DATE: 08/06/2026
NOM ET PRENOM MATRICULE
1-MOUDON EROUME PATRICK 21Q2854
2-NYANDJOCK SERAPHINE 21N2550
3-POUAMOUN FOCHIVE NGAMDODOUO RAHIMA 20L2333
4-NERIBAR NGOUN-NDODJIM RODOLPHE 25I2459
5-YONG BIONDANA JED ERWAN 22O2729
TRAVAUX PRATIQUE BOA 4138: Isolement des cellules mononucléées du sang
périphérique (PBMC)
Titre: Isolement des cellules mononucléées du sang périphérique par centrifugation sur gradient
de densité Ficoll-Paque
Objectif
Isoler les cellules mononucléées du sang périphérique (lymphocytes et monocytes) à partir d’un
échantillon de sang total en utilisant la technique de centrifugation sur gradient de densité avec le
Ficoll-Paque.
Principe
Le Ficoll-Paque est un milieu de densité permettant de séparer les différents constituants du sang
lors de la centrifugation.
Après centrifugation:
* Le plasma se retrouve en surface.
* Les cellules mononucléées (lymphocytes et monocytes) forment un anneau blanc à l’interface
plasma/Ficoll.
* Le Ficoll-Paque constitue une couche intermédiaire.
* Les granulocytes et les hématies, plus denses, se déposent au fond du tube.
Cette méthode permet d’obtenir une population enrichie en cellules mononucléées utilisables
pour diverses analyses immunologiques et biologiques.
Matériel et réactifs
Équipements
Centrifugeuse
Vortex
Hotte stérile
Récipient pour déchets biologiques
Consommables
* Tubes coniques stériles de 15 mL
* Pipettes sérologiques stériles de 5 mL
* Micropipette avec embouts de 1000 µL
Réactifs
* PBS 1X sans calcium (Ca²⁺) ni magnésium (Mg²⁺)
* Ficoll-Paque
* Sang total
Méthode expérimentale
1. Étiqueter un tube conique stérile de 15 mL.
2. Introduire 4 mL de sang total homogénéisé.
3. Ajouter 4 mL de PBS 1X sans Ca²⁺ ni Mg²⁺.
4. Mélanger délicatement par inversion environ 10 fois.
5. Déposer soigneusement le mélange au-dessus de 4 mL de Ficoll-Paque afin de préserver
l’interface entre les deux couches.
6. Centrifuger à 2000 tours/minute pendant 20 minutes sans frein.
7. Après centrifugation, éliminer délicatement la couche de plasma.
8. Prélever l’anneau de cellules mononucléées situé à l’interface plasma/Ficoll.
9. Transférer les cellules dans un nouveau tube stérile de 15 mL.
10. Laver les cellules deux fois avec du PBS 1X sans calcium ni magnésium.
11. Resuspendre finalement les cellules dans 3 mL de PBS pour le comptage cellulaire.
Résultats attendus
Après centrifugation, quatre couches distinctes sont observées :
1. Plasma (couche supérieure)
2. Cellules mononucléées (PBMC): lymphocytes et monocytes
3. Ficoll-Paque
4. Granulocytes et hématies (culot). Les cellules récupérées à l’interface constituent la fraction
mononucléée utilisée pour les analyses ultérieures.
Discussion
L’absence de calcium et de magnésium dans le PBS favorise le maintien des cellules en
suspension individuelle et limite leur activation ou leur agrégation. La séparation repose sur les
différences de densité entre les cellules [Link] technique permet d’obtenir une
population cellulaire relativement pure de lymphocytes et de monocytes, essentielle pour les
études d’immunologie, la cytométrie en flux, les cultures cellulaires ou les tests fonctionnels.
Conclusion
La centrifugation sur gradient de densité au Ficoll-Paque permet d’isoler efficacement les
cellules mononucléées du sang périphérique. Les cellules obtenues sont principalement des
lymphocytes et des monocytes, qui peuvent ensuite être comptés, caractérisés ou utilisés dans
diverses analyses immunologiques.