République algérienne démocratique et populaire
وزارة اﻟﺘﻌﻠﯿﻢ اﻟﻌﺎﻟﻲ و اﻟﺒﺤﺚ اﻟﻌﻠﻤﻲ
Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique
ECOLE NATIONALE SUPERIEURE
اﻟﻤﺪرﺳﺔ اﻟﻮطﻨﯿﺔ اﻟﻌﻠﯿﺎ ﻓﻲ اﻟﺒﯿﻮﺗﻜﻨﻮﻟﻮﺟﯿﺎ
DE BIOTECHNOLOHIE
CONSTANTINE ﻗﺴﻨﻄﯿﻨﺔ
Génétique moléculaire et plasticité des génomes microbiens
TD N°3 : Régulation de l’expression des gènes chez les procaryotes
Problème N°1
La carte de l’opéron lac est la suivante : POZY
La région promotrice (P) est au niveau duquel débute la transcription, qui commence par la
fixation de la molécule d’ARN polymérase avant la production véritable d’ARNm. Les
promoteurs modifiés par mutation (P-) ne peuvent apparemment pas fixer la molécule d’ARN
polymérase. On peut faire certaines prédictions quant aux conséquences de mutations P-.
- Utilisez vos prédictions et votre connaissance du système lactose pour compléter le tableau
ci-dessous. Mettez un « + » lorsqu’une enzyme est produite et un «-» dans le cas contraire. La
première ligne a été complétée à titre d’exemple.
β-Galactosidase Perméase
Pas de Pas de
Génotype lactose lactose
lactose lactose
I+ P+ O+ Z+ Y+/ I+ P+ O+ Z+ Y+ - + - +
I- P+ Oc Z+ Y-/ I+ P+ O+ Z- Y+
Is P+ O+ Z+ Y-/ I+ P+ O+ Z- Y+
Is P+ O+ Z+ Y+/ I- P+ O+ Z+ Y+
I- P+ Oc Z+ Y-/ I- P+ O+ Z- Y+
I- P- O+ Z+ Y+/ I- P+ Oc Z+ Y-
I+ P+ O+ Z- Y+/ I- P+ O+ Z+ Y-
Problème N°2
Les gènes indiqués dans le tableau ci-dessous appartiennent au système de l’opéron lac
d’[Link]. Les symboles a, b, et c représentent le gène du répresseur (I), la région opératrice
(O) et le gène structural (Z) de la β-galactosidase, bien qu’ils ne soient pas nécessairement
dans cet ordre. De plus, l’ordre dans lequel les symboles sont écrits dans les génotypes ne
correspond pas obligatoirement à la véritable séquence dans l’opéron lac.
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Gène Z actif (+) ou inactif (-)
Génotype Inducteur absent Inducteur présent
a- b+ c+ + +
a+ b+ c- + +
a+ b- c- - -
a+ b- c+/a- b+ c- + +
a+ b+ c+/a- b- c- - +
a+ b+ c-/a- b- c+ - +
a- b+ c+/a+ b- c- + +
a. Déterminez le symbole (a, b ou c) représentant chacun des gènes lac : I, O et Z.
b. Dans le tableau, un exposant « moins » accolé à un symbole de gène indique
simplement un mutant, mais vous savez que des mutants dont l’action est particulière
ont des dénominations spécifiques. Utilisez les symboles traditionnels de gènes de
l’opéron lac pour désigner chaque génotype du tableau.
Problème N°3
On mesure l’activité de l’enzyme β-galactosidase produite par des cellules de type sauvage
cultivées sur un milieu enrichi en différentes sources de carbone. On observe les résultats
suivants, indiqués en unités relatives :
Glucose Lactose Lactose+glucose
0 100 1
- Prédisez les niveaux relatifs de l’activité β-galactosidase dans des cellules cultivées
dans des conditions similaires lorsque ces cellules sont lacI-, lacIs, lacO et crp-.
-
Problème N°4
Chez [Link], l’opéron trp code des enzymes essentielles à la biosynthèse du tryptophane. Le
mécanisme général de contrôle de l’opéron trp est similaire à celui observé pour l’opéron lac :
lorsque le répresseur se fixe à l’opérateur, la transcription ne peut avoir lieu ; lorsque le
répresseur ne s’y fixe pas, la transcription a lieu. La régulation de l’opéron trp diffère de la
régulation de l’opéron lac par les caractéristiques suivantes : les enzymes codées par l’opéron
trp ne sont pas synthétisées en présence de tryptophane mais sont produites en son absence.
Dans l’opéron trp, le répresseur possède deux sites de liaison : un pour l’ADN et l’autre pour
la molécule effectrice, le tryptophane. Le répresseur trp doit d’abord fixer une molécule de
tryptophane avant d pouvoir se lier lui-même à l’opérateur trp.
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a. Dessinez une carte de l’opéron tryptophane en indiquant le promoteur (P), l’opérateur
(O) et le premier gène structural de l’opéron tryptophane (trpA). Indiquez sur votre
dessin le site de l’ADN au niveau duquel se lie la protéine répresseur lorsqu’elle a fixé
du tryptophane.
b. Le gène trpR code le répresseur ; trpO est l’opérateur et trpA code l’enzyme
tryptophane synthétase. Un répresseur appelé trpR2 ne peut fixer de tryptophane ;
l’opérateur trpO2 empêche la fixation du répresseur et l’enzyme codée par le gène
mutant trpA2 est totalement inactive. Vous attendez vous à trouver de la tryptophane
synthétase active dans chacune des souches mutantes ci-dessous lorsque les cellules
sont cultivées en présence de tryptophane ? en son absence ?
i. R+ O+ A+ (type sauvage)
ii. R- O+ A+/R+ O+ A-
iii.
R+ O- A+/R+ O+ A-
Problème N°5
Chez Neurospora, toutes les mutations affectant les enzymes carbamyl phosphate
synthétase et aspartate transcarbamylase sont situées au niveau du locus pyr-3. Lorsque
vous induisez des mutations dans pyr-3 avec de l’ICR-170 (un mutagène chimique), vous
découvrez que les deux fonctions enzymatiques sont absentes, ou que seule la fonction
transcarbamylase est absente. On n’observe jamais de synthétase inactive lorsque la
transcarbamylase est active. (On suppose que l’ICR-170 induit des décalages du cadre de
lecture).
- Interprétez ces résultats en fonction d’un éventuel opéron.
Problème 6
Que deviendrait la capacité du bactériophage lambda de lyser une cellule hôte s’il avait acquis
une mutation dans le site OR de fixation de la protéine Cro ? Pourquoi ?
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