :0,86
- Température d’ébullition :110,6°C
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II-Extraction liquide- Liquide
Protocole:
Prélever 30 mL de la solution d’acide benzoïque dissout dans le toluène.
Ajouter 15 mL d’une solution aqueuse de soude à 10%
Verser dans l’ampoule à décanter. Agiter. Dégazer pointe en l’air
Après décantation, séparer la phase aqueuse de la phase organique
Ajouter 50 mL de solution de HCl à 10% à la solution obtenue,
1-Quelle est la réaction de la soude sur l'acide benzoïque ? Dans quelle phase (aqueuse ou
organique) le produit obtenu se dissout-il ?
2- Quelle est la réaction de la solution d'HCl sur l'ion benzoate?
3- Calculer le rendement de l’extraction
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III-Extraction Solide- Liquide
1-Extraction par Soxhlet
Un extracteur de Soxhlet est une pièce de verrerie utilisée en
chimie analytique et en chimie organique qui sert à faire
l'extraction par solvant d'une espèce chimique contenue dans une
poudre solide (pour les produits non volatils).
Le cycle se répète indéfiniment
Avantages Gain de temps de manipulation
Le solvant est constamment distillé
Taille de la cartouche étant limitée
Inconvénients
Dégradation de certaines substances chimiques
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III-Extraction Solide- Liquide
Application: L’extraction d’un principe actif Sulfaméthoxypyridazine
à partir d’un médicament Sultirène comprimé dosé à 250 mg
Protocole:
Broyer 20 comprimés de Sultirène
Peser la poudre et la mettre dans la cartouche
Mettre la cartouche dans le soxhlet
Mettre 250 ml de l’acétone dans le ballon du soxhlet et chauffer
Laisser pendant 1 heure,
Prendre le ballon et procéder à l’évaporation du solvant à l’aide du rotavapeur
1-Déterminer la masse du résidu après l’extraction
2-Déterminer la masse du résidu par rapport à un comprimé
3-Calculer le rendement massique de l’extraction
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III-Extraction Solide- Liquide
2-Entrainement à la vapeur
L’entrainement à la vapeur (l’hydrodistillation) est la méthode la plus utilisée
pour extraire des huiles essentielles. Elle consiste à entraîner les composés
volatiles des produits naturels avec la vapeur d’eau.
Système: Entrainement à la vapeur Hydrodistillation
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III-Extraction Solide- Liquide
Application: L’extraction des huiles essentielles des
feuilles d'Eucalyptus par hydrodistillation de type
clevenger.
Protocole:
Transvaser 50 g de feuilles d'Eucalyptus dans un ballon de 250 ml
Ajouter 150 ml d’eau
Mettre en place le montage de l’hydrodistillation
Laisser pendant 1 heure
1-Décrire l’aspect du distillat obtenu ?
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Faculté de Pharmacie
TRAVAUX PRATIQUES DE CHIMIE ANALYTIQUE INSTRUMENTALE
Méthodes d’analyses CCM,HPLC &
spectrophotomètre UV
I-Généralités sur les méthodes chromatographiques
Définition
L’ensemble des méthodes qui assurent la séparation des constituants d’un
mélange en utilisant deux phases non miscibles.
Temps de
Qualitatif rétention
Objectifs
Quantitatif Aire du pic
2
I-Généralités sur les méthodes chromatographiques
Chromatographie
Chromatographie Gazeuse Chromatographie Liquide
Colonne
surface
CCM
Partage
CP
Echange d’ion
Exclusion
Adsorption
P. Inverse
P. Normale
- 3
II-Chromatographie sur Couche Mince(CCM)
Préparation de la cuve
Préparation de la plaque
Réalisation d'une CCM
Elution
Révélation
l'oeil nu Lampe UV KMnO4
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II-Chromatographie sur Couche Mince(CCM)
Interprétation
La position finale de la tache est caractérisé par le rapport frontal(Rf), ce dernier
est caractéristique d’une molécule si on garde la même phase stationnaire et le
même éluent,
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III-Chromatographie Liquide à Haute Performance (HPLC)
Les composantes de base d’un système HPLC:
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IV- Spectrophotométrie UV/Visible
Principe du spectrophotomètre UV visible
Un spectrophotomètre est un appareil qui permet de faire passer de la lumière à
travers une solution et de mesurer l’intensité de lumière transmise en fonction de
la longueur d’onde.
I0 I
l
Loi de Beer-lambert
Soit une radiation monochromatique de longueur d'onde fixe traversant un échantillon
de concentration c et d'épaisseur l, l'absorbance vérifie la loi de Beer-Lambert soit :
log I0/I=A = ε l c
NB: Cette loi n'est valable que pour les faibles concentrations et en général pour
des absorbances inférieures à 1. 7
V- Quantification en HPLC et UV
L’analyse par ces deux techniques est basée sur le fait que l’aire des pics
chromatographiques ou l’absorbance est proportionnelle à la concentration du
produit analysé: A = K×C
1-Méthode d’analyse validée
La calibration est effectuée à un seul point :
Cref: Concentration du référence Céch: concentration de
la solution à examiner
Aire du référence = K× Cref
Céch = (Aire éch/ Aire réf) × Cref
Aire de l’échantillon = K× Céch
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V- Quantification en HPLC et UV
2-Méthode d’étalonnage externe:
L’étalonnage consiste à préparer à partir d’une substance pure une gamme
d’étalonnage qui va couvrir la plage de travail.
L’équation de la courbe :
Aire= acx+b
Abs = acx+b 16
Application
- 10
1- Identification du paracétamol dans
une spécialité pharmaceutique par CCM
1-Préparation des échantillon:
Solution du référence: Dissoudre une pointe de spatule du témoin dans un peu de
l’éluant
Solution d’échantillon : Ecraser un comprimé du spécialité pharmaceutique et
dissoudre une pointe de spatule dans un peu de l’éluant
2-Conditions chromatographiques :
Phase stationnaire : gel de silice 60 avec indicateur de fluorescence UV 254
Phase mobile : mélange de solvants: Hexane/ Acétate d’éthyle :20/80(v/v)
Révélation : une lampe UV
Compte-rendu
- Calcul du rapport frontal Rf pour chaque tache
- Conclusion sur la conformité du produit
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2-Dosage du paracétamol et caféine dans
une spécialité pharmaceutique par HPLC
135 mg Paracétamol
Parasphan 40 mg Caféine
265 mg Acide acétylsalicylique
2-1 Préparation des solutions de références
Peser 13.5 mg paracétamol + 4 mg caféine fiole100 ml, [S0]
5 ml 5 ml
5 ml
Fiole 50ml[S2] Fiole 25ml[S3]
Fiole 100ml[S1]
2-2 Préparation de l’échantillon:
Dissoudre un comprimé Parasphan dans une fiole de 1000 ml.
10 ml
Fiole 100ml[Sx]
Condition chromatographiques:
Paramètre Condition optimisée
Phase mobile Eau/Méthanol : 60/40 (v/v)
Mode de séparation Isocratique
Colonne Hypersil C18, 150/4.6 mm, 5 µm
Débit 1 ml/min
Longueur d’onde 260 nm
Température de la colonne 30 °C
Volume injecté 50 µl
Temps d’acquisition 3 min
Diluent Eau
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Compte-rendu
Calcul de la teneur du paracétamol et caféine par comprimé:
Méthode d’étalonnage externe
1-En utilisant les solutions: [S1], [S2], [S3] et la solution à examiner [Sx]
Tracer les courbes d’étalonnage Aire=f (concentration des solutions références)
Paracétamol
Caféine
Déterminer les équations des courbes
Calculer la teneur du paracétamol et de caféine par comprimé.
Méthode validée
2-Calculer la teneur en paracétamol et caféine en utilisant [S2] et [Sx]
Critère d’acceptation : 85%≤ T(%)≤ 115% 19
3-Dosage du paracétamol dans une spécialité
pharmaceutique par spectrophotomètre UV
Préparer une solution mère S d'étalon puis 3 dilutions (S1, S2, S3).
Préparation de la solution S : Peser 50 mg du Paracétamol SCR est transféré dans
une fiole de 1000 ml ajouter l’eau jusqu’au trait de jauge et agiter jusqu' à
solubilisation
Préparation des solutions: S1, S2, et S3
5 ml
S1 : S Fiole de 50 ml
10 ml
S2 : S Fiole de 50 ml
15ml
S3 : S Fiole de 50 ml
Préparation de l’échantillon
Dissoudre un comprimé de paracétamol dans une fiole de 1000 ml.
2 ml
Fiole 100ml [Sx] 15
Effectuer le dosage spectrophotométrique en UV, lecture à 245 nm (blanc : eau ) à
l'aide du spectrophotomètre UV.
Compte-rendu
En utilisant les solutions: [S1], [S2], [S3] et la solution à examiner [Sx]
Tracer la courbe d’étalonnage Absorbance=f(concentration des solutions
références)
Déterminer la concentration du paracétamol dans l’échantillon
Calculer la teneur du paracétamol par comprimé.
Critère d’acceptation : 85%≤ T(%)≤ 115%
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