Immuno-
dosages
Méthodes
optiques
Introduction
à la chimie Chimie
ana
analytique
appliquée
Méthodes
séparatives
Méthodes
électro-
chimiques
Charlier C.
Bac2 – Technologie animalière
HELHa – Fleurus
2017
8. La chromatographie en phase gazeuse
Phase mobile Phase stationnaire
GAZEUSE liquide (C.G.L.) ou solide (C.G.S.)
dans une colonne
Applicable à des composés relativement VOLATILS (M < 1000g/mol)
et thermiquement stables.
Chromatographie 26
Appareillage de CPG
Chromatographie 27
Appareillage de CPG : Les colonnes
REMPLIES (packed) CAPILLAIRES
Diamètre interne
0,1 à 0,5 mm
Diamètre interne
2 à 6 mm
Longueur
10 m à 100 m
Longueur
50 cm à 6 m
WCOT = wall coated open tubulure
PLOT= porous layer open tubulure
Chromatographie 28
Appareillage de CPG : Les colonnes
• Exemples de phases stationnaires liquides
« Like dissolves like »
• Exemples de phases stationnaires solides
Charbon actif, silice, alumine, zéolite
Chromatographie 29
Appareillage de CPG : Les systèmes d’injection
Préparation de l’échantillon au préalable !
À vaporisation directe Split / Splitless
Chromatographie 30
Appareillage de CPG : Les détecteurs
• Catharomètre ou détecteur à conductibilité thermique (TCD)
• À ionisation de flamme (FID)
Chromatographie 31
Appareillage de CPG : Les détecteurs
Type de détecteur (abréviation anglaise) Sélectivité, produits détectés
Ionisation de flamme (FID) La plupart des composés organiques
Conductibilité thermique (TCD) Universel
Capture d’électrons (ECD) Produits halogénés, organométalliques
Thermo-ionisation (TID) Produits azotés ou phosphorés
Photo-ionisation (PID) Produits oxygénés, soufrés,
organométalliques, etc.
Spectromètre de masse (GC-MS) Universel
Chromatographie 32
Analyses en CPG
• Analyse qualitative
Le plus souvent pour évaluer le taux de pureté
tr
t'r
Injection
t0
Temps de rétention = une constante pour une substance chromatographiée,
dans des conditions expérimentales identiques.
Fonction de :
- Nature du soluté et de la phase stationnaire
- Température de la colonne
- Débit du gaz vecteur
- Longueur de la colonne
Chromatographie 33
Analyses en CPG
• Ordre d’élution
Fonction de DEUX FACTEURS :
Les interactions entre l’analyte et la phase stationnaire
( polarité)
La température d’ébullition
A votre avis….
• Sur une phase polaire, les solutés apolaires sortent AVANT ou
APRES les solutés polaires de même point d’ébullition ?
• Sur une colonne de polarité donnée, les composants d’une série
homologues (exemple : une série de n-alcanes de C10 à C14)
sortiront dans quel ordre ?
D’abord, le composé en C10, puis celui en C11, … et celui en C14 pour
finir ou bien le contraire, le composé en C14 d’abord ?
Chromatographie 34
Analyses en CPG
• Analyse quantitative
Relation linéaire entre quantité de soluté injectée et aire du pic
m = FR . S
Facteur de réponse
H
d
Chromatographie 35
Analyses en CPG
• Analyse quantitative
Méthode par normalisation interne (ou 100% normalisé)
Cas d’un mélange de composés à analyser exprimés en % (pas de solvant)
%composé = FR . Srelative
Travail en 2 étapes :
1) Injection d’un mélange d’étalons de % connus
détermination des FR
2) Injection du mélange inconnu
mesure des S calcul des Srelatives
Srel . FR = % calcul % corrigé
Chromatographie 36
Analyses en CPG
• Analyse quantitative
Méthode par standardisation EXTERNE
Travail en 2 étapes :
1) Réaliser une droite d’étalonnage
Surface Droite d’étalonnage
Surface inc
C inc Cétalon
2) Injection de l’échantillon inconnu
Conditions expérimentales strictement les mêmes !
Chromatographie 37
Analyses en CPG
• Analyse quantitative
Méthode par standardisation INTERNE
Ajout étalon interne (= standard interne) en MÊME QUANTITÉ à
tous les standards et inconnues
Travail en 2 étapes :
1) Réaliser une droite d’étalonnage
2) Injection de l’échantillon inconnu
Sanal / Sstd int Droite
d’étalonnage
Sinc / Sstd int
Cinc Cétalon
Chromatographie 38
Effet de la température en CPG
Mode isotherme à 45°C
Mode isotherme à 145°C
Programmation de
température de 30°C à 180°C
Chromatographie 39
Dérivation
Permet d’augmenter la volatilité de composés dont téb élevée
o Dérivés sylilés
2 2 NH3 (g)
o Dérivés acylés
HCl
o Dérivés méthylés
H2O
Chromatographie 40