Chapitre 3: Récepteurs membranaires:

les récepteurs enzymes

Plan:

I. Généralités sur les récepteurs enzymes

II. Les récepteurs à activité Tyrosine Kinase
III. Les récepteurs Sérine/thréonine kinase
IV. Les récepteurs Tyrosine ou Sérine
Phosphatases
V. Les récepteurs à activité Guanylate cyclase
 I. Généralités: les Récepteurs enzymes
Les récepteurs enzyme possèdent un seul domaine transmembranaire, un domaine extra
cellulaire glycosylé et un domaine intracellulaire à activité enzymatique.
Deux possibilités:
▪ Le récepteur agit come une enzyme (Ex: le récepteur est lui-même une protéine
kinase)
▪ Le récepteur est couplé à une enzyme (protéine kinase)

Quels sont les 4 principaux types de

récepteurs enzymes
1 - Récepteurs à activité Tyrosine Kinase
(RTK)

2 - Récepteurs à activité
Sérine/Thréonine Kinase (TGF β , Actine)

3 - Récepteurs à activité Guanylate

cyclase (ANF: atrial natriuretic factor)

4 - Récepteurs à activité Tyrosine ou

Sérine Phosphatase (PTP, CD45)
Dr . Dehimat Abdelouahab 2015/2016 wahab_canon@live . fr 4
Partie I:

Voies de signalisation des récepteurs

Tyrosine kinases (RTK)

• Structure
• Nature des ligands
• Activation
• Voies de signalisation
RTK: 2 types

- RTK membranaires: récepteurs

hormones (EGFR, Rec. Insuline, etc.)

- RTK cytoplasmique: SRC et BCr-

Abl
 I. Structure des Récepteurs à activité
Tyrosine Kinase

▪ Formés de polypeptides qui ont une activité tyrosine kinase dans leur
domaine cytoplasmique

▪ Constitués de 20 familles de plus d’un membre et de 7 récepteurs uniques

▪ La plupart sont formés d’une seule chaîne polypeptidique

▪ Lient une grande variété de ligand comme l’EGF qui stimule la

prolifération et la différenciation des cellules épithéliales ou le PDGF qui
stimule la croissance des cellules musculaires et gliales
 Structure et activité
enzymatique des
récepteurs catalytiques

• Chaque monomère d’un récepteur-

enzyme possède un seul segment
intramembranaire sous forme d’hélice α
(alors que les récepteurs couplés aux
protéines G possèdent 7 hélice
transmembranaires) (ex. Recep.
Insuline)

• Les récepteurs enzymes possèdent une

extrémité extracellulaire réceptrice du
ligand et une extrémité intracellulaire
qui possède l’activité catalytique.
2. Classification des RTK

Protéines transmembranaires
❑ Domaine extracellulaire
• N-terminal
• Glycosylation
• Site de reconnaissance du ligand
• domaines permettant la
dimérisation

❑ Domaine transmembranaire :
• Hélice α
• Séquence hydrophobe (22-25 aa)

❑ Domaine intracellulaire :
• C-terminal
• Domaine tyrosine kinase
• Sites de recrutement
 Les ligands des RTK
LIGAND RECEPTEUR QUELQUES REPONSES
III. Activation des récepteurs RTK: MODE DE FONCTIONNEMENT
 III. Activation des récepteurs RTK: MODE DE
FONCTIONNEMENT

• Ces Récepteurs ont pour caractéristique commune un domaine

cytoplasmique à activité kinase dont la fonction est de phosphoryler des
tyrosines.
• Ces domaines sont repliés de la même manière que les protéines kinases
non récepteur
• Toutes possèdent des extensions qui comportent un grand nombre de
résidus Tyrosine qui sont transphosphorylés dans les récepteurs dimériques
• Cela créé des sites de liaison de phosphotyrosine pour les protéines
adaptatrices et effectrices en aval
• La liaison des ligands aux récepteurs active les récepteurs tyrosines kinases
• Soit en modifiant la conformation d’un dimère préformé
• Soit en entraînant la formation de dimères de récepteurs à partir d’ une population de
sous unités diffusant dans le plan de la membrane
Modification conformation d’un dimère
préformé

Cas du récepteur à
l’insuline
Dimérisation du récepteur à partir de
sous-unité monomère
 Transphosphorylation des dimères

La dimérisation ou le changement de
conformation induit un rapprochement des
domaines kinases cytoplasmiques
Cette juxtaposition permet à chaque kinase de
phosphoryler sa voisine sur des tyrosines
spécifiques
La première et la plus importante est la
phopshorylation d’une tyrosine située dans la
boucle d’activation du domaine catalytique
Domaine de reconnaissance des tyrosines phosphorylées
Effets des phosphorylations des résidus tyrosine
-Première étape de la transmission du signal:
crée des sites de liaison spécifiques pour des protéines
complémentaires qui transmettent des signaux intracellulaires
en aval des récepteurs activés (Adaptateurs).

Les sites les mieux connus sont appelés les domaine SH2
(Src-Homology domain 2, domaine homologue à Src
Sarcoma Rous virus: protéine oncogène de virus de sarcome De Rous.

Les domaines SH2 comprennent

Environ une centaine d ’ aa et se
lient à des séquences peptidiques
Courtes contenant des phosphotyrosines

Ces domaines se retrouvent sur des protéines

comme Grb2 qui est un adaptateur protéique
Domaines protéiques pour des
interactions spécifiques
Protéines relais et domaine d’intéraction
Exemple du Récepteur de l’EGF et de quelques protéines
d’amarrage
IV. Voies de signalisation: transduction du signal
2 voies principales:
IV.1. La voie PI3-kinase/Akt
Activation:
La PI3-kinase phosphoryle les lipides
membranaires
Activation de la protéine Akt
Activation de la protéine Akt
Akt induit la prolifération
 Akt bloque la dégradation de la cycline D

Cycline D régule la progression du cycle cellulaire

Akt active le facteur de transcription NF-
κB
Rétrocontrôle de la voie PI3-kinase/Akt

se lie à
La voie PI3-kinase/Akt et cancers
Résumé
:
 IV.2. La voie des MAPK (Mitogen Activated
protein kinase)

Chez les mammifères, la voie des MAPK de divisent en 4 sous-

familles
• La voie Erk1/2 (extracellular signal-regulated kinase)
• La voie Jnk (Jun kinase)
• La voie p38
• La voie Erk5

• L’activation de ces différentes voies dépend du type cellulaire et du signal

extracellulaire impliqué
Cascade d’activation des MAPK

1e KINASE

2e KINASE
Cascade d’activation des MAPK: 2 voies
Ou Rac

Raf/MEKK1

Ou Rac
MKK1/MKK4

Erk1/2/Jnk

Elk1/c-jun
IV.2.a. La voie Erk1
Activation de Ras par Sos

GEF: Guanine nucleotide exchange factors

 Activation de Ras par Sos

• Activation du récepteur = Grb2

(protéine adaptatrice) facilite l ’ accès
de SOS au récepteur = activation de
Ras (protéine G) = activation de Raf
= cascade d ’ activation de kinases
avec amplification.

26
 Les protéines adpatatrices
à Ras

• Les protéines Ras

Superfamille des proteines GTPase
plus de 150 membre chez l ’ homme.
• 6 sous-famille : Ras, Rho, Ran, Rab,
ARF …

15
La famille des protéines GTPases Ras
Activation de Raf par Ras
Activation de Erk1/2
Erk1/2 induit l’expression de c-fos
IV.2.b. La voie des Jnk
IV.1.a. La voie des Jnk
Comment se fait l’activation de Rac?
Comment se fait l’activation de ces GEF?
Comment se fait l’activation de ces GEF?
La voie JnK récapitulatif:
Jnk phosphoryle le facteur de transcription c-jun
 Les MAPKs stimulent le facteur de
transcription AP1 (adaptator-related
protein complex 1
AP1 active l’expression du gène de la cycline D
Résumé:
V. Voie de signalisation de l’insuline
RTK et Voies de signalisation de l’insuline
Effets pléïotropes de l’insuline
 RTK et Voies de signalisation de l’insuline

La fixation de l'insuline sur le récepteur de

l'insuline induit une autophosphorylation de plusieurs
tyrosines de la sous-unité β intracellulaire : tyrosines 965
et 972 (domaine JM), tyrosines 1158, 1162 et 1163
(domaine TK), tyrosines 1328 et 1334 (domaine C).
Cette autophosphorylation induit des changements de
conformation qui, à leur tour, induisent l'activation de
l'activité tyrosine kinase. Le récepteur de l'insuline peut
alors phosphoryler différentes protéines cibles effectrices.
 RTK et Voies de signalisation de l’insuline
• Parmi les protéines cibles, on peut citer « Insulin Receptor Substrate » (IRS-1 et IRS-
2), "Src homology collagen" (Shc) et APS ("adaptor protein" avec un domaine SH2).
• L'activité tyrosine kinase du récepteur de l'insuline stimule, entre autres, l'activité
kinase de la phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K).
• L'augmentation rapide de la concentration de l'inositol triphosphorylé (PIP3)
déclenche une cascade de Ser/Thr protéines kinases PIP3-dépendantes.
• Parmi ces dernières, Akt (ou Ser/Thr protéine kinase B) et des isoformes atypiques
de la protéine kinase C semblent impliquées dans :
• la régulation du transport du glucose
• la synthèse du glycogène stimulée par le récepteur de l'insuline via IRS-1. Dans ce cas, c'est le domaine SH2
de la phosphatidylinositol 3-kinase qui se fixe à la tyrosine phosphorylée de IRS-1.
• La synthèse des protéines et des lipides
• la modulation de l'expression des gènes : la forme activée de IRS-1 agit comme un second messager
impliqué dans l'activation de la transcription des gènes régulés par l'insuline
 RTK et Voies de signalisation de l’insuline

-
GSK3: Glycogen synthase
kinase 3β

Conséquences:
• Augmentation synthèse de Glycogène
• Augmentation du nombre de transporteurs de
Glucose à la membrane cellulaire
Rôle de l'insuline et transporteur
GLUT4
 Rôle de l'insuline et transporteur
GLUT4
Dans une cellule non stimulée ou quand la concentration en
insuline est faible, le transporteur insulino-dépendant du
glucose GLUT4 est localisé dans des vésicules de
stockage des cellules hépatiques et musculaires.
Ces vésicules doivent fusionner avec la membrane plasmique
avant que le glucose ne pénètre dans la cellule.
Quand le niveau de glucose circulant est élevé,
l'insuline est libérée par les ilots de Langerhans et elle
facilite la mobilisation du glucose via une augmentation de la
synthèse et de la translocation de GLUT4 des compartiments
endosomiques vers la membrane plasmique.
En conséquence, l'absorption du glucose augmente.
Rôle de l'insuline et transporteur
GLUT4
Principales voies de signalisation par l’insuline: voies PI3 kinase et
MAP kinase.
Voies de signalisation et effet pléiotrope de l’insuline
Principales voies de signalisation par l’insuline: voies PI3 kinase et
MAP kinase.
Principales voies de signalisation par l’insuline: voies PI3 kinase et
MAP kinase.
VI. RTK et Pathologies
1. MAPK et Cancers
 2. RTK et Diabètes

Diabète de type II, non-insulinodépendant

• Résistance à l’insuline ± importante
• Synthèse d’insuline ± altérée.

Altérations mise en evidence

• Nombreuses mutations du gène codant le récepteur
• Protéines IRS et à domaine SH2
• Défaut de translocation à la membrane du transporteur de glucose
• Glycogène synthase
Récepteurs à activité TK
EGF-R
Protéine kinase SrC
• Les protéine-tyrosine kinases de la famille Src
(PTKSrc) ont été découvertes initialement dans des
tumeurs et leur activité a longtemps été associée aux
processus prolifératifs.
• En réalité, elles sont également synthétisées dans
des tissus très différenciés, et notamment dans le
système nerveux central
Exemple Protéine kinase SRC associée à l’EGFR

Structure :
3 domaines avec une courte région Nter et un court
domaine Cter
• domaine SH3
• domaine SH2
• domaine kinase

ACTIVATION:
1. Une phosphatase retire le phosphate
inhibiteur (SH2)
2. Une kinase phosphoryle un résidu tyrosine au niveau de la
boucle d’activation

3. Nef vient se fixer sur SH3 (modification tridimensionnelle)

Schéma activation SrC: activation
Schéma activation SrC: activation

Il faut donc 3 info différentes pour activer cette protéine SRC, cette
activation dépend de l ’intégration de signaux spécifiques , c ’est à dire
- le phosphate inhibiteur a t ’il été enlevé ? oui = 1 ; non= 0
- le phosphate activateur a t ’il été ajouté ? oui =1 , non=0
- - Nef est il présent ? oui =1 , non =0
- seule la réponse 111 permet la transduction du signal
Activation:

• Src vient se fixer au niveau du carboxyle terminal de l ’ EGFR elle

va phosphoryler la tyrosine 845 ce qui induit l’activation des
voies mitogènes.
• Src phosphoryle Cbl (protéine importante pour la dégradation
de l’ EGFR par le protéasome).
• La phosphorylation de Cbl entraîne sa dégradation (Donc pas de
degradation de EGFR).
• Src peut induire ses propres signaux mitogènes et de survie.
Rôle de Cbl
Partie II:

Voies de signalisation des récepteurs

Sérine/Thréonine kinases
 Récepteurs à activité Sérine/Thréonine
kinase
• Les protéines kinases à spécificité sérine/thréonine (qui
catalysent le transfert du phosphate de l’ATP sur des résidus
sérines et/ou thréonines) sont fréquentes dans la cellule et
dans la signalisation (PKA, PKC, Protéine G, Raf, MAPK etc..).
• Toutefois, les récepteurs qui possèdent cette activité
sérine/thréonine kinase intrinsèque sont plutôt minoritaires .
Ils ont cependant un rôle important dans le contrôle de la
prolifération cellulaire, la différenciation, la migration et
l’apoptose
Le récepteur du TGF β ( Transforming Growth Factor béta) est le prototype des
récepteurs à activité sérine thréonine kinase.
 La superfamille TGF-β

• L’ensemble des ligands

( β 1 à β 3) et tous les
autre (35 membres)
appartenant à la
superfamille du TGF β
se lient à ce type de
récepteur, formé par
l'association en tétramère
de 2 homodimères RI et
RII .

GDNF: Glial cell line-derived neurotrophic factor

GDF: Growth Differenciation Factor
 Le récepteur au TGFβ
• TGFβ: Transforming Growth factor beta
• Le récepteur au TGFβ est constitué de deux sous unités différentes TβR-I et TβR-II
• Les protéines ( RI ou RII ) de 50 à 75 kDa (500 a.a) sont constituées d'un domaine
extracellulaire glycosylé (150 a.a.) et un domaine sérine/ thréonine kinase cytosolique C-
ter
Activation du récepteur au TGFβ
Activation des facteurs de transcription Smad
 La protéine SARA emprisonne SMAD dans le
cytoplasme
La signalisation TGFβ passe par la phosphorylation des protéines SMAD qui se
détachent de SARA et servent de navettes entre la membrane cellulaire et le
noyau où elles régulent l'expression des gènes

R-SMAD: SMAD2/3
Co-SMAD: SMAD4
Partie III:

Voies de signalisation des récepteurs

Tyrosine/Sérine
Phosphatase
 Superfamille
Les Récepteurs à activité Tyrosine Phosphatase
Domaines Ig

Domaines Fibronectine 1 domaine

extracellulaire
variable

1 ou 2
domaines
phosphatase

Fonctions : assez variées , développement des neurones ( DPTP99A ), adhérence cellulaire

( RPTP LAR ), CD45 des lymphocytes active (déphosphoryle) les PTK de type Src (Lyn, fyn)
Partie III:

Voies de signalisation des récepteurs

Guanylate Cyclase
Récepteurs à activité Guanylate cyclase
 Les Récepteurs à activité Guanylate cyclase
Historique :
Peu après la découverte de l'AMPc dans les années 1960,
la Guanosine monophosphate cyclique (GMPc) a été
identifiée dans différentes cellules avec une concentration
fluctuante en réponse à différents signaux.
Le GMPc est apparu comme un excellent second messager
On a cherché alors la Guanylate cyclase ,
on en a trouvé 3 formes :
GC membranaire (non récepteur)
GC récepteur soluble (NO)
GC récepteur membranaire (ANP)
Les Récepteurs à activité Guanylate cyclase (R-GC)
(Exemple du récepteur membranaire de l'ANP et cytosolique du NO)

(+ PKG)

La GC catalyse la dégradation
du GTP en GMPc
Synthèse et cibles du GMPC
Partie IV:

Voies de signalisation des récepteurs

les récepteurs cytokines

Les récepteurs aux cytokines
 Les récepteurs aux cytokines
STRUCTURE AU REPOS:
protéines monocaténaires → un seul segment transmembranaire
le domaine extracellulaire → le site de liaison spécifique à l’hormone

FIXATION / ACTIVATION:
la liaison de Ho: →homodimérisation du Re
Homodimérisation→ changement de conformation du Re→ Fixation de JAK ,
protéine tyrosine-kinase, sur chacun des deux domaines intracellulaires de
l’homodimère.

PHOSPHORYLATION:
phosphorylation réciproque des
deux molécules de JAK→ JAK-P activées
Jak Jak
YP YP

JAK: Janus kinase

 Les récepteurs aux cytokines
ACTIVATION / PHOSPHORYLATION
JAK-P va phosphoryler sur des Y :
• de la région C t du domaine
intracellulaire du récepteur
• du facteur de transcription STAT
Jak Jak STAT, se lie au Recept. au niveau de YP par
YP YP JAK-P, et sera lui-même phosphorylé et
YP YP
activé par JAK-P.
S S
T T
A A
YP T T YP
STAT phosphorylé sur certaines Y va se
dimériser et pénétrer dans le noyau pour
stimuler spécifiquement la transcription
de gènes.

YP
S S
T T
A A
T T
Target-Gene
STAT: Signal Transducer and Activator
of Transduction
L’exemple de l’IL6
L’activation des facteurs STAT3
Les facteurs STAT3 activent
l’expression des gènes
La voie Jak/Stat et Cancer
 Chapitre 4: les
récepteurs nucléaires
Les ligands
Les récepteurs nucléaires
 Les récepteurs "nucléaires"
Fonctionnement
1
Complexe protéique
inhibiteur
Domaine activation
COOH
transcription Site de fixation
HSP du ligand
En absence du ligand : complexes
H2 N
inactifs : l’activation transcriptionnelle
est inhibée

ligand

HSP
En présence du ligand : l’activation
transcriptionnelle est levée :
1 Dissociation complexe protéique inhibiteur 2
Domaine fixation
à l’ADN accessible
2 Démasquage du domaine de fixation à l’ADN
 Les récepteurs "nucléaires"
Fonctionnement ligand

Fixation ligand : changement conformation

: active le récepteur par dissociation avec HSP Complexe
HSPs inactif
Re
Une fois activé, le complexe récepteur-ligand
migre dans le noyau et se fixe sur une
séquence de régulation de l'ADN appelées HSP
HRE pour Hormone Response Elements
Re
Cette séquence est localisée dans la région
5' proche des gènes cibles
L'activation de la transcription s'effectue via
les domaines AF-1 et AF-2

Re

HRE
Fin