THEME 3B – Variation génétique et santé

TP3 – La réaction immunitaire acquise (RIA)

La réaction immunitaire acquise ou adaptative (RIA) est une réaction qui se met en place après la
réaction inflammatoire. Elle est plus lente (au moins 3 à 5 jours). Elle nécessite un apprentissage basé sur la
reconnaissance des corps étrangers (non-soi) et de leurs antigènes. Cette réaction aboutit notamment à 2
conséquences : la production d’anticorps spécifiques des antigènes mais également la destruction des cellules
infectées par des parasites intracellulaires comme les virus.

Problématique : Comment la RIA permet-elle de produire des anticorps et de détruire les cellules infectées ?

Matériel : Aides :
- Documents 1 à 6 et Manuel BELIN p312 à 317 / PC équipé du logiciel Mesurim2 et photos de microscope - Fiche Protocole « Etudier la RIA »
- Electrophorèse de protéines (cuve, générateur, tampon de migration, membranes d’acétate de cellulose) - Fiche technique Mesurim2
- Echantillons de protéines produites par un lymphocyte B ou un plasmocyte - Fiche technique Electrophorèse de protéines

Activités et déroulement des activités Capacités et Critères de réussite

ETAPE 1 : Proposez une stratégie expérimentale Recenser, extraire des informations
 En s’aidant des documents 1 et 2, proposez une stratégie permettant d’identifier comment Quoi ? Comment ? Attendu ?
sont produits les anticorps au cours de la RIA.
 Appelez le professeur pour vérification Utiliser un logiciel (Mesurim2)
Gestion des fichiers (ouverture via le réseau), mesure
ETAPE 2 : Mettez en œuvre le(s) protocole(s) proposé(s)
de surfaces, réalisation de l’échelle, obtention de
 Réalisez une électrophorèse de protéines pour identifier quel type cellulaire est à l’origine de résultats fiables.
la production d’anticorps. Mettre en œuvre un protocole (Electrophorèse)
 Utilisez le logiciel Mesurim2 pour déterminer le rapport nucléo-cytoplasmique des cellules Sécurité (cheveux attachés, blouse, attitude sérieuse),
proposées et en déduire les caractéristiques associées à la production d’anticorps. Dépôts satisfaisants des échantillons (volume précis,
 Appelez le professeur pour vérification bien alignés, propres, pas de mélange). Respect du
ETAPE 3 : Récapitulez vos résultats sous la forme la plus appropriée sens de migration. Obtention d’un résultat exploitable.
 Votre production devra montrer le rôle des diverses molécules et cellules immunitaires
impliquées dans la production d’anticorps et l’élimination des éléments étrangers à l’organisme. Présenter les résultats à l’écrit
Techniquement correct, Renseigné correctement,
ETAPE 4 : Répondez au problème initial Organisé pour répondre à la question
 Résumez vos observations dans un court texte qui explique comment la RIA permet la
production d’anticorps grâce aux cellules et molécules de l’immunité. Rédiger un texte scientifique
 Complétez votre travail par l’étude des documents 5 et 6 afin de comprendre comment la RIA On a vu que…, Or on sait que…, Donc…
participe à l’élimination des cellules infectées par des virus.
Gérer et organiser le poste de travail
En fin de séance, rangez le matériel et fermez la session informatique.

e SVT - M POURCHER (MAJ : 17/01/2023)

 Mesurer les surfaces cellulaires des lymphocytes B et des plasmocytes (Mesurim 2)
Matériel
- PC équipé de Mesurim2 (réseau) 1- Accéder à Mesurim2 : [Link]
- Fichiers (en local) pour Mesurim2 2- Dans l’onglet « Image », cliquer sur « Ouvrir une image » et la rechercher sur le réseau.
> [Link] (+ version colorisée) 3- Dans l’onglet « Mesurer », choisir sur « Surface».
> [Link] (+ version colorisée) 4- Définir l’échelle en cliquant sur « Définir l’échelle »
Remarques : 5- Saisir la valeur et son unité (ex : 10 cm) sachant qu’un globule rouge mesure 7 µm
- La mesure de surface peut s’effectuer simplement en utilisant
l’outil couleur et en modifiant le seuil. 6- Tracer un trait correspondant aux éléments entrés précédemment et cliquer sur « Valider ».
- Certaines fois, l’outil couleur est trop peu sensible (couleurs trop 7- Mesurer la surface de la cellule et celle du noyau pour le lymphocyte B.
similaires) et ne donne pas de bons résultats, il faut alors utiliser 8- Reproduire les étapes 2 à 7 pour la photographie de plasmocyte.
l’outil « polygone » et tracer le contour de la surface à mesurer.  Appelez le professeur pour vérification de la capture d’écran
-

Identifier les cellules à l’origine de la production d’anticorps (Electrophorèse de protéines)

Matériel
- Cuve à électrophorèse et support de migration 1- Remplir les 2 compartiments de la cuve à électrophorèse avec la solution tampon (voir ci-contre)
en plastique (« pont ») 2- Vérifier que la bande d’acétate de cellulose est bien humidifiée par le tampon Tris HCl
- Générateur de courant 3- Sortir la bande du liquide délicatement (risque de déchirement)
- Feuille d’acétate de cellulose (2,5 x 14 cm) 4- Placer la bande sur le support de migration, encoche du côté cathode (-), à droite
- Echantillons de protéines purifiées à partir de 5- Tendre la bande et la replier des 2 côtés au moyen des élastiques (les 2 replis ont la même taille)
cellules de LB (N) ou de plasmocytes (I) 6- Repérer la zone de dépôt, du côté cathode (-), à 1,5 cm du bord
- Applicateur
7- Réaliser les deux dépôts avec l’applicateur (I ou N : ne pas mélanger les solutions)
- Pince large (si possible sans dent)
- Rouge ponceau  La ligne de dépôt doit être perpendiculaire à la bande
- Acide acétique 5%  Les dépôts doivent être espacés correctement
 Appelez le professeur pour vérification
8- Refermer et brancher la cuve
Ligne de
dépôt (bien
9- Démarrer le générateur en suivant les consignes du matériel (60 minutes, 125 V)
perpendiculaire 10- Vérifier que des bulles se forment au niveau des bornes (petit fil de platine)
à la bande)
A la fin de la migration,
Encoche vers
la cathode (-) 11- Arrêter le générateur, ouvrir la cuve et récupérer les bandes délicatement
et à droite 12- Colorer les bandes au rouge ponceau pendant 10 minutes (paillasse professeur)
13- Réaliser 3 à 6 rinçages avec de l’acide acétique 5% - 1 minute, agiter délicatement
Source : Carnet 14- Observer le résultat
de réussite 1ere
SPE SVT (Hatier)
 Appelez le professeur pour vérification

e SVT - M POURCHER (MAJ : 17/01/2023)

Document 1 : Le rôle des lymphocytes et des macrophages
● Pour identifier le rôle des lymphocytes B, T4 et des macrophages, on a réalisé diverses expériences
de cultures cellulaires récapitulées ci-dessous. La culture 1 est filtrée pour ne conserver que les
cellules et former la culture 2 à laquelle on ajoute parfois d’autres cellules. On étudie la production
d’anticorps qui révèle l’activation de la réaction immunitaire acquise.
Exp Contenu de la culture 1 Culture 2 Résultat
1 LB LB Aucun anticorps produit
2 LB + antigène LB Faible présence d’anticorps
3 LB + antigène + macrophages LB + macrophages Forte présence d’anticorps
4 Macrophage + antigène Macrophage Aucun anticorps produit
5 Macrophages + antigène Macrophages + ajout LT4 Aucun anticorps produit
6 Macrophages + antigène Macrophages + ajout LB Forte présence d’anticorps
7 Macrophages + LT4 + antigène Macrophages + ajout LB Très forte présence d’anticorps

Document 2 : Les LB et les plasmocytes, producteurs d’anticorps

● Les expériences précédentes montrent que les lymphocytes B sont à l’origine de la production
d’anticorps, après qu’ils aient été stimulés par les LT4. L’observation microscopique de LB stimulés
par des LT4 montre qu’ils se différencient en plasmocytes. On a marqué en noir (flèches bleues) la
présence d’anticorps sur des LB et des plasmocytes. Le résultat est présenté ci-dessous.
Lymphocyte B Plasmocyte

Document 3 : Le rôle essentiel des LT4

● Pour déterminer plus précisément le rôle des LT4, Marbrook eût l’idée de réaliser un système avec 2
chambres séparées par une membrane semi-perméable : elle laisse passer les molécules mais pas
les cellules. On ajoute un antigène provenant de globules rouges de mouton (GRM) dans le milieu de
culture qui peut donc diffuser dans les 2 chambres. On étudie ensuite le nombre de plasmocytes
formés, ce qui permet d’évaluer la quantité d’anticorps produits.

Culture Chambre supérieure Chambre inférieure Nombre de plasmocytes

1 Pas de cellule LT4 + LB 961 x 106
2 Pas de cellule LB 72 x 106
3 LT4 LB 1011 x 106
4 Ajout d’interleukine 2 LB 985 x 106
e SVT - M POURCHER (MAJ : 17/01/2023)
Document 4 : L’importance des anticorps pour la phagocytose

a b

Document 5 : L’identification des cellules permettant l’élimination des cellules infectées

● Pour comprendre comment les leucocytes éliminent les cellules infectées, on a réalisé plusieurs
expériences et observations récapitulées ci-dessous.
Exp Contenu de la culture Résultat
1 LB + cellules infectées Cellules infectées intactes
2 LT4 + cellules infectées Cellules infectées intactes
3 Macrophages + cellules infectées Quelques cellules détruites
4 LT8 + cellules infectées Quelques cellules détruites
5 LT4 + LT8 + cellules infectées Nombreuses cellules détruites
6 Macrophages + LT4 + LT8 + cellules infectées Toutes les cellules sont détruites

Document 6 : Le rôle des lymphocytes T8 dans l’élimination des cellules infectées

● L’observation de la culture 4 a permis d’identifier un contact entre les LT8 et les cellules infectées.
Ce contact (a) permet la différenciation du LT8 en LTc (cytotoxique). Les LTc sont alors capables de
produire des molécules toxiques comme les perforines : ce sont des petits canaux qui perforent la
membrane des cellules infectées et contribuent à leur destruction. Les LTc sont aussi capables d’initier
l’apoptose (mort cellulaire programmée des cellules).

e SVT - M POURCHER (MAJ : 17/01/2023)

 Document de référence
Schéma bilan des étapes de la production d’anticorps au cours de la RIA
Réponse
immunitaire
innée

cellule présentatrice
d’antigène
(macrophage ou
cellule dendritique)

e SVT - M POURCHER (MAJ : 17/01/2023)

 Document de référence (à compléter)
Schéma fonctionnel de la réaction immunitaire adaptative (RIA)

e SVT - M POURCHER (MAJ : 17/01/2023)