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Composition et préparation d'eaux peptonées

Le document décrit la préparation de milieux de culture comme l'eau peptonée, le XLD et le TBX en donnant leur composition et mode de préparation. Il est également question de la stérilisation des milieux, de l'ensemencement et de l'incubation à différentes températures.

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Composition et préparation d'eaux peptonées

Le document décrit la préparation de milieux de culture comme l'eau peptonée, le XLD et le TBX en donnant leur composition et mode de préparation. Il est également question de la stérilisation des milieux, de l'ensemencement et de l'incubation à différentes températures.

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« Eau peptonée » :

Mode de préparation : Ajoutez 20g de poudre pour 1 litre


d’eau distillée puis mélangez jusqu’à dissolution complète.
Répartissez le liquide en flacons et stérilisez-les à 121°C
pendant 15 minutes à l’autoclave. Composition : en g/L
Peptone : 10 Phosphate disodique anhydre : 3,56 Phosphate
monopotassique : 1,50 Chlorure de potassium : 5
« XLD » :
Mode de préparation : Ajoutez 55g de poudre pour 1 litre
d’eau distillée froide. Portez le tout à ébullition sous agitation
jusqu’à dissolution complète. Laissez refroidir à 45-50°C,
mélangez et répartissez en boîtes de Pétri stériles.
Composition : en g/L Xylose : 3,5 L-Lysine : 5 Lactose : 7,5
Sucrose : 7,5 Chlorure de sodium : 5 Extrait de levure : 3
Désoxycholate de sodium : 2,5 Thiosulfate de sodium : 6,8
Citrate d’ammonium ferrique : 0,8 Rouge de Phénol : 0,08
Agar : 13,5
« TBX »  :
Verser 36,6 g de poudre dans 1 litre d’eau distillée. Stériliser
15 minutes à 121°C à l’autoclave. Refroidir à 50°C et répartir
en boîtes de Pétri stériles.
Sécher les boîtes. Préparer l’échantillon en effectuant une
dilution au 1/5e ou 1/10e avec 0,1 % (p/v) d’eau peptonée
stérile.
La stérilisation de milieu de culture se fait soit par
autoclavage ou par chauffage sur plaque chauffante avec
agitation.

C’est la préparation de la suspension mère à partir de


l’échantillon.
L’appareil avec lequel se réalise cette étape est : LE DILUMAT
EXPERT. Cette étape commence par : pesage de l’échantillon :
puis dilution par EPT.
Si la matière grasse> 20% : EPT+TWEEN80.
Pendant cette étape il y a un pré-enrichissement dans le cas
de la recherche de salmonelle qui se fait avec EPT.
Exception : chocolat : L’enrichissement se fait avec le LAIT.

DEFINITION
L'ensemencement est le fait d'introduire des micro-
organisme (germes) dans un bouillon du culture dans une
boîte de Pétri. Il conduit à une prolifération de ces
organismes.
Cet acte se fait :
 à l’aide d’une anse.
L’ensemencement se fait soit en profondeur soit en surface :
Exemples :
TBX : en profondeur (pour E. Coli)
GGC : en profondeur (pour LM)
EXCEPTION : pour FT : PCA : en profondeur et en surface.
Après ensemencement, les divers milieux seront incubés dans
des étuves de différentes températures et pour des périodes
différentes aussi.
MILIEUX  : Température  : Durée  :
TBX 44°C 24H
PCA 30°C 3 jours
GGC 25°C 48H
RVS 42°C 48H

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