Faculté des Sciences de la Nature et de Vie et des Sciences de la Terre et de l'Univers

Département d 'Agronomie et des Forets

MEMOIRE DE FIN D'ETUDE

En vue de l'obtention du .-.•

Diplôme de Master

Option : Amélioration de la production végétale

Thème
EVALUATION DE L'ACTIVITE ANTIOX JIZE,
HUILES ESSENTIELLES D'AMMOIDES VERTICILLATA
« NOUKHA » DE LA REGION DE TLEMCEN

Présentée par: ABBES Amal

Devant le jury composé de:

Mr. EL-HAITOLEM A. MCA Président
Melle. MKEDDER 1. MAA Examinatrice
Mr. BENYOUBE N. MAB Examinateur
- Mr. TEFIANI C. MAA Promoteur

Soutenu le: 25 Juin 2014

_

2O13I
REMERCIEMENTS

Avant toute chose, je tiens â remercier mon miséricorde Dieu qui m'a donné la force et la
patience.

Je tiens à exprimer mes sincères remerciements à mon encadreur Mr. Tefiani C., M A A
pour sa confiance, son soutien, son attention, ses bons conseils, ses qualités humaines. Pour
tout cela, je tiens à lui exprimer toute ma gratitude. Pour ces encouragements et surtout pour
la grande patience qu'il a manifestée, je me trouve incapable de formuler mes remerciements
à lui. Aujourd'hui je témoigne que je vous suis redevable et je vous remercie par l'occasion,
pour avoir bien voulu examiner mon travail

Je remercie les membres de jury d'avoir bien voulu accepter de juger ce travail, je vous en
Suis très reconnaissante et en espérant être à l'hauteur de votre confiance.

Mes sincères remerciements à Mr. Elhaitoum A., MCA pour l'honneur qu'il nous a fait en
acceptant de présider le jury de mon soutenance.

Je remercie également Mr. BARKAT.M.S, MCB pour l'honneur qu'il m'a réservé d'avoir
accepter d'examiner ce travail.

Je remercie également Melle MKEDDER.I, MAB pour l'honneur qu'il m'a accordé en
acceptant d'examiner ce travail.
 j.4 U34 &4i3iI

Am,noides verticillata L iU
-
C1evengeri- uLà LJ1 jji

- 4J

j-jja Le, L4 JI J4G1I JU ,, JJ

- TBRAS (1C500,02794mg1m1), ABTS(1C50=0,00 1 3mg/mI), DPPH(1C50= 0,422mg/ml)

4. L1.] L'J LJy)1 Ic Ji1I

Aminoides verticillata.

- Ammoides [Link] Lgi .U3' ij)'

 Abbes A.,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles d'Amnioides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

sommaire
Introduction........................................................................................ Pol

Chapitre I: La plante étudiée Ammoïdes verticillata

1 -Présentation de la plante .......................................................................P 04
- 2-Description botanique de la plante ......................................................P 05
a- Carctéres botaniques ........................................................................
b —la formule florale et diagramme floral ............................................
p os
c-systématique du genre Ammoïdes (ou ptychotis) .............................P 06
3- Enquête thérapeutique d ' Ammoides verticillata. .................................... p 07

Chapitre II: Les huiles essentielles

1-Définition des huiles essentielles.......................................................P 10

2- Répartition systématique et caractères chimiques des huiles

essentielles..................................................................................................P 11

3- Propriétés et activités biologiques des huiles essentielles...................P 12

4- Propriétés physique des huiles essentielles........................................P 13

5-Chimie des huiles essentielles ...............................................................

P14
6- Extraction des huiles essentielles.........................................................
P17
6-1. Principales méthodes d'extraction...................................................P 17

6-2. Autres méthodes d'obtention des extraits volatils..........................P 19

7- Les applications alimentaires des huiles essentielles........................

P21
8- Utilisation des huiles essentielles..........................................................
P23
Abbes A.,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles d'Ammoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

9- Classification des huiles essentielles....................................................P 24

10- Mode d'action des huiles essentielles...............................................P 24

P26
11- Parfumerie et cosmetologie...............................................................

12- Toxicité des huiles essentielles...........................................................P 26

13- L'aromathérapie.................................................................................p 26

14- Contrôle de qualité des huiles essentielles........................................p 26

CHAPITRE III: Antioxydants et activité antioxydante

1- Définition d'antioxydants........................................................................P 29

2- Types d'antioxydants...............................................................................P 29

2-1. Antioxydants synthétiques...............................................................P 29

2-2. Antioxydants naturels.......................................................................
P30

2-3. Antioxydants synergistes ...................................................................... P 33

2-4. Antioxydante primaire .........................................................................P 33

2-5. Antioxydants secondaires ......................................................................................................... P 33
3- Toxicité des antioxydants................................................................
P34
4- Méthodes d'évaluation de l'activité antioxydante............................P 35

Chapitre IV : Matériels et méthodes

1- Prévenance de matériels végétal...........................................................

P36
[Link] géographique de la zone d'étude.......................................P 37

1- 2. Récolte et conservation de la plante (Ammoides Verticillata) ............. . 37

 Abbes A.,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles d'Ammoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

2- Extraction l'huile essentielle de plante étudié ............................. P37

2- 1. Procédé d'extraction et conservation des huiles essentielles ............

p37
2- 2. Matériels utilisés ................................................................................
P38
2 - 4. Conservation de l'huile essentielle obtenue...................................
P39
2- 5. Le rendement(Rd)............................................................................
P39
3- L'activité antioxydante........................................................................
rmt
3- 1. Le test du DPPH ...............................................................................
P42
3- 2. Le teste de l'ABTS............................................................................

3 - 3. Le teste de TfBitR.........................................................................
p43
Chapitre V: Résultat et discution

1-Propriétés organoleptiques des huiles essen;elle 8MIX ........... f1 44

2- Teneur en huiles essentielles...........................................................
P44
3- L'activité antioxydante...................................................................
P46
3-1. La méthode du radica libre DPPH.............................................

3-2. La méthode de l"ABTS ........................................................... P 46

3- 3. La méthode de TBARS................................................................P 49

Conclusion et perspectives.................................................................P 51
P 54
Référeiict
 Liste des photos

Photo 01: Amm.oïdes verlicillata «originale »................................................P 04

Photo 02 : Montage d'hydrodi stillation ............................................................ P38
Abbes A.,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles dAmmoides Verticillati de la région de Tlemcen. Master., A P V

pour être non toxique, il est utilisé comme agent de conservation et arôme alimentaire dans les
boissons (Piochon, 2008).

En industrie alimentaire, jusqu'à présent de nombreux micro-organismes pathogènes;

tels que Eschenchia cou, Staphylococcus aureus, Kiebsiella pneumoniae, Listeria
monocytogenes et Campylobacter jejuni, ont été signalé comme agents responsables de
maladies d'origine alimentaire et d'altération des aliments (Walker, 1988; Deak et Beuchat,
1996; Pitt et Hocking, 1997; Betts et al., 1999).

Les aliments frais et/ou transformés sont ouverts à la contamination au cours de leur
production, leur vente et leur distribution (Deak et Beuchat, 1996).

Actuellement, la recherche de nouvelles substances antimicrobiennes purement

naturelles est la préoccupation capitale de la plupart des gens et des chercheurs (Et-Lakany et
al., 1997).

Les huiles essentielles représentent un groupe très intéressant de ces métabolites qui
sont dotés de propriétés antimicrobiennes les rendant intéressants comme produits de
remplacement des antibiotiques pour la manipulation de la fermentation dans le rumen. Ce
sont des composés volatils naturels qui confèrent aux plantes et, notamment, aux herbes et
aux épices, leurs essences (El-Lakany et al., 1997).

Ce sujet nous assemblé d'autant plus intéressant que la flore Algérienne est extrêmement
riche en plantes aromatiques.

A cet effet, on s'est intéressé à l'une des espèces de la famille des ombellifères:
Ammoïdes verticillata qui est caractérisée par sa forte action stimulante et son remarquable
pouvoir antimicrobien (Abdelouahid et Bekhechi, 2004).

Ceci nous a amené à étudier l'activité antioxydante des huiles essentielles d'Ammoïdes
verticillata.

Dans ce contexte, l'objectif de cette étude est de mettre en évidence l'activité

antioxydante des huiles essentielles d'Ammoïdes verticillata.

Ce travail est structuré en deux parties importantes : La première partie est consacrée à une
synthèse bibliographique mettant l'accent sur trois chapitres:

Introduction Page 2
Abbes A.,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles d'Ammoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

Pour Battandier et Trabut (1902), la plante a un calice à limbe obsoléte des

pétales avec une tache dorsale, des styles réfléns dépassant peu le stylopode, un fruit
oerdinairement scabre, papilleux, ovoides, renfermant six bandelettes par méricarpe,
carpophore biparti, involucre oligophylle à folioles inégales ou nulles; la plante se
trouvant généralement sur les éboulis.
D'apres guinochet et vilmorin (1975), c'est une plante annuelle de 15-35 cm,
glauccecente à racines gréles pivotantes ; tige dressé, striée gréle à nombreux rameaux
étalés, feuilles adultes, stériles, pennatisequées à 3-4 segments, très rapprochés, étroits,
trifides. Ombelles petites à 6-12 rayons capillaires très inégaux, les internes plus
courts involucre nul, involucelle inégale; 3 sétacées, 2 spatulées et aristées. Fleurs
blanches, fruit de lmm de long environ, ovoides très léger comprimé par le dos,
recouvert de poils épais ; Cinque cotés primaires filiformes , proéminentes.
b —la formule florale et diagramme floral
La formule florale est pentamère (FF=5S + 5P+5E +2C). Les sépales sont en
général très réduits, les cinq pétales, les étamines, cinq alterniétales libres, insérées sur
un disque plus ou moins apparent, l'ovaire est de deux carpelles antéro-postérieurs.
(Figure 01) (Bekhechi, 2002)

Figure 01 : Diagramme floral d'Ammoides verticillata (ou Plychotis verticillala). -

Observation à la loupe binoculaire- (Bekhchi, 2002).

Partie bibliographiques Page 6

Abbes A.,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles d'Ammoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

c-systématique du genre Ammoïdes (ou ptychotis)

C'est la classification des êtres vivants d'après un système fondé sur l'emploi d'un
seul ou d'un petit nombre de caractères génétiques, morphologique et embryologiques. La
compostion chimique est devenue un caractères taxonomique supplémentaire
(Lawrence., 1980).

Ammoides (ou ptychotis) verticillata est classé selon la clé de détermination botanique,
d'après Quezel et Santa (1963) et Guinochet et Vilmorin (Il 975) comme suit:

. .

.-,'. .. .. . . . .

lei

3- Enquête thérapeutique d'Ammoides verticillata

Les qualités thérapeutiques d'Amnwides verticillata sont connues depuis les plus
anciens dans la médecine populaire locale. Cette espèce possède des qualités précieuses et
jouit d'une grande faveur populaire (Sijelmassi A., 1991).

Par ailleurs, Merad (1973) avance que l'infusion d'Ammoides verticillata est utilisée
comme antipyrétique, rafraîchissante et antispasmodique (surtout conseillée dans les
spasmes gastro-intestinaux).

Partie bibliographiques Page 7

Abbes A.,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles dAmmoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

An outre, Ziyyat et al. (1997) avancent que Aminoides vertidilala est une plante
aromatique utilisée comme fébrifuge, conseillée contre la grippe, et possède des propriétés
thérapeutiques contre l'hypertension et/ou diabète.

Suite à de Felidj et al. (2010), réalisée auprès des herboristes et des gens campagne
de la région de Tlemcen, les information qu'on a pu recueillir ont montré que la plante a
des usages culinaires et surtout thérapeutiques, et sont résumés dans le (tableau 1).

Tableau I : Enquête thérapeutique d'Aminoïdes vertidilata (Felidj et al., 2010)

Parties Indications Mode d'emploi

utilisées
Fièvre Bouillir de l'eau avec la plante, mettre une serviette
Rhumes-grippe sur la tète, et inhaler les vapeurs dégagées. Ensuite,
Maladies broncho- boire une tasse du mélange filtré avant de se coucher.
pulmonaires
Plante Fièvre typhoïde Décoction ou infusion
entière Antipyrétique
Dépuratif
Antispasmodique
Affections rénales
Règles douloureuses Infusion
Régulateur dermique Décoction
Asthme Mélanaer la Diante lavée, séchée et broyée, avec du miel.
Douleurs Prendre 1 cuillerée à 2 par jour
gastriques
Parasites
intestinaux
Céphalée - Migraine Décoction ou infusion avec un citron. Boire une tasse le
soir avant de se coucher.
Sinusite Mettre la plante dans de l'eau bouillante, laisser infuser,
ensuite mélanger avec du henné et mettre sur les
endroits atteintes (sinus osseux de la face)
Apaise la soif Faire une décoction avec une tranche de citron, laisser
(rafraîchissan refroidir puis mettre au réfrigérateur (boire comme une
t) boisson rafraîchissante)

Partie bibliographiques Page 8

Abbes A.,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles dAmmoides Verticillata de la région de Tlerneun. Master., A P V

Feuille Condiment culinaire Ajouter les feuilles broyées dans des soupes : chorba,
S soue
r d'escargot,
b

Conserve plus longtemps les aliments et empêche la

formation de moisissures, exemple les olives.
Irritations Faire bouffir dans très peu d'eau, une poignée de
dermiques Abcès feuilles fraîches d'Ammoïdes. Lorsque le liquide est
- furoncle presque complètement évaporé mettre les feuilles
cuites sur une serviette, et les écraser pour en
supprimer le suc. Laisser refroidir le cataplasme,
puis l'appliquer sur la partie atteinte.
Racine Diarrhée l'aire bouillir pendant 20 minutes dans un litre d'eau des
S racines d'Ammoïdes séchées au soleil. Filtrer la
décoction, la sucrer avec un peu de miel et la boire en
trois fois au cours de la journée
Diurétique Mettre dans un litre d'eau bouillante des racines
d'Ammoïdes. Filtrer, quand l'infusion est devenue tiède,
sucrer avec un peu de miel. Consommer le tout dans la
journée.

Partie bibliographiques Page 9

-- Abbes A.,(2014):évaluation de lactivité antioxydant des huiles essentielles dAmmoides Verficillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

Chapitre II: Les huiles essentielles

1- Définition des huiles essentielles

Ce sont des extraits volatiles et odorants que l'on extrait de certains végétaux par
distillation à la vapeur d'eau, pressage ou incision des végétaux qui les contiennent. Elles se
forment dans un grand nombre de plantes comme sous produits du métabolisme secondaire.
Les huiles essentielles sont des composés liquides très complexes. Elles ont des propriétés et
des modes d'utilisation particuliers et ont donné naissance à une branche nouvelle de la
phytothérapie qui est Paromathérapie (Benayad, 2008).

Au point de vue chimique, il s'agit de mélanges extrêmement complexes. Les Huiles

essentielles (HIE) sont constitues de différents composants comme les terpènes, esters,
cétones, phénols, et d'autres éléments (Benayad, 2008).

Les HE doivent leur nom à ce qu'elles sont très réfringentes, hydrophobes et lipophiles.
Elles ne sont que très peu solubles ou pas du tout dans l'eau et on les retrouve dans le
protoplasme sous forme d'émulsion plus ou moins stable qui tende à se collecter en
gouttelettes de grosse taille. Par contre, elles sont solubles dans les solvants (acétone, sulfure
de carbone, chloroforme, etc.) des lipides et, à l'inverse des glycérides, dans l'alcool
(Benayad, 2008).

Mais à ces caractères de solubilité se limite la ressemblance avec les huiles grasses. Si
les HIE forment une tache transparente sur le papier, celle-ci disparaît rapidement car les
essences végétales sont très volatiles (contrairement aux résines qui, habituellement dissoutes
dans les essences, laissent un résidu visqueux ou solide après évaporation des essences).
Grâce à cette propriété, les essences végétales diffusent rapidement au travers des épidermes,
même au travers des cuticules épaisses et se répandent dans l'atmosphère. Ce caractère, 20
associé à la propriété qu'ont la plupart des essences végétales de posséder une odeur très
prononcée, et souvent agréable, les rend responsables de l'odeur caractéristique de nombreux
végétaux odoriférants (Benayad, 2008).

Partie bibliographiques Page 10

Abbes A.,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles dAmmoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

2- Répartition systématique et caractères chimiques des huiles

essentielles

Les FIE n'ont pas une présence générale chez les végétaux. Environ 1% des espèces
élaborent des essences. Certaines familles se caractérisent par le grand nombre d'espèces à
essences qu'elles regroupent, en particulier les labiés (Thym, Menthe, Lavande, Origan,
Sauge, etc.), les Ombellifères (Anis, Fenouil, Angélique, Cumin, Coriandre, Persil, etc.), les
Myrtacées (Myrthe, Eucalyptus), les Lauracées (Camphrier, Laurier-sauce, Cannelle)
(Benayad, 2008).

Les huiles essentielles peuvent être stockées dans divers organe fleur (origan), feuillés
(citronnelle), écorce (cannelier), bois (bios de rose), rhizomes (acore), fruits (badiane), ou
grain carvi (Boudjemaa et Ben Guegua, 2010).

Selon Djossou (2006) le marché international des huiles essentielles possède son importante
place à coté des produits commercialisés (Tableau 02).

Tableau 02 : Estimation de la production d'huile essentielle de quelques pays en milliers de

dollars (Djossou, 2006).

Pays Valeurs
USA 145000
Chine 110000
URSS 30000
Maroc 30000
Bulgarie 26000
Inde 25000
France 20000
Egypte 12000
Espagne 10000
Algérie 8000
Haïti 8000
Madagascar 6000
Côte d'Ivoire 3500

Partie bibliographiques Page 11

Abbes A.,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles dAmmoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

Burkina Faso 500

Cuba 500

3- Propriétés et activités biologiques des huiles essentielles

Elles ont des propriétés et des modes d'utilisation particuliers et ont donne naissance a
une branche nouvelle de la phytothérapie: l'aromathérapie.

Les huiles essentielles possèdent de nombreuses activités biologiques. En phytothérapie,

elles sont utilisées pour leurs propriétés antiseptiques contre les maladies infectieuses,
cependant, elles possèdent également des propriétés cytotoxiques qui les rapprochent donc
des antiseptiques et désinfectants entant qu'agents antimicrobiens à large spectre
(ilammoudi, 2008; Ferhat et aL, 2009).

3-1. Antibactérienne

Selon Benayad (2008), les phénols (carvacrol, thymol) possèdent le coefficient

antibactérien le plus élevé, suivi des monoterpénols (géraniol, menthol, terpinéol), aldéhydes
(néral, géranial), etc.

3-2. Antivirale

Les virus donnent lieu à des pathologies très variées dont certaines posent des
problèmes non résolubles aujourd'hui, les HE constituent une aubaine pour traiter ces fléaux
infectieux, les virus sont très sensibles aux molécules aromatiques (Benayad, 2008).

3-3. Antifongique

Les mycoses sont d'une actualité criante, car les antibiotiques prescrits de manière
abusive favorisent leur extension, avec les HE on utilisera les mêmes groupes que ceux cités
plus haut, on ajoutera les sesquiterpéniques et les lactones sesquiterpéniques. Par ailleurs, les
mycoses ne se développent pas sur un terrain acide. Ainsi il faut chercher à alcaliniser le
terrain (Benayad, 2008).

Partie bibliographiques Page 12

Abbes A.,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles d'Ainmoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

3-4. Antiparasitaire

Le groupe des phénols possède une action puissante contre les parasites (Benayad, 2008).

3-5. Antiseptique

Les aldéhydes et les terpènes sont réputés pour leurs propriétés désinfectantes et
antiseptiques et s'opposent à la prolifération des germes pathogènes (Benayad, 2008).

4- Propriétés physique des huiles essentielles

Malgré leurs différences de constitution, les huiles essentielles possèdent un certain

nombre de propriétés physiques communes (Tableau 03). Elles sont généralement sous forme
liquides à température ambiante et leur grande volatilité les oppose aux "huiles fixes"
(lipides). Lorsqu'elles viennent d'être préparées, leurs teintes est généralement comprise dans
une gamme allant de l'incolore, à jaune pâle. Il existe toutefois quelques exceptions, comme
l'huile essentielle de camomille romaine (Anthemis nobilis) qui possède une coloration bleu
clair due à la présence du [Link]ène (Faye et al., 1997).

Leur densité est le plus souvent inférieure à l'unité. Seules 3 huiles essentielles
officinales ont une densité supérieure à celle de l'eau: il s'agit des huiles essentielles de
cannelle, de girofle et de sassafras. Elles possèdent un indice de réfraction souvent élevé et
sont douées de pouvoir rotatoire puisque constituées, pour l'essentiel, de molécules
asymétriques. Peu solubles dans l'eau, elles lui communiquent cependant leurs odeurs (eaux
distillées aromatiques). Elles sont solubles dans les alcools et dans la plupart des solvants
organiques. Elles sont très facilement altérables et sensibles à l'oxydation, mais ne rancissent
pas. Le caractère odorant des huiles essentielles est lié à la volatilité des molécules qui les
composent ce qui permet de les obtenir par entraînement à la vapeur d'eau (Faye et al., 1997).

Tableau 03 : Constantes physicochimiques de quelques constituants volatils (Rivera, 2006).

Masse Molaire Volume molaire

composés (g/mol) Densité (cm3/mol)
a-pinène 136 0,8580 158,51
5-pinène 136 0,8650 157,23
limonène 136 0,8450 160,95

Partie bibliographiques Page 13

Abbes A.,(2014) :évaluat on de l'activité antioxydant des huiles essentielles dAinmoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

Acétate de géranyle 196 0,9174 213,65

- selinène 204 0,9140 223,19 -

carotol 222 0,9624 230,67

5- Chimie des huiles essentielles

Les huiles essentielles représentent un mélange complexe de molécules chimiques qui

peuvent comporter plus de soixante composants différents, parmi lesquels deux ou trois sont
des composants majeurs constituant de 20 à 70% du mélange comparativement aux autres qui
se trouvent le plus souvent sous forme de traces. A titre d'exemple, le carvacrol et le thymol
sont les composants majeurs des huiles essentielles d'Origanum compactum, le linalol pour
les huiles essentielles de Coriandrum sativum, le menthol et le menthone pour les huiles
essentielles de Mentha piperita. Généralement ces composants majeurs déterminent les
propriétés biologiques des huiles essentielles (Garnon, 1991).

La plupart des composants des FIES sont inclus dans deux groupes : les terpénoïdes et
les phénylpropanoïdes, les deux sont synthétisés à travers deux voies métaboliques séparées.
Les terpénoïdes : Ils représentent le groupe le plus diversifié des métabolites secondaires,
végétaux, plus de 15.000 composés différents sont décrits dans la littérature. Ils dérivent
d'une structure de base à cinq carbones (C5H8), communément appelée isoprène
(Calsamiglia et al., 2007) (Figure 02). Selon le nombre répétitif de cette unité, les
terpénoïdes sont classés en : monoterpénoïdes (CIO), sesquiterpénoïdes (C15) et
diterpénoïdes (C20). Dans la composition de la plupart des huiles essentielles les
monoterpénoïdes et les sesquiterpénoïdes forment la majeure partie (Combrinck et al.,
2007; Karray-Bouraoni et al., 2009) (Figure 03).

Les phénylpropanoïdes

Ils sont moins fréquents par rapport aux terpénoïdes. Néanmoins, certaines plantes
possèdent ces composés avec des proportions significatives. Les phénylpropanoïdes dérivent
majoritairement de la phénylalanine (Khenaka ,2011).

Ils sont constitués d'une chaine carbonée liée à un noyau aromatique à six carbones
(Figure 02) (Calsamiglia et al., 2007 ; Khenaka, 2011).

Partie bibliographiques Page 14

Abbes A. ,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles dAmmoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

CH3
CH2
H2C

Figure 02: Structure de la molécule d'isoprène (Calsamiglia et al., 2007).

I
J .

j 1.

•
•••,

J .

4: 'e
N
I) fl(ii ()fl1(

Figure 03: Diversité des structures de sécrétion des huiles essentielles. (A) : poil sécréteur de
Mentha pulegium), (B) : trichome glandulaire de Mentha pulegium, (C): trichome
glandulaire de Lippia scaberrima et (D) : structure de trichome glandulaire de
Thymus vulgaris (Combrinck et al., 2007 ; Karray-Bouraoui et al., 2009).

Partie bibliographiques Page 15

Abbes A.,(2014):évaluation de l activité antioxydant des huiles essentielles [Link] Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V
'

A
OH

0 OH
ç OH
(.irtcrol Ihyrnul Ierpincn-4-uI

OH
-,
(,uaiut Ziiiirrt

C© H

OH

Cinnenialdeh› de [Link]'nnI

HO

Allethole (.paiin

Figure 04: Structure de quelques composés des huiles essentielles (A) : monoterpénoïdes,
(B) : sesquiterpénoïdes et (C) : phénylpropanoïdes (Calsamiglia et al., 2007;
Khenaka, 2011).

Partie bibliographiques Page 16

Abbes A.,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles d'Animoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

6- Extraction des huiles essentielles

Il existe plusieurs méthodes pour extraire les huiles essentielles. Les principales sont
basées sur l'entraînement à la vapeur, l'expression, la solubilité et la volatilité. Le choix de la
méthode la mieux adaptée se fait en fonction de la nature de la matière végétale à traiter, des
caractéristiques physico-chimiques de l'essence à extraire, de l'usage de l'extrait et l'arôme du
départ au cours de l'extraction (Samate Abdoul, 2001).

6-1. Principales méthodes d'extraction

Il existe plusieurs méthodes de distillation dont voici les principales:

6-1.1. L'entraînement à la vapeur d'eau

Les méthodes d'extraction par l'entraînement à la vapeur d'eau sont basées sur le fait que
la plupart des composés volatils contenus dans les végétaux sont entraînables par la vapeur
d'eau, du fait de leur point d'ébullition relativement bas et de leur caractère hydrophobe. Sous
l'action de la vapeur d'eau introduite ou formée dans l'extracteur, l'essence se libère du tissu
végétal et entraînée par la vapeur d'eau. Le mélange de vapeurs est condensé sur une surface
froide et l'huile essentielle se sépare par décantation (Bruneton, 1993).

En fonction de sa densité, elle peut être recueillie à deux niveaux:

- au niveau supérieur du distillat, si elle est plus légère que l'eau, ce qui est fréquent;

- au niveau inférieur, si elle est plus dense que l'eau.

Les principales variantes de l'extraction par l'entraînement à la vapeur d'eau sont

l'hydrodistillation, la distillation à vapeur saturée et l'hydrodiffusion (Bruneton, 1993).

6-1.2. L'hydrodistillation

Le principe de l'hydrodistillation est celui de la distillation des mélanges binaires non

miscibles. Elle consiste à immerger la biomasse végétale dans un alambic rempli d'eau, que
l'on porte ensuite à l'ébullition. La vapeur d'eau et l'essence libérée par le matériel végétal
forment un mélange non miscible. Les composants d'un tel mélange se comportent comme si
chacun était tout seul à la température du mélange, c'est à dire que la pression partielle de la
vapeur d'un composant est égale à la pression de vapeur du corps pur. Cette méthode est

Partie bibliographiques Page 17

Abbes A. ,(2014):évaluation de 1aetivjté antioxydant des huiles essentielles dAmmoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

simple dans son principe et ne nécessite pas un appareillage coûteux. Cependant, à cause de
l'eau, de l'acidité, de la température du milieu, il peut se produire des réactions d'hydrolyse, de
réarrangement, d'oxydation, d'isomérisation, etc. qui peuvent très sensiblement conduire à une
dénaturation (Brian, 1995).

6-1.3. La distillation à vapeur saturée

Dans cette variante, la matière végétale n'est pas en contact avec l'eau. La vapeur d'eau
est injectée au travers de la masse végétale disposée sur des plaques perforées. La distillation
à vapeur saturée est la méthode la plus utilisée à l'heure actuelle dans l'industrie pour
l'obtention des huiles essentielles à partir de plantes aromatiques ou médicinales. En général,
elle est pratiquée à la pression atmosphérique ou à son voisinage et à 100°C, température
d'ébullition d'eau. Son avantage est que les altérations de l'huile essentielle recueillie sont
minimisées (Brian, 1995).

6-1.4. L'hydrodiffusion

Elle consiste à pulser de la vapeur d'eau à travers la masse végétale, du haut vers le bas.
Ainsi le flux de vapeur traversant la biomasse végétale est descendant contrairement aux
techniques classiques de distillation dont le flux de vapeur est ascendant. L'avantage de cette
technique est traduit par l'amélioration qualitative et quantitative de l'huile récoltée,
l'économie du temps, de vapeur et d'énergie (Roux, 2008).

6-1.5. L'expression à froid

Elle constitue le plus simple des procédés, mais ne s'applique qu'aux agrumes dont l'encore
des fruits comporte des poches sécrétrices d'essences. Ce procédé consiste à broyer, à l'aide
de presses, les zestes frais pour détruire les poches afin de libérer l'essence. Le produit ainsi
obtenu porte le nom d'essence, car il n'a subi aucune modification chimique (Roux, 2008).

Partie bibliographiques Page 18

Abbes A. ,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles dAmmoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

6-2. Autres méthodes d'obtention des extraits volatils

6- 2.1. Extraction par solvants

La méthode de cette extraction est basée sur le fait que les essences aromatiques sont
solubles dans la plupart des solvants organiques. L'extraction se fait dans des extracteurs de
construction variée, en continu, semi-continu ou en discontinu. Le procédé consiste à épuiser
le matériel végétal par un solvant à bas point d'ébullition qui par la suite, sera éliminé par
distillation sous pression réduite. L'évaporation du solvant donne un mélange odorant de
consistance pâteuse dont l'huile est extraite par l'alcool. L'extraction par les solvants est très
coûteuse à cause du prix de l'équipement et de la grande consommation des solvants. Un autre
désavantage de cette extraction par les solvants est leur manque de sélectivité; de ce fait, de
nombreuses substances lipophiles (huiles fixes, phospholipides, caroténoïdes, cires,
coumarines, etc.) peuvent se retrouver dans le mélange pâteux et imposer une purification
ultérieure (Brian, 1995).

6- 2.2. Extraction par les corps gras

La méthode d'extraction par les corps gras est utilisée en fleurage dans le traitement des
parties fragiles de plantes telles que les fleurs, qui sont très sensibles à l'action de la
température. Elle met à profit la liposolubilité des composants odorants des végétaux dans les
corps gras. Le principe consiste à mettre les fleurs en contact d'un corps gras pour le saturer
en essence végétale. Le produit obtenu est une pommade florale qui est ensuite épuisée par un
solvant qu'on élimine sous pression réduite. Dans cette technique, on peut distinguer
l'enfleurage où la saturation se fait par diffusion à la température ambiante des arômes vers le
corps gras et la digestion qui se pratique à chaud, par immersion des organes végétaux dans le
corps gras (Brian, 1995).

Partie bibliographiques Page 19

 Abbes A.,(2014):évaluation de lactivité antioxydant des huiles essentielles d'Ainmoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

6-2.3. Extraction par micro- ondes

Le procédé d'extraction par micro-ondes appelée Vacuum Microwave Hydrodistillation

(VIvffID) consiste à extraire l'huile essentielle à l'aide d'un rayonnement micro-ondes
d'énergie constante et d'une séquence de mise sous vide. Seule l'eau de constitution de la
matière végétale traitée entre dans le processus d'extraction des essences. Sous l'effet
conjugué du chauffage sélectif des micro-ondes et de la pression réduite de façon séquentielle
dans l'enceinte de l'extraction, l'eau de constitution de la matière végétale fraîche entre
brutalement en ébullition. Le contenu des cellules est donc plus aisément transféré vers
l'extérieur du tissu biologique, et l'essence est alors mise en oeuvre par la condensation, le
refroidissement des vapeurs et puis la décantation des condensats. Cette technique présente
les avantages suivants: rapidité, économie du temps d'énergie et d'eau, extrait dépourvu de
solvant résiduel (Justin Nzeyumwami, 2004).

6- 2.4. Extraction par un solvant organique volatil

Cette technique est la plus pratiquée avec 1 'hydrodistillation. Elle consiste à épuiser la
matière première de ses constituants odorants au moyen d'un solvant, puis à chasser celui-ci
de l'extrait par évaporation sous vide. II est existe deux cas particuliers, les hydrolats
(extraction par solvant en présence d'eau) et les alcoolats (extraction avec de l'éthanol dilué)
pour lesquels on récupère les composés odorants conjointement avec le solvant lors de la
distillation pratiquée pour éliminer l'eau présente dans les isolats. Le choix du solvant dépend
de nombreux paramètres techniques et économiques, notamment:

la sélectivité (pouvoir solvant),

la température d'ébullition (stabilité thermique des constituants),

la miscibilité dans l'eau,

la facilité de recyclage,

- • la sécurité de manipulation : les solvants choisis seront, dans la mesure du possible, non
toxiques tant pour le manipulateur que pour le consommateur (Mueller et al., 2004).

Partie bibliographiques Page 20

Abbes A. ,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles d'Animoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

Les solvants les plus utilisés à l'heure actuelle sont surtout des hydrocarbures
aliphatiques (hexane, éther de pétrole), des hydrocarbures aromatiques (toluène), des alcools
ou des solvants carbonylés, et moins fréquemment des hydrocarbures halogénés
(dichiorométhane). La méthode d'extraction mise en oeuvre dépend aussi de la nature de la
matière première végétale. On peut extraire soit à chaud, c'est-à-dire à température proche de
la température d'ébullition du solvant, soit à température ambiante. On travaille, en général,
dans un extracteur statique afin d'éviter la dégradation de la matrice végétale et la
solubilisation concomitante de composés indésirables (Mueller et al., 2004).

Les solutions aromatiques obtenues, appelées miscella, sont évaporées sous vide, à
température la plus basse possible afin d'éviter la dégradation des molécules odorantes. Le
solvant organique extrait également des composés indésirables, en particulier des matières
grasses (huile, cires, etc....). Celles-ci sont d'ailleurs responsables de la dénomination
«concrète» qui traduit la tendance des produits à se solidifier à température ambiante. Un
traitement secondaire est donc nécessaire pour séparer les fractions aromatique et grasse. Il
consiste à entraîner, à l'éthanol, les composés aromatiques. Cette opération est pratiquée à
basse température (environ -20°C). On obtient, après évaporation de l'éthanol, un produit
appelé «absolue» qui comporte la majorité des composés volatils (Sokhna et al., 1997)

7- Les applications alimentaires des huiles essentielles

Les études qui ont été réalisées jusqu'à maintenant, montrent que les H.E peuvent être
appliquées à tous les aliments (Tableau 04). Ainsi, les H.E d'origan, de thym, de cannelle ou
de coriandre sont efficaces pour les viandes, les volailles, les charcuteries et les légumes; 1'
I-I.E. de menthe pour les produits frais (salades, yaourts...); les H.E. à base de cavarcrol ou de
citral pour les poissons; les H.E. de thym, de noix de muscade ou de gingembre pour les
céréales (plus particulièrement celles riches en carvacrol pour le riz); et les H.E. à base de
carvacrol ou de cinnamaldéhyde pour les fruits (Caillet et Lacroix, 2007).

Les H.E. sont aussi utilisées pour apporter de la saveur et un arôme raffiné au café, au
thé, aux vins et aux liqueurs distillées (Caillet et Lacroix, 2007).

Partie bibliographiques Page 21

Abbes A.,(2014):évaluation de lactivité antioxydant des huiles essentielles dAmmoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

Les études de Caillet et Lacroix (2007) ont montré que l'incorporation d' H.E. dans la
viande hachée du boeuf a contribué au maintien de la qualité microbiologique et â la réduction
de l'oxydation des gras au-delà de sa durée normale d'entreposage. Ils ont aussi démontré que
l'utilisation des H.E. pouvait augmenter la sensibilité des bactéries à différents procédés de
conservation des aliments (chauffage, pasteurisation, atmosphère modifiée). Selon la bactérie
et le procédé utilisé, la sensibilisation augmente de 2 à 10 fois. Par exemple, M.E. mélangée
à des carottes hachées, emballées sous air ou sous atmosphère modifiée (AM ou MAP en
anglais: Modified Atmospheres Packaging) permet de multiplier par trois la sensibilité
deListeria sp., de même que pour de la viande hachée emballée sous les mêmes conditions,
une augmentation très significative de la sensibilité d'E. cou (2.5 fois) et de Salmonelle (4.5
fois) est constatée en présence d' H.E. Aussi, M.E. combinée à un chauffage doux (55 °C
pendant 1 minute) a permis d'inhiber totalement Salmonelle, alors qu'en absence d'huile, un
chauffage de plus d'une heure était nécessaire pour arriver au même résultat, cependant, le
seuil d'efficacité des huiles essentielles les plus efficaces étant très bas, souvent inférieurs à
0.1%, leur ajout en très faibles quantités n'altère pas les qualités organoleptiques de l'aliment

Des investigations ont été effectuées pour évaluer l'efficacité de quatre H.E. de plantes:
Laurier, clou de girofle, cannelle et thym en tant que conservateurs normaux. L'effet des H.E
aux concentrations de 0,1 de 0,5 et de 1 % a été étudié en fromage à pâte molle à faible teneur
en matière grasse et à matière grasse naturelle contre Listeria monocytogenes et Salmonella
enteritidis à 4°C et à 10°C respectivement, sur une période de 14 jours. Ils ont conclu que les
H.E. des plantes choisies agissent comme inhibiteurs potentiels contre L. monocytogenes et S.
enteritidis dans ce produit alimentaire (Boubrit et Boussad, 2007).

Les traitements du pâté tout préparé de foie de porc avec le romarin retardent la
croissance de Listeria monocytogenes. Par contre, Aeromonas hydrophila et Listeria
monocytogenes ont été inhibées sur la viande cuite (poitrine de poulet) par des extraits
d'eugénol et de piment (Boubrit et Boussad, 2007).

Partie bibliographiques Page 22

Abbes A.,(20 14):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles d'Ammoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

Tableau 04: Exemples de la diversité d'applications des huiles essentielles (Grysole, 2005).

Huiles Parfumerie
essentielles Alimentation Médecine
Cosmétiques Technique
Arôme pour
Antispasmodique régulateur
basilic Parfum sauces et
du système
condiments
Arôme pour
savons, Arôme pour
citronnelle désinfectant, boisson et
éloigne les sucreries
insectes
Arôme pour
boissons,
eucalyptus sucreries, Anti-inflammatoire
sucreries, crèmes
glacées
Arôme pour
géranium parfum sucreries, Anti-spasmodique, relaxant
chewing-gum
lemongrass Vasodilatateur, sédatif
Saveur pour
Menthe Antalgique, anesthésique,
Saveur pour liqueurs, glaces,
tonique, stimulant du
poivrée dentifrice chewing-gum,
système nerveux
chocolat
Saveur pour
Menthe boissons, Saveur pour les sirops par
verte sucreries, crèmes exemple
glacées

8- Utilisation des huiles essentielles

Ces HIE agissent selon leur tropisme ; ce terme signifie que chaque huile exerce ses
pouvoirs curatifs sur un organe ou une zone en particulier, ces substances volatiles pénètrent
les tissus et l'organisme. Par exemple, l'HE de basilic est particulièrement actif au niveau de
la digestion. Celle de cyprès améliore la circulation. Il est donc très important de se renseigner
sur les effets thérapeutiques des ME car leur usage peut comporter des inconvénients. Par
exemple, une ME de menthe des champs est indiquée pour stimuler les personnes fatiguées,
elle soulage les douleurs névralgiques mais ne doit jamais être utilisée dans un bain, sous

Partie bibliographiques Page 23

Abbes A.,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles d'Axnmoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

peine d'irritation sérieuse de la peau. Outre ces propriétés principales, elles ont toutes une
vertu (Maach et Jemali, 1986).

9- Classification des huiles essentielles

Selon le pouvoir spécifique sur les germes microbiens, et grâce à l'indice aromatique
obtenu par des aromatogramme, Chakou et Bassou (2007) classent les huiles essentielles
comme suit:

• Les huiles majeures

Les huiles médiums
• Les huiles terrains.

10- Mode d'action des huiles essentielles

Plusieurs théories sont proposées pour expliquer le mécanisme par lequel les NE
exercent leur activité antimicrobienne. La composition complexe des FIES tend à prouver que
cette activité serait due à plusieurs mécanismes d'action différents, liés à la nature chimique
de ces composés (Skandamis et al., 2001; Carson et al., 2002 ; Burt, 2004).

La plupart des mécanismes d'action sont attribués à l'interaction des composants des
HE avec la membrane cellulaire (Benchaar et al., 2008). Les FIE sont constituées de
molécules lipophiles capables de pénétrer la double couche phospholipidique, leur
accumulation entre les phospholipides entraine alors un changement de conformation et un
mauvais fonctionnement de la membrane cellulaire, perturbant ainsi le transport
membranaires des substances nutritives (Sikkema et al., 1994; Ultee et al., 1999). Les NE
peuvent aussi perturber le gradient ionique de la membrane cytoplasmique ce qui diminue la
stabilité membranaire et perturbe aussi le transport membranaire. Mais certaines bactéries
sont capables de contrebalancer cet effet par l'utilisation de la pompe ionique, dans ce cas la
croissance ralentit grâce à l'épuisement de l'énergie de la pompe (Griffin et al., 1999; Ultee
et al., 1999; Cox et al., 2001). Un mécanisme d'action proposé par Ultee et al., (2002)
implique le groupement hydroxyle des phénols, comme le carvacrol, qui agirait comme un
transporteur transmembranaire des cations et des protons monovalents, cet effet perturbe le
gradient ionique et le fonctionnement membranaire des cellules microbiennes (Figure 6).

Partie bibliographiques Page 24

Abbes A.,(2014):6valuation de l'activité antioxydant des huiles essentielles dAmmoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

D'autres mécanismes d'action sont liés à la coagulation des constituants cellulaires par
la dénaturation des protéines (Gustafson et Bowen, 1997). Les I-TES extraites de cannelle et
de l'ail peuvent inhiber l'activité enzymatique des bactéries du rumen telle l'espèce
Enterobacter aerogenes. D'autres HE inhibent la croissance microbienne par l'inactivation
des acides nucléiques (Calsamiglia et al., 2007).

L'action des 11E dépend aussi de la nature des microorganismes ciblés. Les bactéries à
Gram positif sont plus sensibles à l'action des HE, par rapport aux bactéries à Gram négatif.
Cela peut être expliqué par la présence de la membrane externe chez les bactéries à Gram
négatif, elle représente en effet une barrière capable de diminuer la perméabilité des composés
hydrophobes (Calsamiglia et al., 2007). Cependant, les molécules à faible poids moléculaire
comme le thymol et le carvacrol peuvent traverser cette barrière (Dorman et Deans, 2000;
Ultee et al., 2002).

mllleti epaceUsiIair-e ni e nib ra i e milieu atz-ac€41uIatre

çI-. . ct opi n s mi q LI e
011

ci i,

1'
cl- I, Ct-1,

cL. CI I.
-

cii. Cl-I•. cI_ CI

Figure 05 : Mécanisme d'action du carvacrol sur la membrane cellulaire (Ultee et al., 2002).

Partie bibliographiques Page 25

Abbes A.,(2014):évaluation de lactivité antioxydant des huiles essentielles dAmmoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

11- Parfumerie et cosmétologie

Un grand nombre d'HE (400 à 500) est utilisé dans l'élaboration de la majorité des
parfums et produits de toilette. Ces cosmétiques grâce à leur activité antiseptique tout en leur
assurant une odeur agréable (Roulier, 1992). De même, certains constituants chimiques isolés
à partir d'HE peuvent faire l'objet de transformations chimiques donnant naissance à de
nouvelles odeurs; ainsi, à partir de l'eugénol tiré de l'essence de girofle, on aboutira à
l'isogénol qui a une odeur d'oeillet (Vigne, 1987).

12- Toxicité des huiles essentielles

Les études scientifiques montrent que les huiles essentielles peuvent présenter une
certaine toxicité. Il faut cependant remarquer que celle-ci varie selon la voie d'exposition et la
dose prise (Degryse et al., 2008).

Les huiles essentielles semblent n'être toxiques par ingestion que si celle-ci est faite en
de grandes quantités et en dehors du cadre classique d'utilisation. Les huiles ne seront
toxiques par contact que si des concentrations importantes sont appliquées (Degryse et al.,
2008).

Selon Englebin (2011), les huiles essentielles sont des substances très puissantes et très
actives, c'est la puissance concentrée du plant aromatique, il ne faux donc jamais exagérer les
doses, quelque soit la voie d'absorption, car toute substance est potentiellement toxique à
dose élevée ou répétée. Paracelse à dit: "rien n'est poison, tout est poison, tout dépend de la
dose "Il faut également savoir qu'une période trop prolongée provoque l'inversion des effets
et fou l'apparition d'effets secondaires indésirables.

13- L'aromathérapie

L'aromathérapie, qui signifie littéralement" soin par les odeurs" est le terme que l'on
utilise pour désigner la thérapie basée sur l'utilisation des huiles essentielles. Il s'agit donc de
la capacité et de l'art de soigner avec les huiles essentielles (Buronzo, 2008).

Donc, l'aromathérapie est l'utilisation des huiles essentielles à des fins thérapeutique.
C'est une "biochimio-thérapie" naturelle sophistiquée qui repose sur la relation existant entre
les composants chimiques des huiles essentielles et les activités thérapeutiques qui en

Partie bibliographiques Page 26

Abbes A.,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles dAmmoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

découlent. Elle recourt à une méthodologie rigoureuse qui s'inspire de données scientifiques
solides confirmées tant par la clinique que par le laboratoire. C'est une thérapeutique naturelle
de qualité supérieure (Baudoux, 2008).

14- Contrôle de qualité des huiles essentielles

Selon la pharmacopée française et européenne, le contrôle des huiles essentielles

s'effectue par différents essais, comme la miscibilité à l'éthanol et certaines mesures
physiques: indice de réfraction, pouvoir rotatoire et densité relative. La couleur et l'odeur
sont aussi des paramètres importants. La meilleure carte d'identité quantitative qualitative
d'une huile essentielle reste cependant le profil chromatographie en phase gazeuse. Il permet
de connaître très exactement la composition chimique et de rechercher d'éventuelles traces de
produits indésirables tels des pesticides ou des produits chimiques ajoutés (Pibiri, 2006).

Une huile essentielle pure et naturelle est caractérisée par sa composition strictement
«végétale », contrairement aux essences synthétiques ou «identiques naturelles» intégralement
reconstituées à partir de composés chimiques de synthèse (Pibiri, 2006).

Partie bibliographiques Page 27

y ydailte
Abbes A.,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles dAminoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

CHAPITRE III: Antioxydants et activité antioxydante

1- Définition d'antioxydants
Un antioxydant est défini comme étant toute substance qui peut retarder ou empêcher
l'oxydation des substrats biologiques (Boyd et al., 2003).

Les antioxydant sont des composés qui réagissent avec les radicaux libres et les rendent
ainsi inoffensifs (Dupin et al., 1992 ; Neye, 1995).

La raison pour laquelle les antioxydants sont importants vient du fait que l'oxygène est
un élément potentiellement toxique puisqu'il peut être transformé en formes plus réactives telles
que le superoxyde (0 ° 2), le peroxyde d'hydrogène (H202), l'oxygène singulier (102) et les
radicaux hydroxyle (HO'), collectivement connu sous le nom d'oxygène actif (Boyd et a/.,2003
Hadi, 2004)

Selon Neye (1995) et Berger (2006), la stabilité de la structure des antioxydants leur
permet d'agir pour former des produits finis non radicaux en:

> réagissant rapidement avec un radical d'acide gras avant que celui-ci ne puisse
réagir avec un nouvel acide gras;
> absorbant l'énergie excédentaire de l'oxygène singulet pour la transformer en
chaleur;
> s'oxydant lui-même plus rapidement qu'un substrat à risque d'oxydation.

2- Types d'antioxydants
Les antioxydants sont classés selon leur origine en antioxydants naturels ou
synthétiques et selon leur mode d'action en antioxydants primaires ou secondaires.

2-1. Antioxydants synthétiques

Dans l'industrie alimentaire, les antioxydants synthétiques, tels que le
butylhydroxyanisole (BHA), le butylhydroxytoluene (BHT), la gallate propylée (PG) et le
tetra-butylhydroquinone (TBHQ), sont largement utilisés parce qu'ils sont efficaces et moins
chers que les antioxydants naturels. Cependant, leur sécurité est très discutée car ils génèrent un
besoin de recherche comme matières de substitution d'après des sources naturelles comme
antioxydants de la nourriture (Lisu et al., 2003).

Antioxydants et activité antioxydante Page 29

Abbes A.,(2014):évaluation de lactivité antioxydant des huiles essentielles d'Aninioides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

2-2. Antioxydants naturels:

Plusieurs substances peuvent agir en tant qu'antioxydant in vivo. Elles incluent le
bêtacarotène, l'albumine, l'acide urique, les oestrogènes, les polyamines, les flavonoïdes, l'acide
ascorbique, les composés phénoliques, la vitamine E, etc. Elles peuvent stabiliser les
membranes en diminuant leur perméabilité et elles ont également une capacité de lier les acides
gras libres (Svoboda et Ampson, 1999 In Mohammedi, 2006)

2- 2.1. Sources naturelles d'antioxydants:

Il est bien évident qu'une alimentation saine et équilibrée assure un apport considérable
d'antioxydants naturels pour le bon fonctionnement de l'organisme humain, surtout lors de la
consommation de fruits, de végétaux, de céréales, de la viande et du poisson. Ils existent
d'autres sources de composés antioxydants bien intéressantes, dont l'application peut s'étendre à
des domaines comme la pharmacologie, la microbiologie médicale et clinique, la
phytopathologie et la conservation des aliments (Daferera et al., 2000).

2-2.1.1. Huile d'olive

Les composés phénoliques présents dans l'huile d'olive sont une classe très importante
d'antioxydants qui affectent non seulement la stabilité de l'huile, mais aussi ses propriétés
biologiques et sa qualité nutritionnelle (Visioli et al, 2004).

Parmis ses composés phénoliques, on trouve le 4-acétoxy-éthyl-1 ,2-dihydroxy benzène,

le I -acétoxy-pinorésinol, l'apigénine, l'acide caféique, les acides coumariques, de l'acide
férulique, l'acide gallique, l'acide homovanillique, l'acide p-hydroxybenzoïque,
l'hydroxytyrosol et ses dérivés, le lutéoline, l'oleuropéine, le pinorésinol, l'acide
protocatéchique, l'acide sinapique, l'acide syringique, le tyrosol et ses dérivés (Boskou et al.,
2005).

Les formes dialdéhydique de l'acide elenolique, liées à l'hydroxytyrosol et tyrosol, le

l-acétoxy-éthyl-1, le 2-dihydroxtbenzène, le 1-acétoxypinoresinol, le pinorésinol, l'aglycone
d'oleuropéine, l'aglycone de Hgstroside et le lutéoline, sont les phénols ayant la concentration la
plus élevée dans l'huile d'olive.

Antioxydants et activité antioxydante Page 30

 Abbes A. ,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles d'Ammoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., APV

Nombre de ces composés phénoliques, principalement l'hydroxytyrosol et ses dérivés,

sont examinés en détail dans le but d'établir une relation entre les apports alimentaires et le
risque de maladies cardio-vasculaires ou le cancer. Ils ont pu révéler une activité contre le
peroxyde d'hydrogène et une capacité à prévenir la production d'espèces réactives.
de l'oxygène. Tandis que leur capacité de récupération des espèces réactives de l'azote tel que le
peroxynitrite suggère un effet protecteur contre la nitration de la tyrosine et les dommages de
l'ADN, les mécanismes par lesquels les phénols d'huile d'olive aident à protéger contre divers
troubles cardiovasculaires, sont à leur tour expliqués, in vitro, par leur effet inhibiteur sur la
production d'éicosanoïdes et sur l'agrégation plaquettaire (Boskou et ai, 2005).

2-2.1.2 Olives de Table

Les olives de tables restent des sources considérables d'antioxydants et plusieurs types d'olive de
table, comme les olives noires grecques ou vertes espagnoles, semblent contenir un taux plus
élevé en hydroxytyrosol qui petit aller jusqu'à 170 mg / kg, et un niveau de lutéoline, qui peut
être déterminé, dans le cas des olives noires, à un taux entre 25 et 75 mg/ kg. (Boskou et ai,
2005).

2-2.1.3 Huiles végétales

En plus de l'huile d'olive, une source riche en antioxydants naturels, certaines huiles
végétales pressées à froid sont de bonnes sources de tocopherols et de caroténoïdes. Ces huiles
possèdent une capacité remarquable à piéger les radicaux libres et à absorber le radical
oxygène, lorsqu'elles sont testées soit avec le DPPH (1, 1-diphényl-2-picry1hydrazyl) soit avec
l'ABTS (sel diammonium de l'acide 2,2'-azino-bis (3-é[Link]-6-sulphonique) dans
le test d'ORAC. (Besbes et ai, 2004 ;Yu et ai, 2005).

Antioxydants et activité antioxydante Page 31

Abbes A.,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles dAmmoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

2-2.1.4 Herbes et épices

Dans l'alimentation, le thé et les infusions sont considérés comme une source importante
de composés phénoliques antioxydants, et en particulier, le thé noir et vert et les infusions de
roibos. La plupart des extraits d'herbes traditionnelles sont préparés à partir de plantes de la
famille Lamiaceae. La même chose pour les épices, utilisées en préparations culinaires, elles
sont connues, depuis longtemps, non seulement par leur effet antioxydant, mais aussi pas leurs
innombrables propriétés médicales et traitantes. L'attention a été accordée à une grande variété
d'herbes pour étudier les antioxydants phénoliques qu'ils contiennent et leur capacité.

Pour l'exemple d'infusions de plantes riches en phénols on trouve la menthe, le

dictammus, le thé de la montagne, la camomille, l'eucalyptus, le tilleul et la mauve (Kroyer,
2005). L'origan est riche en acide rosmarinique, en flavonols, et en flavones. L'achillée présente
aussi un taux considérable de flavonoïdes et de tannins (Exarchou et al., 2002; Kosar et a,<,
2003)
On trouve aussi d'autres épices contenants toute une variété d'antioxydants comme le sauge qui
contient, en plus des flavonoïdes et des acides phénoliques qu'on trouve déjà dans l'artichaut, du
nosol, de l'acide carnosique, du latéoline et du rosmanul, (Trouilas et al., 2003). Le romarin et
la sarriette contiennent des composés intéressants de l'acide carnosique , du camosol, de
l'acide rosmarinic et du rosmanol ont été déterminés dans le romarin, et de l'acide rosmarinique,
du carnosol, du carvacrol et des flavonoids ont été, aussi, définis dans la sariette.
(Yanishlieva-Maslarova et al., 2001; Manach et al., 2004).

2- 2.1.5. Sous-produits agricoles

Dans le but d'évaluer et d'exploiter des sous-produits agricole, de nombreux travaux
publiés ont mis l'accent sur la valeur résiduel des grignons d'olive, du margine, des pelures
d'agrumes, des pelures de pomme de terre et des feuilles d'olivier (Civantos, 1998).

Antioxydants et activité antioxydante Page 32

 Abbes A.,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles d'Ammoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

2-3. Antioxydants synergistes

Ce sont des substances qui ne sont guère actives en tant qu'antioxydants, et dont les
propriétés apparaissent surtout en présence d'autres antioxydants. Il en est ainsi des
lécithines,des acides citrique et tartrique, des acides aminés (lysine et arginine), de certains
flavonoïdes. Leurs propriétés peuvent s'expliquer par un effet chélatant de métaux comme le fer
et le cuivre qui ont un effet pro-oxydant à faibles doses. Certains produits ont un effet inhibiteur
de la décomposition des hydroperoxydes, et d'autres semblent régénérer des antioxydants,
comme les tocophérols ou les dérivés de l'acide ascorbique à partir de leurs formes oxydées
(Morelle, 1988).

2-4. Antioxydante primaires

Ils englobent les composés qui interfèrent avec l'oxydation lipidique en convertissant les
produits d'oxydation lipidiques (L% LOO, LO) en produits plus stables (LH, LOOH, LOH)
grâce à leur propriété de donneurs de protons actifs. Le radical (A») dérivé de l'antioxydant
seconvertit en produit stable (Kim et Lee, 2004).
2-5. Antioxydants secondaires
Selon Gordon (1990), les antioxydants secondaires sont des composés qui retardent
L'oxydation lipidique selon différents modes d'action:
o Absorption des radiations ultraviolettes;
o Inactivation de l'oxygène singulet;
o Chélation des métaux;
o Décomposition des hydro peroxydes.

3- Toxicité des antioxydants

Les premières indications des effets possibles des antioxydants sur la santé datent des années 1970,
alors que des chercheurs ont constaté que l'incidence réduite de certains cancers et de maladies
coronariennes allait pair avec une diète riche en fruits, légumes et herbes. Or, il s'avère que ces
végétaux regorgent d'antioxydants (Berger, 2006). L'intégration de molécules d'antioxydants à
des denrées alimentaires constitue tous de même un défi. On reconnaît la fragilité à la chaleur
de la vitamine C, qui est par ailleurs l'un des plus puissants antioxydants (Lehucher-Michel et
al., 2001).

Antioxydants et activité antioxydante Page 33

 Abbes A. ,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles dAmmoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

L'ajout de vitamine E peut également poser des problèmes si on n'a pas prévu un
emballage qui prévient l'oxydation par la lumière. De plus la surconsommation d'antioxydants
peut entraîner une déficience des systèmes naturels de protection de l'organisme (système
immunitaire) et cela peut nuire la santé en altérant de nombreuses fonctions vitales. Certains
antioxydants sont responsables aussi à des réactions allergiques, des hypersensibilités, des
troubles digestifs, etc. (Roberfroid, 2002).

Selon Alais et al. (2003), les produits de synthèse ont été beaucoup étudiés sur le plan
de la toxicologie chez l'animal. Des résultats variant avec les espèces ont été donnés: effet sur
les poumons, le foie, la thyroïde, la coagulation sanguine ou l'action cancérigène. On ne peuties
extrapoler à l'homme, mais on est porté à réduire leur emploi dans l'alimentation humaine.'

4- Méthodes d'évaluation de l'activité antioxydante

Maîtriser l'oxydation est indispensable pour gérer l'évolution des systèmes biologiques dans leur
complexité en particulier dans le cas des aliments dont la dégradation peut avoir des
conséquences en sécurité alimentaire (Marc et al., 2004).

- Les méthodes d'évaluation du pouvoir antioxydant peuvent être qualitatives ou quantitatives. Les
méthodes qualitatives, utilisées pour repérer l'activité antioxydante décomposée, sont
relativement peu nombreuses et font intervenir en général, la coloration ou la décoloration d'un
réactif spécifique en présence d'agents antioxydants. Une des méthodes utilisées pour la
détection d'antioxydants est la chromatographie sur couche mince.
(CCM),qui donne naissance à des réactions colorées en présence de tels composés (Li Peiwu et
a/.,1999).

En ce qui concerne l'évaluation quantitative de l'activité antioxydante, beaucoup de

méthodes peuvent être appliquées pour estimer directement l'activité antioxydante. La
génération de radical libre est reliée avec l'oxydation dans les aliments et les systèmes
biologiques. Les méthodes principales comportent, le balayage des radicaux de superoxyde
(02°);le balayage de peroxyde d'hydrogène (H202); le balayage d'acide hypochloreux(HOC1)
(Sanchez-moreno, 2002) ;
le balayage du radical d'hydroxyle (HO') ou le balayagedu radical
du peroxyle (ROO°). Parmi ces méthodes, la méthode de PIEGE

Antioxydants et activité antioxydante Page 34

 Abbes A.,(2014):évaluation de l'activité antioxydant des huiles essentielles d'Ammoides Verticillata de la région de Tlemcen. Master., A P V

(paramètre total d'antioxydant de radical en piégeage (Brasseur et al, 1995) ; la méthode

d'ORAC (capacitéd'absorbance du radical de l'oxygène)(Cao et al, 1993) ; la méthode d'ABTS
(le balayage du radical 2,[Link]-éthylbenzothiazoline-6-sulphonate) (Duthie et al, 1991 In
Maamri,2008) ; le balayage du radical stable 2,2-diphenyl-1-picry1hydrazyl (la méthode du
radical DPPH°) (Blois, 1958; Uchiyama et al., 1968) , la méthode de DMPD (le balayage du
radical N,N'-p-di-méthylique-phénylènediamine) (Li et al., 1994) ou la méthode de Photo
chimiluminescence (PLC) (Magin et al, 2000).

Antioxydants et activité antioxydante Page 35

Résumé

Vu la diversité et la gravité des maladies qu'induit le stress oxydant, plusieurs équipes de

chercheurs se sont investis dans la recherche de nouveaux antioxydants en vu de lutter contre le stress
oxydant et ses pathologies associées.
Cette étude se propose donc d'évaluer l'activité antioxydante des huiles essentielles d'Ammoides
veriicillafa.
L'extraction des huiles essentielles a été effectuée par hydrodistillation avec un appareil de type
Clevenger et qui ont fourni un rendement de 3,19%.
L'étude du pouvoir antiradicalaire et antioxydant de ces huiles a été réalisée par la méthode de
DPPH (10500,0422 mg/ml), ABTS (10500,0013 mg/ml), TBARS(1C50=0,02794 mg/ml)..
Les résultats obtenus ont montré l'existence d'une activité antioxydante très importante des
l'huiles essentielles & Ammoides Verticillata avec absence d'une efficacité chelatante.
Mots clés : Ammoides Veriicillata, huiles essentielles, anti-oxydants, activité antioxydante.

Abstact

The diversity and severity of diseases induced by oxidative stress, several teams of researchers
have invested in the search for new antioxidants seen fighting against oxidative stress and its associated
pathologies.
This study therefore aims to evaluate the antioxidant activity of essential Ammoides verticillala.
Extraction ofessential oils was performed by hydrodistillation with a Clevenger -type apparatus.
Samples Ammoides verticillata have provided essential oit yield of 3.19 %. The study of radical
scavenger and antioxidant power of thèse oils was performed by the method of DPPH(1C500,0422
mg/ml), ABTS(1C500,0013 mg/ml), TBARS(1C50=0,02794 mg/ml).
The resutts showed the existence of very important antioxidant activity of the essential oils of
Ammoides verticillata with no chetating activity.
Keywords: Ammoïdes Verticillata, essential oils, antioxidants, antioxidantactivity.

ù '3 LS *jf Uil U, JASU Ij4'jI 13 J Ik

4 4.ls1i1 L °1 j j 4Ja JJ :)
Ammoides verticillata -- 'tutil '-k *àb "à4
Clevengerit L4 j4i JJJ
.3.19%'-ro
41A àjl. S.c. c iaà1uU 1i4 jjS Ai i [Link] j JU $i
TBRAS (1C50=0,02794mg/ml), ABTS (1C50=0,0013mg/ml), DPPH(1C50= 0,422mg/ml)
Ammoides y)lI jia u tic aii Ci
verticillata.
%La11

Ammoides vertidilata